CN103655678B - 一种具有护肝功能的花生肽组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有护肝功能的花生肽组合物及其应用，该组合物包括花生肽和蒲公英提取物，所述的花生肽以冷榨花生粕为原料，采用特定的酶解工艺制备而成，其蛋白质≥90%、肽含量≥75%、精氨酸≥11.0%，游离精氨酸/总精氨酸≤8.0%，相对分子质量小于1000的蛋白质水解物所占比例≥80%。本发明保留了花生蛋白良好风味特性，降低了致敏性，增强了吸收性，同时蒲公英提取物的添加强化了组合物的护肝功能。

Description

一种具有护肝功能的花生肽组合物及其应用

技术领域

本发明多肽提取技术领域，具体涉及一种以花生肽为主要成分的具有护肝功能的组合物及其应用。

背景技术

花生作为我国的六大油料作物之一，产量高居世界首位。据国家粮油信息中心统计，2011年我国花生产量为1605万吨，2012年年产量为1620万吨。目前，在我国花生除了直接食用外，对花生的利用多在食用油脂的提取方面，制油后的花生饼粕，其蛋白质含量高达40%以上，但因其溶解性差，在食品工业生产中应用非常有限。

花生蛋白具有一定的功能特性、营养特性以及良好的风味，被广泛的应用于食品加工中。美国、日本等国家相继开发出注射、乳化、凝胶、分散、肉粒、肉粉等80多种类型的花生蛋白产品，广泛应用于肉食品、乳制品、烘焙食品和保健食品等行业。在我国，花生蛋白主要以花生蛋白粉的形式存在，主要作为食品加工中的基础原料，应用于肉制品、焙烤食品、植物蛋白饮料、调味品以及休闲食品等，主要起到改善产品质地和营养结构，提高产品营养价值的作用。然而，花生蛋白的致敏性、有限的吸收性以及溶解性，严重影响到花生蛋白的应用。

花生肽是花生蛋白经降解所得，具有良好的吸收性、溶解性、流动性以及低致敏性。近年来，大量国内外研究显示花生肽具有抗氧化、抗菌、降压、抗疲劳等生理功能。肝脏作为人体中重要的解毒器官，是许多药物、外源性化学物质、氧化性毒物的重要靶点。花生肽在护肝方面的活性报道较少，我国学者陈贵堂等以及彭维兵等分别以半乳糖和四氯化碳制备急性肝损伤小鼠模型，探究花生肽的护肝功能；研究结果显示花生肽能明显降低血清中总胆汁酸的积累，抑制谷丙转氨酶和碱性磷酸酶活性，提高肝脏中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性，降低大鼠肝脏中的脂褐素含量，有效减轻大鼠肝脏的组织病理形态学变化，防止血清中丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶的升高。由此可见，花生肽对半乳糖以及四氯化碳所致急性肝损伤具有明显的保护作用。

目前，工业制备花生肽的方法有化学水解法、酶水解法和发酵法三种。化学水解法由于其工艺不易控制，水解产品无特异性，产品质量不稳定，同时破坏氨基酸造成营养成分损失，对环境污染严重，在生产中已应用很少。因此，人们常采用酶水解法及发酵法制备花生肽，其中《一种花生生物活性肽的制备方法》（申请号：201110004835.0，申请公开号：CN102174628A）、《一种利用低温花生粕制备花生蛋白和花生肽的方法》（申请号：201010110302.6，申请公开号：CN101731445A）、《一种从高温花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法》（申请号：201310077210.6，申请公布号：CN103098977A）《一种水酶法同步制备花生油和花生肽的方法》（申请号：201310077170.5，申请公开号：CN103113977A）在酶解工艺中仅采用单一碱性蛋白酶进行酶解；《一种花生肽的提取方法》（申请号：201010540547.2，申请公布号：CN101965898A）采用脂肪酶前处理，碱性蛋白酶酶解制备花生肽；《一种双中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备花生肽的方法》（申请号：201310167006.3，申请公布号：CN103222537A）采用中性蛋白酶和复合蛋白酶（内切酶和外切酶混合的酶制剂产品）制备花生肽；《一种双酶分布水解制备花生肽的方法》（申请号：201010517651.X，申请公布号：CN101999513A）采用内切酶及风味蛋白酶制备花生肽。以上专利中采用的原料分别为花生饼、粕，花生仁，花生分离蛋白，花生蛋白粉为原料，其中以花生饼、粕及花生仁为原料制备花生肽时均采用有机溶液浸提以及碱溶酸沉的工艺对原料进行前处理。有机溶剂浸提工艺增加产品中有机残留的风险，碱溶酸沉工艺对于环境的污染十分严重，不符合国家节能减排的号召。采用花生分离蛋白或花生蛋白分为原料，虽然不需要对原料进行前处理降低了产品中有机残留的风险，同时也符合环保的要求，但花生分离蛋白以及花生蛋白粉的价格要远高于花生饼粕的价格，造成产品成本价格升高，不利于后期规模化生产，同时高昂的价格，在一定程度上限制了花生肽的应用。

蒲公英为菊科，蒲公英属植物，多年生草本。是我国常见的野生蔬菜和中草药。蒲公英作为中药，始载于《唐本草》。《中国药典》中收载为蒲公英T.mogolicumHand.Mazz、碱地蒲公英T.borealisinensekitam.或同属数种植物的干燥全草，味苦、甘，性寒。归肝、胃经。具有清热解毒，消肿散结，利尿通淋的功能，用于疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛。蒲公英的化学成分主要包括有黄酮类、倍半萜内酯类、香豆素类、三萜类、植物甾醇类、酚酸类、胡萝卜素类，色素类，挥发油类，此外还包含有多种脂肪酸、糖、胆碱、维生素、矿物质、果胶、蛋白质等。国内外学者研究显示蒲公英具有抗菌、抗胃损伤、保肝胆、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、增强机体免疫力等功能。Domitrivi.R等对蒲公英研究显示蒲公英根水提物可显著减少四氢化碳肝纤维化，增强肝脏再生能力。任丽萍等研究显示蒲公英能显著降低乙醇引起急性肝损伤小鼠血清ALT和AST水平。

目前对花生肽的研究仅限于单一产品的工艺制备或功能的研究，关于蒲公英产品的研究主要集中在以蒲公英或蒲公英与一种或几种植提物配伍的饮料或保健茶，尚未有人提出将花生肽与蒲公英联合，制备一款具有护肝功能组合物的思路和方法。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种以花生肽为主要成分的具有护肝功能的组合物及其应用。为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究和探索，最终获得了如下技术方案：

一种具有护肝功能的花生肽组合物，包括活性成分和辅料，所述的活性成分含有花生肽和蒲公英提取物，所述的花生肽按如下方法制备而成：以冷榨花生粕为原料，经高温变性后采用复合酶Ⅰ前处理，然后调节料液pH=4.5，2000r/min-4000r/min离心取沉淀，加水调节料液比1:10～1:60(w/v)，采用复合酶Ⅱ进行酶解2-6小时制备而成；所述的复合酶Ⅰ由质量比为1:1:2～1:2:4的高温淀粉酶、糖化酶和纤维素酶组成，所述的复合酶Ⅱ由质量比为1:0.1～1:1的碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成。

优选地，如上所述具有护肝功能的花生肽组合物所采用的花生肽，其中所述的复合酶Ⅰ的添加量为冷榨花生粕原料干物质重量的0.5%-2%（w/w）。

优选地，如上所述具有护肝功能的花生肽组合物所采用的花生肽，其中所述的复合酶Ⅱ的添加量为冷榨花生粕原料干物质重量的2%-6%（w/w）。

进一步优选地，如上所述具有护肝功能的花生肽组合物，其中所述的活性成分由花生肽与蒲公英提取物组成。

再进一步优选地，如上所述具有护肝功能的花生肽组合物，其中所述的组合物为口服液，所述的花生肽在口服液中的添加量为5%-20%（w/v），蒲公英提取物在口服液中的添加量为0.5%-1%（w/v）。

再进一步优选地，如上所述具有护肝功能的花生肽组合物，其中所述的辅料选自如下的一种或多种：白砂糖、柠檬酸和柠檬酸钠。

为了增强蒲公英提取物的护肝功能，发明人意外地发现，将蒲公英提取物与花生肽联用后制备成组合物，不仅弥补了纯植物提取物产品营养成分单一、缺乏氨基酸类营养成分的不足，而且获得协同保肝护肝的功效。因此，本发明还提供了组合物的医药新用途，即：花生肽联合蒲公英提取物在制备具有护肝功能的药物或保健品中的应用。

与现有技术相比，本发明涉及的花生肽组合物及其制备方法具有如下优点和显著的进步：

（1）本发明采用的花生肽以高温淀粉酶、糖化酶、纤维素酶进行原料前处理，减少对原料成分的破坏，保持花生蛋白所含有的营养，同时提纯原料蛋白含量，为酶解工艺创造良好的条件，复配碱性蛋白酶与胰蛋白酶制备花生肽。

（2）本发明与专利号94116417.9《蒲公英饮料及其制备方法》、专利号201110026924.5《蒲公英低糖饮料及其制备方法》以及专利号200810062455.0《一种蒲公英保健茶及其制备方法》相比，最大的不同在于添加蒲公英提取物的同时添加了花生肽，弥补了纯植物提取物产品营养成分单一，缺乏氨基酸类营养成分的不足。同时添加的小分子花生肽具有致敏性低、吸收性高，营养丰富与等特点。且花生肽和蒲公英提取物的研究表明两者均具有明显护肝功能，将两者配伍而成制备口服液，强化其护肝功能及营养特性。

具体实施方式

以下通过实施例形式对本发明的花生肽组合物及其制备工艺再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的保护范围。

实施例1花生肽的制备

将冷榨花生粕加水以料液比1:10（w/v）均匀混合，经高温变性后采用复合酶Ⅰ前处理2h，复合酶Ⅰ由质量比为1：2：4的高温淀粉酶、糖化酶和纤维素酶组成，添加量为原料干物质重量的2%（w/w）；然后调节料液pH=4.5，离心取沉淀，加水调节料液比1:30（w/v），采用复合酶Ⅱ进行酶解4小时，复合酶Ⅱ由质量比为1：0.2的碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成，添加量为原料干物质重量的4%（w/w）。酶解结束后，过滤取滤液，浓缩干燥得花生肽,其蛋白质含量90.41%，肽含量76.32%。

实施例2花生肽口服液的制备

称取实施例1制备的花生肽100g，以及蒲公英提取物10g（蒲公英提取物购于吉林省宏久生物科技股份有限公司），白砂糖70g，柠檬酸9g溶解于1L纯净水中，混合均匀，加热脱气，灭菌，热灌装。口服液蛋白质含量9.1%，多肽含量7.5%，可溶性固形物18.41%，类黄酮0.036%。

实施例3花生肽的制备

将冷榨花生粕加水以料液比1:40（w/v）均匀混合，经高温变性后采用复合酶Ⅰ前处理2h，复合酶Ⅰ由质量比为1：2：2的高温淀粉酶、糖化酶和纤维素酶组成，添加量为原料干物质重量的2%（w/w）；然后调节料液pH=4.5，离心取沉淀，加水调节料液比1:30（w/v），采用复合酶Ⅱ进行酶解4小时，复合酶Ⅱ由质量比为1：0.5的碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成，添加量为原料干物质重量的4%（w/w）。酶解结束后，过滤取滤液，浓缩干燥得花生肽，其蛋白质含量91.25%，多肽含量78.84%。

实施例4花生肽口服液的制备

称取实施例3制备的花生肽200g，以及蒲公英提取物10g（蒲公英提取物购于吉林省宏久生物科技股份有限公司），白砂糖70g，柠檬酸7g溶解于1L纯净水中，混合均匀，加热脱气，灭菌，热灌装。口服液蛋白质含量17.92%，多肽含量13.45%，可溶性固形物27.94%，类黄酮0.038%。

实施例5复合酶Ⅰ对花生肽品质的影响研究

本项目采用高温淀粉酶、糖化酶和纤维素酶对花生粕进行复合酶解前处理，不仅最大限度的保证了原料的营养成分，同时保证了产品的安全性且生产工艺符合国家节能减排的政策。本实施案例以蛋白质、多肽及相对分子质量小于1000的蛋白质水解物所占比例为指标，探究花生粕最佳前处理条件，其指标检测方法参看国标准GB/T22492-2008《大豆肽粉》，结果见表1。

表1复合酶Ⅰ对花生肽品质的影响结果

实施例6复合酶Ⅱ对花生肽品质的影响研究

本实施例以花生粕为原料采用高温变性，复合酶Ⅰ前处理，其比例为1:1:1，调节pH至4.5离心取沉淀，调节料液比1:20采用复合酶Ⅱ进行酶解制备花生肽，其检测指标方法参看国标准GB/T22492-2008《大豆肽粉》。复合酶Ⅱ对花生肽品质的影响结果详见表2。

表2复合酶Ⅱ对花生肽品质的影响结果

实施例7口感外观调试试验研究

以实施案例3制备的花生肽产品为原料，添加不同量的蒲公英，探讨其对于口服液感官的影响。详情见表3所示。

表3不同配方对口感外观的影响结果

实施例8花生肽口服液毒性试验研究

取实施例4制备的花生肽口服液，以口服液配方干物质为受试物，按照《保健食品功能学评价程序与检验方法规范》，以昆明小鼠为实验动物，雌雄各半，采用最大灌胃量法（MTD）进行实验，计量设计为10.0g/kg.bw，24h内灌胃3次，连续观察两周。小鼠均无死亡，体重有所增长，与空白对照组相比无显著性差异。可见，本发明具有护肝功能的花生肽口服液属实际无毒物质。

实施例9花生肽口服液的保肝功效研究

以成年昆明小鼠为受试动物，体重20±2g，分为正常对照组、对照组（花生肽组及蒲公英提取物组）、模型组、实验组（低剂量、中剂量、高剂量），每组12只，饲喂常规饲料，自由采食，饮水。正常对照组、模型组以灌胃蒸馏水安慰处理。试验组灌胃实施例4制备的花生肽口服液，低剂量组灌胃量为8.35mL/kg，中剂量组灌胃量为16.7mL/kg，高剂量组灌胃量为50.1mL/kg；对照组以中剂量组的灌胃剂量为依据灌胃纯花生肽或纯蒲公英提取物，花生肽对照组灌胃剂量为3.33g/kg的花生肽，蒲公英对照组为0.167g/kg的蒲公英提取物；连续灌胃30d，于第30天将各组动物隔夜禁食16h，模型组及各实验组依次灌胃给予CCl4，空白对照组灌胃植物油。24h后眼眶取血，分离血清，测定血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）活力。取小鼠肝脏测定肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力。

试验结果显示：小鼠在实验灌胃期间，正常对照组、对照组、模型组以及各实验组体重增重基本相同，组间无显著差异（P＞0.05），具体详见表4。模型组ALT、AST、LDH、MDA含量都明显高于空白对照组，且差异呈现极显著性（P＜0.01）；SOD及GSH-PX活性明显低于空白对照组，且差异呈现极显著性（P＜0.01）。表明急性肝损伤模型造模成功。低剂量组ALT、AST、LDH、MDA含量显著低于模型组（P＜0.05），SOD及GSH-PX活性显著高于模型组（P＜0.05）；中剂量组ALT、AST、LDH显著低于模型组（P＜0.05），MDA含量极显著低于模型组（P＜0.01），SOD及GSH-PX活性显著高于模型组（P＜0.05）；高剂量组ALT、AST、LDH、MDA含量极显著低于模型组（P＜0.01），SOD及GSH-PX活性显著高于模型组（P＜0.05）；蒲公英提取物组各项指标与模型组比较无显著性差异，与中剂量组比较显示ALT、AST、LDH含量显著高于中剂量组（P＜0.05），MDA含量极显著高于中剂量组（P＜0.01），SOD及GSH-PX活性显著低于中剂量组（P＜0.05）；花生肽组ALT、LDH、MDA含量显著低于模型组（P＜0.05），SOD及GSH-PX活性显著高于模型组（P＜0.05）；与中剂量组比较显示ALT、AST、LDH、MDA含量均显著高于中剂量组组（P＜0.05），SOD及GSH-PX活性显著低于中剂量组（P＜0.05）；具体详见表5。花生肽口服液低、中、高3个剂量组均能抑制CCl4致小鼠急性肝损伤血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝脏中MDA含量，提高肝脏中SOD及GSH-PX活性，对CCl4所致肝损伤有一定辅助保护作用。蒲公英提取物组各检测指标与模型组比较差异不具备显著性，说明蒲公英提取物在此灌胃剂量条件下辅助保护肝脏损伤作用有限，花生肽组能有效降低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、LDH含量，降低肝脏中MDA含量，提高肝组织中SOD及GSH-PX活性，对肝损伤有一定的保护作用，但与中剂量组相比具有显著性差异，口服液中剂量对CCl4所致肝损伤的辅助保护作用优于同剂量的单纯蒲公英提取物及花生肽。

表4小鼠体增重检测结果（平均数±标准差）

表5小鼠血清及肝脏组织生化指标测定结果（平均数±标准差）

注：△P＜0.05，△△P＜0.01与空白组比较；*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01与中剂量组比较。

Claims (5)

1.一种具有护肝功能的花生肽组合物，包括活性成分和辅料，其特征在于：所述的活性成分由花生肽和蒲公英提取物组成；所述的组合物为口服液，所述的花生肽在口服液中的添加量为5％-20％(w/v)，蒲公英提取物在口服液中的添加量为0.5％-1％(w/v)；所述的花生肽按如下方法制备而成：以冷榨花生粕为原料，经高温变性后采用复合酶Ⅰ前处理，然后调节料液pH＝4.5,2000r/min-4000r/min离心取沉淀，加水调节料液比1:10-1:60(w/v),采用复合酶Ⅱ进行酶解2-6小时制备而成；所述的复合酶Ⅰ由质量比为1:1:2～1:2:4的高温淀粉酶、糖化酶和纤维素酶组成，所述的复合酶Ⅱ由质量比为1:0.1～1:1的碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成。

2.根据权利要求1所述具有护肝功能的花生肽组合物，其特征在于：所述的复合酶Ⅰ的添加量为冷榨花生粕原料干物质重量的0.5％-2％(w/w)。

3.根据权利要求1所述具有护肝功能的花生肽组合物，其特征在于：所述的复合酶Ⅱ的添加量为冷榨花生粕原料干物质重量的2％-6％(w/w)。

4.根据权利要求1所述具有护肝功能的花生肽组合物，其特征在于：所述的辅料选自如下的一种或多种：白砂糖、柠檬酸和柠檬酸钠。

5.根据权利要求1中所述方法制备的花生肽联合蒲公英提取物在制备具有护肝功能的药物或保健食品中的应用。