CN103655384A - 复方豆蔻提取物的微乳体系及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复方豆蔻提取物的微乳体系及其应用。具体涉及一种以豆蔻提取物为核心的微乳体系、其配方组成、其制备方法及应用。所述的豆蔻提取物以小豆蔻明和山姜素为指标成分，包含1～10重量％的豆蔻提取物，0.5～20重量％的油相，0.5～30重量％的乳化剂，0.5～10重量％的助乳化剂，并制备成纳米微乳体系，进一步制备成水剂、乳剂、凝胶剂、膏霜等形态，用于美白系列产品的开发利用，清除自由基，祛除黄气，调匀肤色，抑制黑色素的产生，防止，抑制光照射所致的色素沉着和皮肤暗沉。

Description

复方豆蔻提取物的微乳体系及其应用

技术领域

本发明属于中药药物制剂和植物护肤品领域。本发明公开了一种复方豆蔻提取物的微乳体系及其应用。具体涉及一种以豆蔻提取物为核心的微乳体系、其配方组成、其制备方法及应用。所述的豆蔻提取物以小豆蔻明和山姜素为指标成分，并制备成纳米微乳体系，进一步制备成水剂、乳剂、凝胶剂、膏霜等形态。

背景技术

豆蔻为姜科山姜属Alpinia植物，顶生的穗状花序、花蕾时包藏于佛焰苞状的总苞片中、唇瓣有美丽的色彩，杜牧《樊川文集》有“娉娉袅袅十三余，豆蔻梢头二月初”之语，用来比喻“娉娉袅袅十三余”的少女，言其年少而体态柔美。以“豆蔻”为名的中药有四味，即白豆蔻、草豆蔻、红豆蔻和肉豆蔻。四药均富含挥发油，具芳香之气。在古希腊和古罗马，豆蔻被用作香水中的主要成分。古埃及的妇女则喜欢点燃豆蔻在具有奇香的烟中“熏浴”。在欧洲十三世纪时它被视为防腐剂和调料中的珍品而供不应求。文献报道草豆蔻主要含有黄酮、双苯庚焼、二苯乙烯及萜类等化合物，山姜素和小豆蔻明是其中主要的黄酮类有效成分。[王秀芹等.草豆蔻化学成分研究[J].中药材，2008，31(6)：853-855.]草豆蔻总黄酮作为天然抗氧化剂可清除体内自由基，分解过氧化氢及过氧化物，阻止自由基的产生及细胞膜脂质过氧化过程，且抗氧化作用随浓度的增加逐渐增强。

皮肤的颜色取决于黑色素的含量及分布。黑色素形成的生理过程基本概括为：黑色素细胞产生黑色素；黑色素颗粒通过黑色素细胞树枝状突起向角朊细胞转移；转移至角朊细胞的黑色素颗粒随表皮细胞上行至角质层，并随角质层脱落而排泄。酪氨酸酶是黑色素合成反应的限速酶，其异常表达过量和催化活性升高会引起黑色素生成过多，从而引发黄褐斑、老年斑等色素性疾病。氧自由基是酪氨酸酶催化L-酪氨酸最终生成黑色素的引发剂和反应物，同时也是人体衰老的重要因素之一。体内氧自由基产生过多或清除过慢不仅会使皮肤血管老化，营养成分不能及时输送到肌肤，使面色萎黄无华，同时也会促进酪氨酸酶催化氧化，生成脂褐素，因其不溶于水，不易排除，在细胞内大量堆积，故而形成斑点。清除氧自由基不仅可及时滋养肌肤，也可进一步抑制酪氨酸酶的催化活性，减少皮肤中色素生成，阻止色素沉着，达到美白皮肤的目的。

黄酮类化合物广泛存在于植物界，其中许多具有清除皮肤中自由基、促进皮肤新陈代谢、减少色素沉着、润泽肌肤等作用。在我国，已产业化开发出许多植物黄酮类提取物，如银杏提取物、竹叶提取物、甘草黄酮、大豆异黄酮等，一些已应用于化妆品行业。草豆蔻提取物中以山姜素和小豆蔻明为黄酮类成分的代表，其药理活性主要表现在抑制血小板聚集、抑制肿瘤形成、抗炎抑菌等方面，并且毒性很低，安全性好。本实验室研究了草豆蔻提取物的体外抗氧化作用和对酪氨酸酶活性的抑制作用，结果表明，草豆蔻提取物可淡化色斑，具有一定的美白功效，为其在化妆品领域，特别是在美白系列产品的应用提供了实验依据。

作为一种植物提取物，豆蔻提取物在改善血液循环和改善皮肤的通透性方面有很大的促进作用。能在不破坏皮肤黑色素正常新陈代谢的情况下，加速黑色素细胞代谢过程，缩短黑色素细胞的生理周期，不让黑色素过度沉积而形成色斑，并且增加皮肤的血液循环，使皮肤真正达到从内而外的健康白皙。

发明内容

本发明公开了一种复方豆蔻提取物的微乳体系及其应用。具体涉及一种以豆蔻提取物为核心的微乳体系、其配方组成、其制备方法及应用。所述的豆蔻提取物以小豆蔻明和山姜素为指标成分，并制备成纳米微乳体系，进一步制备成水剂、乳剂、凝胶剂、膏霜等形态，用于美白系列产品的开发利用，清除自由基，祛除黄气，调匀肤色，抑制黑色素的产生，防止，抑制光照射所致的色素沉着和皮肤暗沉。

在本发明的第一个方面，提供了一种复方豆蔻提取物的微乳体系，所述体系包含1～10重量％的豆蔻提取物，0.5～20重量％的油相，0.5～30重量％的乳化剂，0.5～10重量％的助乳化剂。

其中所述的豆蔻提取物选自白豆蔻、草豆蔻、红豆蔻和肉豆蔻的提取物，优选草豆蔻提取物。

其中所述的豆蔻提取物可采用目前可得的植物提取的各种提取方式获得，优选以草豆蔻果实为原料，经超临界提取或水蒸气蒸馏而成的产物，为无色至黄色液体或喷雾干燥产物。

其中所述的豆蔻提取物以小豆蔻明和山姜素为指标成分。

所述的油相可以选自蓖麻油、橄榄油、单亚油酸甘油酯、油酸、肉豆蔻酸异丙酯中的一种或几种的混合混合物。

所述的乳化剂可以选自吐温20、吐温80、月桂酸钠、硬脂醇硫酸钠、硫酸化蓖麻油、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一种或几种的混合物。

所述的助乳化剂可以选自乙二醇、乙醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯中的一种或几种的混合物。

本发明所述的复方豆蔻提取物的微乳体系可以通过下述方法制备：

各组分的质量百分比如下(质量％)

制备方法：按照处方量将豆蔻提取物与吐温80(作为乳化剂)混合，搅拌使其完全溶解后依次加入油酸(作为油相)和乙醇(作为助乳化剂)，加入适量双蒸水，调节pH值至6-8，补加双蒸水至总重，即得。

在本发明的第二个方面，提供了一种复方豆蔻提取物的微乳体系，其中体系中除豆蔻提取物外，还可以复配有选自甘草黄酮、传明酸、维生素C或葛根黄酮苷中的一种或多种其他抑制色素沉着或美白的成分，所述任意一种其他抑制色素沉着或美白的成分的含量为0.05～3重量％。

本发明所述的复方豆蔻提取物的微乳体系可进一步制备成水剂、乳剂、膏霜和凝胶剂用于制备美白系列化妆品。

综上所述，本发明提供下述各项：

1.一种复方豆蔻提取物的微乳体系，其包含1～10重量％的豆蔻提取物，0.5～20重量％的油相，0.5～30重量％的乳化剂，0.5～10重量％的助乳化剂。

2.根据第1项所述的微乳体系，其中所述豆蔻提取物选自白豆蔻、草豆蔻、红豆蔻和肉豆蔻的提取物，优选草豆蔻提取物。

3.根据第1项所述的微乳体系，其中所述豆蔻提取物以草豆蔻果实为原料，经超临界提取或水蒸气蒸馏而成的产物，为无色至黄色液体或喷雾干燥产物。

4.根据第1项所述的微乳体系，其中所述油相选自蓖麻油、橄榄油、单亚油酸甘油酯、油酸、肉豆蔻酸异丙酯中的一种或几种的混合物；所述乳化剂选自吐温20、吐温80、月桂酸钠、硬脂醇硫酸钠、硫酸化蓖麻油、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一种或几种的混合物；所述助乳化剂选自乙二醇、乙醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯中的一种或几种的混合物。

5.根据第1项所述的微乳体系，其中所述豆蔻提取物以小豆蔻明和山姜素为指标成分。

6.根据第1项所述的微乳体系，其中还可以复配有其他抑制色素沉着或美白的成分，所述其他抑制色素沉着或美白的成分选自甘草黄酮、传明酸、维生素C、葛根黄酮苷中的一种或多种。

7.根据第6项所述的微乳体系，其中任一种所述其他抑制色素沉着或美白的成分的含量为0.05～3重量％。

8.第1项所述的微乳体系在制备美白系列化妆品的应用。

9.一种美白系列化妆品，其包含第1项所述的微乳体系。

附图说明

从下面结合附图的详细描述中，本发明的上述特征和优点将更明显，其中：

图1：显示的是豆蔻提取物和维生素C对DPPH·自由基的清除能力测定。结果表明豆蔻提取物与维生素C对DPPH自由基都表现出明显的清除活性，清除作用随浓度的增加而增强，维生素C对DPPH自由基的清除能力强于豆蔻提取物，当浓度达到0.5mg·mL^-1时，两者对DPPH自由基的清除能力相近。

图2：显示的是豆蔻提取物和维生素C对羟自由基(-OH·)的清除能力的测定。结果显示：豆蔻提取物与维生素C对羟自由基(-OH·)都表现出明显的清除活性，清除作用随浓度的增加而增强，当浓度达到0.9mg·mL^-1时，两者对羟自由基(-OH·)的清除能力相近。

图3：显示的是豆蔻提取物和维生素C对超氧阴离子自由基(O₂-·)的清除能力测定。结果显示：豆蔻提取物与维生素C对超氧阴离子自由基(O₂-·)都表现出明显的清除活性，清除作用随浓度的增加而增强，且清除能力比较接近，说明豆蔻提取物和维生素C对超氧阴离子自由基(O₂-·)的清除能力相近。清除效果良好。

图4：显示的是豆蔻提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用。豆蔻提取物具有明显抑制酪氨酸酶活性的作用，随着浓度增加而提高，而添加了传明酸的复方豆蔻提取物效果更加显著。

图5：显示的是豆蔻提取物与阳性对照药维生素c对B16细胞的抑制作用。A图为正常的B16细胞，细胞轮廓清晰，结构清楚，饱满、立体感强。B图为豆蔻提取物给药后被抑制的细胞，细胞轮廓模糊，萎缩，出现纤维化。C图为阳性对照药维生素C给药后被抑制的细胞。细胞已经失去细胞形态，严重萎缩脱落，性状越发不规则。表明豆蔻提取物和维生素C对黑色素B16细胞的正常生长和增殖具有显著抑制作用。通过抑制细胞增殖，从而减少细胞黑色素的产生，起到美白效果。

具体实施方式

下面参照具体的实施例进一步描述本发明，但是本领域技术人员应该理解，本发明并不限于这些具体的实施例。

实施例一、豆蔻提取物抗氧化活性研究

本实施例所用的豆蔻提取物具体是中药材草豆蔻籽通过CO₂超临界流体萃取法制得的提取物，其中山姜素和小豆寇明的含量分别不低于5mg／g和0.6mg／g。

1)DPPH·自由基的清除能力测定：分别取2mL样品溶液置于试管中，再加入2.0mL质量浓度为0.2577mg／mL的DPPH溶液，混合均匀，常温避光反应30min后，在517nm处以溶剂调零后测吸光值为Ai；2mL样品加入2mL溶剂混匀测吸光度记为Aj；2mL溶剂加入2mL DPPH溶液混匀测吸光度记为Ac；取Vc作为阳性对照。样品和标准对照溶液的浓度梯度都依照配制的溶液进行。每个浓度测3个平行样，取其平均值。测定结果以清除率表示。

清除率(％)=(1-(Ai-Aj)／Ac)×100，结果见表1及图1。

表1.DPPH·自由基的清除能力测定(n=3)

实验结果显示：豆蔻提取物与维生素C对DPPH自由基都表现出明显的清除活性，清除作用随浓度的增加而增强，维生素C对DPPH自由基的清除能力强于豆蔻提取物，当浓度达到0.5mg·mL^-1时，两者对DPPH自由基的清除能力相近。

2)羟自由基(-OH·)的清除能力测定：采用水杨酸法测定，具体操作如下：6mmol／L硫酸亚铁溶液，6mmol／L水杨酸-乙醇溶液，各浓度样液均为2mL，再加入0.06mL6.6mmol／L H₂O₂启动反应，总体系为6.06mL。以双蒸水或不同浓度乙醇代替样液作空白对照(A₀)，样品本底吸收A_x0。以双蒸水代替H₂O₂。37℃水浴反应30min，在波长510nm的波长下测定吸光度，分别记作A_x、A_x0、A₀。取Vc作为阳性对照。样品和标准对照溶液的浓度梯度都依照配制的溶液进行。

每个浓度测3个平行样，取其平均值。测定结果以清除率表示。

清除率(％)=(A₀-(A_x-A_x0))／A₀×100，结果见表2及图2。

表2.羟自由基(-OH·)的清除率测定(n=3)

实验结果显示：豆蔻提取物与维生素C对羟自由基(-OH·)都表现出明显的清除活性，清除作用随浓度的增加而增强，当浓度达到0.9mg·mL^-1时，两者对羟自由基(-OH·)的清除能力相近。

3)超氧阴离子自由基(O₂-·)的清除能力测定：采用邻苯三酚自氧化法进行测定，具体操作如下：取50mmol／L pH8.2Tris-HCl缓冲溶液4.5mL，加入4.2mL的超纯水，混匀后在25℃水浴20min后，加入25℃预热的0.3mL3mmol／L的邻苯三酚溶液(溶剂为10mmol／L的HCl溶液)，迅速摇匀后，于325nm波长处测定反应至5min时的吸光度，计算线性范围内每分钟吸光度的增加值A₀；用1mL待测样液代替超纯水，最后用超纯水定容至9mL，按上述步骤测反应至5min时的吸光度，计算线性范围内每分钟吸光度的增加值A；测定时用10mmol／L HCl代替待测液做空白对照，取Vc作为阳性对照。样品和标准对照溶液的浓度梯度都依照配制的溶液进行。每个浓度测3个平行样，取其平均值。测定结果以清除率表示。

清除清除率(％)=(A₀-A)／A₀×100，结果见表3及图3。

表3.超氧阴离子自由基(O₂-·)的清除能力测定(n=3)

实验结果显示：豆蔻提取物与维生素C对超氧阴离子自由基(O₂-·)都表现出明显的清除活性，清除作用随浓度的增加而增强，且清除能力比较接近，说明豆蔻提取物和维生素C对超氧阴离子自由基(O₂-·)的清除能力相近。

实施例二、豆蔻提取物对酪氨酸酶的抑制作用研究

以L-Dopa为底物测定细胞酪氨酸酶活性。调整黑素细胞(黑素细胞购自武汉大学中国典型培养物保藏中心)密度，以10⁵个／孔接种于6孔板，在含10％FBS(杭州四季青生物工程材料有限公司)的DMEM高糖培养基(美国Gibco公司)培养24h后换为不含FBS的DMEM含药培养基，每孔加入2mL的梯度浓度(1、0.5、0.25mg／mL)豆蔻提取物、1mg／mL复方豆蔻提取物(豆蔻提取物：传明酸=25：1(w／w))和阳性对照0.5mg／mL维生素C溶液，每个浓度设置3个复孔，对照组加入新鲜培养液代替药物溶液，5％CO₂，37℃孵育3d后(中间换液一次)，药物作用3d后，弃去上清液，0.25％胰酶消化收集细胞，PBS洗3次，每孔加400μl1％TritonX-100溶液，震荡10min以溶解细胞，每孔加0.01mol／L的L-Dopa溶液，37℃孵育60min，于450nm波长处比色，以空白孔调零，在酶联免疫检测仪测各孔吸光度值，每一实验重复3次。

酪氨酸酶活性抑制率％=(1-各浓度平均吸光度值÷对照组平均吸光度值)×100％，结果见表4以及图4。

表4.豆蔻提取物酪氨酸酶活性抑制实验(n=3)

实验结果显示：豆蔻提取物及复方豆蔻提取物具有明显抑制酪氨酸酶活性的作用。豆蔻提取物随着浓度的增加而提高，复方豆蔻提取物与豆蔻提取物和维生素C(Vc)相比，效果更加显著。酪氨酸酶与黑色素生成具有密切的联系。豆蔻提取物及复方豆蔻提取物通过抑制酪氨酸酶的活性从而抑制黑色素的生成，对美白具有一定的促进作用。

实施例三、豆蔻提取物微乳的制备

按照以下方法制备，各组分的质量百分比如下(质量％)：

制备方法：按照处方量将25g豆蔻提取物与100g吐温80混合，搅拌使其完全溶解后依次加入200g油酸和50g乙醇，加入适量双蒸水，调节pH值至6-8，补加双蒸水至1000g，即得。

实施例四、复方豆蔻提取物微乳的制备

按照以下方法制备，各组分的质量百分比如下(质量％)：

制备方法：按照处方量将25g豆蔻提取物、1g传明酸和25g水溶性甘草黄酮与100g吐温80(作为乳化剂)混合，搅拌使其完全溶解后依次加入200g油酸(作为油相)和50g的乙醇(作为助乳化剂)，加入适量双蒸水，调节pH值至6-8，补加双蒸水至1000g，即得。

实施例五、复方豆蔻提取物微乳美白功效的动物模型评价

方法：紫外线连续照射7d造成花色豚鼠皮肤黑化模型，在褐色无毛部位连续涂抹待测样品30d。Maxmeter仪检测皮肤黑色素指数(MI)和红色素指数(EI)的变化。安乐处死动物后取皮肤组织，多聚甲醛固定、石蜡切片，Fontana-Masson黑色素染色法染色，对组织切片进行图像分析。

结果UV照射豚鼠皮肤后，MI指数升高，组织学观察显示黑色素颗粒增大和表皮层分布增多。

表5.美白效果比较

由上表可知，复方豆蔻提取物微乳能降低黑色素指数，提高红细胞指数，表皮细胞内黑色颗粒下降明显，具有美白效果。

应该理解，尽管参考其示例性的实施方案，已经对本发明进行具体地显示和描述，但是本领域的普通技术人员应该理解，在不背离由后附的权利要求所定义的本发明的精神和范围的条件下，可以在其中进行各种形式和细节的变化，可以进行各种实施方案的任意组合。

Claims (9)

1.一种复方豆蔻提取物的微乳体系，其包含1～10重量％的豆蔻提取物，0.5～20重量％的油相，0.5～30重量％的乳化剂，0.5～10重量％的助乳化剂。

2.根据权利要求1所述的微乳体系，其中所述豆蔻提取物选自白豆蔻、草豆蔻、红豆蔻和肉豆蔻的提取物，优选草豆蔻提取物。

3.根据权利要求1所述的微乳体系，其中所述豆蔻提取物以草豆蔻果实为原料，经超临界提取或水蒸气蒸馏而成的产物，为无色至黄色液体或喷雾干燥产物。

4.根据权利要求1所述的微乳体系，其中所述油相选自蓖麻油、橄榄油、单亚油酸甘油酯、油酸、肉豆蔻酸异丙酯中的一种或几种的混合物；所述乳化剂选自吐温20、吐温80、月桂酸钠、硬脂醇硫酸钠、硫酸化蓖麻油、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一种或几种的混合物；所述助乳化剂选自乙二醇、乙醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯中的一种或几种的混合物。

5.根据权利要求1所述的微乳体系，其中所述豆蔻提取物以小豆蔻明和山姜素为指标成分。

6.根据权利要求1所述的微乳体系，其中还可以复配有其他抑制色素沉着或美白的成分，所述其他抑制色素沉着或美白的成分选自甘草黄酮、传明酸、维生素C、葛根黄酮苷中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的微乳体系，其中任一种所述其他抑制色素沉着或美白的成分的含量为0.05～3重量％。

8.权利要求1所述的微乳体系在制备美白系列化妆品的应用。

9.一种美白系列化妆品，其包含权利要求1所述的微乳体系。

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