CN103650918B - 用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法 - Google Patents
用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于菌类培养技术领域，具体涉及一种用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法。该方法包括使用了以下组成的培养基：木屑65-75份、麸皮25-30份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖1-3份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成；经拌料、装瓶、灭菌、接种和培养得萌发菌菌种。本发明方法采用的培养基透气性强，营养丰富；通过培养基的制作和培养条件的优化控制，制作出的萌发菌菌种产量高，生长均匀，生长周期统一，生命力强，培养条件易于控制。
Description
技术领域
本发明属于菌类培养技术领域，具体涉及一种用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法。
背景技术
天麻有性繁殖，即种子繁殖，这是防止天麻退化的主要途径之一。但天麻种子微小，无胚乳仅由原胚细胞组成，它的萌发靠小菇属(Mycena)一类真菌菌丝侵染种胚提供营养，故统称促进天麻种子萌发的这类真菌为天麻种子萌发菌。到目前为止，文献报道的萌发菌均主要包括紫萁小菇(Mosmundicola)、石斛小菇(Mdendrobii)、开唇小菇(Manoectochila)等，又以紫箕小菇应用最广。
以紫萁小菇为例，凡被紫萁小菇菌丝侵染的天麻种胚或原球茎细胞，其原生质及细胞器逐渐消失而出现许多不定形的囊状体，在种胚萌发至原球茎阶段，主要靠这种囊状体对紫萁小菇菌丝进行包围消化。试验证明，天麻种子不仅在胚萌动初期，而是从种子发芽到原球茎生长并分化出营养繁殖茎的整个阶段，都需要消化侵入的紫萁小菇等萌发真菌以获得营养，发芽后的原球茎及营养茎，如能和蜜环菌建立起营养关系，才能正常生长，长出粗壮的新生天麻。因此，萌发菌的生命力影响着天麻的生长状况，要提高天麻栽培的成功率就必须采用优良的萌发菌栽培种。
萌发菌母种或原种一般可通过商业渠道获得，对原种进行一次菌种的扩培即得到栽培种，可直接用于天麻的栽培。传统的以树叶为主要原料的萌发菌培养基，因树叶太薄，营养不足，致使萌发菌菌种先天不足，接种到天麻后生长不良，导致天麻原球茎因营养不足而在接蜜环菌前提前衰亡。
中国专利申请201110126299.1公开了一种用萌发菌处理天麻种子的方法，其中就涉及小菇属真菌二级菌种的培养。该方法在培养萌发菌菌种时，采用下述组分的培养基：78%的阔叶木屑、20%的麦麸、1%的蔗糖、1%的硫酸钙或阔叶木屑、约20%玉米芯粉、10%麦麸、0.01%磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。本发明人在实际栽培中，发现采用该方法的培养基进行密环菌菌种的培养时，虽然比传统的以树叶为主要原料的培养基效果好，但是却时常出现菌种生长参差不齐、部分菌种瓶长菌不均匀的情况。经考察和研究，小菇属等天麻种子共生萌发菌是一类好气真菌，在培养过程中，如果培养料装得太多或太紧，会延缓这类菌的生长，延长培养时间。由于按上述培养基配方配制的培养基过于致密、透气性差，有的还出现板结现象，在装料过程中，难以保证装料量和装料松紧度一致，导致出现菌种生长状况差异大、培养周期不一、培养条件不好控制等问题。
基于上述现有技术存在的问题，本发明对萌发菌菌种的培养基及菌种的制作方法进行了改进发明。
发明内容
有鉴于此，本发明首先提供一种透气性好、营养丰富的萌发菌菌种的培养基。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种萌发菌菌种的培养基，按重量份计由以下组分组成：木屑65-75份、麸皮25-30份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖1-3份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成。
进一步，所述萌发菌菌种的培养基，按重量份计由以下组分组成：木屑70份、麸皮27份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的杂木屑按重量比2:1组成。
其中，所述磷肥包括磷酸钙、钙镁磷肥等。所述杂木屑也优选阔叶树的木屑，因为阔叶性的木屑木质相对其它树木来说比较松软，有助于菌丝的分解和吸收。
本发明萌发菌菌种的培养基，配合使用了粗木屑和细木屑，制成的培养基透气性强；采用葡萄糖代替常规培养基中的蔗糖，便于萌发菌吸收利用；各组分协同作用，营养丰富，特别适合用于萌发菌菌种的制作。
本发明在上述提供的培养基的基础上，还提供一种产量高、培养条件易于控制的用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法。
一种用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，包括以下步骤：
A、拌料：按照培养基配方称取培养料，所述培养基按重量份计由以下组分组成：木屑65-75份、麸皮25-30份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖1-3份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成；将阔叶树木屑放入葡萄糖水溶液中充分浸润后，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为55%-70%；
B、将上述拌好的培养基进行装瓶、灭菌、接种；
C、培养：将接种后的菌种瓶于20-25℃背光培养，至萌发菌菌丝长满菌种瓶即可。
进一步，所述用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，包括以下步骤：
A、拌料：按照培养基配方称取培养料，所述培养基按重量份计由以下组分组成：木屑70份、麸皮27份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成；将阔叶树木屑放入葡萄糖水溶液中充分浸润后，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为60%；
B、将上述拌好的培养基进行装瓶、灭菌、接种；
C、培养：将接种后的菌种瓶于20-25℃背光培养60天，发出的菌丝即可用于生产。
进一步，所述步骤A中，是将阔叶树木屑放入质量分数为1%的葡萄糖水溶液中浸润10-14小时。
进一步，所述葡萄糖水溶液为溶解有葡萄糖的磷酸盐缓冲液，缓冲液的pH为5.0-5.5。
进一步，步骤A所述的杂木屑也是阔叶树的木屑。
进一步，步骤A所述的磷肥包括磷酸钙和/或钙镁磷肥。
进一步，所述萌发菌为紫萁小菇，此时步骤A中，控制培养基的含水量为60%-70%。
步骤B所述装瓶是将拌匀后的培养料装入菌种瓶，也可以是罐头瓶。所述灭菌和接种按常规菌种培养方法进行即可。
本发明用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，采用了透气性强和营养丰富的培养基，且在培养基的拌料过程中，充分使葡萄糖的营养成分均匀而充分的渗入木屑内部，再通过培养条件的优化控制，制作出的萌发菌菌种产量高，生长均匀，生长周期统一，生命力强，培养条件易于控制。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例和对照例进行详细描述。本实施例和对照例中用于扩大繁殖成萌发菌菌种的原种购买自河南农富康生物科技有限公司；其中未注明具体条件的实验方法，参照NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行。
实施例1
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的杂木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润12小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为60%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养60天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
实施例2
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的阔叶树木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润12小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为60%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养60天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
实施例3
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的杂木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液（为溶解有葡萄糖的磷酸盐缓冲液，缓冲液的pH为5.0-5.5）中浸润12小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为60%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养59天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
实施例4
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2cm的杂木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润10小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为65%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养61天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
实施例5
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.4cm的杂木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润14小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为55%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养62天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
实施例6
按下列配比称取培养基：木屑65份、麸皮30份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖1份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的杂木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润13小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为70%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养62天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
实施例7
按下列配比称取培养基：木屑75份、麸皮25份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖3份，木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的杂木屑按重量比2:1组成。将阔叶树木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润12小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为65%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养63天，萌发菌菌丝即长满整个菌种瓶，不同菌种瓶的生长情况基本一致，可停止培养，将菌丝用于天麻的生产。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索密集，菌索韧。
对照例1
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑为粒径0.3cm的阔叶树杂木屑。将木屑放入1%的葡萄糖水溶液中浸润12小时，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为60%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养，至57-68天，萌发菌菌丝陆续长到最佳状态。获得的萌发菌菌种菌丝粗壮，菌索韧，但在同一菌种瓶中生长不很均匀。
对照例2
按下列配比称取培养基：木屑70份、麸皮27份、磷肥（磷酸钙）1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，木屑为粒径0.3cm的阔叶树杂木屑。将培养基各配料加水混合拌匀，控制培养基的含水量为60%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养，至63-72天，萌发菌菌丝陆续长到最佳状态。获得的萌发菌菌种菌丝较粗壮，菌索韧，但在同一菌种瓶中生长不很均匀，且有部分菌种瓶菌丝比较稀少。
对照例3
按下列配比称取培养基：78%的阔叶木屑、20%的麦麸、1%的蔗糖、1%的石膏粉，木屑为粒径0.3cm的阔叶树杂木屑。将培养基各配料加水混合拌匀，控制培养基的含水量为60%。将拌匀的培养料装入菌种瓶，1.4kg/cm2高压灭菌1小时。按NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，于20-25℃背光培养，至31-75天，萌发菌菌丝陆续长到最佳状态。获得的萌发菌菌种菌丝较细脆，菌索韧性不足，菌索稀疏，在同一菌种瓶中生长不均匀，且有部分菌种瓶菌丝稀少，还有小部分菌种瓶未萌发菌丝。
采集实施例1-7和对照例1-3培养的萌发菌菌索，称重，以对照例3获得的萌发菌菌种重量为基准，统计结果如表1所示。
表1萌发菌菌种产量统计结果
| 序号 | 菌索相对对照例3产量 | 菌索相对对照例3产量提高 |
| 实施例1 | 145% | 45% |
| 实施例2 | 157% | 57% |
| 实施例3 | 156% | 56% |
| 实施例4 | 141% | 41% |
| 实施例5 | 138% | 38% |
| 实施例6 | 131% | 31% |
| 实施例7 | 130% | 30% |
| 对照例1 | 116% | 16% |
| 对照例2 | 109% | 9% |
| 对照例3 | 100% | 0 |
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (8)
1.一种用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、拌料：按照培养基配方称取培养料，所述培养基按重量份计由以下组分组成：木屑65-75份、麸皮25-30份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖1-3份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成；将阔叶树木屑放入葡萄糖水溶液中充分浸润后，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为55％-70％；
B、将上述拌好的培养基进行装瓶、灭菌、接种；
C、培养：将接种后的菌种瓶于20-25℃背光培养，至萌发菌菌丝长满菌种瓶即可；
所述步骤A中，是将阔叶树木屑放入质量分数为1％的葡萄糖水溶液中浸润10-14小时。
2.根据权利要求1所述的用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、拌料：按照培养基配方称取培养料，所述培养基按重量份计由以下组分组成：木屑70份、麸皮27份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成；将阔叶树木屑放入葡萄糖水溶液中充分浸润后，再与培养基的其它配料混合拌匀，控制培养基的含水量为60％；
B、将上述拌好的培养基进行装瓶、灭菌、接种；
C、培养：将接种后的菌种瓶于20-25℃背光培养60天，发出的菌丝即可用于生产。
3.根据权利要求1所述的用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，其特征在于：所述葡萄糖水溶液为溶解有葡萄糖的磷酸盐缓冲液，缓冲液的pH为5.0-5.5。
4.根据权利要求1或2所述的用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，其特征在于：步骤A所述的杂木屑也是阔叶树的木屑。
5.根据权利要求1或2所述的用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，其特征在于：步骤A所述的磷肥包括磷酸钙和/或钙镁磷肥。
6.根据权利要求1所述的用大块阔叶树木屑制作萌发菌菌种的方法，其特征在于：所述萌发菌为紫萁小菇，此时步骤A中，控制培养基的含水量为60％-70％。
7.一种萌发菌菌种的培养基，其特征在于，按重量份计由以下组分组成：木屑65-75份、麸皮25-30份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖1-3份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.2-0.5cm的杂木屑按重量比2:1组成。
8.根据权利要求7所述的萌发菌菌种的培养基，其特征在于，按重量份计由以下组分组成：木屑70份、麸皮27份、磷肥1份、石膏粉1份和葡萄糖2份，所述木屑由1cm×1cm×0.3cm的阔叶树木屑和粒径0.3cm的杂木屑按重量比2:1组成。
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