CN103648500B - 双功能酶制钳型分子的方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于癌症治疗领域。更具体来说，它涉及作为有用试剂用于抑制细胞增殖性障碍，特别是以EGFR的活性过高和/或不适当活性为特征的障碍、包括EGFR相关癌症的化合物，以及治疗这些障碍的方法。

Description

双功能酶制钳型分子的方法和用途
与相关申请的交叉引用
本申请要求分别在2011年3月17日和2011年5月16日提交的美国临时申请系列号61/453,682和61/486,453的优先权，所述每个临时申请以其全部内容通过引用并入本文。
序列表
本申请含有通过EFS-Web以ASCII格式提交的序列表，并以其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII拷贝在2012年3月14日产生，文件名为UPN-5734.txt，大小为8,152字节。
技术领域
本发明属于癌症治疗领域。更具体来说，它涉及作为有用试剂用于抑制细胞增殖性障碍，特别是以EGFR的活性过高和/或不适当活性为特征的障碍、包括EGFR相关癌症的化合物，以及治疗这些障碍的方法。
发明背景
表皮生长因子受体（EGFR）是一种细胞表面受体，其针对的是细胞外蛋白配体的表皮生长因子家族（EGF家族）的成员。
引起EGFR过表达（被称为上调）或活性过高的EGFR的异常激活，已被暗示与癌症包括肺癌、肛门癌和多形性成胶质细胞瘤密切相关，并且已经作为几种抗癌治疗剂的靶点。EGFR或家族成员的突变、扩增或错误调控，已被暗示与所有上皮癌中的约30%相关。
将EGFR鉴定为癌基因，导致开发了针对EGFR的抗癌治疗剂。两种主要策略已被用于抑制异常的EGFR信号传导：受体胞外结构域的抗体靶向，和酪氨酸激酶结构域的小分子抑制。抗体方法提供高的靶特异性，但是由于治疗剂的蛋白质本质，在药物开发中存在着限制和挑战，包括成本和递送。西妥昔单抗和帕尼单抗是单克隆抗体抑制剂的实例。其他处于临床开发阶段的单克隆抗体是扎鲁目单抗、尼妥珠单抗和马妥珠单抗。单克隆抗体阻断细胞外配体结合结构域。在结合位点被阻断时，信号分子不再能够附连并激活酪氨酸激酶。
抑制异常EGFR信号传导的另一种方法是使用小分子抑制位于受体的细胞质一侧上的EGFR酪氨酸激酶。没有激酶活性时，EGFR不能激活自身，而所述自身激活是下游接头蛋白结合的先决条件。表面上，通过在依赖信号传导级联途径生长的细胞中暂停该途径，肿瘤增殖和迁移被减弱。吉非替尼、厄罗替尼和拉帕替尼（混合的EGFR和ERBB2抑制剂）是小分子激酶抑制剂的实例。
小分子药物优于治疗性蛋白的优点包括易于制造和给药，口服用药的可能性，低的免疫原性以及对更广泛的疾病靶点、包括细胞内部靶点的适用性。事实上，EGFR的酪氨酸激酶结构域的小分子抑制剂（即 和）已被成功地开发成直接靶向EGFR的药物。但是不是所有患者都能从这样的药物获益。根据组织化验是否显示出突变，可以将患者分成EGFR阳性和阴性。使肿瘤对小分子酪氨酸激酶抑制剂敏感的最常见突变之一是所谓的L858R突变，其中EGFR肽序列中的Leu-858被Arg-858替换（所谓的“L858R突变”）。EGFR阳性患者显示出令人印象深刻的60%的响应率，超过了常规化疗的响应率。例如，参见JackmanDM等，“在以前未接受过治疗的非小细胞肺癌患者中表皮生长因子受体和KRAS突变对临床结果的影响：临床试验的在线肿瘤登记的结果”（ImpactofepidermalgrowthfactorreceptorandKRASmutationsonclinicaloutcomesinpreviouslyuntreatednon-smallcelllungcancerpatients:resultsofanonlinetumorregistryofclinicaltrials），Clin.CancerRes.15(16):5267-73（2009年8月）。然而，允许这种成功的这种突变仅存在于在EGFR的酪氨酸激酶结构域中带有该特定突变的非小细胞肺癌患者的小的子群体（约5%）上。
对于调控EGFR的过表达，以便在患有以EGFR的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍、包括EFGR相关癌症的更广泛的患者群体中抑制这样的障碍的小分子药物，存在着需求。
发明概述
本公开提供了多功能小分子化合物，其中一个官能团能够结合于EGFR的激酶结构域，以便模拟EGFR激酶结构域突变的药物敏化效应，并且另一个官能团在同时能够结合于邻近结合位点，以便抑制异常的细胞增殖、分化或存活。在本发明的某些实施方式中，这些化合物在与EGFR接触并使用酪氨酸特异性抗体测试时，提供了总EGFR的提高的组成性磷酸化以及Tyr845和/或Tyr1068的提高的组成性磷酸化，但是对Tyr992的组成性磷酸化没有或只有很小影响。
本发明提供了具有式I结构的化合物：
其中
R1独立地是H、任选取代的氨基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、任选取代的苯甲氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、任选取代的苯氧基或单、二或三氟甲基；
n为1、2或3；
R2独立地是H或C1-3-烷基；
R3A是-OR5A、-NR2R5A、-SR5A、-C(O)R5A、-C(O)OR5A、-C(O)N(R2)(R5A)、-OC(O)R5A、-OC(O)OR5A、-OC(O)NR2R5A、-NR2C(O)R5A、-NR2C(O)OR5A；
R4是H、-N(R2)2、任选取代的C1-3-烷基、任选取代的C1-3-烷氧基、氰基、卤素、羟基、硝基或单、二或三氟甲基；
R5A是-(C1-4-烷基)-X-R6-R7；
X独立地是O、S或N(R2)；
R6是连键或C5-6芳基或C5-6杂芳基；
R7是被至少一个-OH或-C(O)OR2或-C(O)N(R2)2取代的C1-4-烷基，或含有1-3个杂原子并被R2取代以及被卤素取代的苯甲氧基或-X-R8取代的C5杂芳基；并且
R8是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、-C(O)N(R2)2或C1-5环烷基取代的C1-3烷基；
或其可药用盐形式。
其他实施方式提供了这些化合物，其也是式III的化合物与式IV的化合物之间的反应的产物：
其中
R1独立地是H、任选取代的氨基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烯基、任选取代的C1-6炔基、任选取代的苯甲氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、任选取代的苯氧基或单、二或三氟甲基；
n为1、2或3；
R2独立地是H或C1-3-烷基；
R3B是-OR5B、-NR2R5B、-SR5B、-C(O)R5B、-C(O)OR5B、-C(O)N(R2)(R5B)、-OC(O)R5B、-OC(O)OR5B、-OC(O)NR2R5B、-NR2C(O)R5B、或-NR2C(O)OR5B；
R4是H、-N(R2)2、任选取代的C1-3-烷基、任选取代的C1-3-烷氧基、氰基、卤素、羟基、硝基或单、二或三氟甲基；
R5B是-(C0-4-烷基)-L，其中L是离去基团；
X独立地是O、S或N(R2)；
R8是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、C(O)N(R2)2或C3-5环烷基取代的C1-3烷基；
或其可药用盐形式。
其他实施方式提供了包含如上所述的多功能小分子化合物的药物组合物，所述小分子化合物的量能够有效抑制以EGF受体的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍。在其他实施方式中，药物组合物包含至少一种如上所述的具有式（I）结构的化合物，或式III的化合物与式IV的化合物之间的反应的产物。
在其他实施方式中，这些化合物被用于制备药物，所述药物用于抑制以表皮生长因子受体（EGFR）的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍。
其他实施方式提供了抑制以受体的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的患者给药药学有效量的至少一种这些化合物。此外，本发明提供了患有以表皮生长因子受体（EGFR）的活性过高和/或不适当活性为特征的疾病的患者的治疗方法，所述方法包括向所述患者给药药学有效量的至少一种这些化合物的步骤。
附图简述
本文提供的图意图在于说明而不是限制。
图1示出了C318在与EGFR激酶复合时的结合位点和可能的取向。图1A示出了复合物的理论电子密度图。图1B示出了与EGFR激酶结合的C318的可能的钳型取向。
图2示出了模拟突变的示例性化合物（EEO3）和对EGFR磷酸化和下游信号传导的影响（实施例3）。
图3示出了本发明的几种各不相同的实施方式与相比，对EGFR激酶的Tyr1068和Tyr992的磷酸化的影响（实施例4）。
图4示出了细胞培养物，其比较了C318和在0.1μM浓度下对NE91细胞的停泊不依赖性生长的影响。培养物显示出在未处理（图4A）、用（图4B）和C318（图4C）处理3周后的软琼脂集落形成。
图5鉴定了人类EGFR激酶结构域的野生型氨基酸（SEQIDNO:2）和相应的核酸序列（SEQIDNO:1）。SEQIDNO:1和2的1号残基对应于图5的695位残基，其余残基以相应的方式连续编号（例如图5中的858位对应于SEQIDNO:1和3的164位）。此外，SEQIDNO:3提供了人类EGFR的氨基酸序列，其中164位处的亮氨酸残基被精氨酸替代（L858R突变）。
图6提供了本文描述的几种实施方式的质谱数据。
图7提供了如实施例6中所描述的EGFR激酶突变体EGFR（L858R，T790M）的体外激酶活性数据。
说明性实施方式的详细描述
通过结合形成本公开的一部分的附图和实施例参考下面的详细描述，可以更容易地理解本发明。应该理解，本发明不限于在本文中描述和/或示出的具体产物、方法、条件或参数，并且在本文中使用的术语的目的仅仅是为了示例性描述特定实施方式，并且不打算限制任何所要求保护的发明。同样地，对可能的作用机制或方式或改进原因的任何描述也意味着仅仅是说明性的，并且本发明不受任何这样的建议的作用机制或方式或改进原因的正确性或不正确性的限制。在整个本文中，应该认识到描述涉及化合物和得到的药物组合物两者以及制造和使用方法。
本发明涉及使用小分子化合物调节或抑制受体酪氨酸激酶的活性。
在本公开中，除非另有指明，否则没有具体数量的指称物包括其复数形式，并且对特定数值的指称至少包括该特定值。因此，例如，对“材料”的指称是指至少一个这样的材料或其本领域技术人员已知的等同物，等等。
当通过使用先行词“约”将值表示成近似值时，应该理解，所述特定值形成另一种实施方式。总体来是，术语“约”的使用指示可以随着通过本公开的主题内容试图获得的所需性质而变的，并且应该在它所使用的特定上下文中根据其功能来解释的近似值，并且本领域技术人员能够如此对它做出解释。在某些情况下，用于特定值的有效数字的数量，可以是用于确定单词“约”的程度的一种非限制性方法。在其他情况下，在一系列值中使用的等级变化，可用于确定对于每个值来说可用于术语“约”的所打算的范围。当存在时，所有范围是包含性和可组合的。也就是说，对在范围内陈述的值的指称，包括所述范围内的每个和所有的值。
应该认识到，本发明的出于清楚起见而在分开的实施方式的上下文中描述的某些特点，也可以组合提供在单一实施方式中。相反，本发明的出于简明起见而在单一实施方式的上下文中描述的各种特点，也可以分开或以任何子组合的形式提供。最后，尽管实施方式可能被描述为一系列步骤的一部分或更宽泛的组合物或结构的一部分，但每个所述步骤本身也可以被当作独立的实施方式。
概述
本发明描述了多功能小分子低分子量化合物，其中一个官能团能够结合于EGFR的激酶结构域，以便模拟EGFR激酶结构域突变的药物敏化效应，该结合位点由图5中示出的人类EGFR的氨基酸序列的残基G719-F723、V726、K745、L747、A755、E758、I759、D761、E762、C797、L799、D800、D837、R841、N842、D855、G857、L858、K875、P877之间的空腔所限定（注意，在SEQ.IDNO:1-2中对应的残基为G25-F29、V32、K51、L53、A61、E64、I65、D67、E68、C103、L105、D106、D143、R841、N148、D161、G163、L164、K181、P183），并且同时另一个官能团能够结合于邻近的结合位点（ATP结合位点），以便抑制异常的细胞增殖、分化或存活。
前一种官能性（即模拟EGFR激酶结构域突变的药物敏化效应的能力）是分别在2011年3月17日和2011年3月18日提交的美国专利申请系列号61/453,626和61/454,083的主题，每个所述专利申请以其全部内容为所有目的通过引用并入本文。
本发明的化合物可以通过它们与靶空腔的结合亲和性和它们的总体药理活性来鉴定。在第一水平上，这可以通过使用能够鉴定小分子或配体在所鉴定的靶空腔内的低能量结合模式的商业化软件包来实现。这样的软件的一个非限制性实例是广泛配售的DOCK软件4.0版，,Ewing等，“DOCK4.0：柔性分子数据库的自动化分子对接的搜索策略”（DOCK4.0:searchstrategiesforautomatedmoleculardockingofflexiblemoleculedatabases），J.Comput.AidedMol.Des.,15:411-428(2001)，其全部内容通过引用并入本文。DOCK软件仅仅是用于此目的的一种商业化软件包，并且预期其他这样的软件包也可用于此目的。
DOCK筛选软件和其他类似程序一般不提供结合亲和性的绝对估算，而是提供相对排序。因此，本发明的实施方式包括以通过DOCK软件4.0版估算的相对结合亲和性与本文中描述的任何特定化合物所表现出的相对结合亲和性至少同样高为特征的化合物。
后一种官能性，即抑制这样的异常细胞增殖、分化或存活的能力，以前已被其他人研究过。在本发明的情形中，预期已知独立地表现出这种类型的活性的任何结构，都可用于此目的。与这种行为相一致，本发明的各种实施方式包括作用于EGFR以重现L858R突变的表象的化合物，即当如下所述测试时，与EGFR的反应引起总EGFR的提高的组成性磷酸化以及Tyr845和/或Tyr1068的提高的组成性磷酸化，但是对Tyr992的组成性磷酸化没有或仅有很小影响的化合物。
在为所有目的、包括其中描述的化合物及其特征、通过引用并入本文的2011年3月17日提交的美国专利申请系列号61/453,626中所描述的实验，已经显示出靶向与所述结合位点（ATP结合位点）相邻的空腔的小分子可用于有效地将EGFR激酶限制在活性构象中，引起传统的酪氨酸激酶抑制剂对EGFR的抑制增强。将这些化合物与靶向ATP结合位点的传统抑制剂（例如厄洛替尼、吉非替尼和拉帕替尼）相连接，可以产生具有双重作用机制的双功能酶结合性钳型分子（EBCM）。EBCM的模拟突变的部分（MMP）将酶限制在类似有活性的构象中，引起酶的信号传导性质的改变。在EGFR激酶的情形中，将MMP引入到表达EGFR的肿瘤细胞中，可以激活酶并在同时引起肿瘤细胞存活者对EGFR信号传导途径的更高依赖性。这些效应与药物敏化突变所产生的效应类似。EBCM的酪氨酸激酶抑制剂部分通过占据ATP结合位点抑制酶，引起肿瘤生长的有效抑制。由于已对大量酶描述了可活化酶的突变，因此将模拟突变的化合物与传统酶抑制剂组合在单一EBCM分子中，可能代表了用于抑制酶并在同时改变它们的信号传导性质并增加酶对细胞存活的重要性的通用的两步方法。
尽管本文描述的分子被设计成通过这种与EGFR相互作用的模式起作用，但本发明不限于这种相互作用模式。分子可以另外地或可选替地通过其他模式起作用，以抑制表皮生长因子受体（EGFR）的活性过高和/或不适当活性。
化合物
综上所述，本发明的各种实施方式提供了具有式I结构的化合物：
其中
苯胺喹唑啉组成部分的取代情况，包括(R1)n、R2和R4，与厄洛替尼、吉非替尼或拉帕替尼中的取代基及其空间排列方式相同，或与在美国专利5,747,498、6,900,221、7,087,613、RE41065（对应于厄洛替尼）、5,457,105、5,616,582、5,770,599（对应于吉非替尼）、6,391,874、6,713,485、6,727,256、6,828,320和7,157,466（对应于拉帕替尼）中所描述的结构和取代基一致或如所述专利中所提供，每个所述专利通过引用并入本文；
R3A是-OR5A、-NR2R5A、-SR5A、-C(O)R5A、-C(O)OR5A、-C(O)N(R2)(R5A)、-OC(O)R5A、-OC(O)OR5A、-OC(O)NR2R5A、-NR2C(O)R5A、-NR2C(O)OR5A；
R5A是-(C1-4-烷基)-X-R6-R7；
X独立地是O、S或N(R2)；
R6是连键或C5-6芳基或C5-6杂芳基；
R7是被至少一个-OH或-C(O)OR2或-C(O)N(R2)2取代的C1-4-烷基，或含有1-3个杂原子并被R2取代以及被卤素取代的苯甲氧基或-X-R8取代的C5杂芳基；并且
R8是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、-N(R2)2、C(O)N(R2)2或C1-5环烷基取代的C1-3烷基；
或其可药用盐形式。
本发明的其他实施方式提供了式（III）的化合物与式（IV）的化合物之间的反应的产物：
其中
苯胺喹唑啉组成部分的取代情况，包括(R1)n、R2和R4，与厄洛替尼、吉非替尼或拉帕替尼中的取代基及其空间排列方式相同，或与在美国专利5,747,498、6,900,221、7,087,613、RE41065（对应于厄洛替尼）、5,457,105、5,616,582、5,770,599（对应于吉非替尼）、6,391,874、6,713,485、6,727,256、6,828,320和7,157,466（对应于拉帕替尼）中所描述的结构和取代基一致或如所述专利中所提供，每个所述专利通过引用并入本文；
R3B是-OR5B、-NR2R5B、-SR5B、-C(O)R5B、-C(O)OR5B、-C(O)N(R2)(R5B)、-OC(O)R5B、-OC(O)OR5B、-OC(O)NR2R5B、-NR2C(O)R5B、-NR2C(O)OR5B；
R5B是-(C0-4-烷基)-L，其中L是对亲和置换敏感的离去基团；
X在每次出现时独立地是O、S或N(R2)；并且
R8是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、C(O)N(R2)2、-N(R2)2、或C3-5环烷基取代的C1-3烷基；
或其可药用盐形式。
这些框架内的其他实施方式包括下列化合物，其中R1独立地是H、任选取代的氨基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、任选取代的苯甲氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、任选取代的苯氧基或单、二或三氟甲基的化合物；
n为1、2或3；
R2独立地是H或C1-3-烷基；并且
R4是H、-N(R2)2、任选取代的C1-3-烷基、任选取代的C1-3-烷氧基、氰基、卤素、羟基、硝基或单、二或三氟甲基。
在各种实施方式中，式（I）的化合物或从式（III）的化合物与式（IV）的化合物的反应得到的化合物，包括其中每个R1独立地是H、任选取代的C2-6炔基、任选取代的苯甲氧基或卤素的化合物。其他实施方式包括其中每个R1独立地是Cl或F的化合物。还有些其他实施方式包括其中R2是H的化合物。独立的实施方式提供了式（I）的化合物或从式（III）的化合物与式（IV）的化合物的反应得到的化合物，其中R1是乙炔基，n是1，并且R2是H，其中n是2，每个R1独立地是Cl或F，并且R2是H，以及其中一个R1是卤素取代的苯甲氧基，一个R1是卤素，并且R2是H。
提供了其他实施方式，其中R4是H、-N(R2)2、任选取代的C1-3-烷基、任选取代的C1-3-烷氧基、氰基、卤素、羟基、硝基或单、二或三氟甲基。其中R4是H的化合物是优选的。
在某些实施方式中，具有式（I）的通用结构的化合物包括其中R3A是-OR5A、-NR2R5A、-SR5A、-C(O)R5A、-C(O)OR5A、-C(O)N(R2)(R5A)、-OC(O)R5A、-OC(O)OR5A、-OC(O)NR2R5A、-NR2C(O)R5A或-NR2C(O)OR5A的化合物。优选实施方式包括其中R3A是-NR2C(O)R5A的实施方式。在这些情况下，R5A是-(C1-4-烷基)-X-R6-R7，其中R6是连键或C5-6芳基或C5-6杂芳基，并且X独立地是O、S或N(R2)。在某些实施方式中，R6是C6杂芳基，R7是含有1-3个杂原子并被R2取代以及被卤素取代的苯甲氧基取代的C5杂芳基。
其他独立的实施方式还包括具有式（I）的通用结构并且其中R5A是-CH2-S-R6-R7的化合物。更具体的独立实施方式包括具有式（I）的结构的化合物，其中R2是H，R3A是-NR2C(O)R5A，R4是H，并且R5A是-CH2-S-R6-R7，并且此外（a）R1是乙炔基，n是1，（b）n是2，每个R1独立地是Cl或F，以及（c）n是2，一个R1是卤素取代的苯甲氧基，一个R1是卤素，并且R2是H。
在某些实施方式中，从式（III）的化合物与式（IV）的化合物之间的反应得到的化合物，包括其中R3B是-OR5B、-NR2R5B、-SR5B、-C(O)R5B、-C(O)OR5B、-C(O)N(R2)(R5B)、-OC(O)R5B、-OC(O)OR5B、-OC(O)NR2R5B、-NR2C(O)R5B或-NR2C(O)OR5B的化合物。优选实施方式包括其中R3B是-NR2C(O)R5B的实施方式。
其他独立实施方式还包括从式（III）的化合物与式（IV）的化合物之间的反应得到的化合物，其中R5B是-CH2-L，其中L优选地是卤素或Cl。更具体的独立实施方式包括从式（III）的化合物与式（IV）的化合物之间的反应得到的化合物，其中R2是H，R3B是-NR2C(O)R5B，R4是H，并且R5B是-CH2-Cl，并且此外（a）R1是乙炔基，n是1，（b）n是2，每个R1独立地是Cl或F，以及（c）n是2，一个R1是卤素取代的苯甲氧基，一个R1是卤素，并且R2是H。
还提供了本发明的含有前述子结构的特定实施方式，其中R7是被至少一个-OH或-C(O)OR2或-C(O)N(R2)2取代的C1-4-烷基，或含有1-3个杂原子并被R2取代以及被卤素取代的苯甲氧基或-X-R8取代的C5杂芳基。在其中取代情况提供了多个羟基、羧基或酰胺基的所有情形中，提供了独立的实施方式，其中这些基团可能以它们的环状脱水形式例如环状酸酐、内酯或内酰胺形式存在。例如：
提供了更具体的实施方式，其中R6是连键并且R7是被至少一个羟基或羧基取代的C1-4-烷基，更具体地，其中R6是连键并且R7是CH2CH2OH或CH2CH2COOH。
提供了本发明的含有任何上述子结构的其他实施方式，其中R6是连键并且R7是含有1-3个杂原子并被R2和-X-R8取代的C5杂芳基，其中X是O、S或N(R2)，特别是其中X是S。
本发明提供了R8可以是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、C(O)N(R2)2或C1-5环烷基取代的C1-3烷基。其中R8是-CH2COOR2、-CH(CH3)COOR2或-CH2-cC3H7的那些实施方式是优选的。
其他实施方式提供了具有结构式（IA）的化合物和包含所述化合物的制剂：
其中(R1)n、R2、R4和R8以及涉及它们的置换的各种实施方式，如上所提供。
还有些其他实施方式提供了具有结构式（IB）的化合物和包含所述化合物的制剂：
其中
苯胺喹唑啉组成部分的取代情况，包括(R1)n、R2和R4，与厄洛替尼、吉非替尼或拉帕替尼中的取代基及其空间排列方式相同，或与在美国专利5,747,498、6,900,221、7,087,613、RE41065（对应于厄洛替尼）、5,457,105、5,616,582、5,770,599（对应于吉非替尼）、6,391,874、6,713,485、6,727,256、6,828,320和7,157,466（对应于拉帕替尼）中所描述的结构和取代基一致或如所述专利中所提供，每个所述专利通过引用并入本文；并且R3C是基本上如美国专利申请系列号61/453,626和61/454,083中所描述的结构，通过0-6个链原子的连接物连接到所述苯胺喹唑啉组成部分。
一般来说，术语在它们所出现的上下文中，将被赋予它们的一般和普通含义，例如本领域技术人员所理解的含义。然而，为了避免任何含义不清，在本文中描述了几个术语。
当本发明的基团被描述成“任选取代的”时，所述基团可以是未取代的或者被所描述的用于该基团的一个或多个取代基取代。同样地，当基团被描述成是“未取代的或取代的”时，如果被取代，取代基可以选自同一组取代基。除非另有指明，否则当取代基被视为是“任选取代的”或“取代的”时，意味着所述取代基是可以被单独且独立选择的一个或多个基团取代的基团。
除非另有指明，否则每个下述术语（例如“烷基”、“杂烷基”、“酰基”、“烷氧基”、“芳基”和“杂芳基”）包括所指示基团的取代和未取代的形式。
除非另有指明，否则术语“烷基”本身或作为另一个取代基的一部分是指直链或支链或环状烃基（环烷基）或其组合，其可以是完全饱和的、单或多不饱和的，并且可以包括二价基和多价基，并且可以具有任选指定的碳原子数（例如C1-3意味着1至3个碳原子）。饱和烃基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基。
当在本文中使用时，“烯基”是指在直链或支链烃链中含有一个或多个双键的烷基。烯基的实例包括但不限于乙烯基（CH2=CH-）、烯丙基（CH3CH=CH2-）、1-丙烯基、2-丙烯基,1-丁烯基、2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基以及己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一烯基和十二烯基的各种异构体。
当在本文中使用时，术语“炔基”是指在直链或支链烃链中含有一个或多个叁键的烷基。在本发明的情形中，取代的乙炔基是优选的。
本发明的环烷基可以在C3至C8的范围内。环烷基可以是未取代的或取代的。如果被取代，取代基可以选自上面对烷基的取代所指示的那些。
本发明的烷基、烯基或炔基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基可以是独立地选自下列的一个或多个基团：环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环基，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，烷硫基，芳硫基，氰基，卤素，氧基，羰基，硫羰基，O-氨甲酰基，N-氨甲酰基，O-硫代氨甲酰基，N-硫代氨甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，S-磺酰胺基，N-磺酰胺基，C-羧基，O-羧基，异氰酸基，硫氰酸基，异硫氰酸基，硝基，甲硅烷基，三卤代甲磺酰基，氨基或取代的氨基，被保护的羟基，被保护的氨基，被保护的羧基和被保护的酰胺基。
当在本文中使用时，“酰基”是指RC(=O)-”。酰基可以含有烷基或芳基组成部分，在这种情况下它可以被分别称为羧基烷基或羧基芳基。酰基的实例包括但不限于甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、新戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、十一酰基、十二酰基和苯甲酰基。目前优选的酰基是乙酰基和苯甲酰基。
本发明的酰基可以是未取代或取代的。当被取代时，取代基可以选自上面对烷基的取代所公开的相同基团。
术语“烷氧基”以其常规意义使用，并且是指通过氧原子附连于分子其余部分的烷基。烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲氧基和二氟甲氧基。
“酰胺”是具有式-(R)n-C(O)NHR’或-(R)n-NHC(O)R’的化学组成部分，其中n是从0-1的亚烷基碳的数量，R和R’独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基（通过环上的碳进行键合）和杂脂环基（通过环上的碳进行键合）。酰胺可以是附连于本发明的分子的氨基酸或肽分子，由此形成前体药物。
本发明的化合物上的任何胺、羟基或羧基侧链可以被酯化或酰胺化。当实施方式描述这样的侧链时，还有些实施方式包括这些侧链被酯或酰胺类似物代替的情况。用于实现这一目的的程序和具体基团对于本领域技术人员来说是已知的，并且可以在参考来源中容易地找到，例如Greene和Wuts，《有机合成中的保护基团》（ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis），第3版，JohnWiley&Sons,NewYork,N.Y.,1999，其全部内容并入本文。
术语“0-6个链原子的连接物”是指0至6个C、N、O或S的线性排列，其连接基本上如美国专利申请系列号61/453,626和61/454,083中所描述的结构与式（IA）的苯胺喹唑啉组成部分，其中(R1)n、R2和R4，与厄洛替尼、吉非替尼或拉帕替尼中的取代基及其空间排列方式相同，或与在美国专利5,747,498、6,900,221、7,087,613、RE41065（对应于厄洛替尼）、5,457,105、5,616,582、5,770,599（对应于吉非替尼）、6,391,874、6,713,485、6,727,256、6,828,320和7,157,466（对应于拉帕替尼）中所描述的结构和取代基一致或如所述专利中所提供。这样的连接物可以包括但不限于烷基、烯基、炔基、胺、酰胺、酯、醚、硫基、硫醚或硫酯组成部分。原子的线性排列仅仅考虑排列在链中的原子，因此，例如酯组成部分-C(O)-O-在链中含有两个原子，出于原子计数目的，羰基氧不被认为“在链的线性排列中”。术语“基本上如美国专利申请系列号61/453,626和61/454,083中所描述的结构”，是指组成部分，其含有在任一这些参考文献中描述的环结构阵列中的任一种，例如：
并且允许利用这些化合物的一个官能团连接到0-6个链原子的连接物（例如通过胺的氮或醇或酯的氧的卤化物偶联或附连）。
术语“酯”是指具有式-(R)n-COOR’的化学组成部分，其中R和R’独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基（通过环上的碳连键）和杂脂环基（通过环上的碳进行键合），并且其中n是0或1。
当在本文中使用时，“醚”是指“-C-O-C-”基团，其中任一或两个碳可以独立地是烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或杂脂环基的一部分。“卤代醚”是指氧任一侧的基团都是被卤素取代的烷基的醚。
除非另有指明，否则术语“卤”或“卤素”本身或作为另一个取代基的一部分，是指氟、氯、溴或碘。优选的卤素是氯和氟。
除非另有指明，否则术语“杂烷基”本身或与另一个术语组合，是指稳定的直链或支链或环状烃基或其组合，其由许多碳原子和选自O、N、Si和S的至少一个杂原子构成，并且其中氮、碳和硫原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂原子O、N和S和Si可以放置在杂烷基的任何内部位置处或烷基附连于分子的其余部分的位置处。实例包括但不限于--CH2-CH2--O-CH3、--CH2-CH2--NH-CH3、--CH2-CH2--N(CH3)-CH3、---CH2--S-CH2-CH3、--CH2-CH2、--S(O)-CH3、--CH2-CH2--S(O)2-CH3、--CH=CH--O-CH3、--Si(CH3)3、--CH2-CH=N-OCH3和-CH=CH--N(CH3)-CH3。多达2个杂原子可以是连续的，例如--CH2--NH-OCH3和-CH2--O--Si(CH3)3。
当在本文中使用时，“杂芳基”是指在环中含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子，并且具有完全离域的π-电子系统的环。“杂芳基”可以由2个或更多个稠合的环（共享两个相邻碳原子的环）构成。当杂芳基是稠合环系统时，则与分子的其余部分相连的环具有完全离域的π-电子系统。稠合环系统中的其他环可以具有或者可以不具有完全离域的π-电子系统。杂芳基环的实例包括但不限于呋喃、噻吩、酞嗪酮、吡咯、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑、异噁唑、异噻唑、三唑、噻二唑、吡喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪。
当在本文中使用时，术语“离去基团”是指对亲和取代、特别是SN2类型的亲核取代敏感的任何组成部分。示例性的离去基团包括卤化物（Cl、Br、I，优选地为Cl）、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、间硝基苯磺酸酯、甲磺酸酯和三氟甲磺酸酯。例如，参见J.March，《高等有机化学》（AdvancedOrganicChemistry），第2版，第10章，1977，其为此目的通过参考并入本文。
本发明的化合物还可以在构成所述化合物的一个或多个原子处含有非天然的原子同位素比例。例如，化合物可以用放射性同位素例如氚（3H）、碘-125（125I）、碳-11（11C）、碳-14（14C）、氮-13（13N）、硫-35（35S）、碘-131（131I）或氟-18（18F）放射性标记。当如此标明时，放射性标记的分子含有高于其天然丰度的富集的同位素。这样的放射性同位素，可以通过合成手段，使用公认的可商购前体和试剂通过替换提供特定目标元素（例如使用放射活性卤化物替换卤化物）来制备，或通过预先形成的分子的回旋加速器辐射来制备。本发明的化合物的所有同位素变化形式，不论是否具有放射活性，都打算被涵盖在本发明的范围之内。
当在本文中使用时，“苯基”是指6元芳基。术语“苯甲氧基”是指通过亚甲基附连于主体结构的6元芳基。苯基或苯甲氧基可以是未取代或取代的。当被取代时，取代基是一个或多个、优选地一个或两个独立地选自卤素、羟基、受保护的羟基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、酰基、酰氧基、羧基、受保护的羧基、羧甲基、受保护的羧甲基、羟甲基、受保护的羟甲基或氨基或取代的氨基的基团。
在整个本公开中，当特定化合物包含手性中心时，本公开的范围还包括包含两种对映异构体的消旋混合物的组合物，以及单独地包含每种对映异构体并且基本上不含另一种对映异构体的组合物。因此，例如，本文中设想了包含S对映异构体并且基本上不含R对映异构体的组合物，或包含R对映异构体并且基本上不含S对映异构体的组合物。“基本上不含”是指组合物包含低于10%或低于8%或低于5%或低于3%或低于1%的次要对映异构体。如果特定化合物包含超过一个手性中心，本公开的范围还包括包含各种非对映异构体的混合物的组合物，以及包含每种非对映异构体并且基本上不含其他非对映异构体的组合物。化合物的叙述，如果未指称其任何特定的非对映异构体，则包括包含所有4种非对映异构体的组合物，包含R,R和S,S异构体的消旋混合物的组合物，包含R,S和S,R异构体的消旋混合物的组合物，包含R,R对映异构体并且基本上不含其他非对映异构体的组合物，包含S,S对映异构体并且基本上不含其他非对映异构体的组合物，包含R,S对映异构体并且基本上不含其他非对映异构体的组合物，以及包含S,R对映异构体并且基本上不含其他非对映异构体的组合物。
合成方案
除非另有定义，否则在本文中使用的所有技术和科学术语一般具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的意义。一般来说，本文中使用的命名和下面描述的有机化学和核酸化学和杂交中的实验室程序，是在本领域中公知且常用的。技术和程序一般按照本领域和整个本文件中提供的各种一般性参考文献中的常规方法来进行。本文中使用的命名和下面描述的分析化学和有机合成化学中的实验室程序，是在本领域中公知且常用的。标准技术或其改良形式被用于化学合成和化学分析。
总体来说，苯胺喹唑啉子结构的化学是已充分发展的。对于那些可以类推至在各自通过参考并入本文的美国专利5,747,498、6,900,221、7,087,613、RE41065（对应于厄洛替尼）、5,457,105、5,616,582、5,770,599（对应于吉非替尼）、6,391,874、6,713,485、6,727,256、6,828,320和7,157,466（对应于拉帕替尼）中所描述的化合物的子结构和替代物的分子的组成部分来说，这些参考文献提供了足够的教示，使普通技术人员至少能够制造分子的这些组成部分。
已知其他方法可用于在6-位（即R3B的附连点）处官能化喹唑啉环的稠合苯环，使其在所需位置中具有氮、氧或硫组成部分，其中如上为R3B所描述的官能团类型（例如-OR5B、-NR2R5B、-SR5B、-C(O)R5B、-C(O)OR5B、-C(O)N(R2)(R5B)、-OC(O)R5B、-OC(O)OR5B、-OC(O)NR2R5B、-NR2C(O)R5B、-NR2C(O)OR5B）可以附连到所述所需位置。
相反，R3A侧基是未知的，至少在本发明的情形中。在这种情形中，用于构造本发明的某些实施方式的一种示例性方案，使用可商购的亲核硫醇和模型苯胺喹唑啉前体（详情提供在下面的实施例部分中），使用SN2类型的化学来实现：
应该认识到，这种方法（SN2类型的化学）可以普遍适用于制备式（I）的化合物。
这种合成方法被用于制备相应的化合物，其每个是本发明的特定实施方式。
提出的合成方案的反应产物也可以含有这些产物的下列结构异构体：
因此，当在本文中使用时，对作为C318的化合物的指称，可以不含、含有一些或所有具有被鉴定为C318-N的结构的结构异构体。同样地，对作为C318A的化合物的指称，可以不含、含有一些或所有具有被鉴定为C318A-N的结构的化合物；对作为C318B的化合物的指称，可以不含、含有一些或所有具有被鉴定为C318B-N的结构的化合物；对作为C318D的化合物的指称，可以不含、含有一些或所有具有被鉴定为C318D-N的结构的化合物；对作为C318F的化合物的指称，可以不含、含有一些或所有具有被鉴定为C318F-N的结构的化合物；并且对作为C300的化合物的指称，可以不含、含有一些或所有具有被鉴定为C300-O的结构的化合物。
还可以使用另一种方案来制备含有硫烷基-3H-[l,3,4]噻二唑-2-硫酮组成部分的化合物（例如式（IA）的化合物，其包括被描述为C318-N、C318A-N、C318B-N、C318D-N和C318F-N的化合物），正如下面对C318-N的制备所示例的（也参见下面的实施例2）：
并且末端硫醇-SH可以起到亲核剂的作用，用于使用标准可获得的底物反应物进行进一步反应，例如：
因此，式（II）或式（IIA）代表了本文描述的化合物的更普遍化的结构。
药物组合物
如上所述，前面部分中描述的化合物可用于抑制以受体的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍。源自于上述各种示出的化合物的每一种的药物组合物，被认为是在本发明的范围之内。同样地，使用任何上述化合物制备用于抑制以表皮生长因子受体（EGFR）的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍的药物，被认为提供了独立的实施方式。就此而言，包含本发明范围内的任何药物组合物以及与其相伴的书面材料的商业化包装，也被认为是在本发明的范围之内，其中所述书面材料陈述了药物组合物可以或应该用于由EGFR的过表达或异常激活所引起的疾病的预防和/或治疗。
本发明设想了其中化合物作为这些化合物的可药用盐以及前体药物和代谢物存在的组合物。
术语“可药用盐”意味着本发明化合物的对于在对象中使用来说安全有效并具有所需生物活性的盐类。可药用盐包括本发明的化合物中存在的酸性或碱性基团的盐。活性化合物的各种可药用盐、醚衍生物、酯衍生物、酸衍生物和水溶性改变的衍生物，也被本发明所涵盖。本发明还包括化合物的所有各个对映异构体、非对映异构体、消旋体和其他异构体。本发明还包括该化合物的所有多形体和溶剂化物，例如水合物和与有机溶剂形成的溶剂化物。这样的异构体、多形体和溶剂化物可以通过本领域已知的方法，例如基于本文提供的公开内容通过区域特异性和/或对映选择性合成和拆分来制备。
由于本发明的化合物可能含有带电荷侧链或末端，因此它们可以作为游离酸或碱或作为可药用盐被包括在任何上述制剂中。可药用盐是基本上保留游离碱的生理活性，并且通过与无机酸类反应制备的盐。在水性和其他质子性溶剂中，药用盐倾向于比相应的游离碱形式更加可溶。关于可药用盐的综述，参见Berge等，66J.Pharm.Sci1-19(1977)，其通过参考并入本文。
本文公开的化合物的前体药物和活性代谢物也在本发明的范围之内。前体药物是药理学上无活性的化合物，其通过代谢转化或任何其他化学或生物学过程（例如水解）被转变成药理学上有活性的试剂。例如，在体内，可以通过天然存在的酶作用于前体药物上，从而引起药理学上有活性的试剂的释放。前体药物常常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更容易给药。例如，它们可以通过口服给药变得可生物利用，而母体药物不行。前体药物还可能在药物组合物中具有与母体药物相比提高的溶解性。前体药物的非限制性实例是作为酯（“前体药物”）给药以促进跨细胞膜传送的本发明化合物，在所述细胞膜中，水溶性对移动不利，但是所述化合物一旦进入到其中水溶性是有利的细胞内部之后，随后被代谢水解成羧酸活性实体。前体药物的其他实例可以是键合于酸基团的短肽（聚氨基酸），其中肽被代谢以释放出活性组成部分。用于适合的前体药物衍生物的选择和制备的常规程序，描述在例如《前体药物的设计》（DesignofProdrugs），H.Bundgaard主编，Elsevier，1985中，其通过参考并入本文。
活性代谢物是在将另一种化合物给药于对象后，由其代谢产生的化合物。代谢物可以通过本领域公知的技术来鉴定。
适合的剂型包括但不限于口服、直肠、舌下、粘膜、鼻、眼、皮下、肌肉内、静脉内、透皮、脊柱、鞘内、关节内、动脉内、蛛网膜下、气管、淋巴和子宫内给药剂型，以及用于活性成分的系统递送的其他剂型。在优选实施方式中，剂型适合于口服给药。
为了制备这样的药物剂型，将一种或多种上述化合物或其可药用盐，按照常规制药配合技术与药用载体密切混合。取决于给药所需的制剂形式，载体可以采取广泛的各种不同形式。
本发明的化合物可以本身或采取药物组合物的形式给药于对象。包含本发明化合物的药物组合物，可以利用常规的混合、溶解、成粒、糖衣丸制造、研和、乳化、包胶、包封或冻干方法来制造。药物组合物可以以常规方式，使用一种或多种生理上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或促进活性肽或肽类似物加工成可以制药使用的制备物的辅助剂来配制。适合的制剂取决于所选的给药途径。
对于肠胃外制剂来说，载体通常包含无菌水，尽管也可以包括其他成分，例如协助溶解或用于防腐的成分。也可以制备可注射溶液，在这种情况下可以使用适合的稳定剂。
肠胃外给药可以包含任何适当形式的系统递送和向中枢神经系统的直接递送。给药可以是例如静脉内、动脉内、鞘内、肌肉内、皮下、肌肉内、腹内（例如腹膜内）等，并且可以通过输注泵（外部或可植入的）或适合于所需给药方式的任何其他适合的手段来实施。
在制备口服剂型的组合物中，可以使用任何常用药物介质。因此，可以通过将化合物、盐或类似物与本领域公知的可药用载体合并，容易地配制化合物。这样的载体能够将本发明的化合物配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬液等，用于被待治疗患者口服摄入。
在某些应用中，利用处于“载体化”形式的活性试剂可能是有利的，例如通过将活性试剂包胶在脂质体、胶束或其他包胶介质中，或通过例如共价键、螯合、组装或缔合配位将活性试剂固定在适合的生物分子，例如从蛋白质、脂蛋白、糖蛋白和多糖中选择的生物分子上。
对于口服固体制剂例如粉剂、胶囊和片剂来说，适合的赋形剂包括填充剂例如糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇；纤维素制备物例如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；成粒剂；以及粘合剂。如果需要，可以添加崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐例如藻酸钠。
如果需要，固体剂型可以使用标准技术进行糖包衣或肠溶包衣。
对于固体口服制剂例如粉剂、胶囊、囊片和片剂来说，适合的载体和添加剂包括淀粉、糖类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。由于易于给药，片剂和胶囊代表了最有利的口服单位剂型。如果需要，片剂可以通过标准技术进行糖包衣或肠溶包衣。
本发明的使用适合于口服给药的制剂的治疗方法，可以作为离散单位例如胶囊、扁囊剂、片剂或锭剂呈现，其各自含有预定量的作为粉末或颗粒的活性成分。任选地，可以使用在水性液体或非水性液体中的悬液，例如糖浆、酏剂、乳液或饮剂。
片剂可以通过任选地与一种或多种辅助成分一起压制或模制或湿法成粒来制造。压制片剂可以通过在适合的机器中压制来制备，其中将处于自由流动形式下的活性化合物例如粉末或颗粒，任选地与粘合剂、崩解剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或脱离剂混合。由粉末状活性化合物与适合的载体的混合物构成的模制片剂，可以通过在适合的机器中模制来制造。
对于口服液体制剂例如悬液、酏剂和溶液来说，适合的载体、赋形剂或稀释剂包括水、二醇、油、醇类等。此外，可以加入调味剂、防腐剂、着色剂等。
糖浆可以通过向糖、例如蔗糖的浓缩水性溶液添加活性化合物来制造，也可以向所述浓缩水性溶液添加任何辅助成分。这样的辅助成分可以包括调味剂、适合的防腐剂、减缓糖类结晶的试剂和增加任何其他成分的溶解性的试剂，例如多羟基醇例如甘油或山梨糖醇。
对于颊给药来说，化合物可以采取以常规方式配制的片剂、锭剂等的形式。
对于局部给药来说，本发明的化合物可以配制成溶液、凝胶、软膏、霜剂、悬液等，正如在本领域中公知的。
适合于肠胃外给药的制剂通常包含活性化合物的无菌水性制剂，其优选地与受体的血液等渗（例如生理盐水溶液）。这样的制剂可以包括悬浮剂和增稠剂，以及被设计用于将化合物靶向血液组分或一个或多个器官的脂质体或其他微粒系统。制剂可以以单一剂量或多剂量形式存在。
系统制剂包括被设计用于通过注射，例如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹膜内注射给药的制剂，以及被设计用于透皮、透粘膜、口服或肺部给药的制剂。
鼻和其他粘膜喷雾制剂（例如可吸入形式）可以包含活性化合物的纯化的水性溶液以及防腐剂和等渗剂。这样的制剂优选地被调整到与鼻粘膜或其他粘膜相容的pH和等渗状态。或者，它们可以采取悬浮在气态载体中的细分固体粉末的形式。这样的制剂可以通过任何适合的手段或方法，例如通过喷雾器、雾化器、定量雾化吸入器等来递送。
对于通过吸入给药来说，本发明使用的化合物方便地以气溶胶喷雾的形式，使用制药工业接受的适合的推进剂，从加压包或喷雾器递送。适合的推进剂包括但不限于二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、1,1,1,2-四氟乙烷、P-227ea、二氧化碳或其他适合的气体。在加压气溶胶的情形中，剂量单位可以通过提供阀门来确定，以递送计量过的量。在吸入器或吹入器中使用的例如明胶胶囊和药筒，可以被配制成含有化合物和适合的粉剂基料例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
对于注射来说，可以将本发明的化合物配制在水性溶液中，优选地在生理相容的缓冲液例如Hank’s溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中。溶液可以含有配制剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
或者，化合物可以采取粉末形式，用于在使用前用适合的介质例如无菌无热原的水重构。
对于透粘膜给药来说，将适合于待穿透的屏障的穿透剂使用在制剂中。这样的穿透剂在本领域中是公知的。化合物也可以配制在直肠或阴道组合物例如栓剂或保留灌肠剂中，其例如含有常规栓剂基料例如可可脂或其他甘油酯、氢化脂肪或氢化脂肪羧酸。
透皮制剂可以通过将活性试剂掺入到触变或胶状载体例如纤维素类介质如甲基纤维素或羟乙基纤维素中来制备，然后将得到的制剂包装在适合于固定成与佩戴者的皮肤处于皮肤接触的透皮装置中。
除了上述成分之外，本发明的制剂还可以包括一种或多种辅助成分，其选自稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂（包括抗氧化剂）等。这样的药物组合物可以通过本领域公知的方法来制备，并含有本领域公知的载体。这样的方法和成分的公认的汇编是《Remington药物学科学与实践》（Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy），AlfonsoR.Gennaro主编，第20版，LippingcottWilliamsandWilkins:Philadelphia,Pa.,2000。
本发明的制剂可以具有本领域技术人员已知的立即释放、持续释放、延迟性释放或任何其他的释放情况。
接受药物组合物的对象优选地是动物，更优选地是哺乳动物，最优选地是人类。
当然，按照本发明给药以获得治疗和/或预防效果的化合物的具体剂量，由病例的特定情况包括例如给药的化合物、给药途径和待治疗的病症所决定。化合物在广泛的剂量范围内有效，并且剂量例如一般落于以重量计约0.0025%至约5%的范围内，更通常在约0.005%至约2%的范围内，更通常在约0.05%至约1%的范围内，更通常在约0.1%至约0.5%的范围内。这些剂量范围打算是指示性的，并且不打算以任何方式限制本发明的范围。
给药的活性试剂的量通常可以在约0.01至约25mg/kg/日之间的范围内，优选地在约0.1至约10mg/kg/日之间，最优选地在约0.2至约5mg/kg/日之间。应该理解，本发明的药物制剂不需必定含有有效治疗障碍的全部试剂量，因为这样的有效量可以通过给药多剂这样的药物制剂来达到。
在本发明的优选实施方式中，化合物被配制在胶囊或片剂中，其优选地含有25至200mg本发明的化合物，并且优选地以约0.5mg至约2g、优选地约7.5mg至约750mg、更优选地约15mg至750mg、最优选地约50至约200mg的每日总剂量给药于患者。仅仅作为参照，在橙皮书（OrangeBook）中列出的和的剂量方式在25mg至250mg的范围内。
用于肠胃外给药的药物组合物含有以总药物组合物为100重量%计，约0.01重量%至约100重量%的本发明的活性试剂。
除了前面描述的制剂之外，化合物还可以配制成储库型制剂。这样的长效制剂可以通过植入（例如皮下或肌肉内）或通过肌肉内注射来给药。因此，例如，化合物可以用适合的聚合或疏水材料（例如作为在可接受的油中的乳液）或离子交换树脂配制，或配制成微溶衍生物例如作为微溶盐。
或者，可以使用其他药物递送系统。脂质体和乳液是可用于递送本发明的肽和肽类似物的递送介质的公知实例。某些有机溶剂例如二甲基亚砜也可以使用，尽管通常以更高的毒性为代价。此外，化合物可以使用持续释放系统例如含有治疗剂的固体聚合物的半透性基质来递送。几种持续释放材料已被确立，并且对于本领域技术人员来说是公知的。持续释放胶囊取决于它们的化学本性，可以在几周直至超过100天中释放化合物。取决于治疗剂的化学本性和生物学稳定性，可以使用其他用于蛋白质稳定化的策略。
对于系统给药来说，治疗有效剂量最初可以从体外测定法来估算。例如，可以在动物模型中制定剂量，以获得包括了细胞培养物中测定到的IC50的循环浓度范围。这样的信息可用于更准确地确定在人类中的有用剂量。
初始剂量也可以使用本领域公知的技术，从体内数据例如动物模型来估算。本领域的普通技术人员可以根据动物数据容易地优化向人类的给药。
剂量和给药间隔可以单个地调整，以提供足以维持治疗效果的化合物的血浆水平。用于通过注射给药的常用患者剂量在约0.1至5mg/kg/日、优选地约0.5至1mg/kg/日的范围内。治疗有效的血清水平可以通过每日给药多剂试剂来获得。某些优选剂量在1nM至500mM的范围内。某些优选剂量在1mM至500mM的范围内。某些优选剂量在1mg至500mg范围内。某些优选剂量在1000mg至3000mg范围内。某些优选剂量在1500mg至2500mg范围内。
在局部给药或选择性摄入的情形中，化合物的有效局部浓度可能不与血浆浓度相关。本领域技术人员不用过多实验就能优化治疗有效的局部剂量。
抑制细胞增殖性障碍
此外，各种实施方式提供了抑制细胞增殖性障碍或治疗患有以EGFR的活性过高和/或不适当活性为特征的疾病的患者的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的患者给药药学有效量的任何上述化合物。在某些实施方式中，治疗可以针对野生型EGFR的活性过高和/或不适当活性；在其他实施方式中，针对激酶突变的EGFR，例如 抗性EGFR（L858R，T790M）。特定实施方式提供了抑制细胞增殖性障碍或通过在患者中抑制细胞增殖性障碍来治疗患者的方法，其中所述细胞增殖性障碍是癌症，特别是与EGFR的活性过高和/或不适当活性相关的癌症，例如肛门、乳腺、结肠、前列腺、肺、胰腺、卵巢或胃癌。更具体的实施方式包括其中患者是哺乳动物的实施方式，甚至更具体的实施方式包括其中患者是人类的实施方式。
在患者的治疗中，本发明的化合物可以按其本身给药于患者，或与药学有效量的抗癌试剂组合或与执行非药物疗法组合或与两者组合以给药于患者。这些抗癌试剂可以同时或在不同时间，作为治疗总体方案的一部分给药。非药物疗法可以包括手术、高血压化疗、基因疗法、热疗、低温疗法、光动力疗法、激光烧灼和/或放疗。本发明的化合物可以在任何这些非药物疗法之前或之后（以防止复发）给药。在一种优选实施方式中，具有与细胞增殖性障碍相关的肿瘤并且所述肿瘤已被手术移除的患者，可以使用本发明的化合物进行治疗，以防止复发或抑制障碍的转移。
当在本文中使用时，术语“治疗剂”打算是指当以治疗有效量存在时，对患者产生所需治疗效果的化合物，例如用于治疗、抗争、减轻、预防或改善患者的不想要的病症或疾病。这样的抑制可以通过例如但不限于直接相互作用，和/或通过竞争性相互作用，或通过与相应受体的变构相互作用来发生。
组合物的“治疗有效量”或“有效量”是经计算可获得所需效果的预定量[。本发明方法所设想的活性视情况而定包括医学治疗性和/或预防性治疗两者。当在本文中使用时，“治疗有效量”是指在组织、系统、动物、个体或人类中引发研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻求的生物和医药响应的活性化合物或药剂的量，所述响应包括在特定方法中所指定的下列一种或多种：（1）预防疾病，例如在可能对疾病、病症或障碍易感但是尚未经历或表现出疾病的病理或症候的个体中预防所述疾病、病症或障碍，（2）抑制疾病，例如在正经历或表现出疾病、病症或障碍的病理或症候的个体中抑制所述疾病、病症或障碍（即停止病理和/或症候的进一步发展），以及（3）改善疾病，例如在正经历或表现出疾病、病症或障碍的病理或症候的个体中改善所述疾病、病症或障碍（即减轻病理和/或症候的严重性）。
当在本文中使用时，术语“预防”描述了抑制细胞增殖或肿瘤生长，或改善症状，延长存活，或者不然则减轻患者正在治疗的疾病的不想要的效应的作用。
当在本文中使用时，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防或阻止性措施，其中目的是防止或减缓（减轻）不想要的生理病症、障碍或疾病，或获得有益或所需的临床结果。出与本发明的目的，有益或所需的临床结果包括但不限于症状缓解，病症、障碍或疾病的程度降低，使病症、障碍或疾病的状态稳定（即不恶化），延迟病症、障碍或疾病的发作或减缓其进展，改善病症、障碍或疾病状态，以及病症、障碍或疾病的可检测或不可检测的缓解（部分或完全）、或改进或改善。治疗包括引发临床上显著的响应，并具有或不具有过高水平的副作用。
为了检测EGFR的表达或活性，对从患者获得的组织（癌组织、血管壁组织、皮肤、口腔粘膜等）或体液（血液、淋巴）等进行测试，以检测EGFR的表达或活性。这样的测试对于本领域技术人员来说是已知的。对于某些病症例如动脉粥样硬化的治疗来说，某些人可能由于例如遗传、环境或历史因素而被鉴定为处于高风险中。本发明范围内的化合物可用于预防或延迟这样的病症的发生或复发，或者不然则治疗所述病症。
正如上面提到的，本发明的化合物在癌症患者的治疗中有效，并且还预计是用于预防和/或治疗以在前列腺癌或乳腺癌中防止从激素敏感性癌症转变成抗性癌症的试剂。此外，它预计是用于预防和/或治疗与实体癌症和肉瘤的生长相关的血管发生、与癌症转移相关的血管发生、与糖尿病性视网膜病相关的血管发生、动脉粥样硬化、银屑病等的试剂。
“EGFR的过度表达或活化”是不低于活生物体的体内平衡所必需的表达量或活性的表达或活性，以及不低于同一来源的正常组织所必需的表达量或活性的表达或活性。
“显示出EGFR的过度表达或活化的患者”是指其中EGFR被过量表达或激活的患者，并且优选地是其中被过量表达或激活两者的患者。本发明的EGFR抑制剂的特征在于被给药用于治疗上面提到的EGFR被过量表达或激活的患者。
本发明的“EGFR抑制剂”优选地是被给药于其中EGFR被过量表达或激活的患者的EGFR抑制剂。可以同时、分开地或以一定时间间隔使用EGFR抑制剂和另一种形式的治疗。换句话说，可以通过各种不同途径同时、分开地或例如在一天内或在几天至几周或几个月的给定时间间隔处，以交错的方式给药EGFR抑制剂和另一种药物或治疗形式。
当然，给药的化合物的量依赖于待治疗的对象、对象的体重、疾病的严重性、给药方式和处方医生的判断。然而，就这些化合物在体内、体外和动物研究中相对于其他已知小分子提供提高的活性而言，在最广泛的意义上，推荐的剂量是与目前为用于此相同目的的其他小分子而开出的剂量相近的剂量。
当症状可检测或者甚至当它们不可检测时，治疗可以间歇地重复。治疗可以单独地或与其他药物组合地提供。
优选地，本文描述的化合物的治疗有效剂量将提供治疗益处而不引起显著毒性。
本文描述的化合物的毒性，可以在细胞培养物或实验动物中通过标准制药程序来确定，例如通过测定LD50（致死50%群体的剂量）或LD100（致死100%群体的剂量）。毒性与治疗性效果之间的剂量比是治疗指数。表现出高治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养物测定法和动物实验获得的数据，可用于制定对人类使用来说无毒性的剂量范围。本文描述的化合物的剂量优选地处于包括具有很小或没有毒性的有效剂量的循环浓度范围之内。剂量可以在该范围内随着所使用的剂型和所利用的给药途径而变。确切的制剂、给药途径和剂量，可以由各个医生根据患者的情况来选择。（参见例如Fingl等，1975，在《治疗剂的药理学基础》（ThePharmacologicalBasisofTherapeutics）第1章第1页中）。优选的剂量在1nM至500mM的范围内。
实施例
实施例1.材料来源
丙酮和碳酸钾购自Sigma-Aldrich，目录号分别为#270725和#209619。
EGFR“抑制剂3”购自Calbiochem，目录号324833。
硫醇起始原料按照下述购买：
·２-巯基乙醇（2-ME）：SIGMA#M3148；
·
·EES5：Maybridge#SPB02607SC；
·EES18：Maybridge#BTB12608SC；
·EES18A：Oakwood产品#60725-23-7；
·EES18B：Enamine#T5878273；
·EES18D：OtavaChemicals#7212920033；
·EES18F：Maybridge#TL00159ZZ
实施例2：化合物的合成
通过将模型酪氨酸激酶抑制剂分子的氯乙酰胺基团与几种模拟突变的化合物的硫醇基团进行反应，合成了本发明的几种实施方式。尽管不打算限制本发明的范围，但这些合成提供了产生这些确定的和较广范围的实施方式的一种方式。
在分开的合成中，将2mgEES化合物与1mg抑制剂3在1mL无水丙酮（含有15mg无水碳酸钾）中混合，并允许其在室温下温育1小时或过夜。使用乙腈（98%）/TFA（0.1%）和双蒸水/TFA（0.1%）溶剂系统将反应混合物装载在C4反相BeckmanC18半制备HPLC柱（P/N235328）上，用于进一步纯化。在每种情况下，由宾夕法尼亚大学化学系质谱中心（MassSpectrometryCenter,DepartmentofChemistry,UniversityofPennsylvania）证实目标分子的身份。
按照上面描述的流程，使用这种方法来制备被鉴定为C53、C300、C318、C318A、C318B、C318D和C318F的化合物。
用于生产C318、C318A、C318B、C318D和C318F的氮连接的同类物（即生产C318-N、C318A-N、C318B-N、C318D-N和C318F-N）的可选替流程也在下面提供（以C318N为例）：
各个转化的条件提供如下。
在用氮气惰性气氛吹扫并维持的100-mL3颈圆底烧瓶中，放入Fe（14g，250.00mmol，10.50当量）、AcOH（1.5mL）、水（24mL）。然后在100℃下添加1,2-二氯-4-氟-5-硝基苯（5g，23.81mmol，1.00当量）。将得到的溶液在100℃下搅拌30分钟。使用水/冰浴将反应混合物冷却至10℃。使用饱和碳酸氢钠水溶液将溶液的pH值调整到8-9。过滤出固体。将得到的溶液用3x40mL乙醚萃取，将有机层合并，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。这产生4.2g（98%）作为白色固体的4,5-二氯-2-氟苯胺。
在用氮气惰性气氛吹扫并维持的50-mL3颈圆底烧瓶中，放入4,5-二氯-2-氟苯胺（3.6g，20.00mmol，1.20当量）、4-氯-6-硝基喹唑啉（3.1g，14.79mmol，1.00当量）、异丙醇（100mL）。将得到的溶液在90℃下搅拌2h。将反应混合物冷却至室温。通过过滤收集固体。将滤饼用3x20mLi-PrOH洗涤。这产生5.4g（99%）作为浅黄色固体的N-(4,5-二氯-2-氟苯基)-6-硝基喹唑啉-4-胺。
在250-mL33颈圆底烧瓶中，装入乙醇（10mL）、水（60mL）、Fe（9g，10.50当量）、AcOH（1.5mL）。然后在100℃下添加N-(4,5-二氯-2-氟苯基)-6-硝基喹唑啉-4-胺（5.4g，15.29mmol，1.00当量）。将得到的溶液在100℃下搅拌1.5h。将反应混合物冷却至10℃。使用饱和碳酸氢钠水溶液将溶液的pH值调整到8-9。将得到的溶液用3x50mL乙酸乙酯萃取，将有机层合并，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。这产生4.5g（91%）作为浅黄色固体的4-N-(4,5-二氯-2-氟苯基)喹唑啉-4,6-二胺。
在用氮气惰性气氛吹扫并维持的100-mL3颈圆底烧瓶中，放入4-N-(4,5-二氯-2-氟苯基)喹唑啉-4,6-二胺（1.6g，4.95mmol，1.00当量）、四氢呋喃（30mL）。然后在0℃下，边搅拌边逐滴加入2-氯乙酰氯（0.47mL，1.20当量）。将得到的溶液在0℃下搅拌30分钟。使用饱和碳酸氢钠水溶液将溶液的pH值调整到8。将得到的溶液用3x30mL乙酸乙酯萃取，将有机层合并，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。这产生1.8g（91%）作为黄色固体的2-氯-N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]乙酰胺。
在100-mL3颈圆底烧瓶中，放入NH2NH2.H2O（300mg，6.00mmol，3.00当量）、四氢呋喃（10mL）。然后添加2-氯-N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]乙酰胺（600mg，1.50mmol，1.00当量）在THF（10mL）中的溶液。将得到的溶液在室温下搅拌过夜。然后通过添加20mL水将反应淬灭。将得到的溶液用3x20mL乙酸乙酯萃取，将有机层合并，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。这产生620mg（98%）作为浅黄色固体的N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]-2-肼基乙酰胺。
在100-mL3颈圆底烧瓶中，放入N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]-2-肼基乙酰胺（600mg，1.52mmol，1.00当量）、N,N-二甲基甲酰胺（20mL）、吡啶（0.3mL）、CS2（0.3mL）。将得到的溶液在100℃下搅拌1.5h。使用AcOH将溶液的pH值调整到7。将得到的溶液用100mL水稀释。通过过滤收集固体。将滤饼用2x20mL水洗涤。将粗产物通过Prep-HPLC进行纯化。这产生300mg（38%）作为黄色固体的N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]-2-(5-硫烷基-2-亚硫烷基-2,3-二氢-1,3,4-噻二唑-3-基)乙酰胺。
在50-mL圆底烧瓶中，放入N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]-2-(5-硫烷基-2-亚硫烷基-2,3-二氢-1,3,4-噻二唑-3-基)乙酰胺（150mg，0.29mmol，1.00当量）、2,5-二氢呋喃-2,5-二酮（28mg，0.29mmol，1.00当量）、四氢呋喃（10mL）。将得到的溶液在70℃下搅拌4h。将得到的混合物在真空下浓缩。这产生140mg（78%）作为棕色固体的N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]-2-[5-[(2,5-二氧代氧杂环戊烷-3-基)硫烷基]-2-亚硫烷基-2,3-二氢-1,3,4-噻二唑-3-基]乙酰胺。
在50-mL圆底烧瓶中，放入N-[4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]-2-[5-[(2,5-二氧代氧杂环戊烷-3-基)硫烷基]-2-亚硫烷基-2,3-二氢-1,3,4-噻二唑-3-基]乙酰胺（200mg，0.33mmol，1.00当量）、四氢呋喃（10mL）、盐酸（1N）（12mL）。将得到的溶液在25℃下搅拌30分钟。将得到的混合物在真空下浓缩。将粗产物通过Prep-HPLC进行纯化（表1）。这产生58mg（28%）作为棕色固体的2-([4-[([4-[(4,5-二氯-2-氟苯基)氨基]喹唑啉-6-基]氨甲酰基)甲基]-5-亚硫烷基-4,5-二氢-1,3,4-噻二唑-2-基]硫烷基)丁二酸。
LC-MS：(ES,m/z)：629[M+H]+
H-NMR(300MHz)(DMSO,ppm):δ2.730-2.959(2H,m),4.394-4.435(1H,m),5.264(2H,s),7.796(4H,s),8.458(1H,s),8.782(1H,s),10.056(1H,s),10.796(1H,s)。
表1
实施例3
将NE91细胞（过表达野生型人类类型EGFR的小鼠成纤维细胞）饥饿过夜，与示例性的模拟突变的化合物（命名为EEO3，参见下文；0.1μM；图2的第2、6道）、（0.1μM；图2的第3、7道）或两者（图2的第4、8道）温育1小时，并收获（图2的第1-4道）或用EGF（50ng/mL）诱导15分钟并收获。将相等量的总蛋白装载在10%SDS-PAGE凝胶上，分离，转移到PVDF膜，并用pY99、pERK抗体（SantaCruzBiotechnology）或针对EGFR的特定磷酸酪氨酸的抗体（pY845、pY1068、pY992）或AKT磷光-丝氨酸（473；CellSignalingTechnology）探测。作为对照，分别使用1005（SantaCruzBiotechnology）和GTU88（Sigma）抗体测定总EGFR和γ-微管蛋白水平。得到的数据显示在图2中。
在2011年3月17日提交的美国专利申请系列号61/453,626中描述的研究显示，某些模拟突变的化合物（MMC）能够重现突变受体的一些重要特点，包括总EGFR的组成性磷酸化、特定Tyr残基的提高的组成性磷酸化和下游AKT和ERK信号传导对抑制的提高的易感性。EEO3是在所述共同待决的申请中用于下列结构的名称：
代表性的结果提供在图2中。已知L858突变引起总EGFR的组成性磷酸化提高以及Tyr845和Tyr1068的组成性磷酸化的提高，但是对Tyr992的组成性磷酸化没有影响。参见SordellaR等，“在肺癌中吉非替尼敏化EGFR突变激活抗凋亡途径”（Gefitinib-SensitizingEGFRMutationsinLungCancerActivateAnti-ApoptoticPathways），Science20August2004:Vol.305no.5687pp.1163-1167DOI:10.1126/science.1101637，其全部内容通过参考并入本文。本发明的化合物显示出这些特点；即提高总EGFR（与图2的上图中示出的相似）以及Tyr845（与图2中从上数第2图中示出的相似）和Tyr1068（与图2中从上数第3图中示出的相似）的组成性磷酸化，但是对Tyr992的组成性磷酸化没有影响（与图2中从上数第4图中示出的相似）。此外，与突变产生的效应类似，化合物提高诱导的对总EGFR（与图2的上图中示出的相似）、Tyr845（与图2中从上数第2图中示出的相似）和Tyr1068（与图2中从上数第3图中示出的相似）的磷酸化的抑制，并且预计增加下游信号传导分子包括AKT（与图2中从上数第5图中示出的相似）和ERK（如图2中从上数第6图中所示）。
实施例4
为了评估化合物C318对EGFR信号传导的抑制活性，测试了它对EGFR激酶的特定Tyr残基的磷酸化的影响（参见图3）。所使用的方法与实施例3中所描述的相同。
与使用模拟突变的化合物EEO3（参见上文）获得的数据相一致，化合物C318与相比在Tyr1068但不是Tyr992的抑制中显示出更强的活性。C300和C-318F的抑制效应不如C-318强，可能是因为它们的结合亲和性较低。该结果与为这种分子提出的双重作用机制相符；所述机制即分子的一部分起到传统酪氨酸激酶抑制剂的作用，而另一部分通过将激酶结构域限制在活性构象下起到模拟突变的化合物的作用。
实施例5
为了评估C318在体外对细胞增殖的抑制效应，测试了化合物对过表达EGFR的NE91细胞的停泊不依赖性生长的抑制（图4）。通过评估悬浮在软琼脂中的细胞的集落形成效率，来测定停泊不依赖性生长。将细胞（5x103个）悬浮在含有3ml无细胞饲养层的6-cm培养皿中的1ml顶层（0.375%琼脂糖，10%FBS/DMEM）中，所述无细胞饲养层由增补有10%FBS和20mMHepes（pH7.5）的DMEM中的0.5%琼脂糖构成。每5天一次向培养皿进料含有0.1μMC318或的0.7ml10%FBS/DMEM。3周后，在用对碘代硝基四唑紫（1mg/ml）染色后对集落进行可视化和计数。
在0.1μM浓度下，在过表达EGFR的细胞系NE91中，C318与 相比抑制停泊不依赖性生长的活性更高。参见下图。
实施例6
在其他试验组中，使用HotSpotSM技术，使用肽底物聚[Glu:Tyr]（4：1，0.2mg/ml）进行了EGFR测定法以确定IC50值。这些试验由ReactionBiologyCorp.（Malvern,PA;http://www.reactionbiology.com）进行。激酶反应在20mmol/LHEPES（pH7.5）、10mmol/LMgCl2、1mmol/LEGTA、0.02%Brij35、0.02mg/mL牛血清白蛋白、2mmol/LDTT和1%DMSO中进行。ATP的终浓度为10μmol/L。将纯化的重组激酶与测试化合物从1μmol/L的终浓度开始的3倍连续稀释液进行温育。ATP浓度为10μmol/L。使用来自于Graph-Pad软件的Prism5.0来拟合剂量响应曲线。
C318和C318N两者表现出与相当的IC50（0.5-1nM）。所有这些抑制剂，也使用抗性EGFR激酶突变体EGFR（L858R，T790M），通过同样的激酶测定法来测试。如图7中所示，C318N与C318（图7中源自于C318的数据被标为C318S）和相比，具有更好的活性以抑制这种激酶的活性。在100nM下，C318表现出与近似相同的抑制。在该测试中，在同样条件下，C318N显示出约20%的EGFR（L858R，T790M）抑制，性能优于和C318/C318S两者。
正如本领域技术人员认识到的，根据这些教示，可以对本发明做出大量修改和改变，并且本发明考虑到了所有这些修改和改变。例如，除了本文中描述的实施方式之外，本发明考虑到了由本文引用的本发明的特点与补充本发明的特点的引用的现有技术参考文献的特点的组合所产生的发明，并要求这些发明的权利。同样地，应该认识到，任何所描述的材料、特点或制品可以与任何其他材料、特点或制品组合使用，并且这样的组合被认为是在本发明的范围之内。
在本文中引用或描述的每个专利、专利申请和出版物的公开内容，在此以其全部内容通过参考并入本文。

Claims (22)

1.由以下结构表示的化合物：
其中
R1独立地是H、任选取代的氨基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烯基、任选取代的C1-6炔基、任选取代的苯甲氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、任选取代的苯氧基或单、二或三氟甲基；
n为1、2或3；
R2独立地是H或C1-3-烷基；
R4是H、-N(R2)2、任选取代的C1-3-烷基、任选取代的C1-3-烷氧基、氰基、卤素、羟基、硝基或单、二或三氟甲基；并且
R8是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、或C3-5环烷基取代的C1-3烷基；
或其可药用盐形式。
2.由以下结构表示的化合物：
其中
R1独立地是H、任选取代的氨基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烯基、任选取代的C1-6炔基、任选取代的苯甲氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、任选取代的苯氧基或单、二或三氟甲基；
n为1、2或3；
R2独立地是H或C1-3-烷基；
R4是H、-N(R2)2、任选取代的C1-3-烷基、任选取代的C1-3-烷氧基、氰基、卤素、羟基、硝基或单、二或三氟甲基；
R8是被至少一个-OH、-COOH、-C(O)O-C1-4烷基、或C3-5环烷基取代的C1-3烷基；
或其可药用盐形式。
3.权利要求1或2的化合物，其中每个R1独立地是H、任选取代的C2-6炔基、任选取代的苯甲氧基或卤素。
4.权利要求1或2的化合物，其中每个R1独立地是Cl或F。
5.权利要求1或2的化合物，其中R2是H。
6.权利要求1或2的化合物，其中R4是H。
7.权利要求1的化合物，其中R1是乙炔基，n是1，R2是H，并且R4是H。
8.权利要求2的化合物，其中R1是乙炔基，n是1，R2是H，并且R4是H。
9.权利要求1的化合物，其中每个R1独立地是Cl或F，R2是H，并且R4是H。
10.权利要求2的化合物，其中每个R1独立地是Cl或F，R2是H，并且R4是H。
11.权利要求1或2的化合物，其中R8是-CH2COOR2、-CH(CH3)COOR2，-C(COOH)-CH2COOH或-CH2-环丙基。
12.权利要求1的化合物，其由下列结构或其可药用盐表示：
13.权利要求2的化合物，其由下列结构或其可药用盐表示：
14.一种药物组合物，其包含权利要求1-13任一项的化合物与药用载体、稀释剂或赋形剂，所述组合物适用于给药于人类。
15.权利要求1-13任一项的化合物在制备用于治疗以表皮生长因子受体(EGFR)的活性过高和/或不适当活性为特征的细胞增殖性障碍的患者的药物中的应用。
16.权利要求15的应用，其中所述细胞增殖性障碍是癌症。
17.权利要求15的应用，其中细胞增殖性障碍影响肛门、乳房、结肠、前列腺、肺、胰腺、卵巢或胃。
18.权利要求15的应用，其中患者是人类。
19.权利要求15的应用，其中所述化合物与以下相组合：向患者给药药学有效量的抗癌试剂、或对患者执行非药物疗法、或两者。
20.权利要求19的应用，其中所述化合物和所述抗癌试剂同时给药。
21.权利要求19的应用，其中所述非药物疗法是手术、高血压化疗、基因疗法、热疗、低温疗法、光动力疗法、激光烧灼、放疗，或其组合。
22.权利要求19的应用，其中在手术移除起因于细胞增殖性障碍的肿瘤之后，给药所述化合物。
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