CN103641794B

CN103641794B - 锍化合物及其用途

Info

Publication number: CN103641794B
Application number: CN201310514618.5A
Authority: CN
Inventors: 克劳德.M.维希克; 珍妮特.E.里卡德; 查尔斯.R.哈林顿; 戴维.霍斯利; 约翰.M.D.斯托雷; 科林.马歇尔; 詹姆斯.P.辛克莱尔
Original assignee: Wista Laboratories Ltd
Current assignee: Wista Laboratories Ltd
Priority date: 2006-03-29
Filing date: 2007-03-28
Publication date: 2016-09-21
Anticipated expiration: 2027-03-28
Also published as: HRP20141261T1; DK2853293T3; SI2001556T1; CA2645919A1; SI2853293T1; JP5184507B2; HK1121084A1; WO2007110630A1; PT2853293T; HK1208000A1; PT2001556E; CN101460222B; JP2009531405A; EP2001556B1; DK2001556T3; HRP20180204T1; CN103641794A; EP2853293B1; CN101460222A; AU2007231127A1

Abstract

本发明涉及锍化合物及其用途。本发明总体上涉及利用特定二氨基吩噻嗪

Description

锍化合物及其用途

本申请为中国发明专利申请(申请日为2007年3月28日、申请号为200780020273.0(PCT申请号为：PCT/GB2007/001107)、发明名称为“锍化合物及其用途”)的分案申请。

相关申请

本申请与2006年3月29日提交的美国专利申请60/786,699有关；美国专利申请60/786,699的内容在此全部引入作为参考。

技术领域

本发明总体上涉及利用特定二氨基吩噻嗪化合物(diaminophenothiazinium)的工艺、用途、方法和物质。这些化合物用作药物用于治疗τ蛋白病(tauopathies)，如阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)。

背景技术

为了更详细地描述和充分公开本发明及本发明相关领域的现状，本申请引用了多篇专利和出版物。各参考文献通过参考全文引入本说明书中，每篇参考文献应视为被单独专门地引入作为参考。

在整个说明书(包括随附权利要求书)中，除非另有说明，术语“包含(或包括)”应理解为包括所指出的整数或步骤，或整数组或步骤组，同时也不排除任何其它整数或步骤，或整数组或步骤组。

必须指出的是，除非另有说明，否则说明书和随附权利要求书中出现的名词包括其单数和复数形式。因此，“药物载体”包括两种或多种这种载体的混合物，依此类推。

本文中的范围通常表达为从“约”一特定数值和/或至“约”另一数值。当用这样的范围表达时，另一个实施方案包括从一特定值和/或至另一特定值。类似地，当数值前用“约”表示其为近似值时，前缀“约”的使用应该理解为该具体数值形成了另一个实施方案。

痴呆病(例如阿尔茨海默氏病)的症状以蛋白结构(例如β-淀粉样蛋白斑和神经原纤维缠结(NFTs))在受感染的患者的脑中细胞内和/或细胞外沉淀物的进行性累积为特征。这些损伤的出现大部分与病理性神经元纤维变性和脑萎缩有关，也和认知缺损有关(参见如Mukaetova-Ladinska,E.B等人，2000,Am.J.Pathol.,卷157,No.2,623-636页)。

在AD中，神经斑和NFTs都含有双股螺旋形细丝(paired helical filaments,PHF)，该螺旋形细丝的主要成分是微管相关蛋白τ(参见如Wischik等人，1988,PNAS USA,第85卷,第4506-4510页)。斑块(Plaques)也含有源自淀粉样前体蛋白(APP)异常加工(processing)的细胞外β-淀粉样蛋白原纤维(参见例如Kang等人，1987,Nature,第325卷，第733页)。由Wischik等人撰写的文章(在‘Neurobiology of Alzheimer’s disease’中,第2版,2000,Eds.Dawbarn,D.和Allen,S.J.,The Molecular and Cellular NeurobiologySeries,Bios Scientific Publishers,Oxford)中详细讨论了τ蛋白在神经变性痴呆发病机理中的可能作用。τ(蛋白)正常形成的缺失、病理性PHF的累积和额中部皮质中突触的缺失都与相关认知缺损有关。而且，突触缺失和锥体细胞缺失都与τ-反应性神经原纤维病理(neurofibrillary pathology)的形态测定(morphometric measures)相关联，其在分子水平类似于阿尔茨海默氏病中τ蛋白池(protein pool)从可溶形式到聚合形式(即PHF)的几乎总体再分配。

τ蛋白以可变剪接同工型(alternatively-spliced isoforms)存在，其含有3或4个对应于微管结合域的重复序列(参见例如Goedert,M等人,1989,EMBO J.,第8卷,第393-399页;Goedert,M等人,1989,Neuron,第3卷，第519-526页)。PHF中的τ蛋白经蛋白水解加工成为核心域(参见例如Wischik,C.M等人,1988,PNAS USA,第85卷,4884-4888页;Wischik等人，1988,PNAS USA,第85卷,第4506-4510页;Novak,M等人,1993,EMBO J.,第12卷,第365-370页)，该核心域由重复域的相移版本(phase-shifted version)组成；仅三个重复域参与稳定的τ-τ相互作用(参见例如Jakes,R等人,1991,EMBO J.,第10卷,第2725-2729页)。一旦形成，PHF-样τ聚集体(aggregate)作为种子，用于进一步捕获蛋白并且为全长τ蛋白的蛋白酶解加工提供模板(template)(参见例如Wischik等人，1996,PNAS USA,第93卷,第11213-11218页)。

在τ加入的PHF的重复域中观察到相移(phase shift)，这说明所述重复域在合并进入丝的过程中历经了一个经诱导的构象变化(conformational change)。一般认为，在AD发病初始的过程中这种构象变化可以通过τ(蛋白)与病理物质如受损的膜蛋白或变异的膜蛋白结合而引发(参见例如Wischik,C.M等人,1997,in“Microtubule-associatedproteins:modifications in disease”,Eds.Avila,J.,Brandt,R.和Kosik,K.S.(HarwoodAcademic Publishers,Amsterdam)185-241页)。

在PHF形成和累积的过程中，PHFs首先组装，在细胞质内形成无定形的聚集体，很有可能是从早期的τ低聚物形成无定形的聚集体，所述早期的τ低聚物在PHF组装之前或组装的过程中被截短(truncated)(参见例如Mena,R等人,1995,Acta Neuropathol.,第89卷,第50-56页;Mena,R等人,1996,ActaNeuropathol.,第91卷,第633-641页)。这些细丝然后继续形成典型的细胞内NFTs。这种状态下，所述PHF由经截短的τ核和含有全长τ的绒毛状外壳(fuzzycoat)组成(参见例如Wischik等人，1996,PNAS USA,第93卷,第11213-11218页)。所述组装过程是指数级的，该过程消耗具有正常功能τ的细胞池(cellular pool)并诱导合成新的τ来弥补这种缺陷(参见例如Lai,R.Y.K等人,1995,Neurobiology of Ageing,第16卷,No.3,第433-445页)。最终，神经元的功能缺损发展为细胞死亡，留下的是细胞外NFT。细胞死亡与细胞外NFT的数目高度相关(参见例如Wischik et al.,in‘Neurobiology ofAlzheimer’s disease’,第二版,2000,Eds.Dawbarn,D.和Allen,S.J.,The Molecular andCellular Neurobiology Series,Bios Scientific Publishers,Oxford)。随着缠结(tangles)被挤出进入细胞外空间，神经元的绒毛状外壳会渐进性缺失，并伴随相应的N-端τ免疫活性的缺失，但与PHF核有关的τ免疫活性仍保留(参见例如Bondareff,W等人,1994,J.Neuropath.Exper.Neurol.,第53卷,No.2,第158-164页)。

先前已经证明，二氨基吩噻嗪类化合物抑制τ蛋白聚集和破坏PHF结构，并逆转PHF核的蛋白水解稳定性(参见例如WO96/30766,F Hoffman-La Roche)。这些化合物经披露用于治疗或预防各种疾病，包括治疗或预防阿尔茨海默氏病。其中，所述化合物包括：

此外，尽管WO02/055720(The University Court of the University ofAberdeen)主要是涉及τ蛋白病，但该申请也讨论了二氨基吩噻嗪的还原形式在治疗各种蛋白积聚疾病中的特定用途。

WO2005/030676(The University Court of the University of Aberdeen)讨论了放射标记的吩噻嗪类化合物，和它们在诊断和治疗如τ蛋白病中的用途。

尽管存在上述公开内容，但应当理解的是如果提供一个或多个先前没有被专门指出能用作有效τ蛋白聚集抑制剂的化合物，将对该领域是有贡献的。

在提交本申请之前(WO2006/032879A2公开于2006年3月30日)已经提交了PCT/GB2005/003634(TauRx Therapeutics Pte.Ltd)，但后一申请还没有公开。PCT/GB2005/003634尤其涉及合成和纯化特定3,7-二氨基-吩噻嗪-5-化合物(称作“二氨基吩噻嗪化合物”)包括MTC和本发明披露的其它化合物的方法。该申请还进一步公开了这些化合物的治疗用途。

发明内容

本发明的发明人现已找到某些锍化合物作为有效的τ蛋白聚集抑制剂，并且当所述抑制剂以优选的形式存在时，其与上述现有技术公开的化合物相比具有某些其它所需的特性。

如上所述，τ蛋白的特征为作为蛋白质家族众多成员中的一个，其在组装和拆散(disassembly)这样的重复循环中与微管共纯化(Shelanski等人(1973)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,70.,765-768)，并已知τ蛋白为微管-相关蛋白(microtubule-associated-proteins,MAPs)。τ家族的成员具有共同的特征，即具有特征性N-端片段、特征性串联重复区域和C-端尾部，其中约50个氨基酸的序列插在N-端片段中，该片段在脑部随发育经逐步调节，并且其中所述串联重复区域由3至4个具有31-32氨基酸的串联重复(序列)组成。

这些特定化合物中的一个或多个是本领域所熟知的-例如MTZ公开在Fierz-Davidand Blangley,1949,“F.Oxazine and Thiazine Dyes,”in:Fundamental Processes ofDye Chemistry,published by Interscience(London,UK),308-314页中。但发明人认为这些化合物中没有一个被现有技术公开作为τ蛋白聚集抑制剂。

因此，本发明涉及采用了这些化合物作为τ蛋白聚集抑制剂和作为与τ蛋白聚集(“τ蛋白病”)有关的疾病的治疗药和预防药的方法、用途、组合物和其它物质。本发明进一步涉及制备这些化合物的方法。

如下将更详细讨论本发明的上述内容和其它发明内容。

化合物

本发明总体上涉及一个或多个选自下述的二氨基吩噻嗪化合物：

这些化合物A-L在此称作“二氨基吩噻嗪化合物”或“DAPT化合物”或“本发明化合物”或(除非文中给出另外说明)“活性化合物”。

同位素变化

在一个实施方案中，所述化合物的一个或多个碳原子为¹¹C、¹³C或¹⁴C。

在一个实施方案中，所述化合物的一个或多个碳原子为¹¹C。

在一个实施方案中，所述化合物的一个或多个碳原子为¹³C。

在一个实施方案中，所述化合物的一个或多个碳原子为¹⁴C。

在一个实施方案中，所述化合物的一个或多个氮原子为¹⁵N。

在一个实施方案中，一个或多个或所有-Me(或-Et)基团中的一个碳原子或多个碳原子或所有碳原子为¹¹C。

在一个实施方案中，一个或多个或所有-NMe₂(或-NEt₂)基团中的一个碳原子或多个碳原子或所有碳原子为¹¹C。

在一个实施方案中，基团-NMe₂为-N(¹¹CH₃)₂。

逆转或抑制τ蛋白聚集的用途

本发明一个方面是用二氨基吩噻嗪化合物逆转或抑制τ蛋白聚集。这种聚集可能发生在体外或体内，并且可能与本文讨论的τ蛋白病有关。本发明还提供了逆转或抑制τ蛋白聚集的方法，包括将聚集体或蛋白与本发明化合物接触。

优选化合物

除非另有说明，否则在本发明上述方面和其它方面，所述化合物选自A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K和L(每种情况任选为如上所述的该化合物的同位素变体(isotopicvariant))。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物A。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物B。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物C。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物D。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物E。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物F。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物G。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物H。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物I。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物J。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物K。

在一个实施方案中，所述化合物为化合物L。

在一个实施方案中，所述二氨基吩噻嗪化合物可以由本发明描述的方法获得(见下述“合成方法”)。

本发明优选的化合物是在本发明测试中表现出高活性的那些化合物，特别是在下述体外测试中表现出高活性的那些化合物。如本文实施例所测定的那样，优选化合物的B50为小于500，更优选为小于300、200、100、90、80、70、60、50、40、30或20μM。

在一个实施方案中，所述二氨基吩噻嗪化合物的Rx指数(RxI)值根据本文实施例测定为大于或等于150，更优选为大于或等于160、170、180、190、200、500、1000、1500或2000。

治疗或预防方法及第一药用和第二药用

本发明一方面涉及治疗或预防患者患有的τ蛋白病的方法，包括向所述患者给药治疗有效量的本发明披露的二氨基吩噻嗪化合物。

本发明一方面涉及“τ蛋白病”。与阿尔茨海默氏病(AD)一样，神经变性疾病如匹克病(Pick’s disease)和进行性核上性麻痹(Progressive Supranuclear Palsy,PSP)的发病机理看起来与病理性截短的τ聚集体分别在新皮质的齿状回(dentate gyrus)和星状锥体细胞中的聚集相互关联。其它痴呆病包括额颞痴呆(fronto-temporal dementia,FTD)；与染色体17相关的帕金森综合征(parkinsonism linked to chromosome17,FTDP-17)；去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(disinhibition-dementia-parkinsonism-amyotrophycomplex,DDPAC)；核-脑桥-黑质变性(pallido-ponto-nigral degeneration,PPND)；ALS-关岛痴呆综合征(Guam-ALS)；核-黑质-苍白球变性(pallido-nigro-luysiandegeneration,PNLD)；皮质-基底变性(cortico-basal degeneration,CBD)及其它疾病(参见Wischik等人.2000,loc.cit,其中进行了详细讨论-特别是在表5.1中)。所有这些疾病都称为“τ蛋白病”或称作“τ蛋白聚集疾病(diseases of tau proteinaggregation)”，该疾病的特征主要是异常τ聚集或部分是异常τ聚集。

在本发明与τ蛋白病有关的上述方面和其它所有方面中，所述τ蛋白病优选地选自如上所列的那些，即AD、匹克病、PSP、FTD、FTDP-17、DDPAC、PPND、ALS-关岛痴呆综合征、PNLD和CBD。

在一个优选的实施方案中，所述τ蛋白病为阿尔茨海默氏病(AD)。

本发明一个方面涉及本发明披露的二氨基吩噻嗪化合物通过医疗而用于治疗或预防人体或动物体的疾病(例如τ蛋白病)中的用途。

本发明一个方面涉及本发明披露的二氨基吩噻嗪化合物在制备用于治疗或预防τ蛋白病的药物中的用途。

另一实施方案为治疗或预防本发明所述τ蛋白聚集疾病的方法，所述方法包括向受试者给药二氨基吩噻嗪化合物或给药含有所述化合物的治疗组合物，从而抑制与所述疾病有关的τ蛋白聚集。

其它方法和用途

另一个实施方案披露了二氨基吩噻嗪化合物或含有所述化合物的治疗组合物在治疗或预防上述τ蛋白聚集疾病的方法中的用途，该方法包括向受试者给药二氨基吩噻嗪化合物或组合物，从而抑制与所述疾病有关的τ蛋白聚集。

另一实施方案涉及二氨基吩噻嗪化合物在制备用在治疗或预防上述τ蛋白聚集疾病的方法中的药物中的用途，所述方法包括向受试者给药所述药物从而抑制与所述疾病有关的τ蛋白聚集。

一个实施方案披露了调节哺乳动物的脑中τ蛋白聚集的方法，所述聚集与上述疾病有关，所述治疗包括向所述需要所述治疗的所述哺乳动物给药预防或治疗有效量的针对所述聚集的抑制剂，其中所述抑制剂为二氨基吩噻嗪化合物。

本发明一个方面为抑制哺乳动物的脑中蛋白聚集体(例如双股螺旋形细丝(PHF)形式)形成的方法，任选在哺乳动物的脑中为神经原纤维缠结形式(NFTs))，该治疗方法如本发明描述的那样。

本发明一个方面提供用于治疗哺乳动物患有的与τ蛋白聚集有关的疾病的药物产品，该药物产品包括容器，所述容器标有或带有指明所述药物是用于治疗所述疾病的标签，所述容器含有一个或多个剂量单位，每个单位含有至少一种可药用的赋型剂和作为活性成分的、单独的、纯的本发明二氨基吩噻嗪化合物。

组合物、制剂和纯度

如下更详细地讨论组合物和制剂。

然而，在一个实施方案中，可以将所述二氨基吩噻嗪化合物用在或加到组合物中，所述化合物的纯度等于或小于100、99、98、97、96、95、94、93、92、91或90%。在一个实施方案中，本发明化合物(不)是通过PCT/GB2005/003634中公开的高纯度方法得到的或(不)可由该方法获得(TauRx Therapeutics Pte.Ltd)，该申请在本申请提交前提交但在本申请提交前没有公布。

本发明一个方面涉及剂量单位(例如药物片剂或胶囊)，该剂量单位含有20至300mg本发明所述的二氨基吩噻嗪化合物(例如通过本发明公开的方法获得或可通过本发明公开的方法获得；具有本发明所述的纯度，等等)。

下面将对含有20至300mg本发明所述的二氨基吩噻嗪化合物和可药用载体、稀释剂或赋型剂的剂量单位(例如药物片剂或胶囊)进行更详细的描述。

在一个实施方案中，所述量为约25mg。

在一个实施方案中，所述量为约35mg。

在一个实施方案中，所述量为约50mg。

在一个实施方案中，所述量为约70mg。

在一个实施方案中，所述量为约125mg。

在一个实施方案中，所述量为约175mg。

在一个实施方案中，所述量为约250mg。

优选的剂量方案

如下将更详细地讨论剂量方案。

不管怎样，在一个实施方案中，将所述二氨基吩噻嗪化合物按照下述剂量方案给药到人类患者：约50或约75mg，每天3或4次。

在一个实施方案中，将所述二氨基吩噻嗪化合物按照下述剂量方案给药到人类患者：约100或约125mg，每天2次。

优选的联合治疗

如下将更详细地讨论联合治疗和疗法，其中将两个或多个治疗或疗法联合，例如将所述治疗或疗法连续或同时使用。因此，应当理解的是，本发明所述的任何医疗用途或方法都可采用联合治疗方式。

在一个实施方案中，本发明的治疗(例如采用本发明化合物)是与胆碱酯酶抑制剂如多奈哌齐(Donepezil)(Aricept^TM)、利伐斯的明(Rivastigmine)(Exelon^TM)或加兰他敏(Galantamine)(Reminyl^TM)联合使用。

在一个实施方案中，本发明的治疗(例如采用本发明化合物)是与NMDA受体拮抗药如美金刚(Memantine)(Ebixa^TM,Namenda^TM)联合使用。

在一个实施方案中，本发明的治疗(例如采用本发明化合物)是与毒蕈碱受体激动剂联合使用。

在一个实施方案中，本发明的治疗(例如采用本发明化合物)是与用于抑制淀粉样前体蛋白加工成β-淀粉样蛋白的抑制剂(an inhibitor of amyloid precursor proteinto beta-amyloid)联合(例如淀粉样前体蛋白加工的抑制剂，所述淀粉样前体蛋白加工导致β-淀粉样蛋白生成增强)。

配体和标记

本发明讨论的、抑制τ蛋白聚集的二氨基吩噻嗪化合物也用作配体或τ蛋白(或聚集的τ蛋白)的标记(label)。因此，在一个实施方案中，所述二氨基吩噻嗪化合物为τ蛋白(或聚集的τ蛋白)的配体。

可将所述二氨基吩噻嗪化合物(配体)与其它化学基团结合(incorporate)、连接(conjugated)、螯合(chelated)或联合(associated)，所述化学基团为例如稳定的或不稳定的可检测同位素、放射性同位素、正电子发射原子(positron-emitting atoms)、磁共振标记(magnetic resonance labels)、染料、荧光标记物、抗原基团(antigenic groups)、治疗部分(therapeutic moieties)或其它任何有助于预防、诊断或治疗用途的部分(moiety)。

例如，如上所述，在一个实施方案中，所述二氨基吩噻嗪化合物如上定义，但是附加的限定是将所述化合物与一个或多个(例如1、2、3、4个等)同位素、放射性同位素、正电子发射原子、磁共振标记、染料、荧光标记物、抗原基团、治疗部分结合、连接、螯合或联合。

在一个实施方案中，所述二氨基吩噻嗪化合物为配体和标记，例如τ蛋白(或聚集的τ蛋白)的标记，并且与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合。

例如，在一个实施方案中，所述二氨基吩噻嗪化合物如上所定义，但是附加的限定是将所述化合物与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合。

可以通过任何合适的手段显现或检测经标记的二氨基吩噻嗪化合物(例如，当配合到τ蛋白或聚集的τ蛋白时)，本领域技术人员能够理解的是可使用任何本领域已知的合适检测手段。

例如，所述二氨基吩噻嗪化合物(配体-标记)可以合适地如下检测：结合正电子发射原子(例如¹¹C)(例如作为一个或多个烷基取代基(如甲基取代基)中的碳原子)，并用本领域已知的正电子发射断层扫描术(PET)对所述化合物进行检测。

制备这些化合物和相似的¹¹C标记的二氨基吩噻嗪化合物的合适方法记载在如WO02/075318(参见WO02/075318的附图11a,11b,12)和WO2005/030676中。

因此，一方面，本发明提供一种标记τ蛋白(或聚集的τ蛋白)的方法，包括如下步骤：将所述τ蛋白(或聚集的τ蛋白)与二氨基吩噻嗪化合物接触，所述二氨基吩噻嗪化合物与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合。

在另一方面，本发明提供一种检测τ蛋白(或聚集的τ蛋白)的方法，包括如下步骤：将τ蛋白(或聚集的τ蛋白)与二氨基吩噻嗪化合物接触，所述二氨基吩噻嗪化合物与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合，检测与τ蛋白(或聚集的τ蛋白)结合的所述化合物的存在和/或其量。

在另一个方面，本发明提供诊断或预测(prognosis)被认为患有τ蛋白病的受试者(subject)所述疾病的方法，包括如下步骤：

(i)向受试者中引入能够标记τ蛋白或聚集的τ蛋白(特别是τ蛋白)的二氨基吩噻嗪化合物(例如与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合的二氨基吩噻嗪化合物)，

(ii)测定与受试者的脑中τ蛋白或聚集的τ蛋白结合的所述化合物的存在和/或其量，

(iii)将(ii)中的测定结果与受试者的疾病状态相关联。

在另一个方面，本发明提供能够标记τ蛋白或聚集的τ蛋白的二氨基吩噻嗪化合物(例如与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合的二氨基吩噻嗪化合物)，所述化合物用在诊断或预测τ蛋白病的方法中。

在另一个方面，本发明提供能够标记τ蛋白或聚集的τ蛋白(特别是τ蛋白)的二氨基吩噻嗪化合物(例如与一个或多个(例如1、2、3、4个等)可检测标记结合、连接、螯合或联合的二氨基吩噻嗪化合物)在制备用于诊断或预测τ蛋白病的诊断剂或预测剂中的用途。

本领域技术人员应当理解的是，二氨基吩噻嗪化合物配体物/标记物可以以前体形式给药，通过所述受试者中存在的活化剂或服用的活化剂而转化为活性形式(例如配合形式、标记形式)，而不是直接给药这些二氨基吩噻嗪化合物配体物/标记物。

本发明披露的配体物可用作诊断方法或预测方法的一部分。可以用其选择进行治疗的患者或用来评估对所述受试者进行的治疗的有效性或给予受试者的治疗剂(例如τ蛋白聚集抑制剂)的有效性。

合成方法

本发明化合物的化学合成方法公开在本文的实施例中。这些合成方法和/或其它已知的方法可通过已知途径进行修饰和/或调整以利于合成本发明其它化合物。

因此，本发明一个方面提供合成本发明披露的化合物的方法，如后述任一实施例所公开的那样或基本如后述任一实施例所公开的那样。

本发明还提供本发明的二氨基吩噻嗪化合物，这些化合物是由本申请描述的方法所或的化合物或者可由本申请描述的方法获得的化合物。

以下对本发明的某些方面进行更详细的描述。

治疗

用在本发明治疗疾病语境中的术语“治疗”总体上与治疗和疗法有关，不管是针对人类还是动物(例如兽用)，其中获得某些所需的治疗效果，例如抑制病症发展(包括减慢发展速度、使发展停止)、使病症消退、使病症改善和使病症治愈。还包括预防措施性(即预防、防治)的治疗。

本文使用的术语“治疗有效量”是指活性化合物的量或含有活性化合物的物质、组合物或剂型的量，当根据所述的治疗方案给药后所述量足以产生某些所需的治疗效果，与合理的益处/风险比例相称。

相似地，本文中使用的术语“预防有效量的”是指活性化合物的量或含有活性化合物的物质、组合物或剂型(dosage from)的量，当根据所述的治疗方案给药后所述量足以产生某些所需的预防效果，与合理的益处/风险比例相称。

术语“处置或治疗”包括联合治疗和联合疗法，其中将两种或多种治疗剂或疗法以例如连续方式联合或同步方式联合。治疗和疗法的实例包括但不限于化学疗法(给予活性制剂包括如药物、抗体(例如在免疫疗法中所使用的抗体)、前药(例如光敏疗法中所使用的前药、GDEPT、ADEPT,等))；外科手术；放射疗法；和基因疗法。

给药途径

可采用任何方便的给药途径将所述二氨基吩噻嗪化合物或含有该化合物的药物组合物给药到受试者/患者，全身/外周或局部给药(即在所希望起作用的部位)都是可以的。

给药途径包括但不限于口服(例如摄入)；含服给药；舌下给药；经皮给药(包括如通过贴剂(patch)、膏剂(plaster)等)；透粘膜给药(包括如通过贴剂、膏剂等)；鼻吸入给药(例如通过鼻腔喷雾)；眼部给药(例如通过滴眼剂)；肺部给药(例如通过例用如气溶胶的吸入或吹入疗法，如通过如嘴或鼻)；直肠给药(例如通过栓剂或灌肠剂)；阴道给药(例如通过阴道栓剂)；非肠道方式给药如通过注射给药包括皮下注射、皮内注射、肌内注射、静脉注射、动脉内注射、心内注射、膜内注射、椎内注射、囊内注射、囊下注射、眼眶内注射、腹膜内注射、气管内注射、表皮下注射、关节内注射、蛛网膜下注射和胸骨内注射(包括如内腔式注射到脑内)；通过埋入库(depot)或贮器(reservoir)给药，例如连续或同时埋入。

受试者/患者

受试者/患者可以是动物、哺乳动物、胎生哺乳动物、有袋类动物(例如袋鼠、袋熊)、单孔类动物(monotreme)(例如鸭嘴兽)、啮齿目动物(例如豚鼠、仑鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、兔形目动物(例如家兔)、禽类(例如鸟)、犬类(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、猪科动物(例如猪)、羊族动物(例如绵羊)、牛族动物(例如母牛)、灵长类(动物)、猿猴(simian)(例如猴或猿)、猴(monkey)(例如狨猴、狒狒)、猿(ape)(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩(orangutang)、长臂猿(gibbon))，或人类。

进一步，受试者/患者可以处于其成长的任何阶段，例如胎儿。

在一个优选的实施方案中，受试者/患者为人类。

用于所述方法的合适受试者可以基于通常的因素进行选择。因此，最初对患者的选择可能包括如下方式中的一个或多个：通过有经验的临床医生的严格评价；通过增补实验和其它研究方法尽可能排除非-AD诊断；利用神经病理有效的实验组客观评价认知功能的水平。

在一个实施方案中，所述受试者/患者为人类。

制剂

尽管可单独使用(例如给药)二氨基吩噻嗪化合物，但通常优选的是将其用在组合物或制剂中。

在一个实施方案中，所述组合物为含有本发明所述二氨基吩噻嗪化合物和可药用载体、稀释剂或赋型剂的药物组合物(例如制剂(formulation)、药品(preparation)、药物(medicament))。

在一个实施方案中，所述组合物为含有至少一个本发明所述二氨基吩噻嗪化合物和一种或多种其它本领域技术人员已知的可药用成分的药物组合物，所述可药用成分包括但不限于可药用载体、稀释剂、赋型剂、助剂、填料、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、助溶剂、表面活性剂(例如润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

在一个实施方案中，所述组合物进一步包含其它制剂如其它治疗剂或预防剂。

合适的载体、稀释剂、赋型剂等可在标准药物教材中找到。参见，例如Handbook of Pharmaceutical Additives,第二版(由M.Ash和I.Ash编辑),2001(Synapse InformationResources,Inc.,Endicott,New York,USA),Remington'sPharmaceutical Sciences,第20版,Lippincott,Williams&Wilkins出版,2000;和Handbook of Pharmaceutical Excipients,第二版,1994。

本发明其它方法涉及制备药物组合物的方法，包括将至少一种本发明所述的[¹¹C]-放射标记的吩噻嗪或吩噻嗪类化合物与一种或多种其它本领域技术人员已知的可药用成分混合，所述可药用成分如载体、稀释剂、赋型剂等。如果以单个单位(例如片剂等)形式进行配制，每个单位含有预定量(剂量)的活性化合物。

本发明使用的术语“可药用的”涉及化合物、成分、物质、组合物、剂型等，其在合理的医学判断范围内适于与出问题的受试者(例如人)的器官接触，而不会产生过量的毒性、刺激、过敏性应答或其它问题或病症，与合理的利益/风险比相称。每一种载体、稀释剂、赋型剂等在与制剂的其它成分的相容方面必须也是“可用的”。

所述制剂可以通过制药领域已知的任何方法进行制备。这些方法包括如下步骤：将活性化合物与作为一种或多种附加成分的载体混合。通常，所述制剂是通过将活性化合物与载体(例如液体载体、细颗粒固体载体，等)均匀而又紧密(intimately)混合在一起，然后根据需要将产品成型。

所述制剂可经制备实现快速或缓慢释放；实现即释、延迟释放、定时释放或持续释放；或它们的组合。

适用于非肠道给药(例如通过注射)的制剂包括含水或不含水、等渗、无热原、无菌液体(例如溶液、悬浮液)，其中将所述活性成分溶解、悬浮或以其它方式提供(例如采用微脂粒或其它微粒形式)。这些液体还含有其它可药用成分，如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、悬浮剂、增稠剂和溶质，所述溶质使制剂与被给药者的血液(或其它相关体液)等渗。赋型剂的例子包括如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。用在这些制剂中的合适等渗载体包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸林格氏(注射液)。

典型地，活性成分在液体中的浓度为约1ng/ml至约10μg/ml，例如从约10ng/ml至约1μg/ml。所述制剂可置于单位剂量或多剂量密封容器中，例如置于安瓿瓶(ampoule)和小瓶(vial)中，并且可储存在冷冻干燥(冻干的(lyophilized))的条件下，此时仅需要在使用前即时加入无菌液体载体例如注射用水即可。临时注射溶液和悬浮液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。

制剂的实施例

本发明一个方面涉及含有20至300mg本发明披露的二氨基吩噻嗪化合物和可药用载体、稀释剂或赋型剂的剂量单位(例如药物片剂或胶囊)(例如，通过本发明方法获得，或可通过本发明得到；具有本发明披露的纯度；等等)。

在一个实施方案中，所述剂量单位为片剂。

在一个实施方案中，所述剂量单位为胶囊。

在一个实施方案中，所述量为30至200mg。

在一个实施方案中，所述量为约30mg。

在一个实施方案中，所述量为约60mg。

在一个实施方案中，所述量为约100mg。

在一个实施方案中，所述量为约150mg。

在一个实施方案中，所述量为约200mg。

在一个实施方案中，所述可药用载体、稀释剂或赋型剂为如下物质或包括如下物质的一种或如下两种物质都包括，所述物质为：甘油酯(e.g.,Gelucire lauroylmacrogol-32glycerides PhEur,USP)和胶体二氧化硅(e.g.,2%ColliodalSilicon Dioxide PhEur,USP)。

剂量

本领域技术人员能够理解的是，二氨基吩噻嗪化合物和含有该二氨基吩噻嗪化合物的组合物的合适剂量会根据患者的不同而不同。最佳剂量的确定通常包括平衡治疗益处对任何风险或有害副反应的水平。尽管总体上，所选的剂量是为了在作用部位实现局部浓度，该浓度起到所需的效果而不产生大量有害或毒副反应，但所选择的剂量水平会依赖于各种因素，包括但不限于特定化合物的活性、给药途径、给药时间、化合物的代谢速度、治疗的持续时间、联合使用的其它药物，化合物和/或物质、疾病的严重程度和物种、患者的性别、年龄、体重、状态、一般健康状况和先前治疗史。化合物的量和给药途径最终由医生、兽医或临床医师决定。

在整个治疗阶段可采用一次剂量连续或间歇给药(例如以合适的间隔分份剂量)。确定最有效途径和给药剂量的方法是本领域技术人员已知的，并随下述因素而变化，所述因素为用于治疗的制剂、治疗目的、进行治疗的目标细胞和进行治疗的受试者。单一或多次给药可以根据由医生、兽医或临床医师选择的剂量水平和模式进行。

总体上，活性化合物的合适剂量为每千克受试者体重每天约100ng至约25mg(特别是约1μg至约10mg)。其中，所述活性化合物采用其盐、酯、酰胺或前药等形式，给药量是基于母体化合物计算的，因此所使用的实际剂量要成比例增加。

在一个实施方案中，将所述活性化合物按照下述剂量方案给药到人类患者：约100mg，每天3次。

在一个实施方案中，将所述活性化合物按照下述剂量方案给药到人类患者：约150mg，每天2次。

在一个实施方案中，将所述活性化合物按照下述剂量方案给药到人类患者：约200mg，每天2次。

具体而言，本发明涉及以下方面：

1.一种化合物，该化合物通过治疗而用在治疗或预防人类或动物的方法中，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

2.一种化合物，该化合物用在治疗或预防患者中的τ蛋白病的方法中，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

3.一种化合物，该化合物用在治疗或预防患者中的τ蛋白聚集疾病的方法中，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

4.一种化合物，该化合物用在治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)、匹克病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞痴呆(FTD)、与染色体17相关的帕金森综合征(FTDP-17)、去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(DDPAC)、核-脑桥-黑质变性(PPND)、ALS-关岛痴呆综合征、核-黑质-苍白球变性(PNLD)或皮质-基底变性(CBD)的方法中，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

5.一种化合物，该化合物用在治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)的方法中，所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

6.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为ETC。

7.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为DEMTC。

8.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为DMETC。

9.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为DEETC。

10.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为MTZ。

11.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为ETZ。

12.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为MTI。

13.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为MTI.HI。

14.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为ETI。

15.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为ETI.HI。

16.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为MTN。

17.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为ETN。

18.项1至5任一所述的化合物，其中所述化合物为ETC。

19.项1至18任一所述的化合物，其中所述化合物以剂量单位的形式提供，该剂量单位含有20至300mg量的所述化合物和可药用的载体、稀释剂或赋型剂。

20.项1至19任一所述的化合物，其中所述治疗或预防包括将所述化合物根据下述剂量方案给药：约50或约75mg，每天3或4次。

21.项1至19任一所述的化合物，其中所述治疗或预防包括将所述化合物根据下述剂量方案给药：约100或约125mg，每天两次。

22.项1至21任一所述的化合物，其中所述治疗或预防包括口服给药所述化合物。

23.项1至22任一所述的化合物，其中所述治疗或预防还包括用胆碱酯酶抑制剂治疗。

24.项1至22任一所述的化合物，其中所述治疗或预防还包括用多奈哌齐(Aricept^TM)、利伐斯的明(Exelon^TM)或加兰他敏(Reminyl^TM)治疗。

25.项1至22任一所述的化合物，其中所述治疗或预防还包括用NMDA受体拮抗剂治疗。

26.项1至22任一所述的化合物，其中所述治疗或预防还包括用美金刚(Ebixa^TM，Namenda^TM)治疗。

27.项1至22任一所述的化合物，其中所述治疗或预防还包括用毒蕈碱受体激动剂治疗。

28.项1至22任一所述的化合物，其中所述治疗或预防还包括用用于抑制淀粉样前体蛋白加工成β-淀粉样蛋白的抑制剂治疗。

29.化合物在制备用在治疗或预防患者τ蛋白病的方法中的药物中的用途，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

30.化合物在制备用在治疗或预防患者中的τ蛋白聚集疾病的方法中的药物中的用途，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

31.化合物在制备用在治疗或预防患者中的下述疾病方法中的药物中的用途，所述疾病为阿尔茨海默氏病(AD)、匹克病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞痴呆(FTD)、与染色体17相关的帕金森综合征(FTDP-17)、去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(DDPAC)、核-脑桥-黑质变性(PPND)、ALS-关岛痴呆综合征、核-黑质-苍白球变性(PNLD)或皮质-基底变性(CBD)，其中所述药物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

32.化合物在制备用在治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)的药物中的用途，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

33.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为ETC。

34.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为DEMTC。

35.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为DMETC。

36.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为DEETC。

37.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为MTZ。

38.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为ETZ。

39.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为MTI。

40.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为MTI.HI。

41.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为ETI。

42.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为ETI.HI。

43.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为MTN。

44.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为ETN。

45.项29至32任一所述的用途，其中所述化合物为ETC。

46.项29至45任一所述的用途，其中所述药物为剂量单位，所述剂量单位含有20至300mg量的所述化合物和可药用的载体、稀释剂或赋型剂。

47.项29至46任一所述的用途，其中所述治疗或预防包括将所述化合物根据下述剂量方案给药：约50或约75mg，每天3或4次。

48.项29至46任一所述的用途，其中所述治疗或预防包括将所述化合物根据下述剂量方案给药：约100或约125mg，每天两次。

49.项29至48任一所述的用途，其中所述治疗或预防包括口服给药所述化合物。

50.项29至49任一所述的用途，其中所述治疗或预防还包括用胆碱酯酶抑制剂治疗。

51.项29至49任一所述的用途，其中所述治疗或预防还包括用多奈哌齐(Aricept^TM)、利伐斯的明(Exelon^TM)或加兰他敏(Reminyl^TM)治疗。

52.项29至49任一所述的用途，其中所述治疗或预防还包括用NMDA受体拮抗剂治疗。

53.项29至49任一所述的用途，其中所述治疗或预防还包括用美金刚(Ebixa^TM,Namenda^TM)治疗。

54.项29至49任一所述的用途，其中所述治疗或预防还包括用毒蕈碱受体激动剂治疗。

55.项29至49任一所述的用途，其中所述治疗或预防还包括用用于抑制淀粉样前体蛋白加工成β-淀粉样蛋白的抑制剂治疗。

56.一种逆转或抑制τ蛋白聚集的方法，包括将所述聚集体或蛋白与选自下列的化合物接触：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

57.一种调节哺乳动物的脑中τ蛋白聚集的方法，所述聚集与τ蛋白聚集疾病有关，所述方法包括向所述哺乳动物给药预防或治疗有效量的选自下列化合物的步骤：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

58.一种抑制哺乳动物的脑中蛋白聚集体产生的方法，包括向所述哺乳动物给药预防或治疗有效量的选自下列化合物的步骤：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

59.一种治疗或预防患者中的τ蛋白病的方法，包括向所述患者给药选自下列的化合物：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

60.一种治疗或预防患者中的τ蛋白聚集疾病的方法，包括向所述患者给药选自下列的化合物：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

61.一种治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)、匹克病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞痴呆(FTD)、与染色体17相关的帕金森综合征(FTDP-17)、去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(DDPAC)、核-脑桥-黑质变性(PPND)、ALS-关岛痴呆综合征、核-黑质-苍白球变性(PNLD)或皮质-基底变性(CBD)的方法，包括向所述患者给药选自下列的化合物：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

62.一种治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)的方法，包括向所述患者给药选自下列的化合物：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN。

63.一种化合物，该化合物用在诊断或预测τ蛋白病的方法中，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN；并且其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合。

64.化合物在制备用在诊断或预测患者τ蛋白病方法中的诊断剂或预测剂中的用途，其中所述化合物选自：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN；并且其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合。

65.一种标记τ蛋白或聚集的τ蛋白的方法，包括如下步骤：

将τ蛋白或聚集的τ蛋白与选自下列的化合物接触：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN；并且其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合。

66.一种检测τ蛋白或聚集的τ蛋白的方法，包括如下步骤：

将τ蛋白或聚集的τ蛋白与选自下列的化合物接触：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN；并且其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合；和

检测与τ蛋白(或聚集的τ蛋白)结合的所述化合物的存在和/或其量。

67.一种诊断或预测被认为患有τ蛋白病的受试者中所述疾病的方法，包括如下步骤：

(i)向受试者中引入选自下列的化合物：ETC、DEMTC、DMETC、DEETC、MTZ、ETZ、MTI、MTI.HI、ETI、ETI.HI、MTN和ETN；其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合，

(ii)检测与受试者的脑中τ蛋白或聚集的τ蛋白结合的所述化合物的存在和/或其量，

(iii)将(ii)中测定结果与受试者的疾病状态相关联。

下面，将参考下述非限定实施例对本发明进行进一步详细说明。在这些实施例的基础上，本发明的其它实施方案对本领域技术人员来说是显而易见的。

对于本发明引用的所有参考文献披露的内容，因为本领域技术人员在实施本发明时会用到，因此通过交叉参考将这些文献专门并入本发明中。

具体实施方式

实施例1–合成方法

下述合成仅出于解释目的而不是对本发明保护范围的限定。

合成1

乙基-锍氯化物(ETC)

N,N-二乙基-对苯二胺二盐酸盐

将N,N-二乙基-对苯二胺(5g,30.4mmol)溶解在乙醚(25cm³)中，加入盐酸(6cm³,10m)，对所得混合物进行浓缩，得到标题化合物(7.22g,100%)，为红/褐色固体。δ_H(250MHz;D₂O):7.68(4H,m,ArH),3.69(4H,q,7.32,NCH₂),1.11(6H,t,7.32,CH₃);δ_C(62.9MHz;D₂O):12.1(CH₃),56.4(NCH₂),126.8(ArC),127.6(ArC),135.5(ArC),139.1(ArC)。

乙基-锍氯化物

将N,N-二乙基-对苯二胺二盐酸盐(7.22g,30.4mmol)溶解在水(250cm³)中，用HCl将pH调节到1.6，向其中逐滴加入硫化钠(>60%)(3.95g,30.4mmol)。搅拌该悬浮液直到所有硫化钠溶解。制备氯化铁(III)(27.15g,100mmol)的水(200cm³)溶液，并将该溶液的一半加到上述混合物中。立即发生颜色变化，从浅黄色变为蓝色。然后向溶液中充气1h，接着加入剩余的氯化铁(III)溶液。将混合物冷却到5℃，过滤除去浅绿色淤浆。向滤液中加入HCl水溶液(15cm³,6m)，然后加入氯化钠(60g)，悬浮液搅拌5分钟，过滤得到固体产物，将其溶解在DCM中，经硫酸镁干燥，过滤浓缩，得到紫/绿色固体(1.28g,22%)。将该紫/绿色固体加载在制备性C18反向柱上，用水洗(1L)或直到黄颜色褪去。用MeOH/HCl(pH2)将产物从柱上冲洗下来，浓缩得到标题化合物(0.64g,11%)，为粘稠紫色固体。δ_H(250MHz;D₂O):1.26(12H,t,6.5,CH₃),3.56(8H,q,6.5,NCH₂),7.01(2H,s,ArH),7.20(2H,d,9.25,ArH),7.54(2H,d,9.25,ArH);m/z(ESI)340.2(100%,[M-Cl]⁺)。

合成2

1,9-二甲基-甲基-锍氯化物(DMMTC)

3-甲基-N,N-二甲基对苯二胺二盐酸盐

向250cm³圆底烧瓶中加入水(100cm³)，用冰浴将温度降低到5℃。向该冷却的溶液中小心加入硫酸(98%,22.5g)。向该溶液中加入3-甲基-N,N-二甲基苯胺(10g,74mmol)和亚硝酸钠(5.6g,81.4mmol)，将该溶液在室温搅拌1小时。加入铁(Fe)屑(12.8g,229mmol)，将混合物再搅拌2小时。过滤该溶液，然后用饱和碳酸氢钠溶液中和，有机物萃取到乙酸乙酯(3x100cm³)中。萃取物用硫酸镁干燥，过滤浓缩，得到棕色油状物。将该油状物溶解在乙醚(100cm³)中，加入浓盐酸(50cm³)。对溶液进行蒸发干燥，得到标题化合物(10g,60%)，为淡褐色固体。ν_max(KBr)/cm^-1:2849(CH),2821(CH),2543(CH),2444(CH),1586(C=N),1487(CH),1445(CH),1415(CH),1138(CH);δ_H(250MHz;D₂O):7.59(1H,s,ArH),7.50(2H,s,ArH),3.24(6H,s,CH₃),2.39(3H,s,CH₃);δ_C(62.9MHz;D₂O)18.9(CH₃),48.8(CH₃),122.1(ArC),126.2(ArC),127.6(ArC),133.7(ArC),137.4(ArC),144.4(ArC)。

二甲基甲基锍氯化物

向500cm³圆底烧瓶中加入3-甲基-N,N-二甲基-对苯二胺二盐酸盐(0.9g,4.03mmol)，将该化合物溶解在盐酸水溶液(50cm³,3m)中，然后加入硫化钠(>60%)(0.52g,4.03mmol)。将氯化铁(III)六水合物(7.26g,27mmol)溶解在水(50cm³)中，制得的溶液的一半倒入反应混合物中，溶液立即变为蓝色。然后向所述溶液中充气2小时，之后加入剩余的氯化铁(III)水溶液。将所得混合物冷却到5℃并过滤；沉淀物溶解在沸水(60cm³)中，过滤，冷却。向该冷却的溶液中加入盐酸(10cm³,6m)，然后过滤得到标题化合物(0.22g,16%)，为紫/蓝色固体。ν_max(KBr)/cm^-1:2926(CH),1604(C=N),1535,1496,1444(CH),1404(CH),1315(CH),1185(CH);δ_H(250MHz;DMSO):7.29(2H,s,ArH),7.23(2H,s,ArH),3.29(12H,s,CH₃),2.55(6H,s,CH₃);δ_C(62.9MHz;DMSO):18.9(CH₃),41.5(CH₃),105.7(ArC),118.7(ArC),133.6(ArC),134.5(ArC),147.2(ArC),154.2(ArC);C₁₈H₂₂N₃S.3H₂O的分析值:C,51.98;H,6.74;N,10.11;S,7.70。实测值:C,52.03;H,6.59;N,10.05;S,7.66。

合成3

1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)

N,N-二甲基-间乙基苯胺

向100cm³圆底烧瓶中加入3-乙基苯胺(10g,82.5mmol)、乙醇(15cm³)、碳酸钠(11.81g,111.4mmol)。逐滴加入碘甲烷(31.63g,222mmol)。然后在45℃加热该混合物10分钟，之后冷却到室温并加入水(100cm³)。将该混合物萃取到乙醚(3x100cm³)中，该萃取物用硫酸镁干燥，过滤浓缩，得到标题化合物(4.68g,38%)，为浅黄色油状物。ν_max(净)/cm^-1:3045(CH),2960(CH),2920(CH),2891(CH),2797(CH),1597(C=N),1494(CH),1438(CH),1352(CH),1225(CH);δ_H(250MHz;CDCl₃):7.22(1H,t,7.75,ArH),6.63(3H,m,ArH),2.97(6H,s,NCH₃),2.63(2H,q,7.5,CH₂),1.27(3H,t,7.5,CH₃);δ_C(62.9MHz;CDCl₃):15.8(CH₃),29.5(NCH₂),40.8(NCH₃),110.3(ArC),112.4(ArC),116.5(ArC),129.1(ArC),145.3(ArC),150.9(ArC)。

N,N-二甲基-间乙基-对苯二胺二盐酸盐

向250cm³圆底烧瓶中加入N,N-二甲基-间乙基苯胺(4.68g,31.3mmol)、水(100cm³)和盐酸(8.5cm³,37%)，该溶液冷却到5℃。然后向该苯胺混合物中逐滴加入亚硝酸钠(2.46g,3.57mmol)的水(80cm³)溶液，室温搅拌3小时。加入铁(Fe)屑(5.24g,94mmol)和盐酸(8.5cm³,37%)，所得混合物在室温搅拌3小时。过滤该悬浮液，用碳酸氢钠溶液将滤液的pH调整到7，然后萃取到乙酸乙酯(3x50cm³)中。合并萃取物，经硫酸镁干燥，过滤浓缩，得到棕色油状物。将该油状物溶解在乙醇(100cm³)和乙醚(80cm³)中，小心加入盐酸(7cm³,37%)得到标题化合物(7.42g,72%)，为淡褐色固体。ν_max(KBr)/cm^-1:2976(CH),2894(CH),2859(CH),2753(CH),1583(C=N),1508(CH),1486(CH),1459(CH),1183(CH);δ_H(250MHz;D₂O):7.66(1H,s,ArH),7.56(2H,s,ArH),3.29(6H,s,NCH₃),2.74(2H,q,7.5,CH₂),1.25(3H,t,7.5,CH₃);δ_C(62.9MHz;CDCl₃):15.5(CH₃)25.6(NCH₂),48.9(NCH₃),122.1(ArC),124.6(ArC),128.1(ArC),132.6(ArC),143.3(ArC),144.9(ArC)。

1,9-二乙基甲基锍氯化物

将N,N-二甲基-间乙基-对苯二胺二盐酸盐(1.3g,5.5mmol)溶解在水(50cm³)中，然后将该溶液的pH值调整到pH1.6。接着向该粉色溶液中逐份加入硫化钠>60%(0.71g,5.5mmol)。所得悬浮液中加入氯化铁(III)水溶液(2.23g,8.2mmol，在50cm³水中的溶液)，立即发生颜色变化，变为紫色。然后向该溶液中充气1小时，再加入第二份氯化铁(III)溶液(2.23g,8.2mmol，在50cm³水中的溶液)。将该溶液冷却到5℃，过滤，用水洗涤沉淀物。向滤液中加入氯化钠(50g)，搅拌溶液10分钟，随着产物盐析，颜色变为红/紫色。过滤该悬浮液，将固体溶解在二氯甲烷(100cm³)和甲醇(10cm³)中，然后经硫酸镁干燥。过滤浓缩，得到绿色固体状的标题化合物(0.15g,15%)。ν_max(KBr)/cm^-1:3408(CH),2613(CH),1606(C=N),1399(CH),1316(CH);δ_H(250MHz;D₂O):6.55(2H,s,ArH),6.23(2H,s,ArH),2.92(12H,s,NCH₃),2.56(4H,q,7.5,CH₂),0.99(6H,t,7.5,CH₃);(ESI),340.4(100%,[M–Cl]⁺)。任选地，进行快速柱色谱除去氯化铁残余物，洗脱液为10%甲醇:90%二氯甲烷，利用硅胶40-63μ60。

合成4

1,9-二甲基-乙基-锍氯化物(DMETC)

将N,N-二乙基-3-甲基对苯二胺二盐酸盐(10.74g,50mmol)溶解在水(400cm³)中，将pH调整到1.6，然后加入硫化钠(>60%)(3.90g,50mmol)。加入氯化铁(III)(20.28g,75mmol)的水溶液(175cm³)，颜色立即发生变化，从黄色变为深蓝色。向混合物中充气1小时，然后加入第二等份氯化铁(III)水溶液(20.28g,75mmol，在175cm³中的溶液)。将溶液冷却到5℃，维持在该温度1小时，然后过滤。滤液中加入氯化钠(200g)，过滤，得到蓝/紫色固体状的粗产物。该粗产物固体用柱色谱纯化(洗脱液为10%meOH,90%DCM，利用40-63μ60)得到标题化合物(0.80g,4%)，为绿/紫色固体。ν_max(KBr)/cm^-1:2971(CH),2921(CH),2865(CH),1600(C=N),1412(CH),1326(CH);δ_H(250MHz;D₂O):6.62(2H,s,ArH),6.39(2H,s,ArH),3.30(8H,q,NCH₂),1.89(6H,s,ArCH₃),1.09(12H,t,CH₃);δ_C(62.9MHz;D₂O)12.6(CH₃),18.0(CH₃),46.2(NCH₂),103.6(ArC),117.1(ArC),132.3(ArC),133.9(ArC),147.3(ArC),151.9(ArC);m/z(ESI)368.1(100%,[M-Cl]⁺)。

合成5

1,9-二乙基-乙基-锍氯化物(DEETC)

N,N-二乙基-间乙基苯胺

向100cm³圆底烧瓶中加入3-乙基苯胺(5.0g,41.3mmol)、乙醇(7.5cm³)、碳酸钠(5.9g,55.7mmol)。逐滴加入碘乙烷(17.38g,111.4mmol)。接着将混合物在45℃加热12小时，然后冷却到室温，加入水(50cm³)。将该混合物萃取到乙醚(3x50cm³)中，萃取物用硫酸镁干燥，过滤浓缩，得到标题化合物(7.03g,96%)，为浅黄色油状物。δ_H(250MHz;CDCl₃):7.20(1H,dd,9,7.25,ArH),6.60(3H,m,ArH),3.43(4H,q,7,NCH₂),2.69(2H,q,7.25,CH₂),1.32(3H,t,7.5,CH₃),1.23(6H,t,7,CH₃);δ_C(62.9MHz;CDCl₃):12.7(CH₃),15.8(CH₃),29.5(CH₂),44.4(NCH₃),109.4(ArC),111.4(ArC),115.1(ArC),129.2(ArC),145.4(ArC),147.9(ArC)。

N,N-二乙基-间乙基-对苯二胺二盐酸盐

向250cm³圆底烧瓶中加入N,N-二乙基-间乙基苯胺(5g,28.2mmol)、水(50cm³)和盐酸(9cm³,37%)，将该溶液冷却到5℃。然后向该苯胺混合物中逐滴加入亚硝酸钠(2.14g,31.0mmol)的水(20cm³)溶液，低温搅拌1小时。加入铁(Fe)屑(4.72g,84.6mmol)和盐酸(9cm³,37%)，将混合物在低于30℃搅拌2小时。过滤悬浮液，滤液的pH值用碳酸氢钠调整到pH7，然后萃取到乙酸乙酯(3x50cm³)中。合并的萃取物用硫酸镁干燥，过滤浓缩，得到棕色油状物。用柱色谱纯化该粗品油状物(洗脱液为乙酸乙酯，利用硅胶40-63μ60)得到所述苯二胺(2.2g,41%)，为棕色油状物。将该油溶解在乙醚(50cm³)中，加入盐酸(2.5cm³,37%)，浓缩该溶液得到标题化合物(2.76g,41%)，为淡棕色固体。δ_H(250MHz;D₂O):7.50(3H,m,ArH),3.59(4H,q,7.25,NCH₂),2.69(2H,q,7.5,CH₂),1.20(3H,t,7.5,CH₃),1.03(6H,t,7.25,CH₃);δ_C(62.9MHz;D₂O):12.1(CH₃),15.5(CH₃),25.5(CH₂),56.3(NCH₂),123.9(ArC),126.0(ArC),127.9(ArC),133.1(ArC),139.4(ArC),143.3(ArC)。

1,9-二乙基乙基锍氯化物

N,N-二乙基-间乙基-对苯二胺二盐酸盐(2g,7.5mmol)溶解在水(75cm³)中，并将所得溶液的pH值调整到pH1.6。然后向所得粉色溶液中逐份加入硫化钠(>60%)(1.35g,10.4mmol)。向悬浮液中加入氯化铁(III)水溶液(4.22g,15.6mmol，在35cm³水中的溶液)，立即发生颜色变化，变为紫色。然后向该溶液中充气1小时，接着加入第二份氯化铁(III)溶液(4.22g,15.6mmol，在35cm³水中的溶液)。将所得溶液冷却到5℃，过滤，用水洗涤沉淀物。沉淀也用乙醇洗涤，并将随后得到的乙醇浓缩得到粘稠紫色固体。向含水滤液中加入氯化钠(50g)，所得溶液搅拌10分钟，随着产物盐析，溶液的颜色变为红/紫色。过滤该悬浮液，并将固体溶解在二氯甲烷(100cm³)和甲醇(10cm³)中，然后经硫酸镁干燥。过滤并与可溶于乙醇的产物浓缩，得到标题化合物(0.06g,3%)，为紫色固体。δ_H(250MHz;D₂O):6.73(2H,s,ArH),6.48(2H,s,ArH),3.45(8H,brdq,NCH₂),2.46(4H,q,7.5,CH₂),1.17(12H,brdt,CH₃),0.93(6H,t,7.5,CH₃);m/z(ESI)396.2(100%,[M-Cl]⁺)。任选地，进行快速柱色谱以除去氯化铁残余物，洗脱液为10%甲醇:90%二氯甲烷，利用硅胶40-63μ60

合成6

乙基-锍氯化物·氯化锌的复盐(ETZ)

将N,N-二乙基-对苯二胺(5.0g,30.4mmol)在H₂O(100cm³)和H₂SO₄(浓的,‘98%’,1cm³)中的搅拌混合物用非还原性ZnCl₂溶液(ZnCl₂,7.60g,55mmol，在15cm³水中的溶液，含100mg的Na₂Cr₂O₇.2H₂O)处理，得到淡红色反应混合物。加入Al₂(SO₄)₃.16H₂O溶液(5.80g,9.2mmol，在10cm³H₂O中的溶液)、Na₂S₂O₃.5H₂O溶液(8.0g,32.2mmol，在10cm³H₂O中的溶液)和随后加入三分之一的Na₂Cr₂O₇.2H₂O(8.7g,29.2mmol，在15cm³H₂O中的溶液)溶液，接着温度迅速升高到40℃。加入N,N-二乙基苯胺(3.0g,20.1mmol，在浓HCl,4cm³中的溶液)，然后加入剩余的Na₂Cr₂O₇.2H₂O溶液。观察到深绿色沉淀生成。温度迅速升高到75℃，之后加入经活化的MnO₂悬浮液(3.80g,44.7mmol，在5cm³H₂O中的悬浮液)。温度升高到85℃，并在该温度保持搅拌30分钟。观察蓝色溶液生成，并伴有沉淀。将反应混合物冷却到50℃并缓慢加入H₂SO₄(浓，11cm³)。将反应进一步冷却到20℃，真空过滤以回收沉淀，然后用盐水(饱和食盐水)洗涤该沉淀。将该黑色固体重新溶解在100℃的H₂O(250cm³)中，冷却，然后真空过滤以除去不溶物。滤液用ZnCl₂(4g)和NaCl(23g)处理，置于冷冻装置中16小时。之后真空过滤回收所得沉淀物，用盐水(30cm³)洗涤，真空箱干燥3小时，得到标题化合物(5.7g,71%)，为锈红色粉末。δ_H(250MHz,D₂O):1.20(12H,br t,CH₃),3.50(8H,br q,CH₂),6.80(2H,s,ArH),7.05(2H,br d,ArH)和7.30(2H,br d,ArH)。参见，例如Interscience(London,UK)出版的Fierz-David and Blangley,1949,“F.Oxazine and Thiazine Dyes,”in:Fundamental Processes of Dyechemistry,第308-314页。

合成7

甲基-锍碘化物(MTI)

将甲基-锍氯化物(2.00g,6.25mmol)溶解在水(50cm³)中，加入碘化钾(1.56g,9.4mmol)，同时搅拌。有沉淀生成，并过滤，固体用沸水(50cm³)重结晶得到标题化合物(1.98g,77%)，为微细绿色针状物。δ_H(250MHz;DMSO):7.88(2H,br d,ArH),7.49(4H,br s,ArH),3.37(12H,s,CH₃)。C₁₆H₁₈N₃SI的分析值:C,46.72;H,4.41;N,10.22;S,7.80;I,30,85;实测值:C,46.30;H,4.21;N,10.14;S,7.86;I,29.34。

合成8

甲基-锍碘化物·碘化氢的混盐(MTI.HI)

将甲基-锍碘化物(0.50g,1.22mmol)溶解在甲醇(20cm³)中，加入碘甲烷(1.90g,13.37mmol)，同时搅拌。将所得混合物加热回流18小时，之后加入另外的碘甲烷(0.42g,6.69mmol)，混合物再次加热回流并搅拌8小时。将所得混合物冷却到室温，得到固体，该固体经过滤，用甲醇洗涤，得到标题化合物(0.30g,46%)，为铜绿色(bronze green)固体。δ_H(250MHz;DMSO):7.82(2H,d,J=8.5,ArH),7.42(4H,s,ArH),3.34(12H,s,CH₃).δ_C(62.9MHz;DMSO):153.8(ArC),137.9(ArC),134.9(ArC),133.5(ArC),119.1(ArC),118.8(ArC),106.9(ArC),106.6(ArC),41.1(NCH₃)。

合成9

乙基-锍碘化物(ETI)

用氢氧化钠水溶液(10%)将N,N-二乙基-对苯二胺(10.0g,61mmol)在盐酸水溶液(0.5m,200cm³)中的搅拌混合物的pH值调整到pH2。将该二胺溶液冷却到5℃，之后加入Na₂S₂O₃.5H₂O水溶液(16.65g,67mmol，在20cm³H₂O中的溶液)。历时15分钟，将Na₂Cr₂O₇.2H₂O水溶液(7.27g,24mmol，在35cm³H₂O中的溶液)逐滴加到上述混合物中，得到黑色悬浮液。将该悬浮液在5℃搅拌1小时(pH=8.07,T=3.7℃)。将N,N-二乙基苯胺(8.25g,61mmol)、H₂SO₄(6g)和水(10cm³)的溶液冷却到5℃，之后加到所述悬浮液中。然后历时20分钟向混合物中逐滴加入Na₂Cr₂O₇.2H₂O水溶液(19.09g,64mmol，在50cm³H₂O中的溶液)，得到粘稠的深绿色悬浮液。该混合物在5℃搅拌2小时(pH=6.75,T=6℃)，过滤。得到的紫绿色固体用水(2x50cm³)洗。将该固体浆化在盐酸水溶液(300cm³,pH2)中，得到悬浮液，该悬浮液在22℃时的pH=6.37。向该悬浮液中加入CuSO₄(1.52g,6.1mmol)，所得混合物加热到90℃，形成深蓝色溶液。在该温度搅拌1小时后，将混合物冷却到25℃，过滤。固体用水(2x50cm³)洗涤，滤液的pH值用盐酸(5M)从pH6.33调整到pH2.00，T＝25℃。将该深蓝色溶液加热到80℃，加入碘化钾(14g)，一经冷却就有橙紫色沉淀析出。过滤得到紫色粉末(8.8g,31%)，该粉末经热乙醇(400cm³)重结晶，得到标题化合物，为微细紫色针状物。Mp211℃；ν_max(KBr)/cm^-1:3574(CH),3484(CH),3028(CH),2965(CH),1662(C=C),1539(CH),1474(CH),1346(CH);δ_C(62.9MHz,CDCl₃):1.33(12H,t,7,CH₃),3.72(8H,q,7,NCH₂),7.23(2H,d,9.75,ArH),7.41(2H,s,ArH),7.83(2H,d,9.75,ArH);δ_H(62.9MHz,CDCl₃):152.4,138.8,135.7,135.2,118.3,106.4,46.8,13.2。

合成10

乙基-锍碘化物·碘化氢的混盐(ETI.HI)

将乙基-锍碘化物(2.00g,4.28mmol)溶解在乙醇(100cm³)中，加入碘乙烷(27.35g,175mmol)，同时搅拌。将所得混合物加热回流18小时，然后冷却到室温，得到沉淀。该沉淀经过滤、乙醇洗涤得到标题化合物(1.02g,40%)，为青铜色固体。δ_H(250MHz;D₂O):7.90(2H,br d,ArH),7.42(4H,s,ArH),2.45(8H,br q,NCH₂),1.23(12H,br t,CH₃)。

合成11

乙基-锍硝酸盐(ETN)

用氢氧化钠水溶液(10%)将N,N-二乙基-对苯二胺(10.0g,61mmol)在盐酸水溶液(0.5m,200cm³)中的搅拌混合物的pH值调整到pH2。将该二胺溶液冷却到5℃，之后加入Na₂S₂O₃.5H₂O水溶液(16.65g,67mmol，在20cm³H₂O中的溶液)。历时15分钟内向该混合物中逐滴加入Na₂Cr₂O₇.2H₂O水溶液(7.27g,24mmol，在35cm³H₂O中的溶液)得到黑色悬浮液。将该悬浮液在5℃搅拌1小时(pH=8.07,T=3.7℃)。将N,N-二乙基苯胺(8.25g,61mmol)、H₂SO₄(6g)和水(10cm³)溶液冷却到5℃，然后加入到上述悬浮液中。历时20分钟，向所得混合物中逐滴加入Na₂Cr₂O₇.2H₂O(19.09g,64mmol，在50cm³H₂O中的溶液)溶液，得到粘稠的深绿色悬浮液。将该混合物在5℃搅拌2小时(pH=6.75,T=6℃)，过滤。得到的紫绿色固体用水洗(2x50cm³)。将所得固体浆化在盐酸水溶液(300cm³,pH2)中，得到悬浮液，其22℃时的pH=6.37。向该悬浮液中加入CuSO₄(1.52g,6.1mmol)，所得混合物加热到90℃，此时有深蓝色溶液形成。在该温度搅拌1小时后，将该混合物冷却到25℃，然后过滤。所得固体用水洗(2x50cm³)，滤液用盐酸(5m)从pH6.33调节到pH2.00，T=25℃。将该深蓝色溶液加热到80℃，加入硝酸钠(50g)，并使其在轻微搅拌下缓慢冷却到25℃。所得产物经过滤为绿色针状物(6.80g,28%)。δ_H(250MHz,CDCl₃):1.36(12H,t,7,CH₃),3.72(8H,q,7,NCH₂),7.23(2H,d,9.5,ArH),7.39(2H,s,ArH),7.89(2H,d,9.5,ArH);δ_H(62.9MHz,CDCl₃):152.5,138.8,135.7,135.6,118.1,106.4,46.6,12.9。

合成12

1,9-二乙基-甲基锍氯化物(DEMTC)

将N,N-二甲基-3-乙基-对苯二胺(5.15g,31.4mmol)溶解在盐酸水溶液中(0.5M,100cm³)。用氢氧化钠水溶液(10%)将所得溶液的pH调整到pH2并冷却到5℃。向所述搅拌溶液中逐滴加入Na₂S₂O₃.5H₂O水溶液(8.57g,34.6mmol，在10cm³水中的溶液)。历时15分钟逐滴加入Na₂Cr₂O₇.2H₂O水溶液(3.74g,12.6mmol，在18cm³水中的溶液)得到黑色悬浮液。5℃继续搅拌1小时。将N,N-二甲基-3-乙基苯胺(4.68g,31.4mmol)溶解在硫酸水溶液(3.00g，在5cm³水中的溶液)中，将所得溶液冷却到5℃，然后将其加入到所述反应混合物中。历时20分钟逐滴加入Na₂Cr₂O₇.2H₂O水溶液(9.83g,33.0mmol，在25cm³水中的溶液)得到墨绿色悬浮液。在5℃保持搅拌2小时，过滤收集固体。将所得固体用水洗(3x30cm³)，然后将其悬浮在盐酸水溶液(150cm³,pH2)中。向所述悬浮液中加入CuSO₄(785mg,3.14mmol)，将所得混合物加热到90℃，保持1小时。将得到的深蓝色混合物经过滤，所得固体用水洗(3x40cm³)。用盐酸(1M)将滤液的pH调整到pH2。将所得溶液加热到80℃，然后向其中加入NaCl(2.00g,34.5mmol)。使所得溶液冷却到室温，此时有沉淀出现。过滤收集所述固体得到标题化合物(1.89g,16%)，其为墨绿色固体。δ_H(250MHz;D₂O):6.65(2H,s,ArH),6.23(2H,s,ArH),2.92(12H,s,NCH₃),2.56(4H,q,7.5,CH₂),0.99(6H,t,7.5,CH₃);ν_max(KBr)/cm^-13408(CH),2613(CH),1606(C=N),1399(CH),1316(CH).MS(ESI):340.4[100%(M-Cl)+]。

该合成方法可代替上述合成3。与上述合成3相比，合成12的主要优点是：(a)收率较高，(b)其可在较高浓度下进行，从而使该方法更适合工业规模运作，和(c)该合成不产生H2S，因此在工业规模进行时成本更低，操作更简单。

合成13

乙基-锍硝酸盐(ETN)

向N,N-二乙基-对苯二胺(6.61g,40mmol)和预冷却到5℃的盐酸水溶液(0.5M,132mL)中一次性加入硫代硫酸钠水溶液(10.91g,44mmol，在15mL H₂O中的溶液)。历时10分钟向其中逐滴加入重铬酸钠(4.96g,15.75mmol，在10mLH₂O中的溶液)，将所得黑色溶液在5℃搅拌1小时(pH=8.22,温度=1.8℃)。与此同时，制备含有N,N-二乙基苯胺(5.96g,40mmol)、硫酸(3.96g)和水(6.60mL)的非均质溶液，将该溶液冷却到5℃，然后将其一次性加入到搅拌中的黑色悬浮液中。历时15钟逐滴加入另一份重铬酸钠(12.52g,42mmol在40mL的H₂O中的溶液)，将所得黑绿色悬浮液在5℃搅拌2小时(pH=7.23,温度=8.0℃)。向其中一次性加入连二亚硫酸钠(1.48g,8.44mmol)水溶液，然后将所得混合搅拌15分钟至温度升温到室温(22℃)。然后将所得反应混合物用在下述两个可选择方法之一中。

可选择方法之一(BG过滤(两锅法)):将形成的墨绿色固体滤出，用水洗(2x50mL)并吸干至合理的干燥程度(耗时30分钟)。将所得墨绿色固体在水中搅拌，用盐水将pH酸化到pH2，向其中加入CuSO₄.5H₂O(0.99g,4.00mmol)。将所得溶液加热到90℃，并在该温度搅拌1小时，生成亮蓝色溶液。停止加热，将所得反应混合物冷却到室温。过滤所述蓝色溶液除去不溶物，用水(2x50mL)洗所得固体。用盐酸(5M,5mL)将滤液的pH酸化到pH2，向其中一次性加入NaNO₃(33g,388mmol)。将所得溶液加热到80℃，轻微搅拌下使其冷却到室温。将生成的绿色针状物从溶液中滤出，吸干，得到标题化合物(4.38g,28%)。Mp:178℃;ν_max(KBr)/cm^- ¹3564(CH),3463(CH),3048(CH),2975(CH),1522(C=C),1489(CH),1370(CH);δ_H(250MHz,CDCl₃),1.36(12H,t,7,CH₃),3.72(8H,q,7NCH₂),7.23(2H,d,9.5,ArH),7.39(2H,s,ArH),7.89(2H,d9.5,ArH);δ_C(62.9MHz,CDCl₃)152.5,138.8,135.7,135.6,118.1,106.4,46.6,12.9。

可选择方法之二(不过滤BG(一锅法)):一旦将所述溶液加热后，就向其中加入CuSO₄.5H₂O(0.99g,4.00mmol)。然后将所得溶液加热到90℃，在该温度搅拌1小时，之后溶液变为深蓝色。使所述蓝色溶液冷却到室温，过滤除去不溶物。用盐酸(5M,约20mL)将滤液的pH调整到pH2，向其中加入NaNO₃(33g,388mmol)。然后将搅拌下的溶液加热到80℃，轻微搅拌下冷却过夜。将所得绿色针状物从溶液中滤出，吸干得到标题化合物(1g,5%)。Mp178℃;ν_max(KBr)/cm^-13564(CH),3463(CH),3048(CH),2975(CH),1522(C=C),1489(CH),1370(CH);δ_H(250MHz,CDCl₃)1.36(12H,t,7,CH₃),3.72(8H,q,7NCH₂),7.23(2H,d,9.5,ArH),7.39(2H,s,ArH),7.89(2H,d9.5,ArH);δ_C(62.9MHz,CDCl₃)152.5,138.8,135.7,135.6,118.1,106.4,46.6,12.9。

实施例2–活性和治疗指数

体外实验以建立B50

该内容在WO96/30766中详细描述。简言之，对应于核心重复域的τ片段(其已经被吸附到固相基质上)能够捕获可溶性全长τ并高亲和力地与τ结合。这种结合使聚集的τ分子具有抗蛋白水解性消化(proteolytic digestion)的稳定性。该过程是自传播的(self-propagating)，可被原型药物制剂(prototype pharmaceutical agents)选择性阻断。

更具体地，将稀释在碳酸盐缓冲液中(pH9.6)的经截短的τ(残基297-390;dGA)结合在分析板上，水相中加入全长τ(T40)。该水相结合缓冲液含有0.05%Tween-20和1%明胶(在磷酸盐-缓冲的盐水溶液(pH7.4)中)。用mAb499检测结合的τ，该检测识别出水相全长τ中的N-端表位，但没有识别出固相结合的经截短的τ片段。

将抑制50%τ-τ结合所需的化合物的浓度定义为B50值。

基于细胞的实验以建立EC50

该方法详细描述于WO02/055720中。实质上，在诱导型启动子的控制下，成纤维细胞(3T6)表达全长τ(“T40”)和低构成水平(constitutive levels)的PHF-核心τ片段(12kD片段)。当T40的表达经诱导后，其在细胞内历经聚集-依赖性的截短，N-端是在～αα295和C-端是在～αα390，从而产生较高水平的12kDPHF-核心域片段。12kD片段的产生可被τ-聚集抑制剂通过剂量依赖方式阻断。事实上，化合物对细胞内蛋白水解生成12kD片段的抑制活性的量可根据与描述体外τ-τ结合抑制使用的参数相同的参数进行完全描述。即，在细胞内蛋白水解生成12kD片段的程度可完全由通过重复域的τ-τ结合的程度来确定。相关蛋白酶在细胞内的利用率是非限定性的。

结果表达抑制12kD片段的50%生成时的浓度。这定义为EC50值。

细胞内毒性–LD50和治疗指数(RxI)

在用来测定EC50的基于细胞的实验中，测试本发明披露的化合物的毒性。毒性测定如下：在将剩余细胞溶解后根据制造商的说明，利用乳酸脱氢酶试剂盒TOX-7(SigmaBiosciences)，使细胞与化合物接触24小时，然后确定细胞数，由此测定毒性。或者，使用Promega UK(CytoTox96)的试剂盒，同样根据制造商的说明进行操作。

治疗指数(RxI)计算如下：RxI=LD50/EC50。

	化合物	B50(μM)	EC50(μM)	LD50(μM)	RxI
							MTC	218±20.1(6)	0.59±0.04(69)	65.0±5.0(38)	110
	DMMTC	3.4±0.2(2)	0.04±0.004(22)	2.7±1.2(6)	67
						A	ETC	49.0±8.5(10)	0.07±0.007(53)	32.0±4.0(26)	480
B	DEMTC	26.2±5.3(6)	0.0016±0.0006(13)	3.3±0.6(22)	2,173
						C	DMETC	4.5±0.3(3)	0.004±0.001(6)	4.2±2.2(4)	1,048
D	DEETC	3.7±0.5(3)	0.0006±0.0003(3)	1.6±0.4(13)	2,667
						F	ETZ	145.4±5.7(5)	0.06±0.01(6)	39.0±7.0(4)	670
G	MTI	382	0.72	120	168

H	MTI.HI	271	0.70	120	168
						I	ETI	>500	0.06	-	-
J	ETI.HI	83	-	-	-
						L	ETN	>500(2)	0.04(1)	13.0±0.5.(2)	325

Claims

1.药物组合物，其包含选自下述的二氨基吩噻嗪化合物：

(A)乙基-锍氯化物(ETC)，

(B)1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)，

(C)1,9-二甲基-乙基-锍氯化物(DMETC)，

(D)1,9-二乙基-乙基-锍氯化物(DEETC)，

(F)乙基-锍氯化物·氯化锌的混盐(ETZ)，

(I)乙基-锍碘化物(ETI)，

(J)乙基-锍碘化物·碘化氢的混盐(ETI.HI)，和

(L)乙基-锍硝酸盐(ETN)，

和可药用载体、稀释剂或赋型剂。

2.权利要求1所述的药物组合物，其还包含一种或多种其它可药用成分，所述可药用成分选自可药用载体、稀释剂、赋型剂、助剂、填料、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、助溶剂、表面活性剂、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

3.权利要求1所述的药物组合物，其中所述可药用载体、稀释剂或赋型剂为如下物质或包括如下物质的一种或两种：甘油酯和胶体二氧化硅。

4.剂量单位，其含有30至200mg权利要求1所述的二氨基吩噻嗪化合物。

5.权利要求4所述的剂量单位，其为片剂或胶囊。

6.二氨基吩噻嗪化合物在制备用在治疗或预防患者中的τ蛋白病的方法中的药物中的用途，其中所述化合物选自：

(A)乙基-锍氯化物(ETC)，

(B)1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)，

(F)乙基-锍氯化物·氯化锌的混盐(ETZ)，

其中通过临床医生评价后和/或利用神经病理有效的实验组客观评价认知功能后选择用于治疗的所述受试者。

7.权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物用在治疗或预防患者中的τ蛋白病的方法中。

8.权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物用在治疗或预防患者中的τ蛋白聚集疾病的方法中。

9.权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物用在抑制哺乳动物的脑中蛋白聚集体产生的方法中。

10.权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物用在调节哺乳动物的脑中τ蛋白聚集的方法中。

11.权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物用在治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)、匹克病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞痴呆(FTD)、与17号染色体相关的额颞性痴呆伴帕金森综合征(FTDP-17)、去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(DDPAC)、核-脑桥-黑质变性(PPND)、ALS-关岛痴呆综合征、核-黑质-苍白球变性(PNLD)或皮质-基底变性(CBD)的方法中。

12.二氨基吩噻嗪化合物在制备用在抑制哺乳动物的脑中蛋白聚集体产生的方法中的药物中的用途，其中所述二氨基吩噻嗪化合物选自：

(A)乙基-锍氯化物(ETC)，

(B)1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)，

(C)1,9-二甲基-乙基-锍氯化物(DMETC)，

(D)1,9-二乙基-乙基-锍氯化物(DEETC)，

(F)乙基-锍氯化物·氯化锌的混盐(ETZ)，

(I)乙基-锍碘化物(ETI)，

(J)乙基-锍碘化物·碘化氢的混盐(ETI.HI)，和

(L)乙基-锍硝酸盐(ETN)。

13.二氨基吩噻嗪化合物在制备用在调节哺乳动物的脑中τ蛋白聚集的方法中的药物中的用途，其中所述二氨基吩噻嗪化合物选自：

(A)乙基-锍氯化物(ETC)，

(B)1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)，

(C)1,9-二甲基-乙基-锍氯化物(DMETC)，

(D)1,9-二乙基-乙基-锍氯化物(DEETC)，

(F)乙基-锍氯化物·氯化锌的混盐(ETZ)，

(I)乙基-锍碘化物(ETI)，

(J)乙基-锍碘化物·碘化氢的混盐(ETI.HI)，和

(L)乙基-锍硝酸盐(ETN)。

14.一种在体外标记τ蛋白或聚集的τ蛋白的方法，包括如下步骤：

将τ蛋白或聚集的τ蛋白与二氨基吩噻嗪化合物接触；其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合，其中所述二氨基吩噻嗪化合物选自：

(A)乙基-锍氯化物(ETC)，

(B)1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)，

(C)1,9-二甲基-乙基-锍氯化物(DMETC)，

(D)1,9-二乙基-乙基-锍氯化物(DEETC)，

(F)乙基-锍氯化物·氯化锌的混盐(ETZ)，

(I)乙基-锍碘化物(ETI)，

(J)乙基-锍碘化物·碘化氢的混盐(ETI.HI)，和

(L)乙基-锍硝酸盐(ETN)。

15.一种在体外检测τ蛋白或聚集的τ蛋白的方法，包括如下步骤：

将τ蛋白或聚集的τ蛋白与二氨基吩噻嗪化合物接触；其中所述化合物与一种或多种可检测的标记结合、连接、螯合或联合；和

检测与τ蛋白或聚集的τ蛋白结合的所述化合物的存在和/或其量，其中所述二氨基吩噻嗪化合物选自：

(A)乙基-锍氯化物(ETC)，

(B)1,9-二乙基-甲基-锍氯化物(DEMTC)，

(C)1,9-二甲基-乙基-锍氯化物(DMETC)，

(D)1,9-二乙基-乙基-锍氯化物(DEETC)，

(F)乙基-锍氯化物·氯化锌的混盐(ETZ)，

(I)乙基-锍碘化物(ETI)，

(J)乙基-锍碘化物·碘化氢的混盐(ETI.HI)，和

(L)乙基-锍硝酸盐(ETN)。

16.根据权利要求6的二氨基吩噻嗪化合物的用途，其中所述治疗或预防为对患者中的τ蛋白聚集疾病的治疗或预防。

17.根据权利要求6的二氨基吩噻嗪化合物的用途，其中所述治疗或预防包括抑制哺乳动物的脑中蛋白聚集体的产生。

18.根据权利要求6的二氨基吩噻嗪化合物的用途，其中所述治疗或预防包括调节哺乳动物的脑中τ蛋白的聚集。

19.根据权利要求6的二氨基吩噻嗪化合物的用途，其中所述治疗或预防为对患者中下述疾病的治疗或预防：阿尔茨海默氏病(AD)、匹克病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞痴呆(FTD)、与17号染色体相关的额颞性痴呆伴帕金森综合征(FTDP-17)、去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(DDPAC)、核-脑桥-黑质变性(PPND)、ALS-关岛痴呆综合征、核-黑质-苍白球变性(PNLD)或皮质-基底变性(CBD)。

20.权利要求1所述的药物组合物在制备用在治疗或预防患者中的τ蛋白病的方法中的药物中的用途。

21.权利要求1所述的药物组合物在制备用在治疗或预防患者中的τ蛋白聚集疾病的方法中的药物中的用途。

22.权利要求1所述的药物组合物在制备用在抑制哺乳动物的脑中蛋白聚集体产生的方法中的药物中的用途。

23.权利要求1所述的药物组合物在制备用在调节哺乳动物的脑中τ蛋白聚集的方法中的药物中的用途。

24.权利要求1所述的药物组合物在制备用在治疗或预防患者中的阿尔茨海默氏病(AD)、匹克病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞痴呆(FTD)、与17号染色体相关的额颞性痴呆伴帕金森综合征(FTDP-17)、去抑制-痴呆-帕金森-萎缩综合征(DDPAC)、核-脑桥-黑质变性(PPND)、ALS-关岛痴呆综合征、核-黑质-苍白球变性(PNLD)或皮质-基底变性(CBD)的方法中的药物中的用途。