CN103637219A - 益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及婴幼儿食品领域，特别涉及益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品。该益生菌组合物包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001。本发明提供的婴幼儿食品能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
Description
技术领域
本发明涉及婴幼儿食品领域，特别涉及益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品。
背景技术
婴儿湿疹是一种常见的皮肤炎症，属于变态反应性疾病，或称为过敏性疾病，是发生在婴儿头面部的急性或亚急性湿疹。湿疹的临床症状表现为反复发作的皮肤损害、瘙痒和继发感染等，可严重影响患儿的生活质量。引起婴儿湿疹病因是复杂的，其多与遗传和外界诱因有关。遗传因素是引起婴儿湿疹的直接病因，所以有过敏体质家族史（如父亲、母亲、祖父、祖母、外祖父、外祖母、兄弟姐妹等家庭成员有过湿疹、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、过敏性结膜炎、哮喘、食物过敏和药物过敏等）的婴儿易发生湿疹。外界因素是引起婴儿湿疹的诱发因素，如食物中蛋白质，尤其是鱼、虾、蛋类及牛乳，接触化学物品（护肤品、洗浴用品、清洁剂等）、毛制品、化纤物品、植物（各种植物花粉）、动物皮革及羽毛、发生感染（病毒感染、细菌感染等）、日光照射、环境温度高或穿着太暖、寒冷等，都可以刺激婴儿的湿疹反复发生或加重。婴儿容易发生湿疹还有其自身的因素，因为婴儿的皮肤角质层比较薄，毛细血管网丰富而且内皮含水及氯化物比较多，对各种刺激因素较敏感，加之婴儿消化吸收差，胃肠道防御能力较弱，食物得不到充分消化分解，而以大分子形式吸收入血液，尤其是蛋白质类食物（奶、鸡蛋、鱼虾等）可做为抗原物质，而诱发湿疹。
母乳喂养可降低婴儿湿疹的发生率，可以减轻湿疹的程度。母乳是母亲给予孩子的天然的最理想的食物，它不但维护了食物与营养的均衡，是增强婴儿免疫力及抵抗疾病的最佳方法，更是促进婴儿大脑和智力健康发育的保证。但由于各种原因，有些婴儿无法实现母乳喂养，采用人工喂养的方式。研究表明，配方乳粉喂养的婴儿粪便样品中双歧杆菌数比母乳喂养的婴儿要少一个数量级，配方乳粉喂养的婴儿更易发生湿疹；补充含双歧杆菌等益生菌有助于减少或预防湿疹的发生。因此提供一种富含益生菌的婴儿产品，对预防婴儿湿疹是十分必要的。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品。该益生菌组合物包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001；包含该益生菌组合物的婴幼儿食品能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种益生菌组合物，包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001。
机体肠道内的菌群结构平衡、稳定和协调是婴幼儿健康的重要标志。它可以促进婴幼儿的生长发育；参与物质代谢、营养转化和合成；构成防止有害菌入侵的生物屏障；提高机体免疫力等。要使体内菌群处于正常水平，体外补充益生菌是措施之一。益生菌（Probiotics）是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。益生菌可通过减低婴儿肠道的通透性，提高肠道屏障功能和降解过敏物质，达到减少过敏物质吸收和刺激机体的作用。目前，应用于人体的益生菌种类主要有双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、乳球菌、嗜热链球菌等，其中又以前两者应用最广泛。双歧杆菌和乳杆菌是胃肠道正常微生物区系中的重要成员，伴随宿主终生。
双歧杆菌对宿主的健康生存至关重要，它在机体内的有无或多寡是衡量健康状况的指标之一，直接或间接影响着人体的生理变化和免疫功能。双歧杆菌能产生乙酸、乳酸等有机酸降低肠道pH值和氧化还原点位，促进肠道蠕动，从而改善便秘，同时水解人体消化不完全的蛋白质，增加可溶性钙、铁及有些B族维生素的含量，起到营养补充作用。此外，它还能产生过氧化氢、细菌素等抗菌物质，抑制病原微生物的粘附生长，提高机体免疫力。
乳杆菌对肠道微生物有重要影响，它是兼性厌氧菌，主要分布在胃肠道的上半端，包括胃、回肠、结肠。通过对粪便中乳酸杆菌的计数分析鉴定发现，其数量超过1010CFU/g，包含嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、短乳杆菌等6个种。无论在食品发酵，还是在工业乳酸发酵以及医疗保健领域，乳杆菌都被广泛应用。就人用益生菌来说，目前常温的有嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌等。
严格厌氧的双歧杆菌和兼性厌氧的乳杆菌在人体胃肠道的不同区域相辅相成，协同维持胃肠道健康。同一种属的菌种，即使菌株不同，其在稳定性、功效方面也有着天壤之别。
本发明通过研究证明，包含双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的婴幼儿食品能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
作为优选，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.1～10）：1。
优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.5～5）：1。
进一步优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（1～1.8）：1。
更优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为1.5：1。
为了保证有效改善婴儿肠道微环境、提高免疫力、降低湿疹发生率，作为优选，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（0.1～10）：1。
优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（0.5～5）：1。
进一步优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（1～1.8）：1。
更优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1.5：1。
本发明还提供了该益生菌组合物在制备改善婴幼儿肠道微生态环境、提高婴幼儿免疫力或预防婴幼儿湿疹食品中的应用；该益生菌组合物包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001；作为优选，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.1～10）：1；优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.5～5）：1；进一步优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（1～1.8）：1；更优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为1.5：1；作为优选，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（0.1～10）：1；优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（0.5～5）：1；进一步优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（1～1.8）：1；更优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1.5：1。
本发明还提供了一种婴幼儿食品，包括乳粉或麦芽糊精中的一种、益生元和本发明提供的益生菌组合物；该益生菌组合物包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001；作为优选，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.1～10）：1；优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.5～5）：1；进一步优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（1～1.8）：1；更优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为1.5：1；作为优选，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（0.1～10）：1；优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（0.5～5）：1；进一步优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为（1～1.8）：1；更优选地，双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1.5：1。
作为优选，婴幼儿食品中益生菌组合物的添加量为105～1010CFU/g。
优选地，本发明提供的食品中益生菌组合物的添加量为107～108CFU/g。
在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的食品中益生菌组合物的添加量为2×107CFU/g。
益生元（Prebiotics）是一种膳食补充剂，通过选择性地刺激一种或少数种菌落中的细菌的生长与活性，而对寄主产生有益的影响，从而改善寄主健康。成功的益生元应是在通过上消化道时，大部分不被消化而能被肠道菌群所发酵，它的主要作用是促进益生菌在体内的定植和繁殖，给益生菌提供养分。在本发明提供的一些实施例中，益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖或菊粉。
在本发明提供的一些实施例中，婴幼儿食品的水分活度小于0.2。
在本发明提供的一些实施例中，婴幼儿食品为婴幼儿配方食品、婴幼儿固体饮料或婴幼儿保健品。
在本发明提供的一些实施例中，婴幼儿配方食品为婴幼儿配方奶粉。
在本发明提供的一些实施例中，婴幼儿食品还包括食品添加剂。
在本发明提供的一些实施例中，食品添加剂选自脱盐乳清粉、结构油脂、精炼植物油、α-乳白蛋白、乳糖、核苷酸、乳清蛋白肽、β-胡萝卜素、胆碱、L-肉碱、复合维生素、碳酸钙或氯化钾。
在本发明提供的一些实施例中，复合维生素选自维生素A、维生素D、维生素E、维生素K1、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、烟酰胺、叶酸、泛酸、生物素或维生素C。
本发明对婴儿粪便中的双歧杆菌、乳杆菌、产气荚膜杆菌、短链脂肪酸、sIgA的含量进行了检测。
其中，婴儿粪便中的双歧杆菌和乳杆菌的含量可直接反应婴儿肠道中双歧杆菌和乳杆菌数量的多寡，粪便中的双歧杆菌和乳杆菌的含量高，则肠道中双歧杆菌和乳杆菌数量多，其是衡量健康状况的指标之一。
产气荚膜杆菌(Clostridiumperfringen)又名魏氏梭菌(ClostridiumWelchii),它广泛存在于自然环境中，并见于几乎所有温血动物的消化道内，属于人和动物肠道内正常菌群的成员。其为梭状芽胞杆菌类属，是厌氧、无动力、能产生芽胞的革兰氏阳性粗大杆菌，单独或成双排列，两段钝圆，芽孢大，卵圆形，位于次端，在机体内可形成荚膜。本菌能引起人类气性坏疽及多种动物的肠毒血症和坏死性肠炎，是近年来我国家畜“猝死症”的主要病原。粪便中的产气荚膜杆菌的多寡可直接反应肠道是否健康，产气荚膜杆菌少是肠道健康的一个重要指标。
机体肠道中的有益菌可分解食物中的多糖，将其分解为乙酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸，因此粪便中的乙酸、丙酸、丁酸的含量及短链脂肪酸总含量可直接反应肠道中益生菌的数量，短链脂肪酸的含量高，则肠道中益生菌的数量多。
sIgA是黏膜免疫系统的主要效应因子，主要存在于泪液、唾液、乳汁和呼吸道、消化道及泌尿生殖道等黏膜表面分泌液中。sIgA在介导黏膜免疫抵御外界病原微生物的侵袭中发挥重要作用，具有免疫作用。因此，粪便中sIgA的含量可反应机体的免疫力水平，sIgA含量高，则机体的免疫力高。
本发明提供了益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品。该益生菌组合物包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001。本发明中对包含该益生菌组合物的婴幼儿食品进行了人体试验，试验结果表明该婴幼儿食品能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，提高免疫力，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。本发明提供的益生菌组合物可有效改善婴儿肠道的微生态环境，提高免疫力，可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
附图说明
图1示产品干预前后各组婴儿粪便双歧杆菌含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便双歧杆菌含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便双歧杆菌含量；
图2示产品干预前后各组婴儿粪便乳杆菌含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便乳杆菌含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便乳杆菌含量；
图3示产品干预前后各组婴儿粪便产气荚膜杆菌含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便产气荚膜杆菌含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便产气荚膜杆菌含量；
图4示产品干预前后各组婴儿粪便乙酸含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便乙酸含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便乙酸含量；
图5示产品干预前后各组婴儿粪便丙酸含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便丙酸含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便丙酸含量；
图6示产品干预前后各组婴儿粪便丁酸含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便丁酸含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便丁酸含量；
图7示产品干预前后各组婴儿粪便短链脂肪酸含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便短链脂肪酸含量，■示产品干预后（3周）各组婴儿粪便短链脂肪酸含量；
图8示产品干预前后各组婴儿粪便中的sIgA含量；□示产品干预前（0周）各组婴儿粪便中的sIgA含量，■示产品干预后（12周）各组婴儿粪便中的sIgA含量。
具体实施方式
本发明公开了益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的益生菌组合物及其应用、婴幼儿食品中所用原料或辅料均可由市场购得。其中，双歧杆菌HN019，拉丁文名称为Bifidobacterium lactis，属于双歧杆菌属，来源于乳制品，该菌株已由NZDRI，即新西兰乳品研究学会收集组织存放，编号为HN019；鼠李糖乳杆菌HN001，拉丁文名称为Lactobacillus Rhamnosus，属于乳酸杆菌属，来源于乳制品，该菌株已由NZDRI，即新西兰乳品研究学会收集组织存放，编号为HN001。本发明中所用的菌种是经过国家卫生部批准的可用于婴幼儿的益生菌菌种。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1益生菌组合物的制备
取15g双歧杆菌HN019和10g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1.5：1。
实施例2益生菌组合物的制备
取10g双歧杆菌HN019和1g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为10：1。
实施例3益生菌组合物的制备
取5g双歧杆菌HN019和5g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1：1。
实施例4益生菌组合物的制备
取1g双歧杆菌HN019和10g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1：10。
实施例5益生菌组合物的制备
取18g双歧杆菌HN019和10g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1.8：1。
实施例6益生菌组合物的制备
取5g双歧杆菌HN019和10g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为1：2。
实施例7益生菌组合物的制备
取10g双歧杆菌HN019和2g鼠李糖乳杆菌HN001混合，即得。对该益生菌组合物中的活菌数进行检测，结果显示该益生菌组合物中双歧杆菌HN019与鼠李糖乳杆菌HN001活菌数的比值为5：1。
实施例8婴幼儿配方奶粉的制备
婴幼儿配方奶粉的配方如表1所示。
表1婴幼儿配方奶粉的配方
婴幼儿配方奶粉的制备方法为：首先将原料乳（鲜牛奶）净乳，然后杀菌，取脱盐乳清粉、结构油脂、精炼植物油、α-乳白蛋白、乳糖、低聚果糖、低聚半乳糖、核苷酸、乳清蛋白肽、β-胡萝卜素、胆碱、L-肉碱、复合维生素、碳酸钙、氯化钾与杀菌后的原料乳混合，经预热、均质、杀菌、浓缩、喷粉即成为半成品，加入实施例1提供的益生菌组合物，混合，即得。经检测，该婴幼儿配方奶粉的水分活度小于0.2。其中复合维生素的配方如表2所示。
表2复合维生素的配方
| 维生素种类 | 单位 | 配方量 |
| 维生素A | μg RE | 630 |
| 维生素D | μg | 6.9 |
| 维生素E | mgα-TE | 4.7 |
| 维生素K1 | μg | 27.0 |
| 维生素B1 | μg | 557 |
| 维生素B2 | μg | 750 |
| 维生素B6 | μg | 376 |
| 维生素B12 | μg | 1.5 |
| 烟酰胺 | μg | 4076 |
| 叶酸 | μg | 36.0 |
| 泛酸 | μg | 2150 |
| 生物素 | μg | 12.0 |
| 维生素C | mg | 52.0 |
实施例9婴幼儿配方奶粉的制备
婴幼儿配方奶粉的配方如表3所示。
表3婴幼儿配方奶粉的配方
婴幼儿配方奶粉的制备方法为：首先将原料乳（鲜牛奶）净乳，然后杀菌，取脱盐乳清粉、结构油脂、精炼植物油、α-乳白蛋白、乳糖、低聚果糖、菊粉、核苷酸、乳清蛋白肽、β-胡萝卜素、胆碱、L-肉碱、复合维生素、碳酸钙、氯化钾与杀菌后的原料乳混合，经预热、均质、杀菌、浓缩、喷粉即成为半成品，加入实施例2提供的益生菌组合物，混合，即得。其中复合维生素的配方见实施例8中复合维生素的配方。
实施例10婴幼儿配方奶粉的制备
婴幼儿配方奶粉的配方如表4所示。
表4婴幼儿配方奶粉的配方
婴幼儿配方奶粉的制备方法为：首先将原料乳（鲜牛奶）净乳，然后杀菌，取脱盐乳清粉、结构油脂、精炼植物油、α-乳白蛋白、乳糖、低聚果糖、菊粉、核苷酸、乳清蛋白肽、β-胡萝卜素、胆碱、L-肉碱、复合维生素、碳酸钙、氯化钾与杀菌后的原料乳混合，经预热、均质、杀菌、浓缩、喷粉即成为半成品，加入实施例3提供的益生菌组合物，混合，即得。其中复合维生素的配方见实施例8中复合维生素的配方。
实施例11婴幼儿固体饮料的制备
婴幼儿固体饮料的配方如表5所示。
表5婴幼儿固体饮料的配方
婴幼儿固体饮料的制备方法为：取麦芽糊精、葡萄糖、低聚果糖、水果粉与实施例4提供的益生菌组合物，经过干燥、过筛、混合后，即得。
实施例12婴幼儿固体饮料的制备
婴幼儿固体饮料的配方如表6所示。
表6婴幼儿固体饮料的配方
婴幼儿固体饮料的制备方法为：取麦芽糊精、葡萄糖、低聚半乳糖、水果粉与实施例5提供的益生菌组合物，经过干燥、过筛、混合后，即得。
实施例13婴幼儿固体饮料的制备
婴幼儿固体饮料的配方如表7所示。
表7婴幼儿固体饮料的配方
婴幼儿固体饮料的制备方法为：取麦芽糊精、葡萄糖、菊粉、水果粉与实施例6提供的益生菌组合物，经过干燥、过筛、混合后，即得。
实施例14婴幼儿保健品的制备
取婴幼儿保健品中常规原辅料与实施例7提供的益生菌组合物，按照常规技术制得。
实施例15人体试验
试验设计：试验为随机、双盲、单中心、安慰剂-试验对照、三组临床试验。根据试验产品的不同，本试验共分为试验组（益生菌奶粉试验组，即喂养本发明实施例8提供的含有益生菌组合物的婴幼儿配方奶粉）、阴性对照组（普通奶粉对照组，即喂养市售的贝因美冠军宝贝宝宝成长配方奶粉，其配方中不包含本发明提供的益生菌组合物，其它组分与实施例8提供的婴幼儿配方奶粉一致）和阳性对照组（母乳对照组，即母乳喂养）三个组。本次试验分组情况对志愿者和研究者设盲，取得所有检验数据后对数据库进行锁定，完成一次揭盲，统计报告第一版完成后进行二次揭盲。为了确保研究小组中预后因素的平衡，试验点共招募符合纳入标准的6～12个月龄身体健康的婴幼儿200名，其中纯母乳喂养婴儿60名，以作为阳性对照组；非母乳喂养婴儿140名，随机分为2组，每组70名，其中70名婴儿喂养本发明实施例8提供的婴幼儿配方奶粉，作为试验组；另外70名婴儿喂养阴性对照产品（市售的贝因美冠军宝贝宝宝成长配方奶粉），作为阴性对照组。试验组和阴性对照组产品服用方式：口服，27g/次，5次/天；阳性对照组采用常规母乳喂养。产品干预12周。按照表8中的检测项目进行临床监测。
表8临床检测安排表
| 试验时间 | 检测项目 |
| 第0天 | 粪便检测、湿疹发生情况统计、sIgA测定 |
| 第21天 | 粪便检测 |
| 第84天 | 湿疹发生情况统计、sIgA测定 |
粪便实验室检测：分别于试验基线日、第21天及试验干预期结束后内由指定医务人员采取全部志愿者粪便样本，每位志愿者粪便采集一次，且限定1克，放入密闭带盖的厌氧取样瓶中，冷藏条件下立即送往复旦大学生命科学学院实验室。对基线日及第21天的粪便样本进行细菌计数和短链脂肪酸检测，其中粪便细菌计数包括产气荚膜杆菌、双歧杆菌、乳杆菌活菌数的检测，检测方法采用实时定量PCR；短链脂肪酸的检测包括乙酸、丙酸和丁酸，检测方法采用气相色谱法。此外还对基线日及试验干预期结束后的粪便样本进行sIgA的检测，检测方法采用酶联免疫方法。
湿疹发生情况统计：湿疹发生情况将通过小儿湿疹评估表对所有参与试验的志愿者进行评估，主要内容包括：湿疹发生情况、湿疹类型、湿疹部位、症状发生及消失日期、接受湿疹治疗情况。湿疹的诊断标准为：皮损为多形性，以红斑、丘疹、丘疱疹为主，皮疹中央明显，逐渐向周围散开，境界不清，弥漫性，有渗出倾向，慢性者则有浸润肥厚；病程不规则，呈反复发作，瘙痒剧烈。在试验期间每组志愿者的湿疹发生率，定义为试验中任何时间该组发生湿疹症状的人数除以该组志愿者的总数。
临床监测结果如下：
（1）婴儿粪便中的双歧杆菌、乳杆菌和产气荚膜杆菌含量检测结果
产品干预前后各组婴儿粪便中的双歧杆菌、乳杆菌和产气荚膜杆菌含量见表9，相应的柱状图如图1、图2、图3所示。
表9产品干预前后各组婴儿粪便中的双歧杆菌、乳杆菌和产气荚膜杆菌含量（log10cfu/g）
注：同一行数据后面的小写字母完全不同表示差异显著（p<0.05），同一行数据后面的大写字母完全不同表示差异极显著（p<0.01）；数据后面带有*表示与干预前相比差异显著（p<0.05），数据后面带有**表示与干预前相比差异极显著（p<0.01）。
由表9中数据可以得知，产品干预前母乳对照组（阳性对照组）婴儿粪便中的双歧杆菌和乳杆菌含量显著高于普通奶粉对照组（阴性对照组）和益生菌奶粉试验组（试验组），而产气荚膜杆菌含量显著低于普通奶粉对照组和益生菌奶粉试验组（p<0.01）。经过3周的产品干预后，益生菌奶粉试验组婴儿粪便中的双歧杆菌和乳杆菌含量显著增加，产气荚膜杆菌含量显著降低（p<0.01），而母乳对照组和普通奶粉对照组婴儿粪便中的各种菌群含量在干预前后均没有显著变化（p>0.05）。
对产品干预后各组婴儿粪便中的菌群含量进行差异性比较分析得出，益生菌奶粉试验组婴儿粪便中的双歧杆菌和乳杆菌含量显著高于普通奶粉对照组（p<0.01），并且与母乳对照组没有显著性差异（p>0.05），而产气荚膜杆菌含量不仅显著低于普通奶粉对照组，甚至显著低于母乳对照组（p<0.01）。这表明本试验所用的益生菌奶粉与普通奶粉相比，能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境。
（2）婴儿粪便中的短链脂肪酸含量检测结果
产品干预前后各组婴儿粪便中的短链脂肪酸含量见表10，相应的柱状图如图4、图5、图6、图7所示。
表10产品干预前后各组婴儿粪便中的短链脂肪酸含量（mg/g）
注：同一行数据后面的小写字母完全不同表示差异显著（p<0.05），同一行数据后面的大写字母完全不同表示差异极显著（p<0.01）；数据后面带有*表示与干预前相比差异显著（p<0.05），数据后面带有**表示与干预前相比差异极显著（p<0.01）。
由表10中数据可以得知，产品干预前母乳对照组（阳性对照组）婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量显著高于普通奶粉对照组（阴性对照组）和益生菌奶粉试验组（试验组），数据具有统计学意义（p<0.01），而丙酸和丁酸的含量在各组婴儿之间均没有显著性差异（p>0.05）。经过3周的产品干预后，益生菌奶粉试验组婴儿粪便中的各种短链脂肪酸含量及总含量均显著增加（p<0.05），而母乳对照组和普通奶粉对照组在干预前后均没有显著变化（p>0.05）。
对产品干预后各组婴儿粪便中的短链脂肪酸含量进行差异性比较分析得出，益生菌奶粉试验组婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量均显著高于普通奶粉对照组（p<0.05），并且其中的短链脂肪酸总含量与母乳对照组没有显著性差异（p>0.05）；丙酸和丁酸的含量在各组婴儿之间均没有显著性差异（p>0.05）。这表明本试验所用的益生菌奶粉与普通奶粉相比，能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿。
（3）婴儿粪便中的sIgA含量检测结果
产品干预前后各组婴儿粪便中的sIgA含量见图11，相应的柱状图如图8所示。
表11产品干预前后各组婴儿粪便中的sIgA含量（ng/g）
注：同一行数据后面的小写字母完全不同表示差异显著（p<0.05），同一行数据后面的大写字母完全不同表示差异极显著（p<0.01）；数据后面带有*表示与干预前相比差异显著（p<0.05），数据后面带有**表示与干预前相比差异极显著（p<0.01）。
由于同组数据的离散程度较大，因此在对数据进行差异性比较时，先将数据进行了对数转换。从表11中可以看出，产品干预前母乳对照组（阳性对照组）婴儿粪便中的sIgA含量显著高于普通奶粉对照组（阴性对照组）和益生菌奶粉试验组（试验组），数据具有统计学意义（p<0.01）。经过12周的产品干预后，益生菌奶粉试验组婴儿粪便中的sIgA含量显著增加（p<0.01），而母乳对照组和普通奶粉对照组婴儿粪便中的sIgA含量在干预前后没有显著变化（p>0.05）。
对产品干预后各组婴儿粪便中的sIgA含量进行差异性比较分析得出，益生菌奶粉试验组婴儿粪便中的sIgA含量显著高于普通奶粉对照组（p<0.01），并且与母乳对照组没有显著性差异（p>0.05）。这表明本试验所用的益生菌奶粉与普通奶粉相比，能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，并接近纯母乳喂养婴儿。
（4）湿疹发生情况统计结果
湿疹发生情况统计结果如表12所示。
表12湿疹发生情况统计结果
表12中数据显示，试验期间共有16人出现湿疹症状，其中益生菌奶粉试验组（试验组）有5人，湿疹发生率为7.14%，普通奶粉对照组（阴性对照组）有11人，湿疹发生率为15.71%，而母乳对照组（阳性对照组）无人出现湿疹症状。对益生菌奶粉试验组和普通奶粉对照组婴儿的湿疹发生率进行Fisher精确检验，得出益生菌奶粉试验组婴儿的湿疹发生率显著低于普通奶粉对照组（p=0.003），这表明本试验所用的益生菌奶粉与普通奶粉相比，可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
由上述分析结果可知，本发明实施例8提供的含有益生菌组合物的婴幼儿配方奶粉与普通奶粉相比，能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，提高免疫力，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。并由此可以推知本发明实施例1提供的益生菌组合物可有效改善婴儿肠道的微生态环境，提高免疫力，可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
取本发明实施例9至实施例14提供的婴幼儿食品进行人体试验，结果与实施例8提供的婴幼儿配方奶粉的效果相近，表明本发明实施例9至实施例14提供的婴幼儿食品与普通奶粉相比，能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，提高免疫力，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。并由此可以推知本发明实施例2至7提供的益生菌组合物可有效改善婴儿肠道的微生态环境，提高免疫力，可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
由此可见，本发明提供的含有益生菌组合物的婴幼儿食品能显著提高婴儿肠道中的双歧杆菌和乳杆菌含量，同时显著降低产气荚膜杆菌含量，从而有效改善婴儿肠道的微生态环境；能显著提高婴儿粪便中的乙酸含量和短链脂肪酸总含量，并接近纯母乳喂养婴儿；能显著提高婴儿粪便中的sIgA含量，提高免疫力，并接近纯母乳喂养婴儿；可以显著降低婴儿的湿疹发生率。本发明提供的益生菌组合物可有效改善婴儿肠道的微生态环境，提高免疫力，可以显著降低婴儿的湿疹发生率。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种益生菌组合物，其特征在于，包括双歧杆菌HN019和鼠李糖乳杆菌HN001。
2.根据权利要求1所述的益生菌组合物，其特征在于，所述双歧杆菌HN019与所述鼠李糖乳杆菌HN001的质量比为（0.1～10）：1。
3.如权利要求1或2所述的益生菌组合物在制备改善婴幼儿肠道微生态环境、提高婴幼儿免疫力或预防婴幼儿湿疹食品中的应用。
4.一种婴幼儿食品，其特征在于，包括乳粉或麦芽糊精中的一种、益生元和如权利要求1或2所述的益生菌组合物。
5.根据权利要求4所述的婴幼儿食品，其特征在于，所述婴幼儿食品中所述益生菌组合物的添加量为105～1010CFU/g。
6.根据权利要求4所述的婴幼儿食品，其特征在于，所述益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖或菊粉。
7.根据权利要求4所述的婴幼儿食品，其特征在于，所述婴幼儿食品的水分活度小于0.2。
8.根据权利要求4所述的婴幼儿食品，其特征在于，所述婴幼儿食品为婴幼儿配方食品、婴幼儿固体饮料或婴幼儿保健品。
9.根据权利要求4所述的婴幼儿食品，其特征在于，所述婴幼儿食品还包括食品添加剂。
10.根据权利要求9所述的婴幼儿食品，其特征在于，所述食品添加剂选自脱盐乳清粉、结构油脂、精炼植物油、α-乳白蛋白、乳糖、核苷酸、乳清蛋白肽、β-胡萝卜素、胆碱、L-肉碱、复合维生素、碳酸钙或氯化钾。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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