CN103609837A - 用于乳猪的乳酸菌粉剂及其制备方法、使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供的一种用于乳猪的乳酸菌粉剂及其制备方法、使用方法，属于微生物饲料添加剂技术领域。所用乳酸菌包括粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌的一种菌或多种复合菌，有效活菌数为50～1000亿/克，含水量为4%～8%。本发明提供的制备方法获得的乳酸菌粉剂，通过向初生乳猪口腔喷洒方式或向母猪乳头喷洒方式使初生乳猪摄入乳酸菌，使得乳猪死亡率下降，患红白痢的病猪比率下降，体重增加，乳猪活泼，毛发光亮，充分发挥了乳酸菌的特效。

Description

用于乳猪的乳酸菌粉剂及其制备方法、使用方法

技术领域

本发明属于微生物饲料添加剂技术领域，特别是涉及一种用于乳猪的乳酸菌粉剂及其制备方法、使用方法。

背景技术

自20世纪以来，多种抗生素和激素等被广泛用作饲料添加剂，虽然在畜禽生产与疫病防治及促进动物生长等方面发挥了不可或缺的作用，但由于长期使用甚至滥用，使抗生素的使用存在越来越多的问题，主要表现在：药物残留和毒性；喂养的家畜中大量应用广谱抗生素造成细菌的耐药性快速增长；长期使用抗生素扰乱了畜禽体内微生物系统中微生物群落的微生态平衡，导致消化功能紊乱，引起各种消化道疾病；降低动物的免疫功能。为了克服这些弊端，世界各国的科研工作者不断努力以寻求和开发一种安全、无毒副作用、无残留，既能促进动物生长，又能防治畜禽疾病、替代抗生素的新型添加剂。动物微生态制剂(微生物饲料添加剂)正是基于饲用抗生素的安全性问题应运而生,它不仅能够对致病菌有抑制作用、也可促进畜禽生长和改善畜禽产品的品质。

2008年版饲料添加剂品种目录允许使用的微生物菌种增加到16个种，包括地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、保加利亚乳杆菌等。其中不耐热的无芽孢细菌有11种，占69%。

目前，微生物饲料添加剂的使用方法主要是掺入颗粒饲料的造粒或用于发酵饲料，乳酸菌（粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌等）因其不耐高温而限制了其在颗粒饲料中的应用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种用于乳猪的乳酸菌粉剂的其制备方法和使用方法，使其充分发挥乳酸菌的特点，通过向初生乳猪口腔喷洒方式或向母猪乳头喷洒方式使初生乳猪摄入乳酸菌。

本发明中细菌培养及检测方法说明书中未提及的，均为本领域常规的方法。

为实现上述目的，本发明提供一种用于乳猪的乳酸菌粉剂，其中，乳酸菌包括粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌的一种菌或多种复合菌，有效活菌数为50～1000亿/克，含水量为4%～8%。

上述乳酸菌粉剂的制备方法为，将乳酸菌进行浓缩，获得浓缩液，在真空低温干燥的条件下对浓缩液进行干燥处理，制得乳酸菌粉剂。

优选的制备方法包括以下步骤，

（1）将乳酸菌菌种接入MRS培养基或番茄汁中，在种子培养条件下进行种子培养，获得种子液；

（2）将步骤（1）中的种子液接种到发酵培养基中，在发酵培养条件下进行发酵培养，获得发酵液；

（3）发酵结束，对步骤（2）获得的发酵液进行浓缩，获得浓缩液。

（4）对步骤（3）获得的浓缩液在真空低温干燥的条件下，通过喷雾方式进行干燥处理，制得乳酸菌粉剂。

优选的，在浓缩液中添加脱脂奶粉、乳糖和/或海藻糖。其添加量优选为，按重量百分比计，添加脱脂奶粉为0.1～0.5%、乳糖1～3%和/或海藻糖0.1～0.3%。

优选的浓缩方式为离心浓缩或膜浓缩。

上述乳酸菌粉剂的使用方法为，

a，将稀释后的乳酸菌粉剂向乳猪口腔内喷洒；

或者b，将稀释后的乳酸菌粉剂向母猪乳头喷洒；

或者，将上述a与b两种方法混合使用。

所述稀释后的乳酸菌粉剂的有效活菌数为1～50亿/毫升。

优选的，先向乳猪口腔内喷洒，然后再让乳猪吸奶，每天喷洒1～3次；

或者先用温热开水清洁母猪乳头，再用无菌水清洁，待乳头干至无明水后再喷洒，每天早晚各一次。

优选的喷洒量为0.08～0.32毫升/次。

优选的使用期限为连续使用15天。

优选的，乳酸菌粉剂用于初生乳猪直接摄入或初生乳猪间接摄入。

本发明提供的制备方法所制得的乳酸菌粉剂，通过向初生乳猪口腔喷洒方式或向母猪乳头喷洒方式使初生乳猪摄入乳酸菌，使得乳猪死亡率下降，患红白痢的病猪比率下降，体重增加，乳猪活泼，毛发光亮，充分发挥了乳酸菌的特效。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

所述乳酸菌菌种采用公知的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus Faecium)、乳酸片球菌(Pediococcusaci dilactici)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)制备。

实施例1

1、粪肠球菌粉剂的制备

（1）粪肠球菌种子的培养：

将粪肠球菌接种于MRS培养基（蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖20.0g，K₂HPO₄2.0g，柠檬酸三铵2.0g，乙酸钠5.0g，MgSO₄·7H₂O0.58g，MnSO₄·4H₂O0.25g，吐温-801.0ml，纯水1000ml，pH6.4-6.8，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度37±1℃，培养时间10h-18h，获得种子液。

（2）粪肠球菌的发酵培养：

将种子液接种到发酵培养基（蛋白胨3.6kg，酵母膏3.0kg，葡萄糖4.0kg，硫酸镁0.06kg，柠檬酸三铵1.2kg，乙酸钠1.8kg，自来水600L，pH6.2-6.4，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度37±1℃，培养时间10h-18h，获得发酵液

（3）发酵结束，用离心机对发酵液浓缩，收集浓缩液31L。

（4）在浓缩液中添加脱脂奶粉0.14kg、乳糖0.9kg、海藻糖0.06kg，充分搅拌均匀。

（5）通过MJY型真空低温干燥机通过喷雾方式进行真空低温干燥，干燥温度35±2℃,真空度400-5000Pa。

（6）收集粪肠球菌粉剂产品2.7Kg。有效活菌数为1000亿/克，水份含量6.1%。

2、粪肠球菌粉剂的使用

取有效活菌数为1000亿/克的粪肠球菌粉剂1.0克加入20毫升无菌水，摇匀，使粪肠球菌粉剂充分溶解，转入25毫升的小喷雾器中。

对初生乳猪向其口腔中喷菌液2次（每次0.16毫升），使乳猪安全摄入菌液后，才能允许乳猪吸奶。

此后15天，每天重新以同比例稀释菌液，并向乳猪口腔喷菌液3次。

3、结果与分析

结论：由表1所示，试验结果表明，试验组中乳猪死亡率减少6.5%，黄、白、红痢发生率为零，试验组乳猪更为活泼、毛发光亮，粪便成型、猪舍嗅味明显改善。

表1对照组与实验组的具体情况对比（出生1-15天）

实施例2

1、屎肠球菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂的制备

（1）屎肠球菌粉剂的制备：

屎肠球菌粉剂的制备同实施例1中粪肠球菌粉剂的制备；

收集屎肠球菌粉剂产品的有效活菌数为480亿/克，水份含量6.3%。

（2）干酪乳杆菌粉剂的制备：

1）干酪乳杆菌种子的培养：

将干酪乳杆菌接种于MRS培养基（同实施例1）。培养温度35±2℃，培养时间12h-20h，获得种子液。

2）干酪乳杆菌的发酵培养：

将种子液接种到发酵培养基（蛋白胨3.6kg，酵母膏2.4kg，牛肉膏0.6kg，葡萄糖3.2kg，硫酸镁0.06kg，柠檬酸三铵1.2kg，乙酸钠1.8kg，自来水600L，pH6.0-6.5，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度34±1℃，培养时间12h-16h，获得发酵液

3）发酵结束，用膜浓缩器对发酵液浓缩，收集浓缩液38L。

4）在浓缩液中添加脱脂奶粉0.18kg、乳糖1.1kg、海藻糖0.08kg，充分搅拌均匀。

5）通过MJY型真空低温干燥机通过喷雾方式进行真空低温干燥，干燥温度35±2℃,真空度500-5000Pa。

6）收集干酪乳杆菌粉剂产品2.7Kg。有效活菌数为640亿/克，水份含量5.8%。

（3）屎肠球菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂的复配

取屎肠球菌粉剂和干酪乳杆菌粉剂各200克，用多维混合机充分混合。即为屎肠球菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂，有效活菌数为560亿/克。

2、屎肠球菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂的使用

取有效活菌数为560亿/克的二元复合粉剂1.0克加入20毫升无菌水，摇匀，使屎肠球菌、干酪乳杆菌复合二元复合粉剂充分溶解，转入25毫升的小喷雾器中。

乳猪在产下来时，先用温热开水清洁母猪乳头，再用无菌水将母猪乳头清洁一次，待乳头干至无明水后，用小喷雾器向母猪乳头喷菌液2次后，乳猪才可以吸奶采食。

此后15天，每天重新以同比例稀释菌液，并每天早晚向母猪乳头各喷菌液2次。

3、结果与分析

结论：试验结果表明，试验组中，乳猪死亡率减少8.3%，黄、白痢减少8.9%，红痢发生率为零，乳猪活泼、毛发光亮，粪便成型、猪舍嗅味明显改善。

实施例3

1、粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌三元复合粉剂的制备

（1）粪肠球菌的制备同实施例1。

（2）干酪乳杆菌的制备同实施例2。

（3）植物乳杆菌粉剂的制备

1）植物乳杆菌种子的培养：

将植物乳杆菌接种于MRS培养基（同实施例1）。培养温度35±2℃，培养时间12h-20h，获得种子液。

2）植物乳杆菌的发酵培养：

将种子液接种到发酵培养基（蛋白胨4.2kg，酵母膏3.0kg，葡萄糖3.6kg，硫酸镁0.06kg，柠檬酸三铵0.6kg，乙酸钠1.2kg，自来水600L，pH5.8-6.4，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度35±1℃，培养时间12h-16h，获得发酵液

3）发酵结束，用膜浓缩器对发酵液浓缩，收集浓缩液28L。

4）在浓缩液中添加脱脂奶粉0.028kg、乳糖0.84kg、海藻糖0.08kg，充分搅拌均匀。

5）通过MJY型真空低温干燥机通过喷雾方式进行真空低温干燥，干燥温度35±2℃,真空度500-5000Pa。

6）收集植物乳杆菌粉剂产品1.8Kg。有效活菌数为430亿/克，水份含量5.8%。

（4）粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌三元复合粉剂的复配

取粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌各200克，用多维混合机充分混合。即为粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌三元复合粉剂，有效活菌数为600亿/克。

2、粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌三元复合粉剂的使用

取有效活菌数为600亿/克的三元复合粉剂2.5克加入20毫升无菌水，摇匀，使粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌三元复合粉剂充分溶解，转入25毫升的小喷雾器中。

使用方法同实施例1。

3、结果与分析

结论：试验结果表明，试验组中，乳猪死亡率减少8.7%，黄、白、红痢发生率为零，体重相对增加12.3%，乳猪活泼、毛发光亮，粪便成型、嗅味明显改善，改善了养殖场环境。

实施例4

1、乳酸片球菌、嗜热链球菌二元复合粉剂的制备

（1）乳酸片球菌粉剂的制备

1）乳酸片球菌种子的培养：

将乳酸片球菌接种于种子培养基（蛋白胨20.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖5.0g，乳糖5.0g，蔗糖0g，氯化钠4.0g，（NH₄）₂HPO₄4.0g，乙酸钠1.5g，Vc0.5g，琼脂粉20.0g，纯水1000ml，pH6.2-6.8，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度36±2℃，培养时间16h-24h，获得种子液。

2）乳酸片球菌的发酵培养：

将种子液接种到发酵培养基（蛋白胨4.0kg，酵母膏3.0kg，葡萄糖9.0kg，硫酸镁0.06kg，柠檬酸三铵1.2kg，乙酸钠1.8kg，自来水600L，pH6.0-6.8，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度36±1℃，培养时间16h-20h，获得发酵液

3）发酵结束，通过膜浓缩器对发酵液浓缩，收集浓缩液28L。

4）在浓缩液中添加脱脂奶粉0.14kg、乳糖0.28kg、海藻糖0.03kg、麦芽糊精1.2kg，充分搅拌均匀。

5）通过MJY型真空低温干燥机通过喷雾方式进行真空低温干燥，干燥温度35±2℃,真空度500-5000Pa。

6）收集乳酸片球菌粉剂产品1.9Kg。有效活菌数为520亿/克，水份含量5.5%。

（2）嗜热链球菌粉剂的制备

1）嗜热链球菌种子的培养：

将嗜热链球菌接种于番茄汁培养基（酵母膏7.5g，葡萄糖10.0g，番茄汁100ml，蛋白胨7.5g，磷酸二氢钾2.0g，吐温-800.5ml，纯水900ml，琼脂粉20.0g，pH7.0，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度37±1℃，培养时间16h-24h，获得种子液。

2）嗜热链球菌的发酵培养：

将种子液接种到发酵培养基（蛋白胨4.2kg，酵母膏3.0kg，番茄汁2.4kg，葡萄糖3.6kg，硫酸镁0.06kg，柠檬酸三铵1.2kg，乙酸钠1.8kg，自来水600L，pH6.8-7.2，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度37±1℃，培养时间16h-20h，获得发酵液

3）发酵结束，通过膜浓缩器对发酵液浓缩，收集浓缩液24L。

4）在浓缩液中添加脱脂奶粉0.12kg、乳糖0.72kg、海藻糖0.072kg、麦芽糊精0.45kg，充分搅拌均匀。

5）通过MJY型真空低温干燥机通过喷雾方式进行真空低温干燥，干燥温度40±2℃,真空度50-5000Pa。

6）收集嗜热链球菌粉剂产品1.4Kg。有效活菌数为400亿/克，水份含量5.1%。

（3）乳酸片球菌和嗜热链球菌二元复合粉剂的复配

取乳酸片球菌粉剂和嗜热链球菌粉剂各300克，用多维混合机充分混合，即为二元复合粉剂，有效活菌数为460亿/克。

2、乳酸片球菌和嗜热链球菌二元复合粉剂的使用

取有效活菌数为460亿/克的二元复合粉剂1.0克加入20毫升无菌水，摇匀，使乳酸片球菌和嗜热链球菌二元复合粉剂充分溶解，转入25毫升的小喷雾器中。

对刚出生的乳猪向其口腔中喷菌液2次（每次0.16毫升），使乳猪安全摄入菌液后，才能允许乳猪吸奶。

此后15天，每天早晚先用温热开水清洁母猪乳头，再用无菌水将母猪乳头清洁一次，待乳头干至无明水后，用小喷雾器向母猪乳头喷菌液2次后，乳猪才可以吸奶采食。

3、结果与分析

结论：试验结果表明，在试验组中，乳猪死亡率减少8.7%，黄、白痢发生率为零，红痢减少10.5%，体重相对增加13.7%，乳猪活泼、毛发光亮，粪便成型、养殖场嗅味明显改善。

实施例5

1、粪肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌三元复合粉剂的制备

（1）粪肠球菌粉剂的制备同实施例1。

（2）乳酸片球菌粉剂的制备同实施例4。

（3）嗜热链球菌粉剂的制备同实施例4。

（4）粪肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌三元复合粉剂的复配

取粪肠球菌粉剂、乳酸片球菌、嗜热链球菌各200克，用多维混合机充分混合，即为三元复合粉剂，有效活菌数为580亿/克。

2、粪肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌三元复合粉剂的使用

取有效活菌数为580亿/克的三元复合粉剂1.5克加入20毫升无菌水，摇匀，使粪肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌三元复合粉剂充分溶解，转入25毫升的小喷雾器中。

使用方法同实施例2。

3、结果与分析

结论：试验结果表明，在试验组中，乳猪死亡率减少9.6%，黄、白痢发生率为零，红痢减少9.4%，体重相对增加11.7%，乳猪活泼、毛发光亮，粪便成型、养殖场嗅味明显改善。

实施例6

1、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌杆菌二元复合粉剂的制备

（1）嗜酸乳杆菌粉剂的制备

1）嗜酸乳杆菌种子的培养：

将嗜酸乳杆菌接种于MRS培养基（同实施例1）。培养温度36±2℃，培养时间20h-24h，获得种子液。

2）嗜酸乳杆菌的发酵培养：

将种子液接种到发酵培养基（蛋白胨6.0kg，酵母膏3.0kg，葡萄糖7.2kg，硫酸镁0.06kg，柠檬酸三铵1.2kg，乙酸钠1.8kg，自来水600L，pH6.0，121℃高压蒸汽灭菌15min）。培养温度36±1℃，培养时间16h-20h，获得发酵液

3）发酵结束，通过膜浓缩器对发酵液浓缩，收集浓缩液24L。

4）在浓缩液中添加脱脂奶粉0.12kg、乳糖0.72kg、海藻糖0.024kg，充分搅拌均匀。

5）通过MJY型真空低温干燥机通过喷雾方式进行真空低温干燥，干燥温度38±2℃,真空度800-1500Pa。

6）收集乳酸片球菌粉剂产品1.1Kg，有效活菌数为410亿/克，水份含量4.1%。

（2）干酪乳杆菌粉剂的制备同实施例2。

（3）嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂的制备

取嗜酸乳杆菌粉剂70g、干酪乳杆菌粉剂40g、麦芽糊精890g，用多维混合机充分混合，即为二元复合粉剂，有效活菌数为50亿/克。

2、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂的使用

取有效活菌数为50亿/克的二元复合粉剂2.0克加入20毫升无菌水，摇匀，使嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌二元复合粉剂充分溶解，转入25毫升的小喷雾器中。

使用方法同实施例2。

3、结果与分析

结论：试验结果表明，在试验组中，乳猪死亡率减少8.1%，黄、白痢发生率为零，红痢减少7.2%，体重相对增加10.3%，乳猪活泼、毛发光亮，粪便成型、养殖场嗅味明显改善。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种用于乳猪的乳酸菌粉剂，其特征在于，乳酸菌包括粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌的一种菌或多种复合菌，有效活菌数为50～1000亿/克，含水量为4%～8%。

2.根据权利要求1所述的乳酸菌粉剂的制备方法，其特征在于，将乳酸菌进行浓缩，获得浓缩液，在真空低温干燥的条件下对浓缩液进行干燥处理，制得乳酸菌粉剂。

3.根据权利要求2所述的乳酸菌粉剂的制备方法，其特征在于，在所述浓缩液中添加脱脂奶粉、乳糖和/或海藻糖。

4.根据权利要求3所述的乳酸菌粉剂的制备方法，其特征在于，按重量百分比计，添加所述脱脂奶粉为0.1～0.5%、乳糖1～3%和/或海藻糖0.1～0.3%。

5.根据权利要求2-4任一所述的乳酸菌粉剂的制备方法，其特征在于，浓缩方式为离心浓缩或膜浓缩。

6.根据权利要求5所述的乳酸菌粉剂的制备方法，其特征在于，所述干燥处理采用喷雾方式进行。

7.根据权利要求1所述的乳酸菌粉剂的使用方法，其特征在于，

a，将稀释后的乳酸菌粉剂向乳猪口腔内喷洒；

或者b，将稀释后的乳酸菌粉剂向母猪乳头喷洒；

或者，将上述a与b两种方法混合使用。

8.根据权利要求7所述的乳酸菌粉剂的使用方法，其特征在于，所述稀释后的乳酸菌粉剂的有效活菌数为1～50亿/毫升。

9.根据权利要求8所述的乳酸菌粉剂的使用方法，其特征在于，先向乳猪口腔内喷洒，然后再让乳猪吸奶，每天喷洒1～3次；

或者先用温热开水清洁母猪乳头，再用无菌水清洁，待乳头干至无明水后再喷洒，每天早晚各一次。

10.根据权利要求9所述的乳酸菌粉剂的使用方法，其特征在于，喷洒量为0.08～0.32毫升/次，连续使用15天。