CN103588660B

CN103588660B - 一种新型的酰基苯胺化合物及用途

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Publication number: CN103588660B
Application number: CN201310589438.3A
Authority: CN
Inventors: 刘天军; 赵力挥; 洪阁
Original assignee: Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Current assignee: Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Priority date: 2013-11-18
Filing date: 2013-11-18
Publication date: 2016-06-01
Anticipated expiration: 2033-11-18
Also published as: CN103588660A

Abstract

本发明公开了一种新型的酰基苯胺化合物。新型的酰基苯胺化合物具有下述结构：

Description

一种新型的酰基苯胺化合物及用途

技术领域

本发明属于有机合成和药物领域，具体涉及一种新型的酰基苯胺化合物及其在抗HPV方面的应用。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)属于乳多孔病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是一类分子量较小(7.9Kb)的无包膜双链环状嗜上皮性DNA病毒^[1]，常引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮细胞增殖。目前所发现的HPV有200多种基因型，根据HPV侵犯部位和临床表现的不同可分为：皮肤低危型(如HPV1、2、3、4、7、10、12、15等，与寻常疣、扁平疣、跖疣有关)、皮肤高危性(如HPV5、8、14、17、20、36、38等，与疣状表皮发育不良、外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌有关)、黏膜低危型(如HPV6、11、13、32、34、40、42、43、44、53、54等，与生殖器、肛门、口咽部、食道黏膜感染有关)和黏膜高危性(如HPV16、18、30、31、35、39等，与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌有关)。

流行病学研究表明，持续性感染高危型HPV是宫颈癌最重要的致病因素^[2-3]。2008年诺贝尔医学奖得主德国人ZurHausen等人的研究表明，世界范围内大约70％的宫颈癌由高危型的HPV16和HPV18两种亚型病毒引起。在对宫颈癌患者进行的活组织检查中，约95％的患者检出HPV阳性，进一步证实了HPV感染与宫颈癌密切相关^[4-5]。因此，科学家们将大多数研究主要集中在HPV的生物学研究上^[6]。

HPV的基因组结构基本相似，包括早期基因(E)、晚期基因(L)和长控制区(LCR)3个部分。早期基因区可以编码6个早期蛋白，其功能与病毒的复制、转录、翻译以及宿主细胞的恶性转化有关，其中早期蛋白E6和E7在高危型HPV引起宫颈癌过程中起着关键的作用，两者可以通过不同的机制逃避宿主的免疫系统，调控细胞周期和细胞凋亡，促进DNA损伤和突变，最终导致细胞恶性转化。因此，以HPVE6和E7癌蛋白为靶点筛选抗HPV药物成为研究和开发抗病毒新药的一个重要途径^[7]。

目前临床上治疗HPV感染性疾病的主要手段包括：1)物理治疗，如激光、微波、冷冻、电灼、手术切除(妇科的LEEP刀)、光动力疗法等，目的是去除肉眼可见的瘤体和亚临床感染。2)药物治疗，如0.5％足叶草脂毒素酊、5％咪喹莫特、50％三氯醋酸、氟尿嘧啶软膏等。3)免疫治疗：如干扰素、白介素、胸腺肽、转移因子、卡介苗、异维A酸、自体疫苗等，目的在于减少复发和加快清除病灶。3)预防性疫苗：如2006年美国FDA批准上市的默沙东公司的四价疫苗Gardasil(HPV6/11/16/18L1VLP)和2007年美国FDA批准上市的葛兰素史克公司(GSK)的二价疫苗Cervarix(HPV16/18L1VLP)。4)治疗性疫苗：目前治疗性疫苗还处于临床实验阶段。由于HPV抵抗力强、复发率高、能耐受干燥、易长期存活，故上述方法仅适用于各类良性病变，而对于根除HPV感染或治疗HPV所引起的宫颈癌仍然束手无策。因此，加快筛选抗HPV候选化合物，研发适用于感染人群的HPV治疗药物，已成为抗HPV研究能否取得突破性进展的关键。

对乙酰氨基酚属于苯胺类解热镇痛抗炎药，常用于感冒发热、头痛和肌肉疼痛等。本课题组在抗病毒药物筛选过程中发现对乙酰氨基酚具有较强的抗HPV16活性。基于该研究成果，我们制备出一系列的对乙酰氨基酚的衍生物，并将它们用于HPV16的治疗。相对于其它HPV治疗药物，本发明提供的新型的酰基苯胺化合物，具有制备方法简单、生产成本低廉、抗HPV效果显著等优点。因此，本发明的酰基苯胺化合物在开发治疗HPV药物方面具有重大的潜在价值。

参考文献

[1]WoodmanCB，CollinsSI，YoungLS.ThenaturalhistoryofcervicalHPVinfection：unresolvedissues[J].NatRevCancer，2007，7(1)：11-22.

[2]IARCWorkingGroupontheEvaluationofCarcinogenicRiskstoHumans.Humanpapillomavimses[J].IARCMonogrEvalCarcinogRisksHum，1995，64：1-378.

[3]ZurHausenH.Papillomavirusesandcancer：frombasicstudiestoclinicalapplication[J].NatRevCancer，2002，2(5)：342-350.

[4]刘明君，张秀荣，刘婕.947例女性患者HPV感染与细胞学检查与分析[J].中外健康文摘，2011，8(7)：4950.

[5]王鲁平.人乳头状瘤病毒感染与子宫颈病变关系的研究进展及应对策略[J].诊断病理学

杂志，2007，14(2)：86-89.

[6]乔友林.中国妇女人乳头瘤病毒感染和子宫颈癌的流行病学研究现状及其疫苗预防前景[J].中华流行病学杂志，2007，28(10)：937-940.

[7]陆巧妮.人乳头瘤病毒16型(HPV16)药物筛选模型的建立及药效学评价[D].北京：北京协和医学院，2012：7-9.

发明内容

本发明的目的在克服现有技术的不足，提供一种新型的酰基苯胺化合物。

本发明的第二个目的是提供一种新型的酰基苯胺化合物作为抗HPV药物的用途。

本发明的技术方案概述如下：

一种新型的酰基苯胺化合物，具有下述结构：

其中，当n=1时，

R₁为①碳原子数≤18的直链或支链烷基；②有1个或2个羟基，总碳原子数≤12直链或支链烷基取代基；③有1个或2个羧基，总碳原子数≤12直链或支链烷基取代基；④苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基或4-羟基苯基；⑤含1-3个杂原子的5元杂环或6元杂环，杂原子可以是O，S，N原子；

R₂为氢或甲基或碳原子数≤6的支链或直链酰基。

当n=2时，

R₁为X可以是O，S原子；可以是O，S原子；m=0，1，2，3，4，5；R₂为氢或甲基。

当n=3时，

R₂为氢或甲基。

当n=4时，

R₂为氢或甲基。

本发明的新型酰基苯胺化合物可用于预防和治疗HPV感染引发的临床症状，特别是寻常疣、扁平疣、跖疣、外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。

附图说明

图1为本发明实施例1对羟基乙酰苯胺的合成路线图。

图2为本发明实施例2对甲氧基乙酰苯胺的合成路线图。

图3为本发明实施例3对乙酰氧基乙酰苯胺的制备的合成路线图。

图4为本发明实施例43-溴-4甲氧基乙酰苯胺的合成路线图。

图5为本发明实施例5N，N’-双(4-甲氧基苯基)丁二酰胺的合成路线图。

图6为本发明实施例6N，N’-双(4-羟基苯基)丁二酰胺的合成路线图。

图7为本发明实施例7氮川三乙酰(4-甲氧基)苯胺的合成路线图。

图8为本发明实施例8氮川三乙酰(4-羟基)苯胺的合成路线图。

图9为本发明实施例9乙二胺四乙酰(4-甲氧基)苯胺的合成路线图。

图10为本发明实施例10乙二胺四乙酰(4-羟基)苯胺的合成路线图。

具体实施方式

实施例1对羟基乙酰苯胺的制备(图1)

取1：1摩尔比的乙酸酐和4-氨基苯酚在二氯甲烷中回流反应10min，反应结束后，减压除去溶剂，以乙醇重结晶，得到相应产物，收率均大于90％。

实施例2对甲氧基乙酰苯胺的制备(图2)

取1：1.1摩尔比的N-(4-羟基苯基)乙酰胺和碘甲烷在无水碳酸钾干燥的丙酮溶液中回流反应3h，反应结束后，减压除去溶剂，以乙醇重结晶，得到相应产物收率均大于90％。

实施例3对乙酰氧基乙酰苯胺的制备(图3)

以1：1摩尔比的N-(4-羟基苯基)乙酰胺和乙酰氯在二氯甲烷和三乙胺中回流反应2h，反应结束后，减压除去溶剂，以乙醇重结晶，得到相应产物收率均大于80％。

实施例43-溴-4甲氧基乙酰苯胺的制备(图4)

将3-溴4-甲氧基苯胺溶解到无水四氢呋喃中，加入三乙胺，将上述溶液滴加到新鲜制备的乙酰氯中(摩尔比为1：1)，搅拌90min，过滤，浓缩滤液，得到3-溴4-甲氧基乙酰苯胺；将3-溴4-甲氧基乙酰苯胺溶解在干燥的二氯甲烷中，冷却到-25℃，将三溴化硼(摩尔比2：1)配制的二氯甲烷溶液缓慢滴加到上述溶液中，搅拌90min，冷藏过夜。缓慢加入少量饱和氯化铵溶液，浓缩除去溶剂，以乙醇重结晶，即得，收率大于85％。

实施例5N，N’-双(4-甲氧基苯基)丁二酰胺的制备(图5)

将5g对甲氧基苯胺溶解于10mL无水四氢呋喃中，加入三乙胺4.11g，将上述溶液滴加到3.15g新鲜制备的丁二酰氯中，搅拌90min，过滤，浓缩滤液，即得。

实施例6N，N’-双(4-羟基苯基)丁二酰胺的制备(图6)

取实施例5制备的N，N’-双(4-甲氧基苯基)丁二酰胺溶解在干燥的二氯甲烷中，冷却到-25℃，将含有3.61g三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)缓慢滴加到上述溶液中，搅拌90min，冷藏过夜。缓慢加入少量饱和氯化铵溶液，浓缩除去溶剂，乙醇重结晶，得到产品5.2g，两步总收率74.0％。

实施例7氮川三乙酰(4-甲氧基)苯胺的制备(图7)

将对甲氧基苯胺15g溶解到无水四氢呋喃中，加入三乙胺12.3g，将上述溶液滴加到新鲜制备的氮川三乙酰氯10g中，室温搅拌90min，过滤，浓缩滤液。乙醇重结晶，得到11.3g产物，收率55％。

实施例8氮川三乙酰(4-羟基)苯胺的制备(图8)

将氮川三乙酰(4-甲氧基苯)胺11.3g溶解在干燥的二氯甲烷中，冷却到-25℃，将含有15.3g三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)缓慢滴加到上述溶液中，搅拌90min，冷藏过夜。缓慢加入少量饱和氯化铵溶液，浓缩除去溶剂，乙醇重结晶，得产品15.6g，总收率75.9％。

实施例9乙二胺四乙酰(4-甲氧基)苯胺的制备(图9)

将对甲氧基苯胺6.73g溶解到无水四氢呋喃中，加入三乙胺5.53g，将上述溶液滴加到新鲜制备的乙二胺四乙酰氯5g中60min过滤，浓缩滤液，以乙醇重结晶，得产物6.54g，

总收率67.1％。

实施例10乙二胺四乙酰(4-羟基)苯胺的制备(图10)

将乙二胺四乙酰(4-甲氧基苯)胺6.54g溶解在干燥的二氯甲烷中，冷却到-25℃，将含三溴化硼6.84g的二氯甲烷溶液(1M)缓慢滴加到上述溶液中，搅拌90min，冷藏过夜。缓慢加入少量饱和氯化铵溶液，浓缩除去溶剂，以乙醇重结晶，得产物6.02g，总收率67.1％。实施例11

参照实施例1-10合成方法制备的新型酰基苯胺化合物的体外抗病毒评价包括如下步骤：

(1)细胞毒性测试：将常规培养方法培养的处于生长对数期的人宫颈癌Caski细胞(HPV16阳性)，用胰蛋白酶消化，使贴壁细胞脱落，用含10％胎牛血清的液体培养基配成悬液，接种在96孔板培养，1×10⁵个细胞/孔，置CO₂培养箱中孵育24h使细胞贴壁。将参照实施例1-10合成方法制备的新型酰基苯胺化合物溶于细胞培养用DMSO，再用液体培养基稀释配成一系列浓度递增的药物培养液，浓度依次为25，50，100，200，400μg/mL。倾去培养液，给药组加入按倍数关系配制的药物培养液100μL，对照组以培养液代替药物溶液，每个浓度4个副孔，CO₂培养箱中孵育72h。采用MTT法，以Reed-Muench法计算半数有毒浓度(TC_so)和最大无毒浓度(TC_o)。

(2)以Caski细胞为模型的参照实施例1-10合成方法制备的新型酰基苯胺化合物的药效评价：取参照实施例1-10合成方法制备的新型酰基苯胺化合物，用液体培养基配置最大无毒浓度的药物培养液，以该药物培养液处理细胞培养48小时后终止培养，提取细胞内的总RNA，Oligo(dT)₁₅为引物进行逆转录，最后以eDNA为模版，以E6，E7为目的基因，β-actin为内参基因，采用Real-timePCR法测定参照实施例1-10合成方法制备的新型酰基苯胺化合物作用于Caski细胞后，HPV16E6和E7mRNA在基因表达水平上的变化，判断其对HPV16病毒的抑制活性(实验结果见表1)。

表1新型酰基苯胺化合物的结构及抗病毒活性

Claims

1.一种酰基苯胺化合物，具有下述结构：

n＝3，4

当n＝3时，

R₂为氢或甲基；

当n＝4时，

R₂为氢或甲基。

2.酰基苯胺化合物在制备抗人乳头瘤病毒药物中的应用，其中所述的酰基苯胺化合物结构选自：

n＝1，2，3，4

当n＝1时，

R₁为①碳原子数≤18的直链或支链烷基；②有1个或2个羟基取代基，总碳原子数≤12的直链或支链烷基；③苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基或4-羟基苯基；

R₂为氢或碳原子数≤6的支链或直链酰基；

当n＝2时，

R₁为X是O，S原子；m＝0，1，2，3，4，5；

R₂为氢或甲基；

当n＝3时，

R₂为氢或甲基；

当n＝4时，

R₂为氢或甲基。