CN103582649B - 激活胞外基质蛋白质合成的新肽和包含其的美容组合物 - Google Patents

激活胞外基质蛋白质合成的新肽和包含其的美容组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN103582649B
CN103582649B CN201280009431.3A CN201280009431A CN103582649B CN 103582649 B CN103582649 B CN 103582649B CN 201280009431 A CN201280009431 A CN 201280009431A CN 103582649 B CN103582649 B CN 103582649B
Authority
CN
China
Prior art keywords
peptide
composition
skin
promoting agent
aging
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201280009431.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103582649A (zh
Inventor
C·达尔法拉
N·东洛热
J-M·博托
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ISP Investments LLC
Original Assignee
ISP Investments LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ISP Investments LLC filed Critical ISP Investments LLC
Publication of CN103582649A publication Critical patent/CN103582649A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103582649B publication Critical patent/CN103582649B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及用于在皮肤中合成胞外基质蛋白质的新的激活肽。本发明还涉及一种包括这种肽作为活性剂的美容组合物，涉及这种组合物用于增强胞外基质蛋白质的表达、延迟皱纹出现或减少皱纹、下垂和皮肤体积减少和皮肤脱水的应用。最后，本发明涉及用于延迟或治疗皮肤衰老和光老化迹象的美容护理方法。

Description

激活胞外基质蛋白质合成的新肽和包含其的美容组合物
发明领域
本发明涉及美容和皮肤药物活性物质以及包含其的组合物的领域。
本发明的目的是提供激活胞外基质蛋白表达的新的肽。
本发明还涉及在生理学合适的介质中包含这种肽作为活性剂的美容组合物。
本发明还涉及这种组合物用于增强胞外基质蛋白表达、延迟皮肤衰老迹象尤其是皱纹的出现、下垂和皮肤体积减少以及皮肤脱水和／或对抗其的应用，最后涉及试图延迟皮肤衰老和光老化的出现和／或治疗皮肤衰老和光老化的迹象的美容护理方法。
发明背景
皮肤包括许多层(真皮，真皮表皮连接，表皮)的覆盖器官。真皮是支撑皮肤的组织，包括水、弹性蛋白纤维和胶原纤维(70％真皮纤维)，被包围在蛋白聚糖的间质基质里。成纤维细胞是真皮的主要细胞成分，而且是胶原纤维和弹性蛋白纤维合成的来源。
糖胺聚糖确保胶原和弹性蛋白原纤维的构建以及水储存，由于其特别的吸水性。透明质酸是皮肤中最丰富的糖胺聚糖，而且是真皮的主要成分，但是还存在于表皮中的角质细胞周围。糖胺聚糖和胶原复合物是皮肤弹性和紧致性的主要参与者。
如同所有其他器官一样，皮肤也经受复杂的衰老生理过程。内在或序时衰老和外在衰老是不同的。内在衰老是遗传程序衰老和由于内在因素的生化改变的结果。在皮肤中，它特征在于细胞和胞外基质再生的减慢，导致真皮和表皮萎缩，干燥，弹性降低，以及细纹和皱纹的出现。
至于外在衰老，它是由于环境胁迫如污染，阳光，疾病，生活方式习惯等等造成。它的作用与内在衰老的作用在长期暴露于这些侵袭的区域中结合；这称为光老化。与光老化相关的主要改变包括：色素斑点的出现，以及导致皱纹出现的胶原纤维的减少和破坏。
鉴定能对抗皮肤衰老的活性物质的研究已经导致许多或多或少有效的活性物质在市场上出现。然而，鉴定能延迟皮肤衰老迹象或更有效地对抗皮肤衰老迹象的新化合物仍然是重要的。本发明更具体靶向的问题是鉴定能对抗位于胞外基质的主要皮肤衰老迹象的新的活性物质。
发明描述
发明人已经证明具有下面通式(I)的肽是好的胞外基质蛋白质合成活化剂：R1-(AA)n-X1-Pro-X2-Gly-Pro-X3-X4-(AA)p-R2。因此，这些肽适于对抗皮肤衰老和光老化。
根据本发明的肽特征在于：
-增强I型和Ill型胶原的表达
-增强纤连蛋白的表达，
-增强透明质酸的表达，
-减少成纤维细胞衰老的迹象。
“激活胞外基质蛋白的肽或活性物质”指通式(I)的任何肽，其能增加细胞中存在的胶原蛋白、纤连蛋白和透明质酸的量、或者通过直接或间接调节基因表达增加蛋白质合成或通过其他生物学进程如蛋白质稳定或信使RNA转录的稳定增加分泌的胶原蛋白，纤连蛋白和透明质酸的量。
“成纤维细胞衰老的迹象”指与细胞衰老表型相关的生化标记的表达谱。
皮肤指构成皮肤，粘膜和皮肤附件包括毛发，睫毛和眉毛的所有覆盖组织。
因此，本发明首先涉及通式(I)的肽
R1-(AA)n-X1-Pro-X2-Gly-Pro-X3-X4-(AA)p-R2
其中
X1表示甘氨酸或丙氨酸或缬氨酸，
X2表示甘氨酸或丙氨酸或缬氨酸，
X3表示天冬酰胺或赖氨酸或谷氨酰胺或没有氨基酸，
X4表示苯丙氨酸或酪氨酸或没有氨基酸，
AA表示任何氨基酸，n和p是0与2之间的整数，
R1表示N-末端氨基酸的伯胺官能，-NH2，其中2个氢原子中的一个被饱和或不饱和的C1到C30烃基链取代、或者被酰基型基团(R-CO-)取代或者被苯甲酰基、甲苯磺酰基或卞氧羰基型的芳基取代，其中R基团是饱和或不饱和的C1到C30烃基链，优选甲基，
R2表示C-末端氨基酸的羧基官能的羟基，-OH，其中氢原子可以被C1到C30烃基链、或NH2、NHY或NYY基团取代，其中Y表示C1到C4烃基链，
通式(I)的所述序列由5到11个氨基酸残基组成并能够是盐的形式。
根据本发明的一个特别优选的实施方案，肽是如下的序列：
(SEQIDno1)：Ala-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2
(SEQIDno2)：Val-Pro-Ala-Gly-Pro
(SEQIDno3)：Val-Pro-Gly-Gly-Pro-NH2
(SEQIDno4)：Gly-Pro-Ala-Gly-Pro
(SEQIDno5)：Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2
(SEQIDno6)：Lys-Gly-Ala-Pro-Gly-GLy-Pro-Asn-Tyr-NH2
根据一个特别有利的实施方案，肽相应于序列SEQIDno4。
根据另一个特别有利的实施方案，肽相应于序列SEQIDno5。
构成本发明的肽并以术语AA指示的氨基酸可以是L-和D-同分异构构型。优选地，氨基酸是L型的。
术语“肽”指彼此通过肽键连接的两个或更多个氨基酸的链。
“肽”还指如上所述本发明的天然或合成肽，或者至少它的片段之一，无论它是通过蛋白质水解或合成获得的，或者任何天然或合成肽，其序列完全或部分由上述肽的序列组成。
为了提高对降解的抗性，使用保护形式的本发明肽是必需的。通过用酰基型的R1基团(R-CO-)取代(其中R基团是饱和或不饱和的C1到C30烃基链)、优选甲基型的R1基团或者通过用苯甲酰基、甲苯磺酰基或卞氧羰基型的芳基取代可以保护N-末端氨基酸的伯胺官能。
优选地，通过用C1到C30烃基链型的R2基团、或NH2、NHY或NYY基团取代(其中Y表示C1到C4烃基链)保护C-末端氨基酸的羧基官能。
可以在N-末端或C-末端或在两个末端对序列SEQIDno1到SEQIDno6的本发明的肽进行保护。
可以通过典型化学合成(以固相或液体均相)或通过从组成氨基酸的酶促合成(Kullmanetal.J.Biol.Chem.，1980，vol.225，p.8234)获得本发明的通式(I)的肽。
本发明的肽可以是天然或合成来源的。优选地，根据本发明，肽是合成来源的，通过化学合成获得。
根据本发明，活性物质可以是单个肽或肽的混合物。
本发明的肽有利地溶解于一种或多种生理学合适的溶剂中，如水，甘油，乙醇，丙二醇，丁二醇，二丙撑二醇，乙氧基化或丙氧基化二甘醇，环状多元醇或这些溶剂的任何混合物。
“生理学合适”指适合用于与人皮肤或皮肤附件接触、同时没有毒性、不耐受性、不稳定性、过敏反应或其他不利作用风险的溶剂或介质。
稀释的肽然后通过无菌过滤进行消毒。
这种稀释步骤后，肽可以包封或包含在美容载体中如脂质体或用于美容领域的任何其他微囊中或吸附于粉状有机聚合物、矿物载体如滑石和膨润土，更常见地溶解于或连接到任何生理学合适的载体。
第二，本发明涉及一种美容组合物，其包括于生理学合适介质中的通式(I)的肽作为激活皮肤中胞外基质蛋白质合成的活性物质。
根据本发明的一个有利的实施方案，相对于最终组合物的总重量，所述活性物质以0.0005到500mg／kg、优选0.01到5mg／kg的浓度存在于组合物中。
该浓度范围表示获得所需分子效应也即激活I型和Ill型胶原、纤连蛋白和透明质酸的表达所需的活性物质的量。
优选地，本发明的组合物是适于局部施用的形式，其包括生理学上适于皮肤的介质。
“局部施用”指本发明活性物质或者包含它的组合物应用或涂布于皮肤表面。
这些组合物尤其可以含水、水醇或含油溶液；水包油或油包水或多重乳液、含水或无水凝胶、胶体的形式。这些组合物还可以是乳剂、悬浮液或粉末的形式，适于应用于皮肤、粘膜、唇和／或皮肤附件。这些组合物可以是更多或更少的流体并具有乳剂、洗液、乳、血清、润发油、乳剂、糊剂或泡沫的形态。它们也可以是固体形式如棒或以气溶胶形式应用于皮肤。它们可以用作护理产品和／或化妆产品用于皮肤。
所有这些组合物另外包括通常用于规定应用领域的任何添加剂，以及它们配制所需的助剂，如助溶剂(乙醇，甘油，苯甲醇，湿润剂......)，增稠剂，稀释剂，乳化剂，抗氧化剂，着色剂，防晒霜，色素，填料，防腐剂，香料，气味吸附剂，精油，微量元素，必需脂肪酸，表面活性剂，成膜聚合物，化学或矿物过滤物，水合剂或热水等等。例如，可以提及的是天然型的水溶性聚合物如多糖或多肽，甲基纤维素或羟丙基纤维素型的纤维素衍生物，或合成聚合物，泊洛沙姆，卡波姆，硅氧烷，PVA或PVP，尤其是ISP公司销售的聚合物。
在任何情况下，本领域技术人员将确信选择的这些助剂以及它们的比例以便不抵消本发明组合物中探索到的有利特性。这些助剂可以例如以组合物总重量的0.01到20％的浓度范围存在。当本发明的组合物是乳液时，相对于组合物的总重量，脂肪相可以是5到80％重量，优选5到50％重量。可以从考虑的领域中通常使用的那些中选择组合物中使用的乳化剂和助乳化剂。例如，相对于组合物的总重量，它们可以0.3到30％重量的比例使用。
当然，本发明的活性物质可以单独或者与其他的活性物质联合使用。
有利地，根据本发明可以使用的组合物另外包括至少一种意欲增强本发明活性物质在预防和改善皮肤衰老迹象方面的作用的其他活性物质或者使扩展考虑的组合物的特性范围成为可能的另一种活性物质。
以非限制性方式，引用下面的组分类别是可能的：再生、抗衰老、抗皱、滋润、抗自由基、抗糖化、水合、抗细菌(antibactériens)、抗真菌、角质层分离、肌肉放松、剥落和紧致剂，刺激真皮大分子合成或能量代谢或微循环或指甲或毛发生长的物质，调节表皮分化或色素沉着的物质，金属蛋白酶抑制剂或防晒霜和阳光过滤物。
在本发明的一个特定实施方案中，除了本发明的肽以外，本发明的组合物还将包括：
-至少一种细胞色素C激活化合物，和／或
-至少一种水合化合物，如水通道蛋白激活化合物，和／或
-至少一种sirtuin激活化合物，和／或
-至少一种增强细胞粘附的化合物，和／或
-至少一种增加基质蛋白质如胶原、纤连蛋白、层粘连蛋白、糖胺聚糖生产的化合物，和／或
-至少一种调节蛋白酶体活性的化合物，和／或
-至少一种调节生理节奏的化合物，和／或
-至少一种调节HSP蛋白的化合物，和／或
-至少一种增强细胞能量的化合物，和／或
-至少一种调节皮肤色素沉着的化合物，和／或
-至少一种辅酶Q10激活化合物，和／或
-至少一种改善屏障功能的化合物，如转谷氨酰胺酶或HMG-CoA还原酶激活化合物，和／或
-至少一种线粒体保护化合物。
所述上述化合物可以是天然来源的，如植物的肽水解物，或合成来源的，如肽。
与它们的功能无关，组合物中与本发明的活性物质相关的其他活性物质可以具有非常多样的化学结构。以非限制性方式，引用肽，维生素C及其衍生物，B组维生素，DHEA(双氢表雄甾酮)，植物甾醇，水杨酸及其衍生物，类视黄醇，类黄酮，糖胺，吡咯，金属盐，植物来源的肽提取物或聚合物是可能的。
第三，本发明涉及一种美容组合物用于增强通过皮肤细胞的胞外基质蛋白质合成的应用，该美容组合物包括作为活性物质的通式(I)的肽。
更具体地，本发明的肽用于增强通过人皮肤的成纤维细胞的胶原I和III以及纤连蛋白的合成。
根据本发明的这个特定实施方案，通式(I)的肽用于增加真皮密度，从而增加皮肤的紧致度，以延迟或减少面部线条的下垂，真皮体积减少，皮肤变薄，张力缺乏，细纹，深皱纹和真皮萎缩。
第四，本发明涉及一种美容组合物用于增强通过成纤维细胞和角质细胞的透明质酸的表达的应用，该美容组合物包括作为活性物质的通式(I)的肽。
根据本发明的这个特定的实施方案，通式(I)的肽用于增加所有皮肤层的容量，用于保持水分和延迟或减少与衰老相关的皮肤脱水。
第五，本发明涉及一种美容组合物用于延迟皮肤细胞衰老的出现或减少皮肤细胞衰老的应用，该美容组合物包括作为活性物质的通式(I)的肽。
短语“延迟真皮细胞衰老的出现或减少真皮细胞衰老”指，根据本发明的该有利方面，本发明的肽降低了人成纤维细胞中衰老标记的表达，其中已经通过FOXO3a基因的消退诱导了衰老。
第六，本发明涉及一种延迟和／或治疗皮肤衰老和光老化迹象的美容护理方法，其特征在于把本发明的组合物局部应用于待处理的皮肤。
“皮肤衰老征象”指皮肤和皮肤附件由于衰老而出现的外部表观的变化，如例如皮肤变薄，下垂，水合作用减少和张力缺乏，深皱纹和细纹，紧致度和色调丧失，真皮萎缩或由于暴露于UV辐射而致的任何其他内部皮肤退化。
根据用于说明性和非限制性目的而提供的以下实施例，本发明的其他优点和特征将变得更清楚。
实施例1：肽SEQIDn o 4和n o 5对人成纤维细胞中胶原I，胶原III，前胶原，纤连蛋白 和透明质酸表达的激活作用的证明
本研究的目的是确定肽SEQIDno4和no5与肽SEQIDno4对人成纤维细胞中以下胞外基质蛋白质表达的影响：胶原I，胶原III，前胶原，纤连蛋白和透明质酸。为此，对获自真皮的正常人成纤维细胞培养物进行特异标记。
特异标记方案：用肽SEQIDno5或肽SEQIDno4以0.5％，1％和／或3％的终浓度(基于40mg／kg原液)处理培养物中的人成纤维细胞24，48和／或72小时。然后洗涤细胞，用冷甲醇4℃固定4分钟(用于胶原I，胶原III和透明质酸标记)或用甲醛以3.7％在室温固定10分钟(用于前胶原和纤连蛋白标记)。在存在特异性兔胶原I多克隆抗体(Rockland，Ref：600-401-103-0.5)，特异性兔胶原III多克隆抗体(Rockland，Ref：600-401-105-0.5)，特异性小鼠前胶原多克隆抗体(Millipore，Ref：MAB1912)，特异性兔纤连蛋白多克隆抗体(Sigma，Ref：F-3648)，然后偶联荧光染料的抗兔二抗(Invitrogen，Ref：A21206)或偶联荧光染料的抗大鼠抗体(Invitrogen，A11006)时孵育细胞。为标记透明质酸，在存在特异性生物素化蛋白(Coger，Ref：4007631A)，然后在存在偶联荧光染料的链霉抗生物素蛋白(Invitrogen，Ref：S32354)时孵育细胞。然后在落射荧光显微镜(NikonEclipseE600显微镜)下检验细胞。
结果：在所有的检测条件下，在通过肽SEQIDno5或肽SEQIDno4处理的成纤维细胞中，观察到比对照条件下更强的荧光。
结论：肽SEQIDno5和SEQIDno4刺激人真皮成纤维细胞的胶原I，胶原III，前胶原，纤连蛋白和透明质酸的表达。
实施例2：证明人皮肤活组织检查中肽SEQIDn o 5对胶原I，胶原III，前胶原和透 明质酸表达的激活作用
本研究的目的是确定肽SEQIDno5对人皮肤中以下胞外基质蛋白质表达的影响：胶原I，胶原III，前胶原，纤连蛋白和透明质酸。为此，对离体培养的人皮肤样本进行特异标记。
方案：人皮肤样本置于空气／液体界面培养。肽SEQIDno5以0.5％，1％或3％的终浓度局部应用于样本(使用40mg／kg的原液)，然后样本于37℃孵育24，48和／或72小时。
这些皮肤样本然后用甲醛固定，然后包埋到石蜡中或者固定并包埋到OCT中，然后-20℃冷冻。然后产生4μm厚的切片(6μm用于冷冻切片)。
暴露特异性位点后，对包埋到石蜡中的样本上的胶原I和胶原III进行标记。使用特异性兔胶原I多克隆抗体(Rockland，Ref：600-401-103-0.5)，特异性兔胶原III多克隆抗体(Rockland，Ref：600-401-105-0.5)，然后用偶联荧光染料的抗兔二抗(Invitrogen，Ref：A21206)进行免疫标记。为标记透明质酸，在存在特异性生物素化蛋白(Coger，Ref：4007631A)，然后在存在偶联荧光染料的链霉抗生物素蛋白(Invitrogen，Ref：S32354)时孵育细胞。
在用冷丙酮固定10分钟以后，对包埋到OCT中的样本上的前胶原进行免疫标记。使用特异性小鼠前胶原多克隆抗体(Millipore，Ref：MAB1912)，然后用偶联荧光标记的抗大鼠二抗(Invitrogen，A11006)进行免疫标记。
然后在落射荧光显微镜(NikonEclipseE600显微镜)下检验细胞。
结果：显微镜观察显示用肽SEQIDno5处理的皮肤样本的真皮上的荧光更强烈。在免疫标记透明质酸的情况中，用肽SEQIDno5处理的皮肤样本的表皮也观察到荧光增强。
结论：肽SEQIDno5刺激真皮中的胶原I，胶原III，前胶原的表达，并刺激人真皮和表皮中透明质酸的表达。
实施例3：通过实时PCR证实肽SEQIDn o 5对胶原I信使RNA表达的激活作用
本研究的目的是确定肽SEQIDno5对人成纤维细胞中胶原I信使RNA表达的影响。为此，通过实时PCR研究胶原I的表达。
方案：用肽SEQIDno5以0.5％和1％的终浓度(使用40mg／kg的原液)处理培养物中的人成纤维细胞24，48和72小时。使用提取试剂盒(QIAGEN)提取总RNA，然后用含RNase抑制剂的特定试剂盒(AppliedBiosystems)进行反转录。使用特定胶原ITaqMan基因表达分析(AppliedBiosystem，Hs99999901_sl)在热循环仪上进行实时PCR，而且特定的18STaqMan基因表达分析用作内源对照(AppliedBiosystem，Hs00164004_ml)。通过比较性Ct方法对胶原I信使RNA的表达进行相对定量(Ct，阈值循环，是扩增曲线与阈值线之间的交点)。
结果／结论：肽SEQIDno5刺激人成纤维细胞中胶原I信使RNA的表达。
实施例4：研究存在肽SEQIDn o 5时衰老标记P16的表达
本研究的目的是确定肽SEQIDno5对P16表达的影响，P16是随着年龄在皮肤中表达增加的蛋白质。P16是涉及细胞循环的负调节的蛋白质，其已经被描述为细胞衰老的可靠标记(BrookesS.etal.ExperimentalCellResearch298,2004)。
方案：用肽SEQIDno5以0.5％和1％的终浓度(使用40mg／kg的原液)处理培养的人成纤维细胞48小时。根据Shandon细胞制备系统试剂盒(ThermoScientific，Ref：7401150)制备细胞。
细胞然后用甲醛固定然后包埋到石蜡中。然后产生4μm切片。在暴露特异性位点以后，对包埋到石蜡中的细胞上的p16进行标记。使用特异性小鼠p16多克隆抗体(Santa-Cruz，Ref：sc81157)，然后用偶联荧光染料的抗小鼠二抗(Invitrogen，Ref：A21202)进行免疫标记。然后在落射荧光显微镜(NikonEclipseE600显微镜)下检验细胞。
结果：显微镜观察显示用肽SEQIDno5处理的细胞中核荧光强度较弱。
结论：肽SEQIDno5降低人成纤维细胞中p16衰老标记的表达。
实施例5：肽SEQIDn o 5逆转成纤维细胞中诱导的细胞衰老的证实
本研究的目的是确定肽SEQIDno5对衰老成纤维细胞的影响，该衰老成纤维细胞中FOXO3a基因的消退已经诱导了衰老。相对于它们的衰老状态，这些细胞过表达β-半乳糖苷酶。
FOXO3a是细胞寿命中涉及的一种Forkhead转录因子。在皮肤中，FOXO3a的负调节加速正常人成纤维细胞的衰老(HyunKyoungK.etal.J.ofGerontol.，2005，vol.60Ano1，pages4-9)。这种特性用于有利于通过特异性干扰RNA(siRNA)阻断FOXO3a表达诱导人成纤维细胞衰老。
方案：利用LipofectamineTmRNAiMAX(Invitrogen，Ref：13778-075)转染技术，通过用FOXO3a的特异性siRNA以25nM的终浓度处理，使培养中的人成纤维细胞衰老。产生未经处理的对照。通过肽SEQIDno5以1％的终浓度(使用40mg／kg的原液)平行处理成纤维细胞48小时。
漂洗细胞并在固定缓冲液(0.2％戊二醛，2％甲醛)中固定。然后用于40mM柠檬酸／磷酸盐(pH6)，5mMK3FeCN6，5mMK4FeCN6，150mMNaCl和2mMMgCl2中的1mg／mL的X-Gal溶液在37℃、无CO2孵育细胞24小时。然后在白色光显微镜(NikonEclipseE600显微镜)下检验细胞。
结果：具有特异性B-半乳糖苷酶活性的衰老细胞染色显示蓝色。用FOXO3a的特异性siRNA处理的细胞显示与衰老诱导相关的β-半乳糖苷酶活性增加，包括染色显示蓝色的细胞数目增加。用FOXO3a的特异性siRNA和肽SEQIDno5以1％处理的细胞显示β-半乳糖苷酶活性降低，包括染色显示蓝色的细胞数目减少。
结论：肽SEQIDno5能降低人成纤维细胞中诱导的衰老表型。
实施例6：组合物的制备
1-抗衰老面霜：
于65-70℃制备和融解A相。于65-70℃加热C相。正好在C中乳化A之前添加B相到A相中。于大约45℃，通过添加D相中和卡波姆。在大约30℃，然后轻轻搅拌添加E相并冷却直到达到25℃。如果需要，然后添加F相。

Claims (17)

1.如下序列的肽：
(SEQIDn°5):Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2。
2.权利要求1的肽，特征在于其溶解于一或多种生理学合适的溶剂中，所述溶剂选自水，甘油，乙醇，丙二醇，丁二醇，二丙撑二醇，乙氧基化或丙氧基化二甘醇，环状多元醇或这些溶剂的任何混合物。
3.美容组合物，其包含存在于生理学合适介质中的至少权利要求1或2的肽，其作为激活皮肤中胞外基质蛋白质合成的活性剂。
4.权利要求3的组合物，特征在于相对于最终组合物的总重量，所述肽以0.0005到500mg/kg的浓度存在。
5.权利要求4的组合物，特征在于相对于最终组合物的总重量，所述肽以0.01到5mg/kg的浓度存在。
6.权利要求3到5中任一项的组合物，特征在于其用于局部施用。
7.权利要求3到5中任一项的组合物，特征在于其还包含至少一种其他的活性剂。
8.权利要求6的组合物，特征在于其还包含至少一种其他的活性剂。
9.权利要求7的组合物，特征在于所述其他的活性剂选自维生素C、B族维生素、DHEA(双氢表雄甾酮)、植物甾醇、水杨酸、类视黄醇、类黄酮、糖胺、吡咯、金属盐、植物来源的肽提取物、防晒霜和阳光过滤物质。
10.权利要求8的组合物，特征在于所述其他的活性剂选自维生素C、B族维生素、DHEA(双氢表雄甾酮)、植物甾醇、水杨酸、类视黄醇、类黄酮、糖胺、吡咯、金属盐、植物来源的肽提取物、防晒霜和阳光过滤物质。
11.一种组合物用于增强皮肤细胞的胞外基质蛋白质合成的美容应用，该组合物包括在生理学合适的介质中的作为活性剂的权利要求1或2的肽。
12.一种组合物用于增强成纤维细胞的I型和III型胶原蛋白以及纤连蛋白合成的美容应用，该组合物包括在生理学合适的介质中的作为活性剂的权利要求1或2的肽。
13.权利要求12的组合物的美容应用，用于增加真皮密度和皮肤弹性、和延迟或减少真皮体积减少、皮肤变薄、张力缺乏、细纹和深皱纹。
14.一种组合物用于增强皮肤成纤维细胞和角质细胞的透明质酸表达的美容应用，该组合物包括在生理学合适的介质中的作为活性剂的权利要求1或2的肽。
15.权利要求14的组合物的美容应用，用于增加所有皮肤层的容量用于保持水分和延迟或降低与衰老相关的皮肤脱水。
16.一种组合物用于延迟皮肤细胞衰老出现或减少皮肤细胞衰老的美容应用，该组合物包括在生理学合适的介质中的作为活性剂的权利要求1或2的肽。
17.一种为了延迟和/或处理皮肤衰老和光老化迹象的美容护理方法，其特征在于把权利要求3到10中任一项的组合物局部应用于待处理的皮肤。
CN201280009431.3A 2011-02-18 2012-02-17 激活胞外基质蛋白质合成的新肽和包含其的美容组合物 Active CN103582649B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1100497A FR2971784B1 (fr) 2011-02-18 2011-02-18 Nouveaux peptides activateurs de la synthese des proteines de la matrice extracellulaire et compositions cosmetiques les comprenant
FR1100497 2011-02-18
PCT/FR2012/000064 WO2012140331A1 (fr) 2011-02-18 2012-02-17 Nouveaux peptides activateurs de la synthese des proteines de la matrice extracellulaire et compositions cosmetiques les comprenant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103582649A CN103582649A (zh) 2014-02-12
CN103582649B true CN103582649B (zh) 2016-06-01

Family

ID=44060491

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280009431.3A Active CN103582649B (zh) 2011-02-18 2012-02-17 激活胞外基质蛋白质合成的新肽和包含其的美容组合物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US8809276B2 (zh)
EP (1) EP2675825B1 (zh)
JP (1) JP6044902B2 (zh)
KR (1) KR102012527B1 (zh)
CN (1) CN103582649B (zh)
ES (1) ES2540454T3 (zh)
FR (1) FR2971784B1 (zh)
HK (1) HK1194397A1 (zh)
WO (1) WO2012140331A1 (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6336781B2 (ja) * 2013-03-27 2018-06-06 ロート製薬株式会社 新規ペプチド
CN104072582B (zh) * 2013-03-27 2020-07-28 乐敦制药株式会社 新型肽
US9872825B2 (en) 2013-03-29 2018-01-23 Osaka University Peptide with anti-aging effect and use thereof
JP7016117B2 (ja) 2016-01-18 2022-02-21 コスメディ製薬株式会社 コラーゲン化粧品
FR3062853A1 (fr) * 2017-02-14 2018-08-17 Laboratoire Shigeta Utilisation de 2,5-dicetopiperazines en tant qu’agents cosmetiques
EP3831358A1 (en) * 2019-12-04 2021-06-09 Lipotrue, S.L. Peptides and compositions for use in cosmetics and medicine
AU2020415517A1 (en) * 2019-12-27 2022-07-07 Suntory Holdings Limited Composition containing peptide, production method thereof, and use of peptide
CN114010526A (zh) * 2021-12-01 2022-02-08 宇肽生物(东莞)有限公司 一种抗衰多肽组合物及其应用
WO2023119230A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 L'oreal Coagulation pathway and nicotinamide-adenine dinucleotide pathway modulating compositions and methods of their use

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4703107A (en) * 1983-05-16 1987-10-27 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Water-soluble acylated derivatives of peptides or amino acids, their preparation and their use

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5618948A (en) * 1979-07-24 1981-02-23 Ajinomoto Co Inc Peptide derivative
US5688489A (en) * 1995-09-15 1997-11-18 Resolution Pharmaceuticals, Inc. Non-receptor mediated imaging agents
WO2002064734A2 (en) * 2000-12-19 2002-08-22 Palatin Technologies, Inc. Identification of target-specific folding sites in peptides and proteins
US20070054298A1 (en) * 2005-08-12 2007-03-08 Kent Kirshenbaum Methods for enzyme-mediated coupling of oligomers
WO2007087131A2 (en) * 2006-01-05 2007-08-02 The Johns Hopkins University Peptide prodrugs
FR2940971B1 (fr) * 2009-01-09 2011-02-18 Isp Investments Inc Nouveaux peptides anti-age et composition cosmetique et/ou pharmaceutique les contenant

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4703107A (en) * 1983-05-16 1987-10-27 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Water-soluble acylated derivatives of peptides or amino acids, their preparation and their use

Also Published As

Publication number Publication date
CN103582649A (zh) 2014-02-12
FR2971784A1 (fr) 2012-08-24
ES2540454T3 (es) 2015-07-09
KR102012527B1 (ko) 2019-08-20
FR2971784B1 (fr) 2015-01-02
US20140044655A1 (en) 2014-02-13
JP6044902B2 (ja) 2016-12-14
EP2675825B1 (fr) 2015-04-29
US8809276B2 (en) 2014-08-19
HK1194397A1 (zh) 2014-10-17
EP2675825A1 (fr) 2013-12-25
WO2012140331A1 (fr) 2012-10-18
JP2014510052A (ja) 2014-04-24
KR20140096989A (ko) 2014-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103582649B (zh) 激活胞外基质蛋白质合成的新肽和包含其的美容组合物
CN102958503B (zh) Sirtuin 6激活肽以及包含所述激活肽的化妆品或药物组合物
CN102762189B (zh) 包含长角豆提取物作为促进水通道蛋白表达活性剂的化妆品和/或药物组合物
JP2018537455A (ja) 低分子ｒｎａオニユリ抽出物を含む局所組成物および加齢に関する皮膚の徴候を低減するための美容ケア方法
Pageon et al. Reconstructed skin modified by glycation of the dermal equivalent as a model for skin aging and its potential use to evaluate anti-glycation molecules
US20040142873A1 (en) Cosmetic or dermatological use of peptides for promoting adhesion between skin cells
CN102272149A (zh) 新的抗衰老肽及含有所述肽的化妆品和/或药物组合物
JP2017530116A (ja) スキンケア組成物の製造方法
US20040141939A1 (en) Cosmetic or dermatological use of peptides for promoting adhesion between skin cells
CN104203206B (zh) 包含由大豆和酵母的肽提取物的组合组成的协同trf2蛋白活化系统的化妆品组合物及其用途
Hajem et al. The regulatory role of the tetrapeptide A c SDKP in skin and hair physiology and the prevention of ageing effects in these tissues–a potential cosmetic role
EP3532024B1 (en) Cosmetic use and method for improving physiological functions of the skin by increasing the expression of ubiad1
JP5858482B2 (ja) スルビビンを調節する新規の抗加齢ペプチドおよびこれを含む組成物
CN102947323B (zh) 新的胱天蛋白酶-14激活肽及包含所述激活肽的组合物
CN107405278B (zh) 序列为his-d-trp-ala-trp-d-phe-lys-nh2的肽用于减少或延缓细胞衰老的出现和皮肤老化的迹象的用途
CN103201282A (zh) 新型的皮肤桥蛋白活化肽和包括其的化妆品组合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1194397

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1194397

Country of ref document: HK