CN103566006B - 一种中药组合物在制备破坏细菌生物膜的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药组合物在制备破坏细菌生物膜的药物中的应用。该中药组合物是由连翘、金银花、麻黄、苦杏仁等药味组成，实验证实，该中药组合物可以破坏细菌生物被膜，有利于杀灭细菌，也可以提高普通抗生素的疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备破坏细菌生物膜的药物中的应用，属中药应用领域。
背景技术
超过半数的感染性疾病都是由与人类息息相关的条件致病菌引起的，如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, S.a）和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, P.a)等，这些致病菌常能导致极为严重的慢性感染性疾病，不论是在生物材料相关的感染中，还是在其他的一些慢性感染性疾病如牙周炎及相关疾病、难治性呼吸道感染、前列腺炎等，都能发现上皮细胞表面多聚物层层包绕的致病菌组成的膜状物。这些膜状物就是细菌生物被膜（Biofilm, BF）。据美国NIH的统计，约80%人类细菌感染性疾病是由BF的形成引起的，虽然应用各种抗感染药，病原菌仍持续存在，导致慢性持续性感染或感染反复发作，是临床上一大难题。
BF是细菌为适应环境的一种生长方式，由于生物被膜的形态与正常菌落区别很大, 且体外常规培养下生物被膜会消失，电镜标本的制作过程又易使这些含水份的多糖基质压缩， 故人们很长时间未认识生物被膜。1978年，才有人首先提出生物被膜的相关理论。BF附着于组织或固体表面，由细菌分泌的胞外多糖复合物将自身克隆聚集包裹于其中而形成的一层膜样物。BF中水份含量可高达97%，除了水和细菌外，BF还含有大分子多聚物，如蛋白质，多糖，DNA，RNA，肽聚糖，脂和磷酯等，同时还含有吸附的营养物质和代谢产物。
BF具有极强的耐药性及免疫逃避性，近年来人们针对BF形成的药物渗透屏障，采取了联合用药方法，即用一种药物破坏BF，另一种药物进入BF杀灭细菌。由于BF的顽固性，给药剂量很难控制，如果用药剂量低，不能完全去除BF，会诱导菌株的耐药性，但是提高抗生素的用量又涉及药物的毒性问题。
中国专利03143211.5公开了该中药组合物具有抗病毒的作用，可应用于流行性感冒，但该专利未提及该中药组合物破坏细菌生物膜的作用。
本发明是在第03143211.5号的基础上进行的改进发明，在此全文引用该专利文件记载的内容。
发明内容
本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备破坏细菌生物膜的药物中的应用。
本发明所述中药可以被有相同或相似功效的中药代替，并且这些药材均可按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》进行炮制。
本发明目的是提供一种中药组合物在制备治疗破坏细菌生物膜的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：
连翘210-280，金银花210-280，板蓝根210-280，大黄45-55，广藿香75-100，绵马贯众210-280，红景天75-100，薄荷脑5.5-8.5，麻黄75-100，苦杏仁75-100，鱼腥草210-280，甘草75-100，石膏210-280。
优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成:
连翘210，金银花280，板蓝根210，大黄55，广藿香75，绵马贯众280，红景天75，薄荷脑8.5，麻黄75，苦杏仁100，鱼腥草210，甘草 100，石膏 210。
或：
连翘280，金银花210，板蓝根280，大黄45，广藿香100，绵马贯众210，红景天75，薄荷脑5.5，麻黄100，苦杏仁75，鱼腥草280，甘草75，石膏280。
或：
连翘258，金银花258，板蓝根258，大黄50，广藿香88，绵马贯众258，红景天88，薄荷脑7.8，麻黄88，苦杏仁88，鱼腥草258，甘草88，石膏258。
优先地，所述中药组合物所用原料药中，麻黄可以为蜜麻黄，苦杏仁可以为炒苦杏仁。
本发明还提供了所述中药组合物的活性成分由以下步骤制成:
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分。
本发明药物的剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。
为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等（范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社 . 1997年12月第1版 .各剂型记载的辅料）。
其中胶囊剂的制备方法，是由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装入胶囊，即得。
其中颗粒剂的制备方法，是由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
优选的颗粒剂的制备方法为：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的水滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加95%乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏滤液；
(5) 将步骤（4）所得清膏滤液与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.25-1.35的稠膏，备用；
(6) 将步骤(5)所得稠膏加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
本发明药物的其他剂型按比例称取原料药后，采用常规的制备方法制备，例如，范碧亭《中药药剂学》（上海科学出版社1997年12月第1版）记载的制备工艺，制成药剂学可接受的常规剂型。
该中药组合物可以提高抗生素的抗菌疗效，该中药组合物可有效破坏细菌生物膜或者渗透入细菌生物膜杀灭细菌。
为证实本发明药物组合物破坏细菌生物膜的作用效果，用按实施例1制得的胶囊剂（以下称本发明药物），进行了如下实验：
实验例1：本发明药物破坏细菌生物膜的作用
1、材料和试剂
1.1菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, S.a, ATCC 25923)。
1.2 药物
本发明药物（按照实施例1的方法制备）内容物，由石家庄以岭药业股份有限公司提供，每克含生药9.78g，进行离体实验时，配制浸膏粉浓度为12500ug/ml共10ml，静止12小时后，取上清液，倍比稀释，共10个浓度进行实验；注射用青霉素钠，由华北制药股份有限公司生产。
1.3 试剂与仪器
胰蛋白胨、酵母提取物（英国OXOID公司），结晶紫（美国AMRESCO公司），微生物活性检测试剂盒（日本同仁化学研究所），LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability试剂盒（美国Molecular Probes公司），戊二醛（上海化学试剂公司），自动洗板机（美国伯腾仪器有限公司），恒温恒湿培养箱（上海森信实验仪器有限公司），酶标仪（美国伯乐公司），激光共聚焦显微镜（日本奥林巴斯公司），扫描电子显微镜（日本日立公司）。
2、试验方法
2.1 最小抑菌浓度检测：
将本发明药物(200000–100ug/ml)和青霉素(2–0.001ug/ml)分别进行倍比稀释，加入96孔圆底培养板中，使板中的细菌浓度为OD600=0.05。将96孔板置于37℃培养24小时，每孔取菌液，接种于LB固体培养基，37℃培养24小时，观察无细菌生长的最小浓度即是药物最小抑菌浓度。
2.2 药物对S.a生物膜形成的影响：
观察本发明药物对S.a生物膜形成过程的作用，将本发明药物（12500–24.4ug/ml）和青霉素（2–0.004ug/ml）分别用LB培养液进行倍比稀释，加入96孔圆底培养板与细菌（细菌浓度为OD600=0.05）混合，阴性对照加入相同体积的LB培养液，终体积200ul，每个浓度4个复孔，置于37℃培养24小时。用0.01M的PBS缓冲液清洗2次，去掉悬浮细菌。生物膜内所有的物质及活细菌数量分别通过结晶紫（Crastal Violet, CV）及WST染色法对每孔细菌生物膜的生物量进行测定。
2.3 药物对成熟S.a生物膜的影响：
成熟S.a生物膜的培养：将S.a用含葡萄糖的LB培养液稀释至OD600=0.05，加入96孔圆底培养板，每孔200ul，37℃培养24小时，形成S.a生物膜。
弃培养基，洗去悬浮细菌，将本发明药物（12500–24.4ug/ml）和青霉素（20–0.04ug/ml）分别用含葡萄糖的LB培养液进行倍比稀释，加入96孔板，阴性对照加入相同体积含葡萄糖的LB培养液，每孔200ul，每个浓度4个复孔，置于37℃培养24小时。用0.01M的PBS缓冲液清洗2次，去掉悬浮细菌。利用CV染色和WST检测方法对每孔细菌生物膜的生物量进行测定。
2.4用扫描电子显微镜观察药物对S.a生物膜的影响：
药物对S.a生物膜形成的影响：本发明药物（浓度12500ug/ml浸膏粉上清倍比稀释）和青霉素（终浓度2ug/ml）分别与细菌（细菌浓度为OD600=0.05）混合，共培养于24孔板，阴性对照加入相同体积的LB培养液，终体积500ul，置于37℃培养24小时。
药物对成熟S.a生物膜的影响：将S.a用含葡萄糖的LB培养液稀释至OD600=0.05，加入24孔培养板，每孔500ul，37℃培养24小时，形成S.a生物膜。弃上层培养基，洗去悬浮细菌，将本发明药物（12500ug/ml）和青霉素（20ug/ml）分别用含葡萄糖的LB培养液稀释，加入有成熟细菌生物膜的24孔板中，空白对照加入相同体积含葡萄糖的LB培养液，每孔500ul，置于37℃培养24小时。
各样本经2.5%戊二醛固定，乙醇逐级脱水，真空冷冻干燥、喷金，扫描电子显微镜下拍照观察。
用激光共聚焦显微镜观察药物对S.a生物膜的影响
药物对S.a生物膜形成的影响：本发明药物（终浓度12500ug/ml浸膏粉上清倍比稀释）和青霉素（终浓度2ug/ml）分别与细菌（细菌浓度为OD600=0.05）混合，共培养于35mm的小皿中，阴性对照加入相同体积的LB培养液，终体积2000ul，置于37℃培养24小时。
药物对成熟S.a生物膜的影响：将S.a用含葡萄糖的LB培养液稀释至OD600=0.05，接种于35mm的小皿中，每孔2000ul，37℃培养24小时，形成S.a生物膜。弃上层培养基，洗去悬浮细菌，将本发明药物（12500ug/ml）和青霉素（20ug/ml）分别用含葡萄糖的LB培养液稀释，加入有成熟细菌生物膜的小皿中，空白对照加入相同体积含葡萄糖的LB培养液，每孔2000ul，置于37℃培养24小时。
各样本用LIVE/DEAD® BacLight. Bacterial Viability Kits染色，直接用共焦激光扫描显微镜进行观察。
2.6本发明药物与抗生素的协同作用
将本发明药物(200000–100ug/ml)和青霉素(2–0.001ug/ml)分别进行倍比稀释，按照药物浓度从高到低，同时加入本发明药物和青霉素至96孔圆底培养板中，使板中的细菌浓度为OD600=0.05，同时进行二者单独的抑菌试验和空白对照。将96孔板置于37℃培养24小时，每孔取菌液，接种于LB固体培养基，37℃培养24小时，观察无细菌生长的最小浓度既是二者协同作用的最小抑菌浓度。
3 结果
3.1本发明药物对S.a最小抑菌浓度
本发明药物最小抑菌浓度为100mg/ml，青霉素最小抑菌浓度为2ug/ml。
3.2本发明药物对S.a生物膜形成的影响
图1示，CV染色本发明药物（12500-781.25ug/ml）和青霉素（2-0.125ug/ml）可以抑制S.a生物膜的形成。图2示，WST检测本发明药物（12500-1562.5ug/ml）和青霉素（2-0.25ug/ml）可以减少形成金黄色葡萄球菌生物膜的活细菌数量。
3.3用扫描电镜观察药物对细菌生物膜形成的影响
扫描电镜图片显示，对照组有大量细菌密集叠加在一起，细菌形态正常，表面光滑，大小基本一致（图3A）；本发明药物组细菌量较少，大小形态不一致，半数以上细胞肿胀，直径增大，个别细菌塌陷萎缩（图3B）；青霉素组，细菌虽然数量较少，但大小形态规则，直径基本一致（图3C）。
3.4用激光共聚焦显微镜观察药物对细菌生物膜形成的影响
共聚焦显微镜图片显示，空白对照组形成细菌生物膜，细菌生物膜主要以活菌为主体，其间散落死菌（或休眠细菌）；本发明药物组和青霉素组，有少量细菌量散落分布，主要以死菌为主，活菌散落其间（见图4）。
3.5药物对成熟S.a生物膜的作用
图5示，本发明药物（12500-781.25ug/ml）可以显著减少S.a生物膜的总的生物量（图5），而青霉素对成熟细菌生物膜作用不明显。本发明药物（12500-1562.5ug/ml）可以减少S.a生物膜的活细菌数量（图6），而青霉素对生物膜作用不明显。
3.6用扫描电镜观察药物对成熟细菌生物膜的影响
扫描电镜图片显示，空白对照组有大量细菌密集叠加在一起，细菌形态正常，表面光滑，大小基本一致（图7A）；本发明药物组有散在细菌菌落存在，大小形态不一致，多数细菌肿胀破裂，直径明显增大（图7B）；青霉素组有大量细菌密集叠加在一起，细菌形态正常，个别细菌塌陷萎缩，但大体正常（图7C）。
3.7用激光共聚焦显微镜观察药物对细菌生物膜形成的影响
共聚焦显微镜图片显示（绿色表示活菌、红色表示死菌），空白对照组细菌生物膜正常，细菌生物膜主要以活菌为主体，其间散落死菌（或休眠细菌）；本发明药物组细菌生物膜厚度显著降低，死菌和活菌相互参杂，有大量死菌存在于膜内；青霉素组细菌生物膜未见显著下降，以活菌为主，活菌分布在细菌生物膜上层（图8）。
3.8二者的协同作用
测试结果，当本发明药物为12500ug/ml，青霉素浓度为0.125ug/ml时即可表现出较强的抑菌效果，二者单独在此浓度时并没有抑菌作用，可见本发明药物对抗生素具有提高疗效的作用，原因与本发明药物可有效破坏细菌生物膜，使抗生素的药效可直达细菌体而产生抗菌作用。
附图说明
图1本发明药物和青霉素对S.a生物膜形成的作用（CV染色）；与对照组比较，***P<0.001。
图2本发明药物和青霉素对S.a生物膜形成的作用（WST检测）；与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图3 用扫描电镜观察药物对细菌生物膜一厢形成的影响 (X500，10kv)。
图4用激光共聚焦显微镜观察药物对细菌生物膜形成的影响 (X100 oil)。
图5 本发明药物和青霉素对成熟S.a生物膜的作用(CV染色)；与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。
图6本发明药物和青霉素对成熟S.a生物膜的作用(WST染色)与对照组比较，***P<0.001。
图7 用扫描电镜观察药物对成熟细菌生物膜影响 (X500，10kv)。
图8用激光共聚焦显微镜观察药物对成熟细菌生物膜的影响 (X100 oil)。
具体实施方式
实施例1：
原料药配方为：
连翘258g，金银花258g，板蓝根258g，大黄50g，广藿香88g，绵马贯众258g，红景天88g，薄荷脑7.8g，麻黄88g，苦杏仁88g，鱼腥草258g，甘草88g，石膏258g；
制备方法为：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
(5) 将步骤(4)所得干膏粉加入淀粉138克，用85%乙醇制粒；
(6) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(5)所得颗粒，密闭，混匀，装入1000粒胶囊，即得。
实施例2：
原料药配方为：
连翘210g，金银花280g，板蓝根210g，大黄55g，广藿香75g，绵马贯众280g，红景天75g，薄荷脑8.5g，麻黄75g，苦杏仁100g，鱼腥草210g，甘草 100g，石膏 210g；
制备方法为：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加5倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6倍量50%的乙醇提取2次，第一次3小时，第二次1小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次0.5小时，第二次2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
(5) 将步骤(4)所得干膏粉加入淀粉134克，用85%乙醇制粒；
(6) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(5)所得颗粒，按常规制剂方法制成片剂即得。
实施例3：
原料药配方为：
连翘280g，金银花210g，板蓝根280g，大黄45g，广藿香100g，绵马贯众210g，红景天75g，薄荷脑5.5g，麻黄100g，苦杏仁75g，鱼腥草280g，甘草75g，石膏280g；
制备方法为：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用10倍量90%的乙醇提取2次，第一次1小时，第二次3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次2.5小时，第二次0.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用；
(5) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(4)所得干膏粉，按常规制剂方法制成丸剂即得。
实施例4：
原料药配方为：
连翘170g，金银花170g，炙麻黄57g，炒苦杏仁57g，石膏170g，板蓝根170g，绵马贯众170g，鱼腥草170g，广藿香57g，大黄34g，红景天57g，薄荷脑5.0g，甘草57g；
制备方法：
（一）提取工艺：
(1) 按照上述处方量称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香加6倍量水提取挥发油，提油时间4h，收集挥发油，出油率为0.33±0.05%，提取液过滤后备用，残渣弃去；
(3) 连翘、炙麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液过滤，滤液合并，回收乙醇至无醇味，备用；
(4) 金银花、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入炒苦杏仁，煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液过滤，滤液合并同时加入步骤（2）广藿香提油后的水溶液，浓缩成60℃测定相对密度为1.10-1.15清膏，加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70%，冷藏放置24小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，与醇提液合并，浓缩至浓缩成60℃测定相对密度为1.25-1.35稠膏，备用；
（二）制剂工艺：
(5) 制剂配方为：步骤（4）所得稠膏335.5g，薄荷脑5g，步骤（2）所得广藿香油0.2ml，糖粉342.5g，糊精514.0g；
(6) 制粒：将糖粉和糊精混合均匀，用稠膏作粘合剂制软材，14目筛网制粒，60—65℃烘干，10目筛网整粒;
(7) 分装：筛出细粉适量，将薄荷脑、广藿香挥发油加入适量乙醇，溶解，喷入细粉中，混合均匀，并与颗粒混合均匀，密闭半小时，装袋，即得，以上处方可制成颗粒1000g。
Claims (10)
1.一种中药组合物在制备破坏金黄色葡萄球菌所形成的生物膜的药物中的应用，其特征在于该中药组合物由下列重量份的原料药制成:
连翘210-280，金银花210-280，板蓝根210-280，大黄45-55，广藿香75-100，绵马贯众210-280，红景天75-100，薄荷脑5.5-8.5，麻黄75-100，苦杏仁75-100，鱼腥草210-280，甘草75-100，石膏210-280。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于该中药组合物由下列重量份的原料药制成:
连翘210，金银花280，板蓝根210，大黄55，广藿香75，绵马贯众280，红景天75，薄荷脑8.5，麻黄75，苦杏仁100，鱼腥草210，甘草 100，石膏 210。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于该中药组合物由下列重量份的原料药制成:
连翘280，金银花210，板蓝根280，大黄45，广藿香100，绵马贯众210，红景天75，薄荷脑5.5，麻黄100，苦杏仁75，鱼腥草280，甘草75，石膏280。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于该中药组合物由下列重量份的原料药制成:
连翘258，金银花258，板蓝根258，大黄50，广藿香88，绵马贯众258，红景天88，薄荷脑7.8，麻黄88，苦杏仁88，鱼腥草258，甘草88，石膏258。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物的活性成分由以下步骤制成:
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
步骤（5）所得干膏粉、步骤（2）所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分。
6.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述药物剂型为胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述胶囊剂是由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2) 广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装入胶囊，即得。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述颗粒剂是由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述颗粒剂是由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的水滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加95%乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏滤液；
(5) 将步骤（4）所得清膏滤液与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.25-1.35的稠膏，备用；
(6) 将步骤(5)所得稠膏加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
10.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物在制备提高抗生素疗效的药物中的应用。
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| 中药抗细菌生物膜的研究进展;汪长中;《中国中药杂志》;20100228;第35卷(第4期);521-524 * |
| 细菌生物膜的形成和研究注射用双黄连对细菌生物膜的影响;王坤;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20100215;24 * |
| 肉桂酸等4种单体对细菌生物膜的影响;徐多多等;《畜牧与饲料科学》;20111231;第32卷(第12期);10-11 * |
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