CN103561768B - 抗炎组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及提供口服抗炎组合物，特别地涉及用于通过识别下调炎症标志物如白介素6 (IL‑6)的活性物治疗或预防心血管疾病和高血压的并发症的口服组合物。因此，本发明提供了用于预防或治疗心血管疾病或高血压的并发症的口服组合物，所述组合物包含油橄榄或橄榄苦苷的水性乙醇提取物和包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。本发明还提供了用于预防或治疗人类中心血管疾病或高血压的并发症的方法，所述方法包括给予有需要的人本发明的组合物的步骤。

Description

抗炎组合物
本发明涉及提供口服抗炎组合物，特别地涉及用于治疗或预防心血管疾病和高血压的并发症的口服组合物。
心血管疾病(与心脏或血管有关的一类疾病)导致超过三分之一的全球死亡并且是目前发展中国家中死亡的主要原因。心脏病的风险随着你的年龄增加并且该术语学术上是指任何影响心血管系统的疾病。它通常用于是指与动脉粥样硬化(动脉疾病)有关的那些。
Libby (American J. Clinical Nutrition, 83(2), 456S-460S (2006))公开了与心血管疾病有关的几种促炎标志物如IL-6。IL-6是细胞因子或细胞信号转导蛋白，其在人类中被IL-6基因编码，其既是促炎的又是抗炎的并且其刺激对导致炎症的创伤的免疫反应。Libby等人 (Circulation, 105, 1135-1143 (2002))公开了流行病学研究已经发现增加的血管危险与增加的细胞因子如IL-6的基础水平有关。他还公开了脂肪组织能合成细胞因子如IL-6使得肥胖本身似乎促进炎症。Libby等人还提到炎症可能参与高血压，提供了与动脉粥样硬化的病理生理学联系。因此，下调炎症标志物如IL-6的活性物的识别可提供满足对用于治疗或预防心血管疾病和高血压的并发症的有效口服组合物的持续需求的途径。
EP 1 852 430 A公开了包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中例如在90至100摄氏度下加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质1至4小时获得。然后，可使用技术人员已知的标准技术将产生的混合物过滤、浓缩、分离或干燥。用于制备组合物的最佳方法在EP 1 852 430 A的第[0015]至[0023]段中公开并且通过引用并入本文。与原花色素聚合物原料相比，这类组合物的分子量已被降低至低聚物能被活体更容易地吸收的水平。组合物包括结构(I)的化合物：
其中n为0或者1或2的整数，和/或结构(II)的化合物：
其中n为0或者1或2的整数。通过使用本领域技术人员已知的标准分离方法分离上述EP 1 852 430 A的组合物获得结构(I)和(II)的低聚物。
包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的提取物可选自葡萄、松树、日本扁柏、樟脑树、杨梅属植物、可可树、君迁子、香蕉、木瓜、苹果、山楂、荔枝、杨梅和肉桂。具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质可选自白藜芦醇、间苯三酚、类黄酮和黄烷类(flavanoid)。具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质还可选自绿茶、新鲜茶叶、葡萄籽、葡萄籽皮、方形黑儿茶、红藻及其提取物。
EP 1 852 430 A还公开了这类组合物在1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基-清除活性检验和Trolox当量抗氧化能力(TEAC)检验中显示显著的抗氧化活性。还公开了这类组合物的应用导致在紫外线辐射下提高的细胞生存能力、对血清和肝脂质过氧化物(小鼠中)显著的抗氧化活性和肝酶谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT)和谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)的血清水平的降低。GOT和GPT与氨基酸的氨基从α-氨基酸转移至α-酮酸有关。转氨酶储存在肝脏中并且通常在血清中仅以低水平存在。它们在肝细胞损伤时被释放至血液中，因此在血清中检测到高水平的转氨酶证明肝细胞损伤。
可以Oligonol (Cognis/BASF)的名义商业获得EP 1 852 430 A的组合物并且包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得，所述植物材料为从荔枝的果实和茶树的绿叶的组合制备的提取物。
Aquasol (Sabinsa)为油橄榄叶的90:10 v/v乙醇:去矿质水提取物，所述提取物包含2.5 % w/v的橄榄苦苷、1.9 % w/v的羟基酪醇。酪醇似乎不存在。下文给出结构：
羟基酪醇是油橄榄、初榨橄榄油和从初榨橄榄油生产中获得的废水中主要的酚类化合物之一。在新生产的初榨橄榄油中，主要以橄榄酸酯(elenolic ester)形式 (称为橄榄苦苷)发现羟基酪醇，其随时间水解为非酯化形式。
从上述提取物制备Aquasol30%总干燥固体，然后喷雾干燥。
本发明人观察到OligonolAquasol
发明概述
因此，在本发明的第一方面中，提供了用于预防或治疗心血管疾病或高血压的并发症的口服组合物，所述组合物包含油橄榄的水性乙醇提取物或橄榄苦苷和包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。
该组合物可包含10-5000 mg，优选50-2500 mg，最优选100-300 mg的油橄榄和10-5000 mg，优选50-2500 mg，最优选100-300 mg的包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。
油橄榄的水性乙醇提取物与包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物的重量比可为10:1至1000:1，优选10:1至100:1，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。
原花色素低聚物可具有2至4的聚合度。
包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物可选自葡萄、松树、日本扁柏、樟脑树、杨梅属植物、可可树、君迁子、香蕉、木瓜、苹果、山楂、荔枝、杨梅和肉桂。
具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质可选自白藜芦醇、间苯三酚、类黄酮和黄烷类(flavanoid)。
具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质可选自绿茶、新鲜茶叶、葡萄籽、葡萄籽皮、方形黑儿茶、红藻及其提取物。
包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物可任选通过在酸性水溶液中加热为从荔枝的果实和茶树的绿叶的组合制备的提取物的植物材料获得，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。
特别地，包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物可任选通过在酸性水溶液中加热为从荔枝的果实和茶树的绿叶的组合制备的提取物的植物材料获得，其为Oligonol
在本发明的第二方面中，提供了用于预防或治疗心血管疾病或高血压的并发症的口服组合物，所述组合物包含10-5000 mg，优选50-2500 mg，最优选100-300 mg的油橄榄和10-5000 mg，优选50-2500 mg，最优选100-300 mg的包含由结构(I)代表的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物：
其中n为0或者1或2的整数。
在本发明的第三方面中，提供了用于预防或治疗心血管疾病或高血压的并发症的口服组合物，所述组合物包含10-5000 mg，优选50-2500 mg，最优选100-300 mg的油橄榄和10-5000 mg，优选50-2500 mg，最优选100-300 mg的包含由结构(II)代表的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物：
其中n为0或者1或2的整数。
油橄榄的水性乙醇提取物可为Aquasol
在本发明的第四方面中，提供了用于预防或治疗人类中的心血管疾病或高血压的并发症的方法，所述方法包括给予需要其的人本发明的第一、第二或第三方面中任一方面所述的组合物的步骤。
在本发明的第五方面中，提供了用作用于人类的药物的本发明的第一、第二或第三方面中任一方面所述的组合物。
在本发明的第六方面中，提供了用于预防或治疗人类中的心血管疾病或高血压的并发症的本发明的第一、第二或第三方面中任一方面所述的组合物。
在本发明的第七方面中，提供了本发明的第一、第二或第三方面中任一方面所述的组合物在制备用于预防或治疗人类中的心血管疾病或高血压的并发症的药物中的用途。
附图简述
参考下列附图说明本发明
图1示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用10 μg/ml Oligonol100 μg/ml Aquasol (图中表示为“Olive”)或二者处理的原代真皮成纤维细胞的白介素6 (IL-6)反应 (pg每μg蛋白质)；
图2示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用0.1 μg/ml、1 μg/ml和10 μg/ml Oligonol100 μg/ml Aquasol (图中表示为“Olive”)或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的白介素6反应 (pg每μg蛋白质)；
图3示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用0.1 μg/ml、1 μg/ml和10 μg/ml Oligonol100 μM 橄榄苦苷或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的白介素6反应 (pg每μg蛋白质)；
图4示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用10 μg/ml Oligonol1 μM和10 μM 酪醇或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的白介素6反应 (pg每μg蛋白质)；
图5示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用10 μg/ml Oligonol0.1 μM、1 μM和10 μM 羟基酪醇或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的白介素6反应 (pg每μg蛋白质)；以及
图6示出用于对照(未处理的人脐静脉内皮细胞)的血红素加氧酶1 (HO-1) (pg每µg蛋白质)；2 μg/ml和4 μg/ml Oligonol5 μg/ml、10 μg/ml和20 μg/ml Aquasol (图中表示为“Olive”)；及其组合。
发明详述
本发明的口服组合物可为胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、溶液剂、悬浮剂或乳剂形式。胶囊剂、丸剂或片剂中油橄榄的水性乙醇提取物或橄榄苦苷或包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物的量不超过推荐的成年人的每日限量，所述原花色素低聚物可通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。上述口服形式的本发明组合物的制备是本领域技术人员熟知的。
实施例 1
实验方法概述
已经开发体外模型以研究氧化应激对真皮成纤维细胞的炎性状态的影响，其中：
a. 使细胞在6-孔(9.5cm2)板中生长。
b. 使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)将细胞氧化应激。
c. 在PMA处理后24小时(t24)收获细胞培养物上清液和细胞颗粒。
d. 检验所有细胞培养物上清液的乳酸脱氢酶(LDH)，作为细胞毒性和白介素6 (IL-6)合成的量度。
真皮细胞的培养
在补充有10%胎牛血清(FBS)的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM) (Gibco)中将原代人真皮成纤维细胞培养并传代。以约5000细胞/cm2的接种密度以2 ml完全培养基/孔将细胞常规板出(plated out)在6-孔组织培养皿中达24小时并在5% CO2中在37℃下孵育。去除培养基并在处理之前使细胞在DMEM和1% FBS中生长24小时。
试验溶液的添加
在包含1% FBS的DMEM中制备试验溶液。在试验溶液的存在下，使用1 μM PMA (Sigma P8139)将真皮成纤维细胞氧化应激24小时。去除处理的上清液(细胞培养物上清液)并在IL-6和LDH分析之前在-20℃下储存。
使用500 μl的达尔伯克氏磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤真皮成纤维细胞并加入1 ml的胰蛋白酶/EDTA溶液(Invitrogen)并在37℃下孵育板直至细胞分离。然后立即将细胞在13000 rpm下离心10分钟并丢弃上清液。使用500 μl的PBS洗涤产生的细胞颗粒并如前所述离心。然后，丢弃上清液并在细胞裂解之前在-20℃下储存细胞颗粒(用于蛋白质的定量)。
以1 ml细胞裂解缓冲液每2.5 × 106细胞将所有细胞颗粒在冰上裂解30分钟。裂解缓冲液包含1%的壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(Tergitol-型NP-40)、0.1%脱氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠 (SDS)、6 mM氯化钠和0.05M 三(羟基甲基)氨基甲烷，pH为7.6。在10 μl/ml的裂解缓冲液水平下，在使用之前添加蛋白酶抑制剂混合物 (1000X；Sigma P8340)。使用捣碎棒将部分裂解的细胞颗粒完全均质并通过在4℃下以20,000 g离心20分钟去除不需要的细胞碎片。在-80℃下冷冻澄清的细胞裂解物直至需要。
使用Promega CytoTox 96非放射性细胞毒性检验检测细胞培养物上清液的细胞毒性。该检验定量检测细胞裂解后释放的乳酸脱氢酶 (LDH)并且是细胞生存能力的良好指示。将50 μl的细胞培养物上清液或对照培养基加入至96孔板的双份孔。加入50 μl的CytoTox试剂并充分混合。在室温下在黑暗中将板孵育30分钟，此后将50 μl的停止溶液加入至各个孔并在492 nm下读取板的吸光度。任何产生大于对照培养基两倍的吸光度值的试验样本被认为是细胞毒的。样本中不包括显示任何细胞毒性迹象的结果。
使用Pierce BCA蛋白质检验试剂盒检测各个澄清细胞裂解物的总蛋白质浓度使得对试验物质影响的反应能被标准化至ug蛋白质。从提供的2 mg/ml牛血清白蛋白(BSA)原液制备一组范围为0 μg/ml至1200 μg/ml蛋白质的八个标准溶液。将10 μl的标准品或细胞裂解物加入至平底96-孔板的双份孔。根据试剂盒说明从50份试剂A和1份试剂B制备试剂溶液。将200 μl的最终试剂加入至各个孔。将板混合、遮盖并在37℃下孵育30分钟，在562 nm下读取吸光度。建立蛋白质标准曲线并用于测定各个细胞裂解物的蛋白质浓度。
根据制造商说明书使用QuantiGlo Q6000人IL-6检验(R&D Systems)检测各个细胞培养物上清液的IL-6浓度。以0 pg/ml至3000 pg/ml的浓度在校准品稀释液中制备六个IL-6标准品。将50 μl的检验稀释液和150 μl的细胞培养物上清液或标准品加入至双份孔。在使用洗涤缓冲液洗涤四次之前在水平轨道板摇床(约500 rpm)上将板在室温下孵育2小时。将200 μl的IL-6结合物加入至各个孔并在水平轨道板摇床(约500 rpm)上将板在室温下孵育3小时。如前所述洗涤板。各个孔接受200 μl的底物溶液并将板在室温下孵育40分钟。使用具有1分钟延迟时间、1秒/孔读数时间、求和模式和自动增益(automatic gain on)的光度计装置测定各个孔的相对光单位(RLU)。绘制平均RLU对IL-6浓度的标准曲线并通过回归分析计算最佳拟合的线并从该线估算所有样品中IL-6蛋白质的未知浓度。
图1示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯 (PMA)氧化应激，随后使用10 μg/ml Oligonol100 μg/ml AquasolIL-6反应 (pg每μg蛋白质)。因此，当使用PMA处理原代真皮成纤维细胞时，已知的促炎剂，IL-6表达的水平是显著的。在随后使用OligonolAquasolIL-6表达的显著降低。然而，当随后使用OligonolAquasolIL-6表达的显著的 (p=0.006)协同降低。因此，预期的是这样的组合适用于预防或治疗人类中的心血管疾病或高血压的并发症。
如上文所述，IL-6是促炎细胞因子并且是心血管疾病中炎症的通用标识物。人们认为OligonolAquasol
实施例 2
图2示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用0.1 μg/ml、1 μg/ml和10 μg/ml Oligonol100 μg/ml AquasolIL-6反应(pg每μg蛋白质)。因此，当使用PMA处理原代真皮成纤维细胞时，已知的促炎剂，IL-6表达的水平是显著的。在随后使用OligonolAquasolIL-6表达的略微降低。然而，当随后使用OligonolAquasolIL-6表达的显著的(p = 0.16、0.35和0.015)协同降低。因此，预期这样的组合适用于预防或治疗人类中的心血管疾病或高血压的并发症。
如上文所述，IL-6是促炎细胞因子并且是心血管疾病中炎症的通用标识物。人们认为OligonolAquasol
实施例 3
图3示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯 (PMA)氧化应激，随后使用0.1 μg/ml、1 μg/ml和10 μg/ml Oligonol10 uM 橄榄苦苷或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的IL-6反应(pg每μg蛋白质)。因此，当使用PMA处理原代真皮成纤维细胞时，已知的促炎剂，IL-6表达的水平是显著的。在随后使用OligonolIL-6表达的略微降低。然而，当随后使用Oligonol0.1 μg/ml Oligonol10 uM 橄榄苦苷的组合观察到IL-6表达的显著的(p = 0.025)协同降低，尽管也观察到1 μg/ml Oligonol10 uM 橄榄苦苷以及10 μg/ml Oligonol10 uM 橄榄苦苷的组合的降低。因此，预期这样的组合适用于预防或治疗人类中的心血管疾病或高血压的并发症。
如上文所述，IL-6是促炎细胞因子并且是心血管疾病中炎症的通用标识物。人们认为OligonolAquasolAquasolOligonolAquasolIL-6的协同下调。
实施例 4
由于羟基酪醇是AquasolOligonol4示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用10 μg/ml Oligonol1 uM和10 uM 酪醇或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的IL-6反应(pg每μg蛋白质)。因此，当使用PMA处理原代真皮成纤维细胞时，已知的促炎剂，IL-6表达的水平是显著的。在随后使用OligonolIL-6表达降低。然而，当随后使用OligonolIL-6表达没有显著的协同降低。
实施例 5
图5示出针对使用1 μM 佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)氧化应激，随后使用10 μg/ml Oligonol0.1 uM、1 uM和10 uM 羟基酪醇或其组合处理的原代真皮成纤维细胞的IL-6反应(pg每μg蛋白质)。因此，当使用PMA处理原代真皮成纤维细胞时，已知的促炎剂，IL-6表达的水平是显著的。在随后使用OligonolIL-6表达降低。然而，当随后使用OligonolIL-6表达没有显著的协同降低。
如上文所述，IL-6是促炎细胞因子并且是心血管疾病中炎症的通用标识物。人们认为OligonolAquasolAquasolOligonolAquasolIL-6的协同下调。
实施例 6
在补充有肝素、血管内皮生长因子(VEGF)、硫酸庆大霉素、抗坏血酸、人内皮生长因子 (HEGF)、皮质醇、人成纤维细胞生长因子B (HFGF-B)、长R胰岛素样生长因子1 (R3-IGF-1)和胎牛血清 (FBS)的内皮细胞生长培养基(EGM-2) (Biowhittaker)中培养和传代Huvec细胞，还称为人脐静脉内皮细胞，(TCS Biologicals)。在开始实验前以2 ml完全培养基每孔以约5000细胞/cm2的接种密度将细胞在6-孔组织培养皿中常规板出(plated out)24小时并在5% CO2中在37℃下孵育。
排列在血管内侧的血管内皮是身体的最大分泌组织之一。Huvec细胞，还称为人脐静脉内皮细胞，用作体外模型，如Bachettia等人 (Pharmacological Research, 42, 1 (2000))所述，以检测不同成分对帮助预防和/或治疗心血管疾病的潜能。
使用5 μM 4-羟基壬烯醛和试验物质的水溶液将细胞处理24小时，然后检测血红素加氧酶1的水平。
通过添加1 ml的胰蛋白酶/EDTA溶液(Invitrogen)收获细胞并在37℃下孵育直至分离。然后立即将细胞在13000 rpm下离心10分钟并丢弃上清液。使用500 μl的达尔伯克氏磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤产生的细胞颗粒并如前所述离心。如前所述丢弃上清液并在细胞裂解之前在-20℃下储存细胞颗粒。
以1 ml细胞裂解缓冲液每2.5 × 106细胞将所有细胞颗粒在冰上裂解30分钟。裂解缓冲液包含1%的壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(Tergitol-型NP-40)、0.1%脱氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠 (SDS)、6 mM氯化钠和0.05M 三(羟基甲基)氨基甲烷，pH为7.6。在10 μl/ml的裂解缓冲液水平下，在使用之前添加蛋白酶抑制剂混合物 (1000X；Sigma P8340)。使用捣碎棒将部分裂解的细胞颗粒完全均质并通过在4℃下以20,000 g离心20分钟去除不需要的细胞碎片。在-80℃下冷冻澄清的细胞裂解物直至需要。
如前面实施例1中描述的，检测细胞裂解物的细胞毒性和各个细胞裂解物的总蛋白质浓度。
在样本稀释液中稀释Huvec细胞裂解物，并将100 μl转移至预涂覆的抗人血红素加氧酶1免疫检验板(Assay Designs)。25 ng/ml至0.39 ng/ml的7-点重组血红素加氧酶1标准曲线也在样本稀释液中制备。在室温下将免疫检验板孵育30分钟，使用洗涤缓冲液洗涤六次并在室温下使用100 μl/孔的抗血红素加氧酶1抗体溶液孵育另外60分钟。如上所述洗涤板并在室温下使用100 μl/孔的辣根过氧化物酶结合物溶液孵育30分钟。再次如上所述洗涤板并将100 μl/孔的四甲基联苯胺底物加入至各个孔并在黑暗中在室温下储存15分钟。在加入100 μl/孔的停止溶液后，在450 nm下读取吸光度并从标准曲线推测未知活检水平的血红素加氧酶1。
图6示出用于对照(未处理的人脐静脉内皮细胞)的血红素加氧酶1 (HO-1) (pg每µg蛋白质)；2 μg/ml和4 μg/ml Oligonol5 μg/ml、10 μg/ml和20 μg/ml Aquasol (图中表示为“Olive”)；及其组合。OligonolAquasol1水平。
Murashima等人(Biofactors, 22, 1-4, 271-5 (2004))描述了核因子红细胞衍生2 (Nrf2)转录因子介导低密度脂蛋白(LDL)氧化。Marco等人 (N. Engl. J. Med., 337, 408-416 (1997))描述了动脉粥样硬化如何从LDL发展成为被自由基特别是活性氧物种氧化。因此，Nrf2转录因子的激活应导致LDL氧化的抑制。Lee等人(Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 37, 2, 139-143 (2004))描述了由Nrf2转录因子诱导的酶包括血红素加氧酶-1 (HO-1)。因此，血红素加氧酶-1 (HO-1)是Nrf2激活的指示剂或结束标识物，因此预期在结合OligonolAquasolHO-1的协同上调导致LDL氧化的协同降低，其间接降低动脉粥样硬化的发病。
可使用许多不同途径(通过诱导Nrf2基因表达和核转位)激活血红素加氧酶1。Nrf2转录因子上调用于HO-1的信使核糖核酸(mRNA)、蛋白质和活性并且人们认为OligonolAquasolNrf2途径的不同部分。现在结果显示该上调以协同方式出现，例如通过构象变化或增加磷酸化作用，其可导致Nrf2的核转位增加。

Claims (14)

1.用于预防或治疗心血管疾病的口服组合物，所述组合物包含油橄榄的水性乙醇提取物或橄榄苦苷和包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得，所述包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物通过在酸性水溶液中加热为从荔枝的果实和茶树的绿叶的组合制备的提取物的植物材料获得，其为Oligonol™；并且其中所述油橄榄的水性乙醇提取物为油橄榄叶的90:10 v/v乙醇:去矿质水提取物，所述提取物包含2.5% w/v的橄榄苦苷和1.9% w/v的羟基酪醇。
2.用于预防或治疗高血压的并发症的口服组合物，所述组合物包含油橄榄的水性乙醇提取物或橄榄苦苷和包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得，所述包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物通过在酸性水溶液中加热为从荔枝的果实和茶树的绿叶的组合制备的提取物的植物材料获得，其为Oligonol™；并且其中所述油橄榄的水性乙醇提取物为油橄榄叶的90:10 v/v乙醇:去矿质水提取物，所述提取物包含2.5% w/v的橄榄苦苷和1.9% w/v的羟基酪醇。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其包含10-5000 mg的油橄榄的水性乙醇提取物和10-5000 mg的包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物，所述原花色素低聚物通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。
4.如权利要求3所述的组合物，其包含50-2500 mg的油橄榄的水性乙醇提取物。
5.如权利要求3所述的组合物，其包含100-300 mg的油橄榄的水性乙醇提取物。
6.如权利要求3所述的组合物，其包含50-2500 mg的包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物。
7.如权利要求3所述的组合物，其包含100-300 mg的包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物。
8.如权利要求1或2所述的组合物，其中油橄榄的水性乙醇提取物与包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物的重量比为10:1至1000:1，所述原花色素低聚物通过在酸性水溶液中加热包含原花色素聚合物的植物材料或其包含原花色素聚合物的水性提取物以及具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质获得。
9.如权利要求8所述的组合物，其中油橄榄的水性乙醇提取物与包含已结合具有间苯三酚环结构或间苯二酚环结构的物质的原花色素低聚物作为它的主要成分的组合物的重量比为10:1至100:1。
10.权利要求1或2所述的组合物，其用作用于人类的药物。
11.权利要求1或2所述的组合物，其用于预防或治疗人类中的心血管疾病。
12.权利要求1或2所述的组合物，其用于预防或治疗人类中的高血压的并发症。
13.权利要求1或2所述的组合物在制备用于预防或治疗人类中的心血管疾病的药物中的用途。
14.权利要求1或2所述的组合物在制备用于预防或治疗人类中的高血压的并发症的药物中的用途。
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