EA026079B1 - Противовоспалительная композиция - Google Patents

Противовоспалительная композиция Download PDF

Info

Publication number
EA026079B1
EA026079B1 EA201391804A EA201391804A EA026079B1 EA 026079 B1 EA026079 B1 EA 026079B1 EA 201391804 A EA201391804 A EA 201391804A EA 201391804 A EA201391804 A EA 201391804A EA 026079 B1 EA026079 B1 EA 026079B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
ring structure
composition
composition according
substance
hypertension
Prior art date
Application number
EA201391804A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201391804A1 (ru
Inventor
Карен Элизабет Барретт
Гейл Дженкинс
Сильвина Беатрис Лотито
Линда Джейн Уэйнрайт
Original Assignee
Унилевер Н.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Унилевер Н.В. filed Critical Унилевер Н.В.
Publication of EA201391804A1 publication Critical patent/EA201391804A1/ru
Publication of EA026079B1 publication Critical patent/EA026079B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к обеспечению пероральной противовоспалительной композиции, в частности пероральной композиции для лечения или предотвращения сердечно-сосудистого заболевания и осложнений гипертензии, посредством идентификации активных веществ, которые понижающим образом регулируют воспалительные маркеры, такие как интерлейкин 6 (IL-6). Таким образом, изобретение предоставляет пероральную композицию для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии, содержащую водно-этанольный экстракт Olea europaea или олеуропеин и композицию, содержащую в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водного экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе. Изобретение также предоставляет способ предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека, включающий стадию введения индивидууму, нуждающемуся в этом, композиции по изобретению.

Description

Данное изобретение относится к обеспечению пероральной противовоспалительной композиции, в частности к пероральной композиции для лечения или предотвращения сердечно-сосудистого заболевания и осложнений гипертензии.
Сердечно-сосудистые заболевания (класс заболеваний, которые затрагивают сердце или кровеносные сосуды) вносят вклад в более чем треть смертей по всему миру и в настоящее время являются основной причиной смерти в развивающихся странах. Риск заболевания сердца увеличивается с возрастом, и технически этот термин относится к любому заболеванию, которое воздействует на сердечнососудистую систему. Он обычно применяется для обозначения заболевания, связанного с атеросклерозом (артериальное заболевание).
ЫЪЪу (Атепсап ί. С1шюа1 ΝυΐΓΐΙίοη. 83(2), 4568-4608 (2006)) раскрывает то, что некоторые провоспалительные маркеры, такие как 1Ь-6, связаны с сердечно-сосудистым заболеванием. 1Ь-6 является цитокином или клеточным сигнальным белком, кодируемым у людей геном 1Ь-6, который является как провоспалительным, так и противовоспалительным, и который стимулирует иммунный ответ на травму, приводя к воспалению. ЫЪЪу е! а1. (СйсиШюп, 105, 1135-1143 (2002)) раскрывает, то, что в эпидемиологических исследованиях был обнаружен повышенный сосудистый риск в связи с повышенными базальными уровнями цитокинов, таких как 1Ь-6. Он дополнительно раскрывает то, что жировая ткань может синтезировать цитокины, такие как 1Ь-6, так что ожирение, как оказалось, само по себе стимулирует воспаление. ЫЪЪу е! а1. также указывает на то, что воспаление может участвовать в гипертензии, обеспечивая патофизиологическую связь с атеросклерозом. Таким образом, идентификация активных веществ, которые понижающим образом регулируют воспалительные маркеры, такие как 1Ы6, может предоставлять путь для удовлетворения постоянной потребности в эффективных пероральных композициях для лечения или предотвращения сердечно-сосудистых заболеваний и осложнений гипертензии.
В ЕР 1852430 А раскрыта композиция, содержащая в качестве главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который может быть получен нагреванием, например, при 90-100°С в течение 1-4 ч растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водных экстрактов, содержащих проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе. Полученная в результате смесь затем может быть отфильтрована, концентрирована, разделена на фракции или высушена с использованием стандартных технологий, известных специалисту в данной области. Лучший вариант получения композиции раскрыт в абзацах [0015]-[ 0023] ЕР 1852430 А и включен в настоящее описание посредством ссылки. Молекулярная масса такой композиции была уменьшена по сравнению с исходным проантоцианидиновым полимером до такого уровня, что олигомер может быть более легко абсорбирован живым организмом. Композиция содержит соединения структуры (I)
где η является 0 или целым числом 1 или 2, и/или структуры (II)
- 1 026079 он но
он он он
.он он
Структура (II) где η является 0 или целым числом 1 или 2.
Олигомеры структуры (I) и (II) получены фракционированием указанной выше композиции ЕР 1852430 А с использованием стандартных способов фракционирования, известных специалисту в данной области.
Растительный материал, содержащий проантоцианидиновый полимер или его экстракт, содержащий проантоцианидиновый полимер, может быть выбран из группы, состоящей из винограда, сосны, СЬатаесурат18 оЫи8е, камфарного дерева, восковника восконосного, какао, хурмы обыкновенной, банана, хеномелесы китайской, яблока, боярышника, ЬусЫ сШпеп818, Мупса тиЬта и С1ппатот1 сойех. Вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, может быть выбрано из группы, состоящей из ресвератрола, флороглюцина, флавоноида и флаваноида. Вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, может также быть выбрано из группы, состоящей из зеленого чая, свежих листьев чая, виноградных семечек, оболочки виноградных семечек, кубического гамбира, красных водорослей и их экстрактов.
В ЕР 1852430 А дополнительно раскрыто, что такая композиция проявляет существенную антиоксидантную активность в анализе активности захвата радикалов 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила (ΌΡΡΗ) и анализе тролокс-эквивалента антиоксидантной способности (ТЕАС). Также раскрыто, что применение таких композиций приводит к улучшенной жизнеспособности клеток под ультрафиолетовым излучением, значительной антиоксидантной активности в сыворотке крови и липидных пероксидах печени (у мыши) и уменьшению в сыворотке крови уровней ферментов печени глутамин-щавелево-уксусной трансаминазы (СОТ) и аланинтрансаминазы (ОРТ). СОТ и ОРТ вовлечены в перенос аминогруппы аминокислот от альфа-аминокислот к альфа-кетокислотам. Трансаминазы накапливаются в печени и обычно представлены только в низких концентрациях в сыворотке крови. Они высвобождаются в кровь, когда клетки печени разрушены; таким образом обнаружение высоких уровней трансаминаз в сыворотке крови является свидетельством повреждения клеток печени.
Композиция по ЕР 1852430 А коммерчески доступна под названием Ойдопо1™ (Содш8/ВА§Р) и содержит проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе, при этом растительный материал является экстрактом, полученным из комбинации плодов ЬусЫ сШпеп818 и зеленого листа СатеШа 8шеп818.
Адиа8о1™(8аЫп8а) представляет собой экстракт листьев О1еа еигораеа смесью 90:10 об./об. этанол:деминерализованная вода, при этом экстракт содержит 2,5% мас./об. олеуропеина, 1,9% мас./об. гидрокситирозола. Тирозол, по-видимому, не представлен. Структуры приведены ниже
- 2 026079
Гидрокситирозол является одним из главных фенольных соединений в О1еа еигораеа, оливковом масле первого отжима и сточной воде, полученной в производстве оливкового масла первого отжима. В свежеприготовленном оливковом масле первого отжима гидрокситирозол в основном обнаруживается в форме сложного еленолевого эфира (известного как олеуропеин), которая со временем гидролизуется в неэтерифицированную форму.
АсщаюГ1™ получают из указанного выше экстракта, который затем концентрируют в вакууме до 30% общего сухого твердого вещества и затем подвергают распылительной сушке.
Авторы изобретения наблюдали, что комбинация ОНдоио1™ и Ас|иа5о1™ проявляет синергический противовоспалительный эффект.
Сущность изобретения
Таким образом, в первом аспекте изобретения предоставлена пероральная композиция для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии, содержащая водно-этанольный экстракт О1еа еигораеа или олеуропеина и композицию, содержащую в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водного экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе.
Композиция может содержать 10-5000, предпочтительно 50-2500, наиболее предпочтительно 100300 мг О1еа еигораеа и 10-5000, предпочтительно 50-2500, наиболее предпочтительно 100-300 мг композиции, содержащей в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водного экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе.
Массовое отношение водно-этанольного экстракта О1еа еигораеа к композиции, содержащей в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водного экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе, может составлять от 10:1 до 1000:1, предпочтительно от 10:1 до 100:1.
Проантоцианидиновый олигомер может иметь степень полимеризации от 2 до 4.
Растительный материал, содержащий проантоцианидиновый полимер, или его водный экстракт, со- 3 026079 держащий проантоцианидиновый полимер, может быть выбран из группы, состоящей из винограда, сосны, Скатаесурапх оЬШхе, камфарного дерева, восковника восконосного, какао, хурмы обыкновенной, банана, хеномелеса китайского, яблока, боярышника, ЬусЫ сЫпеи818, Мупса гиЬга и Ситатопп сойех.
Вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, может быть выбрано из группы, состоящей из ресвератрола, флороглюцина, флавоноида и флаваноида.
Вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, может быть выбрано из группы, состоящей из зеленого чая, свежих листьев чая, виноградных семечек, виноградной семенной оболочки, кубического гамбира, красных водорослей и их экстрактов.
Композиция, содержащая в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водного экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе, необязательно может быть получена нагреванием растительного материала, являющегося экстрактом, полученным из комбинации плодов ЬусЫ сЫиеи818 и зеленого листа СатеШа 81иеи818, в кислотном водном растворе.
В частности, композиция, содержащая в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их водного экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе, необязательно может быть получена нагреванием растительного материала, являющегося экстрактом, полученным из комбинации плодов ЬусЫ сЫпепхй и зеленого листа СатеШа хтепхй, в кислотном водном растворе, представляет собой ОНдоио1™.
Во втором аспекте изобретения предоставлена пероральная композиция для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии, содержащая 10-5000, предпочтительно 50-2500, наиболее предпочтительно 100-300 мг О1еа еигораеа и 10-5000, предпочтительно 502500, наиболее предпочтительно 100-300 мг композиции, содержащей в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, представленный структурой (I)
где и является 0 или целым числом 1 или 2.
В третьем аспекте изобретения предоставлена пероральная композиция для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии, содержащая 10-5000, предпочтительно 50-2500, наиболее предпочтительно 100-300 мг О1еа еигораеа и 10-5000, предпочтительно 502500, наиболее предпочтительно 100-300 мг композиции, содержащей в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, представленный структурой (II)
- 4 026079
где η является 0 или целым числом 1 или 2.
Водно-этанольный экстракт О1еа еигораеа может представлять собой Лциа8о1™.
В четвертом аспекте изобретения предоставлен способ предотвращения или лечения сердечнососудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека, включающий стадию введения индивидууму, нуждающемуся в этом, композиции согласно любому из первого, второго или третьего аспектов изобретения.
В пятом аспекте изобретения предоставлена композиция согласно любому из первого, второго или третьего аспектов изобретения для применения в качестве лекарственного средства для человека.
В шестом аспекте изобретения предоставлена композиция согласно любому из первого, второго или третьего аспектов изобретения для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
В седьмом аспекте изобретения предоставлено применение композиции согласно любому из первого, второго или третьего аспектов изобретения для производства лекарственного средства для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
Краткое описание графических материалов
Изобретение проиллюстрировано с помощью следующих фигур:
на фиг. 1 показан ответ посредством интерлейкина 6 (1Ь-6) (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 10 мкг/мл О11допо1™, 100 мкг/мл Ациа8о1™ (обозначен ОПуе на фигуре) или обоими;
на фиг. 2 показан ответ посредством интерлейкина 6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 0,1, 1 и 10 мкг/мл ОПдопоГ1™. 100 мкг/мл АциакоР™ (обозначен ОПуе на фигуре) или их комбинациями;
на фиг. 3 показан ответ посредством интерлейкина 6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 0,1, 1 и 10 мкг/мл Ойдопо1™, 100 мкМ олеуропеина или их комбинациями;
на фиг. 4 показан ответ посредством интерлейкина 6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 10 мкг/мл ОйдопоР™ и 1 и 10 мкМ тирозола или их комбинациями;
на фиг. 5 показан ответ посредством интерлейкина 6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 10 мкг/мл ОйдопоР™ и 0,1, 1 и 10 мкМ гидрокситирозола или их комбинациями; и на фиг. 6 показана гемоксигеназа 1 (НО-1) (пг в расчете на мкг белка) в качестве контроля (необработанные человеческие эндотелиальные клетки пуповинной вены); 2 и 4 мкг/мл ОйдопоР™; 5, 10 и 20 мкг/мл АциакоР™ (обозначен ОПуе на фигуре) и их комбинации.
Подробное описание изобретения
Пероральные композиции по изобретению могут быть в форме капсул, пилюль, таблеток, гранул, растворов, суспензий или эмульсий. Количество водно-этанольного экстракта О1еа еигораеа, или олеуропеина, или композиции, содержащей в качестве ее главного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резор- 5 026079 циновую кольцевую структуру, который получен нагреванием растительных материалов, содержащих проантоцианидиновый полимер, или их экстракта, содержащего проантоцианидиновый полимер, с веществом, имеющим флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, в кислотном водном растворе, в капсуле, пилюле или таблетке не будет превышать рекомендуемый суточный предел для взрослого индивидуума. Получение композиций по изобретению в указанных выше пероральных формах хорошо известно специалисту в данной области.
Пример 1. Схема экспериментального подхода.
Была разработана ίη-νίίΓΟ модель для исследования вклада окислительного стресса в воспалительный статус клеток фибробластов кожи, в которой:
a) клетки выращивают в 6-луночных (9,5 см2) планшетах;
b) клетки подвергают окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА);
c) супернатант клеточной культуры и осадки клеток собирают через 24 ч (424) после РМАобработки;
б) весь супернатант клеточной культуры анализируют на лактатдегидрогеназу (ЬИН) в качестве меры цитотоксичности и синтеза интерлейкина 6 (1Ь-6).
Культивирование дермальных клеток.
Первичные человеческие клетки фибробластов кожи культивировали и пересеивали в модифицированную по способу Дульбекко среду Игла (ΌΜΕΜ) (ОФсо), дополненную 10% фетальной бычьей сыворотки (РВ8). Клетки стандартным образом адсорбировали на 6-луночных чашках для тканевой культуры с плотностью засева ~5000 клеток/см2 в 2 мл полной среды/лунка в течение 24 ч и инкубировали при 37°С в 5% СО2. Среды удаляли, и клетки выращивали в ΌΜΕΜ и 1% РВ8 24 ч перед обработками.
Добавление тестируемых растворов.
Тестируемые растворы готовили в ΌΜΕΜ, содержащей 1% РВ8. Фибробласты кожи подвергали окислительному стрессу в течение 24 ч 1 мкМ РМА (§1§та Р8139) в присутствии тестируемых растворов. Обработанный супернатант (супернатант клеточной культуры) удаляли и хранили при -20°С перед анализом 1Ь-6 и ЬИН.
Фибробласты кожи промывали 500 мкл забуференного фосфатом раствора Дульбекко (РВЗ) и добавляли 1 мл раствора трипсин/ΕΌΤΑ (ЧпуПгодеп). и планшет инкубировали при 37°С пока клетки не откреплялись. Клетки затем немедленно центрифугировали при 13000 об/мин в течение 10 мин, и супернатант сливали. Полученный в результате осадок клеток промывали 500 мкл РВ8 и центрифугировали, как указано выше. Затем супернатант сливали, и осадок клеток хранили при -20°С перед клеточным лизисом (для количественного определения белка).
Все осадки клеток лизировали на льду в 1 мл буфера для клеточного лизиса в расчете на 2,5х106 клеток. Буфер для лизиса содержал 1% нонилфеноксиполиэтоксилэтанола (Тсгд11о1-1урс ΝΡ-40), 0,1% дезоксихолата натрия, 0,1% додецилсульфата натрия (8Ό8), 6 мМ хлорида натрия и 0,05М трисгидроксиметиламинометана при рН 7,6. Коктейль ингибиторов протеаз (1000Х; Зщта Р8340) добавляли перед применением при концентрации 10 мкл/мл буфера для лизиса. Частично лизированные осадки клеток полностью гомогенизировали с помощью пестика для растирания, и ненужный клеточный дебрис удаляли центрифугированием в течение 20 мин при 20000д при 4°С. Осветленный клеточный лизат замораживали при -80°С до его применения.
Супернатант клеточной культуры проверяли на цитотоксичность с использованием нерадиоактивного набора для анализа цитотоксичности Рготеда Су1оТо\ 96. Этот анализ количественно измеряет лактатдегидрогеназу (ЬИН), высвободившуюся при клеточном лизисе, и является подходящим для индикации жизнеспособности клетки. 50 мкл супернатанта клеточной культуры или контрольной среды добавляли в дублирующие лунки 96-луночного планшета. Добавляли 50 мкл реагента Су1оТо\ и тщательно перемешивали. Планшет инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 30 мин, затем добавляли 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку, и поглощение планшета считывали при 492 нм. Любые тестируемые образцы, демонстрирующие значение поглощения, более чем в два раза большее, чем у контрольной среды, считались цитотоксичными. Не включены какие-либо из результатов для образцов, которые демонстрировали любые признаки цитотоксичности.
Общую концентрацию белка каждого осветленного клеточного лизата измеряли с использованием набора для белкового анализа Р1егсе ВСА так, что ответ на эффект тестируемых веществ мог быть нормализован к мкг белка. Готовили набор из восьми стандартных растворов, варьировавших от 0 до 1200 мкг/мл белка из входящего в комплект стокового раствора 2 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (В8А). 10 мкл стандарта или клеточного лизата добавляли в дублирующие лунки 96-луночного плоскодонного планшета. Раствор реагента готовили в соответствии с инструкциями к набору из 50 частей реагента А и 1 части реагента В. 200 мкл полученного в результате реагента добавляли в каждую лунку. Планшет перемешивали, закрывали и инкубировали при 37°С в течение 30 мин, и считывали поглощение при 562 нм. Строили калибровочную кривую белка и использовали ее для определения концентрации белка в каждом клеточном лизате.
Концентрацию 1Ь-6 в каждом супернатанте клеточной культуры анализировали с использованием набора для анализа человеческого 1Ь-6 Циай)О1о Ц6000 (Κ&Ό ЗуЧепъ) в соответствии с инструкциями
- 6 026079 производителя. Шесть стандартов Ш-6 готовили в калибровочном разбавителе с концентрациями, варьирующими от 0 до 3000 пг/мл. 50 мкл разбавителя для анализа и 150 мкл супернатанта клеточной культуры или стандарта добавляли в дублирующие лунки. Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 2 ч на горизонтальном орбитальном планшетном встряхивателе (около 500 об/мин) перед четырехкратным промыванием промывочным буфером. 200 мкл коньюгата Ш-6 добавляли в каждую лунку, и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 3 ч на горизонтальном орбитальном планшетном встряхивателе (около 500 об/мин). Планшет промывали, как указано выше. В каждую лунку вносили 200 мкл субстратного раствора, и планшет инкубировали при комнатной температуре 40 мин. Относительную световую единицу (ОСЕ) каждой лунки определяли с использованием набора с люминометром со временем задержки 1 мин, временем считывания 1 с/лунка, режимом суммирования и автоматическим усилением. Строили калибровочную кривую средней ОСЕ в зависимости от концентрации Ш-6 и линию наилучшего соответствия, рассчитанную регрессионным анализом, и исходя из этого оценивали неизвестную концентрацию белка Ш-6 во всех образцах.
На фиг. 1 показан ответ посредством Ш-6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 10 мкг/мл Θΐί^οηοΐ™, 100 мкг/мл АсщаюЕ™ или обоими. Таким образом, когда первичные фибробласты кожи обрабатывали РМА, известным провоспалительным средством, уровень экспрессированного Ш-6 являлся значительным. При последующей обработке Θ1ί§οηο1™ или Ациа5о1™ отмечали значительное снижение экспрессии Ш-6. Однако когда первичные фибробласты кожи последовательно обрабатывали комбинацией Θ1ί§οηο1™ и Αςπα^οΐ™. наблюдали значительное (р=0,006) синергическое снижение экспрессии Ш-6. Таким образом, можно предположить, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
Как указано выше, Ш-6 является провоспалительным цитокином и характерным маркером воспаления при сердечно-сосудистом заболевании. Считается, что как Θ1ί§οηο1™, так и АсщаюЕ™ активирует ряд различных рецепторов и воспалительные метаболические пути синергическим образом и можно ожидать, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
Пример 2.
На фиг. 2 показан ответ посредством 1Ь-6(пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 0,1, 1 и 10 мкг/мл Θ1ί§οηο1™, 100 мкг/мл АсщаюЕ™ или их комбинациями. Таким образом, когда первичные фибробласты кожи обрабатывали РМА, известным провоспалительным средством, имел место значительный уровень экспрессированного Ш-6. При последующей обработке Θ1ί§οηο1™ или АсщаюЕ™ отмечалось небольшое снижение экспрессии Ш-6. Однако когда первичные фибробласты кожи последовательно обрабатывали комбинациями Θ1ί§οηο1™ и Α^иаδο1™, наблюдались значительные (р=0,16, 0,35 и 0,015) синергические уменьшения экспрессии Ш-6. Таким образом, можно ожидать, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
Как указано выше, Ш-6 является провоспалительным цитокином и характерным маркером воспаления при сердечно-сосудистом заболевании. Считается, что как Θ1ί§οηο1™, так и Αςπαδο1™ активирует ряд различных рецепторов и воспалительные метаболические пути синергическим образом, и можно ожидать, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
Пример 3.
На фиг. 3 показан ответ посредством Ш-6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 0,1, 1 и 10 мкг/мл Θ1ί§οηο1™, 10 мкМ олеуропеина или их комбинации. Таким образом, когда первичные фибробласты кожи обрабатывали РМА, известным провоспалительным средством, имел место значительный уровень экспрессированного Ш-6. При последующей обработке Θ1ί§οηο1™ или олеуропеином отмечалось небольшое снижение экспрессии Ш-6. Однако когда первичные фибробласты кожи последовательно обрабатывали комбинациями Θ1ί§οηο1™ и олеуропеина, наблюдалось значительное (р=0,025) синергическое снижение экспрессии Ш-6 для комбинации 0,1 мкг/мл Θ1ί§οηο1™ и 10 мкМ олеуропеина, хотя уменьшения также были видны с комбинацией 1 мкг/мл Θ1ί§οηο1™ и 10 мкМ олеуропеина и 10 мкг/мл Θ1ί§οηο1™ и 10 мкМ олеуропеина. Таким образом, можно ожидать, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
Как указано выше, Ш-6 является провоспалительным цитокином и характерным маркером воспаления при сердечно-сосудистом заболевании. Считается, что как Θ1ί§οηο1™, так и Αςπαδο1™ активирует ряд различных рецепторов и воспалительные метаболические пути синергическим образом и можно ожидать, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого
- 7 026079 заболевания или осложнений гипертензии у человека. Как указано выше, олеуропеин является важным составляющим Асцк-жоР™ и к настоящему времени идентифицирован как, по меньшей мере, частично ответственный за синергическую понижающую регуляцию ГБ-6, обнаруживаемую при комбинировании ОБдопо1™ и Ациако1™.
Пример 4.
Так как гидроксилтирозол является важным компонентом АсщаюГ1™. тирозол также тестировали с ОБдопо1™. На фиг. 4 показан ответ посредством 1Ь-6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 10 мкг/мл ОПдопоР™ и 1 и 10 мкМ тирозола или их комбинациями. Таким образом, когда первичные фибробласты кожи обрабатывали РМА, известным провоспалительным средством, имел место значительный уровень экспрессированного 1Ь-6. При последующей обработке ОБдопо1™ отмечалось снижение экспрессии 1Ь-6. Однако когда первичные фибробласты кожи последовательно обрабатывали комбинациями ОБдопо1™ и тирозола, не наблюдалось какого-либо значительного синергического снижения экспрессии 1Ь-6 для любой комбинации.
Пример 5.
На фиг. 5 показан ответ посредством 1Ь-6 (пг в расчете на мкг белка) для первичных фибробластов кожи, подвергнутых окислительному стрессу 1 мкМ форболмиристатацетата (РМА), последовательно обработанных 10 мкг/мл ОБдопо1™ и 0,1, 1 и 10 мкМ гидрокситирозола или их комбинациями. Таким образом, когда первичные фибробласты кожи обрабатывали РМА, известным провоспалительным средством, имел место значительный уровень экспрессированного 1Ь-6. При последующей обработке ОБдопо1™ отмечалось снижение экспрессии 1Ь-6. Однако когда первичные фибробласты кожи последовательно обрабатывали комбинациями ОБдопо1™ и гидрокситирозола, не наблюдалось значительного синергического снижения экспрессии 1Ь-6 для какой-либо комбинации.
Как указано выше, 1Ь-6 является провоспалительным цитокином и характерным маркером воспаления при сердечно-сосудистом заболевании. Считается, что как ОБдопо1™, так и Ас.|иако1™ активируют ряд различных рецепторов и воспалительные метаболические пути синергическим образом, и можно ожидать, что такая комбинация будет пригодна для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека. Как указано выше, гидрокситирозол является важным компонентом АциакоР™ и к настоящему времени был идентифицирован как не ответственный, по меньшей мере, сам по себе за синергическую понижающую регуляцию 1Ь-6, обнаруживаемую при смешивании ОЕдопо1™ и АциакоР™.
Пример 6.
Клетки Ниуее, также известные как человеческие эндотелиальные клетки пуповинной вены (ТСЗ Вю1одюа1к), культивировали и пересеивали в эндотелиальную среду для роста (ЕСМ-2) (ВютеБШакег), дополненную гепарином, фактором роста эндотелия сосудов (УЕСР), сульфатом гентамицина, аскорбиновой кислотой, человеческим эндотелиальным фактором роста (НЕСР), гидрокортизоном (человеческий фактор роста фибробластов В (НРСР-В)), длинным К инсулиноподобным фактором роста 1 (К3ЮР-1) и фетальной бычьей сывороткой (РВЗ). Клетки стандартным образом адсорбировали на 6луночных чашках для тканевой культуры с плотностью посева ~5000 клеток/см2 в 2 мл полной среды в расчете на лунку за 24 ч перед началом эксперимента и инкубировали при 37°С в 5% СО2.
Сосудистый эндотелий, который покрывает внутреннюю сторону кровеносных сосудов, является одной из самых больших секреторных тканей организма. Клетки Ниуее, также известные как человеческие эндотелиальные клетки пуповинной вены, применяются в качестве ίπ-νίΙΐΌ модели, как описано ВаеБеШа е1 а1. (РБагтаео1одюа1 КекеагеБ, 42, 1 (2000)), для исследования потенциала различных ингредиентов для содействия предотвращению и/или терапии сердечно-сосудистых заболеваний.
Клетки обрабатывали 5 мкМ 4-гидроксиноненалем и водными растворами тестируемых веществ в течение 24 ч, и затем измеряли уровень гемоксигеназы 1.
Клетки собирали добавлением 1 мл раствора трипсин/ЕБТА (1пуБгодеп) и инкубировали при 37°С до открепления. Затем клетки немедленно центрифугировали при 13000 об/мин в течение 10 мин, и супернатант сливали. Полученный в результате осадок клеток промывали 500 мкл раствора фосфатного буфера Дульбекко (РВЗ) и центрифугировали, как указано выше. Супернатант сливали, как указано выше, и осадок клеток хранили при -20°С перед клеточным лизисом.
Все осадки клеток лизировали на льду в течение 30 мин в 1 мл буфера для клеточного лизиса в расчете на 2,5х106 клеток. Буфер для лизиса содержал 1% нонилфеноксиполиэтоксилэтанола (Тегд11о1-1уре ΝΡ-40), 0,1% дезоксихолата натрия, 0,1% додецилсульфата натрия (ЗБЗ), 6 мМ хлорида натрия и 0,05М трисгидроксиметиламинометана при рН 7,6. Коктейль ингибиторов протеаз (1000Х; 81дта Р8340) добавляли перед применением при концентрации 10 мкл/мл буфера для лизиса. Частично лизированные осадки клеток полностью гомогенизировали пестиком для растирания, и ненужный клеточный дебрис удаляли центрифугированием в течение 20 мин при 20000д при 4°С. Осветленный клеточный лизат замораживали при -80°С до его применения.
Клеточный лизат проверяли на цитотоксичность, и общую концентрацию белка для каждого кле- 8 026079 точного лизата измеряли, как описано выше в примере 1.
Клеточный лизат Ниуес разводили разбавителем для образцов, и 100 мкл переносили на предварительно покрытый антителом против человеческой гемоксигеназы 1 планшет для иммуноанализа (Анализ а88ау Ое8фп8). 7-точечную стандартную кривую рекомбинантной гемоксигеназы 1, варьирующую от 25 до 0,39 нг/мл, также готовили в разбавителе для образцов. Планшет для иммуноанализа инкубировали при комнатной температуре 30 мин, промывали шесть раз промывочным буфером и инкубировали в течение дополнительных 60 мин при комнатной температуре с 100 мкл/лунка раствора антитела против гемоксигеназы 1. Планшет промывали, как указано выше, и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре с 100 мкл/лунка раствора конъюгата с пероксидазой хрена. Планшет снова промывали, как указано выше, и 100 мкл/лунка субстрата тетраметилбензидина добавляли в каждую лунку и выдерживали в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте. После добавления 100 мкл/лунка стопреагента считывали поглощение при 450 нм, и неизвестные из биопсии уровни гемоксигеназы 1 экстраполировали из калибровочной кривой.
На фиг. 6 показана гемоксигеназа 1 (НО-1) (пг в расчете на мкг белка) в качестве контроля (необработанные человеческие эндотелиальные клетки пуповинной вены); 2 и 4 мкг/мл Θ1ί§οηο1™; 5, 10 и 20 мкг/мл Лциа8о1™ (обозначен Ойуе на фигуре) и их комбинации. Комбинация Θ1ί§οηο1™ и Лсцто!1™. как оказалось, значительно и синергически увеличивает уровни гемоксигеназы 1.
МитакЫта е1 а1. (ВгоГасГОго, 22, 1-4, 271-5 (2004)) описывают, что полученные из эритроидного ядерного фактора 2 (Ντί2) факторы транскрипции опосредуют окисление липопротеина низкой плотности (ЛПНП). Μπγοο е1 а1. (Ν. Епд1.1. Мей., 337, 408-416 (1997)) описывают, как атеросклероз развивается от того, что ЛННП становятся окисленными свободными радикалами, чрезвычайно активными формами кислорода. Следовательно, активация Ντ£2 факторов транскрипции должна привести к ингибированию окисления ЛПНП. Ьее е! а1. Οοΐ-ΐη·^ οί ВюсНеищйу апй ΜοΚουΗτ Вюкду, 37, 2, 139-143 (2004)) описывает ферменты, индуцируемые Ντί2 факторами транскрипции, включая гемоксигеназу-1 (НО-1). Таким образом, гемоксигеназа-1 (НО-1) является индикатором или конечным маркером Ντί2 активации и, следовательно, можно ожидать, что синергическая повышающая регуляция НО-1 на Θ1φοηο1™ и ΛςυηδοΓ™ приведет к синергическому снижению ЛПНП окисления, опосредованно снижая начало атеросклероза.
Гемоксигеназа 1 может быть активирована с использованием ряда различных путей (посредством индукции экспрессии гена Ντί2 и ядерной транслокации). Ντί2 факторы транскрипции повышающим образом регулируют матричную рибонуклеиновую кислоту (мРНК), белок и активность для НО-1, и полагают, что как Θ1ΐ§οηο1™, так и Λςυη8ο1™ направляет и активирует различные части метаболического пути Ντί2. Результаты в настоящее время демонстрируют, что такая повышающая регуляция происходит синергическим образом, например посредством конформационных изменений или увеличений фосфорилирования, что может привести к увеличению ядерной транслокации Ντί2.

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Пероральная композиция для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии, содержащая водно-этанольный экстракт О1еа еигораеа, или олеуропеин, и композицию, содержащую в качестве основного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, где указанная композиция получена нагреванием растительного материала, являющегося экстрактом, полученным из комбинации плодов ЬусЫ сЫпеп818 и зеленых листьев СатеШа 81пеп818 в кислотном водном растворе.
  2. 2. Композиция по п.1, содержащая 10-5000 мг водно-этанольного экстракта О1еа еигораеа и 10-5000 мг композиции, содержащей в качестве основного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру.
  3. 3. Композиция по п.2, где количество водно-этанольного экстракта О1еа еигораеа составляет 502500 мг.
  4. 4. Композиция по п.2, где количество водно-этанольного экстракта О1еа еигораеа составляет 100300 мг.
  5. 5. Композиция по п.2, где количество композиции, содержащей в качестве основного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, составляет 50-2500 мг.
  6. 6. Композиция по п.2, где количество композиции, содержащей в качестве основного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую кольцевую структуру, составляет 100-300 мг.
  7. 7. Композиция по любому из пп.1-6, где массовое отношение водно-этанольного экстракта О1еа еигораеа к композиции, содержащей в качестве основного компонента проантоцианидиновый олигомер, к которому присоединено вещество, имеющее флороглюциновую кольцевую структуру или резорциновую
    - 9 026079 кольцевую структуру, составляет от 10:1 до 1000:1.
  8. 8. Композиция по п.7, где указанное массовое отношение составляет от 10:1 до 100:1.
  9. 9. Композиция по п.1, где указанная композиция, полученная нагреванием растительного материала, являющегося экстрактом, полученным из комбинации плодов ЬусЫ сЫпеп518 и зеленых листьев СатеШа 8шеп818 в кислотном водном растворе, представляет собой Θ1ί§οηο1™.
  10. 10. Способ предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека, включающий стадию введения индивидууму, нуждающемуся в этом, композиции по любому из пп. 1-9.
  11. 11. Применение композиции по любому из пп.1-9 для предотвращения или лечения сердечнососудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
  12. 12. Применение композиции по любому из пп.1-9 для получения лекарственного средства для предотвращения или лечения сердечно-сосудистого заболевания или осложнений гипертензии у человека.
EA201391804A 2011-05-27 2012-04-17 Противовоспалительная композиция EA026079B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11167804 2011-05-27
PCT/EP2012/056981 WO2012163590A1 (en) 2011-05-27 2012-04-17 Anti-inflammatory composition

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201391804A1 EA201391804A1 (ru) 2014-03-31
EA026079B1 true EA026079B1 (ru) 2017-02-28

Family

ID=44303497

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201391804A EA026079B1 (ru) 2011-05-27 2012-04-17 Противовоспалительная композиция

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP2714085B1 (ru)
CN (1) CN103561768B (ru)
BR (1) BR112013029426A2 (ru)
CA (1) CA2835715A1 (ru)
EA (1) EA026079B1 (ru)
WO (1) WO2012163590A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101555872B1 (ko) 2014-11-13 2015-09-30 주식회사 아토큐앤에이 고욤잎 추출물을 함유하는 항알레르기용 또는 항가려움용 조성물

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997032947A1 (en) * 1996-03-05 1997-09-12 Comiter Trading & Services S.R.L. A product based on olive oil, enriched and supplemented with antioxidants
WO2005072726A1 (en) * 2004-01-28 2005-08-11 Mars, Incorporated Compositions and methods of use of a-type procyanidins
WO2006087748A1 (en) * 2005-02-21 2006-08-24 Goya Holding S.A. Method for the enrichment and supplementation of olive oils with organic antioxidants, product obtained thereby and system for implementing said method
EP1852430A1 (en) * 2005-02-25 2007-11-07 Nagasaki University Method of producing proanthocyanidin oligomer
WO2010070183A1 (es) * 2008-12-18 2010-06-24 Sanidad Y Residencias 21, S.A.U. Composición farmacéutica que comprende oleuropeina para utilización en la inducción de angiogénesis y vasculogénesis

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997032947A1 (en) * 1996-03-05 1997-09-12 Comiter Trading & Services S.R.L. A product based on olive oil, enriched and supplemented with antioxidants
WO2005072726A1 (en) * 2004-01-28 2005-08-11 Mars, Incorporated Compositions and methods of use of a-type procyanidins
WO2006087748A1 (en) * 2005-02-21 2006-08-24 Goya Holding S.A. Method for the enrichment and supplementation of olive oils with organic antioxidants, product obtained thereby and system for implementing said method
EP1852430A1 (en) * 2005-02-25 2007-11-07 Nagasaki University Method of producing proanthocyanidin oligomer
WO2010070183A1 (es) * 2008-12-18 2010-06-24 Sanidad Y Residencias 21, S.A.U. Composición farmacéutica que comprende oleuropeina para utilización en la inducción de angiogénesis y vasculogénesis

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CATERINA MANNA, VALENTINA MIGLIARDI, PAOLO GOLINO, ANNALISA SCOGNAMIGLIO, PATRIZIA GALLETTI, MASSIMO CHIARIELLO AND VINCENZO ZAPPI: "Oleuropein prevents oxidative myocardial injury induced by ischemia and reperfusion", THE JOURNAL OF NUTRITIONAL BIOCHEMISTRY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 15, no. 8, 1 August 2004 (2004-08-01), AMSTERDAM, NL, pages 461 - 466, XP002654432, ISSN: 0955-2863, DOI: 10.1016/j.jnutbio.2003.12.010 *
DEBASIS BAGCHI, CHANDAN K SEN, SIDHARTHA D RAY, DIPAK K DAS, MANASHI BAGCHI, HARRY G PREUSS AND JOE A VINSON: "Molecular mechanisms of cardioprotection by a novel grape seed proanthocyanidin extract", MUTATION RESEARCH, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 523-524, no. Special Issue, 1 February 2003 (2003-02-01), AMSTERDAM, NL, pages 87 - 97, XP002654433, ISSN: 0027-5107, DOI: 10.1016/s0027-5107(02)00324-x *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012163590A1 (en) 2012-12-06
CN103561768B (zh) 2016-11-16
CA2835715A1 (en) 2012-12-06
CN103561768A (zh) 2014-02-05
EP2714085A1 (en) 2014-04-09
EP2714085B1 (en) 2016-06-01
EA201391804A1 (ru) 2014-03-31
BR112013029426A2 (pt) 2017-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kruger et al. Proanthocyanidins, anthocyanins and cardiovascular diseases
Brâkenhielm et al. Suppression of angiogenesis, tumor growth, and wound healing by resveratrol, a natural compound in red wine and grapes
Chen et al. Protective effects of Chlorella-derived peptide on UVB-induced production of MMP-1 and degradation of procollagen genes in human skin fibroblasts
Fernández-Fernández et al. LMN diet, rich in polyphenols and polyunsaturated fatty acids, improves mouse cognitive decline associated with aging and Alzheimer's disease
Kim et al. Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid profile and inhibiting NF-κB activation via phase II gene expression
WO2011108487A1 (ja) 筋萎縮阻害剤
JP5271534B2 (ja) 筋萎縮抑制剤
EP2983662A1 (en) Activated soy pod fiber
WO2007091707A1 (ja) 骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物、その組成物を含有する機能性食品、健康食品及び医薬製剤、並びに歯根－歯周組織形成促進剤
KR101217181B1 (ko) 탄닌산 및 퀘르세틴을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2013155166A1 (en) Modulation of oxidative stress, inflammation, and impaired insulin sensitivity with grape seed extract
EA026079B1 (ru) Противовоспалительная композиция
Adekunle et al. Antiatherogenic, hypolipidemic and antiinflammatory benefits of black tea and Zanthoxylum zanthoxyloid.
Tripathi et al. Effect of a dietary supplement on the reduction of lymphedema-progression in mouse tail-cut model
EP2124923A1 (en) Use of a polyphenol in the treatment of the metabolic syndrome and endothelial dysfunction or other vascular sequellae.
Son et al. Comparison of anti-obesity effects of sprit vinegar and natural fermented vinegar products on the differentiation of 3T3-L1 cells and obese rats fed a high-fat diet
HT et al. Grape-seed polyphenols inhibit AAA in mice via regulation of macrophage polarization.
Zhou et al. A local dark tea–Liubao tea–extract exhibits remarkable performance in oral tissue regeneration, inflammation relief and oral microbiota reconstruction
KR101356398B1 (ko) 대두가공 부산물을 유효성분으로 하는 비만 예방 또는 치료용 조성물
Haynie Role of sex differences on cancer cachexia progression and fibrosis during cancer cachexia development
Abdel-Razek et al. Prophylactic effects of dietary caper (Capparis spinosa) extracts on the control of Streptococcus agalactiae infection, growth, immune-antioxidant, and inflammation cytokine responses of Nile tilapia fingerlings
KR101473748B1 (ko) 문주란 추출물을 이용한 항비만 조성물 및 항고지혈증 조성물
JP2010235524A (ja) 花粉荷を含有する抗ヒスタミン剤
KR20230100427A (ko) 파프리카 추출물을 함유하는 혈관염증질환 예방 또는 치료용 조성물
Ahmed et al. Antioxidant Activity of Different Treatments of Sesame Seeds on Lipid Profile in Rats with Atherosclerosis

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU