CN103550403A - 一种从茶果皮中提取血管紧张素ⅰ转化酶抑制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的提取方法，旨在提供一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法。该方法包括以下步骤：向干燥后粉碎的茶果皮中加入丙酮，浸泡后离心得到茶果皮，向得到的茶果皮中加入缓冲液超声提取，再离心得到提取液，向提取液中加入氯仿，萃取得到萃余液，萃余液浓缩后冷冻干燥得到初提取物，然后将初提取物加入到乙醇水溶液中，离心得到上清液，最后上清液浓缩后冷冻干燥，即得到血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂。本发明通过超声提取和极性筛选从茶果皮中提取了一种天然的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂，对血管紧张素Ⅰ转化酶的抑制效果显著，并且，本发明的技术可以有效提高茶果皮资源的经济效益。
Description
技术领域
本发明是关于血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的提取方法，特别涉及一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法。
背景技术
高血压是最常见的一种以动脉收缩压或舒张压升高为特征的心血管疾病，常常引发心、脑、肾、眼等的并发症，是当今世界五大常见疾病之一。根据2009年统计，全球最少有10亿人有高血压，预计到2025年高血压患者会增至15.6亿人，严重威胁着人类的健康。血管紧张素I转换酶（Agiotensin I-converting enzyme，ACE）是与细胞膜结合的含锌蛋白酶，它在肾素-血管紧张素-醛固酮系统中，通过以下两种途径使血压升高：一方面，ACE可以将无升压活性的血管紧张素Ⅰ水解，生成具有升压活性的血管紧张素Ⅱ；另一方面，在激肽释放酶-激肽系统中，ACE能够降解具有降压活性的缓激肽，使之失去降血压活性。因此，对于血管紧张素Ⅰ转化酶的抑制对治疗高血压意义重大。
当前，植物源天然产物因其高效、低毒和来源丰富备受世界关注。茶果是茶树除茶叶之外的另一重要部位，包括茶果皮、茶籽壳和茶籽仁。随着2010年茶叶籽油被卫生部批准为新资源食品，茶叶籽油加工如火如荼开展，然而，这也导致茶果皮这一加工副产物的大量产生。目前，对于如何有效利用茶果皮资源还鲜见报道。更未见从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的报道或专利。
发明内容
本发明的主要目的在于克服现有技术中的不足，提供一种能有效利用茶果皮资源，且能提取出天然血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法。为解决上述技术问题，本发明的解决方案是：
提供一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法，包括干燥和粉碎茶果皮，包括以下具体步骤：
步骤A：称取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和丙酮为1g：10ml～1g：20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3～4小时后离心得到茶果皮；
步骤B：以茶果皮和缓冲液为1g：15ml～1g：25ml的比例，向步骤A得到的经丙酮浸泡过的茶果皮中加入PH为2～3的缓冲液，在200～300W频率下超声提取1～2小时后离心，得到提取液；
步骤C：以步骤B中得到的提取液和氯仿的体积比为1：1～3:1的比例，向步骤B得到的提取液中加入氯仿，进行萃取，得到萃余液；
步骤D：将步骤C得到的萃余液浓缩后冷冻干燥，即得到具有抑制血管紧张素Ⅰ转化酶的初提取物；
步骤E：以步骤D中得到的初提取物和体积浓度75%的乙醇水溶液为1g：10ml～1g：20ml的比例，将步骤D得到的初提取物加入到体积浓度75%的乙醇水溶液中，充分搅拌后离心得到上清液；
步骤F：将步骤E中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，即得到从茶果皮中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂。
作为进一步的改进，所述步骤A和步骤B中的离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟。
作为进一步的改进，所述步骤B中的缓冲液是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
作为进一步的改进，所述步骤E中的离心条件为：10000转/分钟，离心25分钟。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过超声提取和极性筛选从茶果皮中提取了一种天然的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂，这种天然的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂对血管紧张素Ⅰ转化酶的抑制效果显著，并且，本发明的技术可以有效提高茶果皮资源的经济效益。
附图说明
图1为本发明实施例中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂对血管紧张素Ⅰ转化酶的抑制作用对比图。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细描述：
本发明从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法具体步骤包括：
步骤A：称取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和丙酮为1g：10ml～1g：20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3～4小时后离心得到茶果皮，所述离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤B：以茶果皮和缓冲液为1g：15ml～1g：25ml的比例，向步骤A得到的经丙酮浸泡过的茶果皮中加入PH为2～3的缓冲液，在200～300W频率下超声提取1～2小时后离心，得到提取液；所述缓冲液优选磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤C：以步骤B中得到的提取液和氯仿的体积比为1：1～3:1的比例，向步骤B 得到的提取液中加入氯仿，进行萃取，得到萃余液；
步骤D：将步骤C得到的萃余液浓缩后冷冻干燥，即得到具有抑制血管紧张素Ⅰ转化酶的初提取物；
步骤E：以步骤D中得到的初提取物和体积浓度75%的乙醇水溶液为1g：10ml～1g：20ml的比例，将步骤D得到的初提取物加入到体积浓度75%的乙醇水溶液中，充分搅拌后离心得到上清液，所述离心条件为：10000转/分钟，离心25分钟；
步骤F：将步骤E中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，即得到从茶果皮中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂。
下面的实施例可以使本专业的专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
步骤A：称取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和丙酮为1g：10ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡4小时后离心得到茶果皮，所述离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤B：以茶果皮和缓冲液为1g：15ml的比例，向步骤A得到的经丙酮浸泡过的茶果皮中加入PH为2的缓冲液，在200W频率下超声提取2小时后离心，得到提取液；所述缓冲液优选磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤C：以步骤B中得到的提取液和氯仿的体积比为1：1的比例，向步骤B得到的提取液中加入氯仿，进行萃取，得到萃余液；
步骤D：将步骤C得到的萃余液浓缩后冷冻干燥，即得到具有抑制血管紧张素Ⅰ转化酶的初提取物；
步骤E：以步骤D中得到的初提取物和体积浓度75%乙醇水溶液为1g：10ml的比例，将步骤D得到的初提取物加入到体积浓度75%乙醇水溶液中，充分搅拌后离心得到上清液，所述离心条件为：10000转/分钟，离心25分钟；
步骤F：将步骤E中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，即得到从茶果皮中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂0.74g，得率为3.7%（占茶果皮干重）。
实施例2
步骤A：称取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和丙酮为1g：15ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3.5小时后离心得到茶果皮，所述离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤B：以茶果皮和缓冲液为1g：20ml的比例，向步骤A得到的经丙酮浸泡过的茶果皮中加入PH为2.5的缓冲液，在250W频率下超声提取1.5小时后离心，得到提取液；所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤C：以步骤B中得到的提取液和氯仿的体积比为2:1的比例，向步骤B得到的提取液中加入氯仿，进行萃取，得到萃余液；
步骤D：将步骤C得到的萃余液浓缩后冷冻干燥，即得到具有抑制血管紧张素Ⅰ转化酶的初提取物；
步骤E：以步骤D中得到的初提取物和体积浓度75%乙醇水溶液为1g：15ml的比例，将步骤D得到的初提取物加入到体积浓度75%乙醇水溶液中，充分搅拌后离心得到上清液，所述离心条件为：10000转/分钟，离心25分钟；
步骤F：将步骤E中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，即得到从茶果皮中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂1.2g，得率为6%（占茶果皮干重）。
实施例3
步骤A：称取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和丙酮为1g：20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3小时后离心得到茶果皮，所述离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤B：以茶果皮和缓冲液为1g：25ml的比例，向步骤A得到的经丙酮浸泡过的茶果皮中加入PH为3的缓冲液，在300W频率下超声提取1小时后离心，得到提取液；所述缓冲液优选磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟；
步骤C：以步骤B中得到的提取液和氯仿的体积比为3:1的比例，向步骤B得到的提取液中加入氯仿，进行萃取，得到萃余液；
步骤D：将步骤C得到的萃余液浓缩后冷冻干燥，即得到具有抑制血管紧张素Ⅰ转化酶的初提取物；
步骤E：以步骤D中得到的初提取物和体积浓度75%乙醇水溶液为1g：20ml的比例，将步骤D得到的初提取物加入到体积浓度75%乙醇水溶液中，充分搅拌后离心得到上清液，所述离心条件为：10000转/分钟，离心25分钟；
步骤F：将步骤E中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，即得到从茶果皮中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂1.5g，得率为7.5%（占茶果皮干重）。
将上述3个实施例的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂进行血管紧张素Ⅰ转化酶抑制效果验证，具体步骤如下所示：
步骤一、预先配制下列溶液：
硼酸盐缓冲液：配制0.1mol/L含0.3mol/L氯化钠的硼酸钠缓冲液，溶液PH=8.3；
马脲酰组氨酰亮氨酸（HHL）溶液：用硼酸钠缓冲液配制5mmol/L马尿酰组氨酰亮氨酸溶液；
血管紧张素I转换酶（ACE）溶液：用去离子水配制0.1U/ml的血管紧张素Ⅰ转换酶溶液。
抑制剂：用PH为8.3硼酸钠缓冲液溶解制备的抑制剂溶液。
二、按照下表所示添加并操作：
三、将步骤二中的编号a、b、c在37℃水浴反应60min后，马上加入1mol/L的HCL以终止反应，然后加入1ml冷乙酸乙酯，均匀混合15s，进行4000r/min的离心；吸取750μl乙酸乙酯层于另一试管中，放入120℃烘箱蒸发溶剂，冷却后加入去离子水3ml，混合半分钟后，228nm下测a、b和c的吸光度，血管紧张素Ⅰ转换酶抑制率计算如下：
ACE抑制率（%）=(Ab-Aa)/(Ab-Ac)*100％，其中Aa、Ab、Ac分别为编号a、b、c在228nm下测的吸光度。
如图1所示，从实验数据可以看出，应用本发明技术制备的血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂对血管紧张素Ⅰ转换酶具有显著的抑制作用，并且呈现剂量依赖效应，可以应用在针对高血压患者开发的药物和保健食品等领域。
Claims (4)
1.一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法，包括干燥和粉碎茶果皮，其特征在于，包括以下具体步骤：
步骤A：称取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和丙酮为1g：10ml～1g：20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3～4小时后离心得到茶果皮；
步骤B：以茶果皮和缓冲液为1g：15ml～1g：25ml的比例，向步骤A得到的经丙酮浸泡过的茶果皮中加入PH为2～3的缓冲液，在200～300W频率下超声提取1～2小时后离心，得到提取液；
步骤C：以步骤B中得到的提取液和氯仿的体积比为1：1～3:1的比例，向步骤B得到的提取液中加入氯仿，进行萃取，得到萃余液；
步骤D：将步骤C得到的萃余液浓缩后冷冻干燥，即得到具有抑制血管紧张素Ⅰ转化酶的初提取物；
步骤E：以步骤D中得到的初提取物和体积浓度75%的乙醇水溶液为1g：10ml～1g：20ml的比例，将步骤D得到的初提取物加入到体积浓度75%的乙醇水溶液中，充分搅拌后离心得到上清液；
步骤F：将步骤E中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，即得到从茶果皮中提取的血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述的一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤A和步骤B中的离心条件为：5000转/分钟，离心10分钟。
3.根据权利要求1所述的一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤B中的缓冲液是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的一种从茶果皮中提取血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤E中的离心条件为：10000转/分钟，离心25分钟。
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