CN105146045A - 海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法，属于食品加工领域。根据海洋鱼和淡水鱼的不同性质，选用不同的蛋白酶制备其胶原蛋白，再利用不同复配方案复合酶解制得两种鱼蛋白生物活性肽，收集具有降血压活性的特定分子量段的肽组分，按照特定比例组合海洋鱼蛋白肽和淡水鱼蛋白肽，组合之后的复合肽降血压活性高于海洋鱼肽或淡水鱼肽单独使用时。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工领域，一种食品功能性成分的制作方法，具体涉及海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法。
背景技术
高血压是危害身体健康的疾病，对心、脑、血管都有严重危害，并常引发脑卒中、中风、猝死等重大疾病或死亡。一些食源性活性肽具备预防、缓解和治疗高血压的功能。
海洋鱼与淡水鱼蛋白资源比较丰富，利用复合酶解的方法制备特定的海洋鱼蛋白肽和淡水鱼蛋白肽，再将二者组合，可生产出具有降血压功能的活性肽。
发明内容
本发明提供了海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法，按以下步骤进行：
1）前处理：海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺、杂质等，打成匀浆；
2）胶原蛋白提取：在海洋鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:8或1:12的纯净水，再加入3000U/g鱼肉-5000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为7.5-8.5、温度为35℃-40℃、酶解时间为2h-4h；在淡水鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:6或1:8的纯净水，再加入4000U/g鱼肉-5000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.0-2.5、温度为35℃-40℃、酶解时间为1h-3h；
3）离心分离：酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为3000转/min-4000转/min，离心时间为15min-20min；
4）海洋鱼蛋白肽制备：在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于海洋鱼胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL-2000U/mL、3000U/mL-4000U/mL与1500U/mL-2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0-7.5、温度为35℃-45℃、酶解时间为6h-8h；
5）淡水鱼蛋白肽制备：在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL-2000U/mL、3000U/mL-4000U/mL与1500U/mL-2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0-8.0、温度为35℃-45℃、酶解时间为4h-6h；
6）钝化酶：将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是90℃-95℃，3min-5min；
7）超滤：将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在0.5MPa-1.0MPa，室温操作；
8）干燥：将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间为25h-35h，温度为30℃-35℃，真空度为100Pa-300Pa；
9）组合：海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比4:1或3:1比例混合；
10）压片：海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
进一步地，该方法按以下步骤进行：
海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺、杂质等，打成匀浆；在海洋鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:8的纯净水，再加入5000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为7.5、温度为40℃、酶解时间为2h；在淡水鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:6的纯净水，再加入4000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.0、温度为35℃、酶解时间为2h；酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为4000转/min，离心时间为15min；在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于海洋鱼胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL、4000U/mL与2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0、温度为37℃、酶解时间为8h；在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是2000U/mL、3000U/mL与1500U/mL，酶解条件是：pH为8.0、温度为45℃、酶解时间为4h；将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是95℃，3min；将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在1.0MPa，室温操作；将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间25h，温度35℃，真空度100Pa；海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比4:1比例混合；海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
进一步优化地，本方法按以下步骤进行：
海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺、杂质等，打成匀浆；在海洋鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:12的纯净水，再加入3000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为8.5、温度为37℃、酶解时间为4h；在淡水鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:8的纯净水，再加入5000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.5、温度为40℃、酶解时间3h；酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为3000转/min，离心时间为20min；在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于海洋鱼胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是2000U/mL、3000U/mL与1500U/mL，酶解条件是：pH为7.5、温度为40℃、酶解时间为6h；在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL、4000U/mL与2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0、温度为42℃、酶解时间为6h；将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是90℃，5min；将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在0.5MPa，室温操作；将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间为35h，温度为30℃，真空度为200Pa；海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比3:1比例混合；海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
与现有技术相比，本发明具有如下优点与技术效果：
（1）根据海洋鱼与淡水鱼肌肉的不同性质，分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶处理鱼肉，制备胶原蛋白。
（2）采用复合酶解的方法将鱼胶原蛋白酶解成为生物活性肽，根据海洋鱼胶原蛋白与淡水鱼胶原蛋白的不同性质，采用不同的复合酶解方案，以获得两种鱼类的生物活性肽。
（3）通过对酶解制得的鱼蛋白肽进行降血压功能体外实验测定，来确定收集不同分子量范围的肽组分，海洋鱼蛋白肽收集组分为1000Da-2000Da，淡水鱼蛋白肽收集组分为2000Da-3000Da。
（4）收集特定分子量范围的肽组分，以使得其降血压这项功能的指标强。（5）通过检测降血压功能来优化海洋鱼蛋白肽与淡水鱼蛋白肽的比例配方，两种鱼蛋白肽复配之后，显示出协同增效作用，比它们单独使用时，降血压效果更好。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的实施作进一步说明，但本发明的实施和保护不限于此。
实施例一：
海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺、杂质等，打成匀浆；在海洋鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:8的纯净水，再加入5000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为7.5、温度为40℃、酶解时间为2h；在淡水鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:6的纯净水，再加入4000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.0、温度为35℃、酶解时间为2h；酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为4000转/min，离心时间为15min；在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL、4000U/mL与2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0、温度为37℃、酶解时间为8h；在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是2000U/mL、3000U/mL与1500U/mL，酶解条件是：pH为8.0、温度为45℃、酶解时间为4h；将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是95℃，3min；将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在1.0MPa，室温操作；将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间为25h，温度为35℃，真空度为100Pa；海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比4:1比例混合；海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
实施例二：
海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺、杂质等，打成匀浆；在海洋鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:12的纯净水，再加入3000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为8.5、温度为37℃、酶解时间为4h；在淡水鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:8的纯净水，再加入5000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.5、温度为40℃、酶解时间为3h；酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为3000转/min，离心时间为20min；在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是2000U/mL、3000U/mL与1500U/mL，酶解条件是：pH为7.5、温度为40℃、酶解时间为6h；在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL、4000U/mL与2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0、温度为42℃、酶解时间为6h；将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是90℃，5min；将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在0.5MPa，室温操作；将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间为35h，温度为30℃，真空度为200Pa；海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比3:1比例混合；海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
活性肽降血压功能测定：
高血压患者通过服用含有血管紧张素转换酶（ACE酶）的抑制剂，降低ACE酶活性，则血管紧张素Ⅱ的生成减少，缓激肽的破坏减少，在二者的共同作用下可以有效地降低血压。因此，可以用ACE酶的抑制率来衡量活性肽的降血压效果，ACE酶的抑制率越高，则活性肽的降血压效果越好。表1为海洋鱼蛋白生物活性肽的降血压功能表。
表1
| 海洋鱼肽:淡水鱼肽=4:1 | 海洋鱼肽:淡水鱼肽=3:1 | 海洋鱼肽 | 淡水鱼肽 | |
| 血管紧张素转换酶（ACE酶）抑制率（%） | 88.5±2.3 | 81.7±2.7 | 70.5±3.1 | 53.3±2.5 |
注：抑制率为三次重复实验的平均值，数据以±s表示。
上表为本方案制备的不同分子量肽组分的ACE酶抑制效果，其中分子量小于3000Da的肽组分对ACE酶的抑制率最高，因此，本方案收集该组分制成降血压活性肽。
Claims (3)
1.海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法，其特征在于，该方法按以下步骤进行：
1）前处理：海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺与杂质，打成匀浆，得海洋鱼肉匀浆与淡水鱼肉匀浆；
2）胶原蛋白提取：在海洋鱼肉匀浆中加入与海洋鱼肉匀浆质量比为1:8或1:12的纯净水，再加入3000U/g鱼肉-5000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为7.5-8.5、温度为35℃-40℃、酶解时间为2h-4h；在淡水鱼肉匀浆中加入与淡水鱼肉匀浆质量比为1:6或1:8的纯净水，再加入4000U/g鱼肉-5000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.0-2.5、温度为35℃-40℃、酶解时间为1h-3h；
3）离心分离：酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为3000转/min-4000转/min，离心时间为15min-20min；
4）海洋鱼蛋白肽制备：在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于海洋鱼胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL-2000U/mL、3000U/mL-4000U/mL与1500U/mL-2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0-7.5、温度为35℃-45℃、酶解时间为6h-8h；
5）淡水鱼蛋白肽制备：在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL-2000U/mL、3000U/mL-4000U/mL与1500U/mL-2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0-8.0、温度为35℃-45℃、酶解时间为4h-6h；
6）钝化酶：将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是90℃-95℃，3min-5min；
7）超滤：将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在0.5MPa-1.0MPa，室温操作；
8）干燥：将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间为25h-35h，温度为30℃-35℃，真空度为100Pa-300Pa；
9）组合：海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比4:1或3:1比例混合；
10）压片：海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
2.根据权利要求1所述的海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法，其特征在于，该方法按以下步骤进行：
海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺与杂质，打成匀浆；在海洋鱼肉匀浆中加入与海洋鱼肉匀浆质量比为1:8的纯净水，再加入5000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为7.5、温度为40℃、酶解时间为2h；在淡水鱼肉匀浆中加入与淡水鱼肉匀浆质量比为1:6的纯净水，再加入4000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.0、温度为35℃、酶解时间为2h；酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为4000转/min，离心时间为15min；在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于海洋鱼胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL、4000U/mL与2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0、温度为37℃、酶解时间为8h；在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是2000U/mL、3000U/mL与1500U/mL，酶解条件是：pH为8.0、温度为45℃、酶解时间为4h；将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是95℃，3min；将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在1.0MPa，室温操作；将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间25h，温度35℃，真空度100Pa；海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比4:1比例混合；海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
3.根据权利要求1所述的海洋鱼蛋白与淡水鱼蛋白制备组合降血压肽的方法，其特征在于，该方法按以下步骤进行：
海洋鱼和淡水鱼都经过去皮、骨、刺与杂质，打成匀浆；在海洋鱼肉匀浆中加入与海洋鱼肉匀浆质量比为1:12的纯净水，再加入3000U/g鱼肉的碱性蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为8.5、温度为37℃、酶解时间为4h；在淡水鱼肉匀浆中加入与淡水鱼肉匀浆质量比为1:8的纯净水，再加入5000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH为2.5、温度为40℃、酶解时间3h；酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，上清液即胶原蛋白液；离心转速为3000转/min，离心时间为20min；在离心分离得到的海洋鱼胶原蛋白液中加入胰蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶，相对于海洋鱼胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是2000U/mL、3000U/mL与1500U/mL，酶解条件是：pH为7.5、温度为40℃、酶解时间为6h；在离心分离得到的淡水鱼胶原蛋白液中加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶，相对于胶原蛋白液体积所加入的酶用量分别是1500U/mL、4000U/mL与2000U/mL，酶解条件是：pH为7.0、温度为42℃、酶解时间为6h；将酶解后的蛋白肽液经过热处理，钝化蛋白酶，使蛋白酶失去活性，热处理条件是90℃，5min；将钝化酶后的蛋白肽液进行超滤分离，海洋鱼蛋白肽液收集分子量在1000Da-2000Da范围内的肽组分；淡水鱼蛋白肽液收集分子量在2000Da-3000Da范围内的肽组分；超滤压力在0.5MPa，室温操作；将收集到的海洋鱼和淡水鱼蛋白肽组分分别通过真空冷冻干燥获得肽粉末产品；真空冷冻干燥时间为35h，温度为30℃，真空度为200Pa；海洋鱼蛋白肽粉末与淡水鱼肽粉末以质量比3:1比例混合；海洋鱼与淡水鱼混合肽粉末采用压片机制成片状。
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