CN103550237A

CN103550237A - 一种茜草活性成分组合物及其在医药上的应用

Info

Publication number: CN103550237A
Application number: CN201310551606.XA
Authority: CN
Inventors: 单鸣秋; 丁安伟; 张丽; 陈佩东; 曹雨诞; 于生; 包贝华
Original assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Current assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date: 2013-11-11
Filing date: 2013-11-11
Publication date: 2014-02-05
Anticipated expiration: 2033-11-11
Also published as: CN103550237B

Abstract

本发明涉及一种药理作用明确的茜草活性提取组合物，其特征是该组合物含有1,3,6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素，且两个活性成分重量总含量大于90％，该组合物中1,3,6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素的重量比值为1∶0.5～5。本发明还涉及茜草活性提取组合物在制备治疗白细胞减少症药物中的应用。

Description

一种茜草活性成分组合物及其在医药上的应用

技术领域

本发明涉及一种茜草活性成分组合物及其在医药上的应用。该组合物含有1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素，且两个活性成分重量总含量大于90％。该组合物可用于制成口服制剂，用于治疗白细胞减少症。

背景技术

凡外周血液中白细胞数持续低于4×10⁹/L时，统称白细胞减少症。临床主要表现以乏力、头晕为主，常伴有食欲减退、四肢酸软、失眠多梦、低热心悸，畏寒腰酸等症状。白细胞减少症为常见血液病，尤其在老年患者中发生率较高。其发生的原因是化疗在杀灭癌细胞的同时也破坏正常细胞。美国癌症协会调查显示2010年美国新增癌症1529560人。目前全球每年约有1100万新增肿瘤患者，其中20％发生在中国。临床多用鲨肝醇、利血生、瑞白等药物治疗，但疗效较差，且副作用较大。近年来采用的粒细胞集落因子虽有一定疗效但价格昂贵、副作用大，限制了药物的推广。

茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根茎。茜草多年生攀援草本，根数条至数十条丛生，外皮紫红色或橙红色，叶四片轮生，具长柄，叶片形状变化较大，卵形、三角状卵形、宽卵形至窄卵形，浆果球形，红色后转为黑色，花期6～9月，果期8-10月。生于山坡路旁、沟沿、田边、灌丛及林缘，春、秋季采挖。茜草主产于安徽、江苏、山东、河南、山西等地。具有凉血，祛瘀，止血，通经之功效。用于吐血，衄血，崩漏，外伤出血，瘀阻经闭，关节痹痛，跌扑肿痛。

白细胞减少症小鼠口服茜草生药，结果表明茜草对造模后白细胞降低有明显改善作用。血清SOD含量、胸腺指数、脾脏指数、游泳时间较模型组均有显著性差异。

茜草的化学成分以蒽醌及其苷类化合物为主，包括茜草素、1-羟基-2-甲基-蒽醌、羟基茜草素、异茜草素等。此外还含有萘醌类、萜类、己肽类、多糖类等其他化学成分。

1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷，分子式：C₂₄H₃₀O₁₄，分子量：558。大叶茜草素，分子式：C₁₇H₁₆O₄，分子量：284，CAS登录号：191729-45-0。其结构式如下：

发明内容

本发明所要解决的关键问题在于运用现代医药理论，经大鼠白细胞减少症模型试验，提供一种成分明确、质量可控、疗效确切的茜草活性成分组合。

本发明所要解决的关键问题在于该组合物可用于制成口服制剂。

本发明所要解决的关键问题在于该组合物可用于制备治疗白细胞减少症药物中的应用。

本发明所要解决的关键问题可以通过以下措施来达到：

本发明是含1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素活性提取物，二者重量总含量大于90％，其重量比值为1∶0.5～5，最佳重量比值为1∶1。

本发明含有上述茜草活性提取组合物和一种或多种药用赋形剂制成的药用组合物。本发明中1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素的提取来源可以是茜草属植物，本属植物在中国有12种(《中国植物志》)，优选为茜草科植物茜草Rubiacordifolia L.，更优选为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根茎。

本发明合理利用茜草资源，明确有效成分及含量，可利用于制成胶囊剂，可用于制成治疗白细胞减少症的药物。

本发明的药效学研究如下：

1.实验药物与动物

茜草饮片(安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，产地：安徽，批号：120602)，经南京中医药大学吴启南教授鉴定为茜草科植物茜草Rubia Cordifolia L.的干燥根和根茎所制成的饮片。鲨肝醇(广东市桥制药厂，批号：090309)。

SPF级ICR小鼠，雌雄各半，体质量18～22g，108只。由南京中医药大学动物实验中心提供。

2.方法

2.1白细胞减少症小鼠模型的建立

适应环境一周后进行白细胞减少症的造模。除空白组外，各组动物腹腔注射环磷酰胺100mg·kg^-1，每天1次，共3天，造成白细胞减少症模型(白细胞下降至2.00～3.00×10⁹/L)，次日起持续灌胃给药，每天1次，共7天。正常组、模型组灌胃给等容量生理盐水。

2.2分组及给药

将小鼠随机分为9组，每组12只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(鲨肝醇0.3g·kg^-1)、A组(1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷)、B组(大叶茜草素)、C组(按照实施例7制备，2mg/kg)、D组(按照实施例8制备，2mg/kg)、E组(按照实施例9制备，2mg/kg)、F组(生药提取物，2mg/kg)，后八组为白细胞减少组。各组造模后断尾取血测白细胞总数。各组均于造模成功后第一天开始每天灌胃给药，空白对照组和模型对照组：0.5％CMC-Na水溶液灌胃2ml/次；鲨肝醇0.3mg/10g灌胃；A、B、C、D、E、F组均以相应药物剂量的0.5％CMC-Na水溶液灌胃；连续给药7天，于第8天将各组小鼠全部称重，取眶后静脉窦血测WBC。解剖小鼠，取出胸腺和脾脏，生理盐水洗净，滤纸吸净血液。用微量天平测胸腺和脾脏重量，计算胸腺指数和脾脏指数。

计算公式为：

2.3统计及数据处理

所有测定数据以均值±标准差

表示，应用SPSS统计软件进行统计学处理。组内采用t检验，组间比较采用方差分析。

3.试验结果

表1试验结果(n=12,

)

注：^＊＊代表P＜0.01，^＊代表P＜0.05，均与模型组比较

上表说明：A组给药后白细胞数非常明显增加，胸腺指数改善不明显，脾脏指数增加明显。B组给药后，白细胞数改善不明显，胸腺指数明显增加，脾脏指数非常明显增加。C、E组给药后，白细胞数、胸腺指数、脾脏指数均显著增加。D组给药后白细胞数、胸腺指数显著增加，脾脏指数非常明显增加。F组给药后白细胞数明显增加，胸腺指数、脾脏指数均不明显增加。

4.结论

从以上试验可以看出，C、D、E组药物(组合物)比单独使用的A、B组，以及生药的提取物F组效果好。

本发明的纯度测定研究方法如下：

1.仪器与试剂

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，SPD-20A型检测器，LC solution色谱工作站。赛多利斯BP211D型电子天平(准确到0.01mg)。甲醇，三氟乙酸均为色谱纯，重蒸水自制。

2.色谱条件

Kromasil C₁₈色谱柱(100×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.07％三氟乙酸水溶液(60：40)为测定1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷纯度的流动相，以甲醇-0.07％三氟乙酸水溶液(80：20)为测定大叶茜草素纯度的流动相；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；检测波长：276nm。

3.供试品溶液的制备

取待测成分适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。

4.纯度测定方法

采用HPLC面积归一化法测定待测成分的纯度：在上述测定条件下，精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。测量待测成分色谱峰面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算待测成分色谱峰面积占总峰面积的百分率。

具体实施方式

实施例1

提取物浸膏的制备：取茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根或根茎10kg，加6倍量的95％乙醇加热回流提取2次，每次2h，残渣再加6倍量75％乙醇加热回流提取2次，每次2h。合并乙醇回流提取液，减压回收乙醇得浸膏1285.6g。

实施例2

提取物浸膏的制备：取茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根或根茎10kg，加8倍量的水煎煮2次，每次2h，残渣再加8倍量95％乙醇加热回流提取2次，每次2h。合并水煎煮液和乙醇回流提取液，减压回收乙醇得浸膏1497.2g。

实施例3

1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷的制备：称取实施例1浸膏200g，加10倍量的正丁醇振摇萃取3次，合并萃取液，回收正丁醇得浸膏62.7g。上硅胶柱(100g)以二氯甲烷洗脱后，再以二氯甲烷-甲醇(2：1)洗脱，200ml为一个流份，以HPLC检测，收集第65～169号流份，减压回收洗脱剂，得黄色粉末2.4g。按照前述纯度测定方法，鉴定为1，3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷，纯度为96.89％。

实施例4

1，3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷的制备：称取实施例2浸膏200g，加10倍量的正丁醇振摇萃取3次，合并萃取液，回收正丁醇得浸膏68.1g。上硅胶柱(100g)以二氯甲烷洗脱后，再以二氯甲烷-甲醇(2：1)洗脱，200ml为一个流份，以HPLC检测，收集第69～181号流份，减压回收洗脱剂，得黄色粉末3.1g。按照前述纯度测定方法，鉴定为1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷，纯度为98.12％。

实施例5

大叶茜草素的制备：称取实施例1浸膏200g，加10倍量的石油醚振摇萃取3次，合并萃取液，回收石油醚得浸膏59.2g。上硅胶柱(100g)以石油醚洗脱后，再以石油醚-乙酸乙酯(99：1)洗脱，200ml为一个流份，以HPLC检测，收集第25～139号流份，减压回收洗脱剂，得黄色片状结晶5.9g。按照前述纯度测定方法，鉴定为大叶茜草素，纯度为98.85％。

实施例6

大叶茜草素的制备：称取实施例1浸膏200g，加10倍量的石油醚振摇萃取3次，合并萃取液，回收石油醚得浸膏47.8g。上硅胶柱(100g)以石油醚洗脱后，再以石油醚-乙酸乙酯(99：1)洗脱，200ml为一个流份，以HPLC检测，收集第55～146号流份，减压回收洗脱剂，得黄色片状结晶4.2g。按照前述纯度测定方法，鉴定为大叶茜草素，纯度为97.01％。

实施例7

1，3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷+大叶茜草素组合物制备：将实施例3和实施例4获得的产品按照1：1混合，得到茜草提取组合物。

实施例8

1，3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷+大叶茜草素组合物制备：将实施例5和实施例6获得的产品按照1：0.5混合，得到茜草提取组合物。

实施例9

1，3，6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷+大叶茜草素组合物制备：将实施例5和实施例6获得的产品按照1：5混合，得到茜草提取组合物。

实施例10

茜草活性成分组合物的制剂：将实施例7获得的组合物10g，加甘油聚乙二醇混合物340g，混合均匀，制成片剂。

实施例11

茜草活性成分组合物的制剂：将实施例7获得的组合物100g，加乳糖400g，淀粉100g，硬脂酸镁1g，CMC-Na25g，混合，制粒后填充胶囊。

Claims

1.一种茜草活性提取组合物，其特征是该组合物含有1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素，且两个活性成分重量总含量大于90％，该组合物中1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素的重量比值为1∶0.5～5。

2.根据权利要求1所述的茜草活性提取组合物，其特征是该组合物中1，3，6-三羟基-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-葡萄糖苷和大叶茜草素的重量比值为1∶1。

3.根据权利要求1所述的茜草活性提取组合物在制备治疗白细胞减少症药物中的应用。