CN103543269B - 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 - Google Patents
一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103543269B CN103543269B CN201310485275.4A CN201310485275A CN103543269B CN 103543269 B CN103543269 B CN 103543269B CN 201310485275 A CN201310485275 A CN 201310485275A CN 103543269 B CN103543269 B CN 103543269B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hepatitis
- virus
- quantum dot
- monoclonal antibody
- test paper
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5767—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis non-A, non-B hepatitis
Abstract
本发明涉及医学免疫检测方法,特别是涉及使用量子点标记免疫层析试纸,以免疫学的方法检测丙型肝炎病毒的方法。一种量子点标记免疫层析试纸,在塑料板上从下到上依次粘贴有玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸;其中,硝酸纤维素膜一端有丙型肝炎病毒多克隆抗体和兔抗鼠二抗,形成检测带T和质控带C;所述量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体位于玻璃纤维素膜B的一端,与检测带T和质控带C相对应,并且量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体位于进样点一端。该方法比胶体金法的灵敏度高1000倍左右。
Description
技术领域
本发明涉及医学免疫检测方法,特别是涉及使用量子点标记免疫层析试纸,以免疫学的方法检测丙型肝炎病毒的方法。
背景技术
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是世界范围内流行的疾病,全球慢性感染者已超过2亿。HCV感染的临床表现多种多样,可以为轻微的炎症、广泛肝纤维化、肝硬化,伴或不伴肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。
目前,常用的检测方法是胶体金法,此法虽然检测快速简便,容易操作,但是准确率较低,灵敏度也较低。因此寻求一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测方法是迫切需要解决的问题。
发明内容
针对上述技术的不足之处,本发明提供一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测试纸以及用该试纸检测丙型肝炎病毒的方法。
一种量子点标记免疫层析试纸,设有塑料板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、吸水纸;
其中,所述塑料板上依次粘贴有玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸;
其中,所述硝酸纤维素膜一端有丙型肝炎病毒多克隆抗体和兔抗鼠二抗,以此形成检测带T和质控带C;
其中,所述量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体位于玻璃纤维素膜B的一端,与检测带T和质控带C相对应,并且量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体位于进样点一端。
优选的,所述量子点为CdTe/ZnSe核壳量子点。
优选的,所述塑料板为粘性PVC底板。
优选的,所述丙型肝炎病毒多克隆抗体的浓度为0.5g/L。
优选的,所述兔抗鼠二抗的浓度为1.0g/L。
优选的,所述检测带T和质控带C间距不少于5mm。
如上所述的试纸的制备方法,包括如下步骤:
(1)量子点与丙型肝炎病毒单克隆抗体的偶联:
取0.01M的PBS缓冲液100~200uL与5~20uL表面连有羧基的量子点;
选取偶联试剂,偶联试剂选自羟基硫代琥珀酸亚胺、1-(3-二甲基氨丙基)-3乙基碳二胺盐酸盐;
加入丙型肝炎病毒单克隆抗体150~200uL;
摇床反应1~4小时;
层析柱过滤,离心纯化;
用1%~5%的牛血清白蛋白封闭;
4℃保存;
(2)试纸的制备:
用0.05~0.15M的PBS缓冲液稀释丙型肝炎病毒多克隆抗体及兔抗鼠二抗,将0.5g/L丙型肝炎病毒多克隆抗体和1.0g/L兔抗鼠二抗喷在硝酸纤维素膜一端,形成检测带T和质控带C,T带和C带间隔5mm,室温晾干,将硝酸纤维素膜放入PBS缓冲液中,37℃封闭待用,或者干燥后4℃保存;
将量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体均匀喷覆于玻璃纤维膜B一端,与形成的T带和C带相对应,室温干燥,4℃保存;
在塑料板上依次粘帖玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸;
用试纸切刀切割成试纸,干燥后密封保存。
用所述的试纸检测丙型肝炎病毒,包括如下步骤:将样品点样在组装好的试纸上接近丙型肝炎病毒单克隆抗体的一端,反应5min后,在紫外分析仪中观察结果。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:由于在所制备的试纸中加入了核壳量子点,特别是采用了CdTe/ZnSe水溶性核壳量子点,将水溶性的量子点与特异性的通过共价偶联,然后利用双抗夹心原理结合量子点的荧光性质检测样品中是否含有目标物。在紫外灯的照射下,通过观察免疫层析试纸条上检测带和质控带的荧光线,判断检测结果。本发明将免疫反应的高特异性和量子点的荧光特性相结合,利用量子点多波长激发,高强度荧光发射,发射峰窄,峰形对称,发光稳定性好的荧光特性,建立了快速,特异,简便,灵敏的免疫层析检测方法。通过观察荧光信号达到了定量检测的目的。该方法的检测灵敏度比目前常用的一种快速检测方法-胶体金的检测灵敏度高约1000倍左右。
附图说明
图1为试纸制备的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1:一种量子点标记免疫层析试纸,设有塑料板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、吸水纸,所述玻璃纤维素膜A为没有点样的市场上购买的玻璃纤维素膜;
其中,所述塑料板上依次粘贴有玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸;
其中,所述硝酸纤维素膜一端有丙型肝炎病毒多克隆抗体和兔抗鼠二抗,以此形成检测带T和质控带C;
其中,所述量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体位于玻璃纤维素膜B的另一端,与检测带T和质控带C相对应,并且量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体位于进样点一端。
优选的,所述量子点为CdTe/ZnSe核壳量子点。
优选的,所述塑料板为粘性PVC底板。
优选的,所述丙型肝炎病毒多克隆抗体的浓度为0.5g/L。
优选的,所述兔抗鼠二抗的浓度为1.0g/L。
优选的,所述检测带T和质控带C间距不少于5mm。
实施例2:如上所述的试纸的制备方法,如图1所示,包括如下步骤:
(1)量子点与丙型肝炎病毒单克隆抗体的偶联:
取0.01M的PBS缓冲液100~200uL与5~20uL表面连有羧基的量子点;
选取偶联试剂,偶联试剂选自羟基硫代琥珀酸亚胺、1-(3-二甲基氨丙基)-3乙基碳二胺盐酸盐;
加入丙型肝炎病毒单克隆抗体150~200uL;
摇床反应1~4小时;
层析柱过滤,离心纯化;
用1%~5%的牛血清白蛋白封闭;
4℃保存;
(2)试纸的制备:
用0.05~0.15M的PBS缓冲液稀释丙型肝炎病毒多克隆抗体及兔抗鼠二抗,将0.5g/L丙型肝炎病毒多克隆抗体和1.0g/L兔抗鼠二抗喷在硝酸纤维素膜一端,形成检测带T和质控带C,T带和C带间隔5mm,室温晾干,将硝酸纤维素膜放入PBS缓冲液中,37℃封闭待用,或者干燥后4℃保存;
将量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体均匀喷覆于玻璃纤维膜B一端,与T带和C带相对应,室温干燥,4℃保存;
在塑料板上依次粘帖玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸;
用试纸切刀切割成试纸,干燥后密封保存。
其中,步骤(1)中偶联效果的检测方法如下:
凝胶电泳法:采用0.8琼脂糖凝胶,电压为80V,电泳15min后,在紫外分析仪中观察电泳结果。
斑点印迹法:将0.3g/L丙型肝炎病毒-BSA液点在硝酸纤维素膜上,晾干后浸泡于含5%BSA的0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,10nmol/L,PH=7.4,含NaCl 8.5g/L)中,封闭膜上剩余的蛋白结合位点,于37℃孵育1h,封闭后取出,PBS洗涤。制备三个完全相同的丙型肝炎病毒印迹膜,晾干后分别放入量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体,量子点-BSA及量子点溶液,于37℃摇床反应30min,PBS洗涤。紫外分析仪中观察结果。
实施例3:用所述的试纸检测丙型肝炎病毒单克隆抗体,包括如下步骤:将样品点样在组装好的试纸上接近丙型肝炎病毒单克隆抗体的一端,反应5min后,在紫外分析仪中观察结果。用PBS缓冲液及正常人的血液设为空白对照。
结果判定:在C带显现红色荧光带的前提下,目视T带的荧光带强度,与空白对照,荧光越弱,代表待测液中含被检物的浓度越低。
实施例4:试纸检测有效性验证,配制四种浓度的丙型肝炎病毒溶液,浓度分别为0.5,1.0,2.0,5.0ug/L。利用检测试纸和化学发光试纸盒对样本进行检测,每个浓度检测6次,测定试纸检出结果的有效性。如表一所示,结果表明用本发明制备的试纸检测出来的呈现阳性,并且溶液浓度越大荧光强度越大。
表一:各种浓度丙型肝炎病毒的试纸条检测结果
以上所述,仅为本发明的较佳实施例而已,举凡熟悉此项技艺的专业人士在了解本发明的技术手段之后,自然能依据实际的需要,在本发明的教导下加以变化。因此凡依本发明申请专利范围所作的同等变化与修饰,曾应仍属本发明专利涵盖的范围内。
Claims (2)
1.一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)量子点与丙型肝炎病毒单克隆抗体的偶联:
取0.01M的PBS缓冲液100~200μL与5~20μL表面连有羧基的CdTe/ZnSe核壳量子点;
选取偶联试剂;
加入丙型肝炎病毒单克隆抗体150~200μL;
摇床反应1~4小时;
层析柱过滤,离心纯化;
用1%~5%的牛血清白蛋白封闭;
4℃保存;
(2)试纸的制备:
用0.05~0.15M的PBS缓冲液稀释丙型肝炎病毒多克隆抗体及兔抗鼠二抗,将0.5g/L丙型肝炎病毒多克隆抗体和1.0g/L兔抗鼠二抗喷在硝酸纤维素膜上,形成检测带T和质控带C,T带和C带间隔5mm,室温晾干,将硝酸纤维素膜放入PBS缓冲液中,37℃封闭待用,或者干燥后4℃保存;
将量子点标记的丙型肝炎病毒单克隆抗体均匀喷覆于玻璃纤维膜B上,室温干燥,4℃保存;
在粘性PVC底板上依次粘帖玻璃纤维素膜A、量子点标记丙型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸;
用试纸切刀切割成试纸,干燥后密封保存。
2.如权利要求1所述的量子点标记免疫层析试纸的制备方法,其特征在于,步骤(1)中的偶联试剂选自羟基硫代琥珀酸亚胺、1-(3-二甲基氨丙基)-3乙基碳二胺盐酸盐。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310485275.4A CN103543269B (zh) | 2013-10-16 | 2013-10-16 | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310485275.4A CN103543269B (zh) | 2013-10-16 | 2013-10-16 | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103543269A CN103543269A (zh) | 2014-01-29 |
CN103543269B true CN103543269B (zh) | 2015-07-22 |
Family
ID=49966926
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310485275.4A Active CN103543269B (zh) | 2013-10-16 | 2013-10-16 | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103543269B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104558169A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-04-29 | 新乡医学院 | 一种用于检测丙型肝炎病毒时作为阳性对照的双功能抗体 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1811449A (zh) * | 2006-02-23 | 2006-08-02 | 上海交通大学 | 量子点标记快速免疫层析试纸条的检测方法 |
CN101339196A (zh) * | 2008-07-29 | 2009-01-07 | 上海师范大学 | 量子点标记免疫层析试纸快速检测膀胱癌方法 |
CN101363848A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-11 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 间接标记纳米颗粒的抗体检测双抗原夹心法及其试剂盒 |
CN101551398A (zh) * | 2008-11-26 | 2009-10-07 | 中国计量学院 | 药物残留竞争型量子点标记免疫层析试纸条及其观测装置 |
CN102520165A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-06-27 | 北京康美天鸿生物科技有限公司 | 一种量子点荧光免疫层析高灵敏定量检测的方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2006307458A1 (en) * | 2005-10-25 | 2007-05-03 | Mnd Diagnostic Ltd. | Compositions for- detecting of influenza viruses and kits and methods using same |
-
2013
- 2013-10-16 CN CN201310485275.4A patent/CN103543269B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1811449A (zh) * | 2006-02-23 | 2006-08-02 | 上海交通大学 | 量子点标记快速免疫层析试纸条的检测方法 |
CN101339196A (zh) * | 2008-07-29 | 2009-01-07 | 上海师范大学 | 量子点标记免疫层析试纸快速检测膀胱癌方法 |
CN101363848A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-11 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 间接标记纳米颗粒的抗体检测双抗原夹心法及其试剂盒 |
CN101551398A (zh) * | 2008-11-26 | 2009-10-07 | 中国计量学院 | 药物残留竞争型量子点标记免疫层析试纸条及其观测装置 |
CN102520165A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-06-27 | 北京康美天鸿生物科技有限公司 | 一种量子点荧光免疫层析高灵敏定量检测的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
水泡性口炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立;孙秀萍等;《中国预防兽医学报》;20120831;第34卷(第8期);637-641 * |
蓝舌病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立;杨俊兴等;《中国兽医科学》;20091231;第39卷(第1期);50-53 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103543269A (zh) | 2014-01-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106872420A (zh) | 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法 | |
CN101339196A (zh) | 量子点标记免疫层析试纸快速检测膀胱癌方法 | |
US11371987B2 (en) | Method of amplifying detection light using light-reflecting material, in immunochromatography | |
CN102680692A (zh) | 基于近红外荧光标记物的免疫层析定量检测试剂 | |
CN104849452A (zh) | 一种pla2r抗体定量检测试纸条及制作、检测方法 | |
CN113640521A (zh) | 一种毛发中毒品定量测定试纸条、试剂盒及制备方法与应用 | |
CN102680689A (zh) | 检测肌酸激酶同功酶的试剂盒及其制备和使用方法 | |
CN103529212B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸及其制备方法 | |
CN104880560A (zh) | 一种pla2r抗体检测试纸条及制作、检测方法 | |
JPWO2015080286A1 (ja) | イムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 | |
CN103529211B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸及其制备方法 | |
CN115436627A (zh) | 一种胱抑素c荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法 | |
CN208367017U (zh) | 血清淀粉样蛋白a免疫层析定量检测试纸条 | |
CN103529213B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 | |
CN104198702A (zh) | 能定量检测血液传染病多指标的量子点标记试条及其方法 | |
CN103543269B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 | |
CN108802393A (zh) | 一种检测四氢大麻酚酸的试纸条及其制备方法和应用方法 | |
CN103529214B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸及其制备方法 | |
CN103529217A (zh) | 检测脊髓灰质炎病毒的方法及量子点标记免疫层析试纸及其制备方法 | |
CN103543262B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 | |
CN110927380A (zh) | 一种检测甲基苯丙胺和氯胺酮的双联试纸条及其制备方法和应用方法 | |
CN103543268B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 | |
CN103529216B (zh) | 一种量子点标记免疫层析试纸的制备方法 | |
CN108072758A (zh) | 一种检测双酚a的量子点荧光淬灭免疫层析试纸条及其制备方法 | |
CN107102132A (zh) | 量子点荧光探针及其制备方法、免疫层析试纸 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180307 Address after: 100085, No. 7, No. 18, No. 18, Anning Zhuang Road, Qinghe, Beijing City, 516 Patentee after: CHINA BEIJING BEIDA JUBANG SCIENCE & TECHNOLOGY CO., LTD. Address before: 100054 Beijing city Xicheng District Baizhifang Street No. 10 Tairan Ju B block 11 layer Patentee before: Beijing Hua Weitian and bio tech ltd |