CN103536910B - 细胞色素c注射液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种细胞色素C注射液。具体地说，本发明涉及一种药物组合物，其中包含细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水。本发明的细胞色素C药物组合物可用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。

Description

细胞色素C注射液

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种药物制剂，特别是涉及一种细胞色素C的药物组合物例如注射液。本发明的细胞色素C药物组合物可用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。

背景技术

细胞色素C(Cytochrome C，Cyt C)或称细胞色素复合体(Cytochrome Complex)，是一种与粒线体内膜有关，结构松散而微小的血红素蛋白。它和其他细胞色素不同，是一种高度可溶性蛋白，可溶性达每升100克。细胞色素C是电子传递链不可或缺的元件，负责携带一粒电子，在复合物III和复合物IV之间传递。此外，它能够接受氧化和还原反应，但不与氧结合。在人体中，细胞色素C已经由CYCS基因完成编码。细胞色素C和细胞程序性死亡有关。

临床上使用的细胞色素C是一种细胞呼吸激动剂，它存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质。细胞色素C担负传递电子的作用，是细胞呼吸不可少的物质。当组织缺氧时，外源性细胞色素C即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。本品是存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质，目前已能提纯分离。药用制剂是从动物心脏或酵母中分离出来的，细胞色素是呼吸链的一环。各种细胞色素按一定顺序排列组成细胞呼吸所不可少的。细胞色素C不能透过细胞膜，因此对正常人无作用，当组织缺氧时、细胞膜通透性增高，外源性制剂即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。

现有技术已有诸多关于细胞色素C及其药品的制备方法。例如，中国专利申请号94110756.6(CN1106019A，陈庆功)公开了一种从动物心脏中提取细胞色素C粗品的生产工艺，它由原料处理、一次提取、二次提取、吸附、沸石的清洗、洗脱、盐析、沉淀、透析等工艺步骤完成，其特征是吸附工艺采用分层沉淀动态吸附的方法，这样可以缩短吸附时间，提高吸附效率，避免了因吸附时间过长而造成母液变质。

中国专利申请号200910229517.7(CN101709086A，东诚)公开了一种细胞色素C的提取方法。以哺乳动物心肌为原料，采用硫酸铝溶液提取法制备，提取过程中硫酸铝的浓度控制在0.1-10%，硫酸铝溶液的体积控制在1-5倍量心肌体积，提取pH值控制在3-6，反应温度控制在0-30℃，提取时间控制在1-4h。再经吸附洗脱，最终得到细胞色素C。本发明具有方法成本低、步骤简单、提取条件温和、引入杂质少、反应物无污染、适合工业化大生产的特点。

中国专利申请号201110094755.9(CN102206265A，宏业)公开了以哺乳动物心提取细胞色素C溶液的生产方法。将哺乳动物心脏经酸水提取，吸附材料吸附，酸水洗脱，盐析，沉淀及透析法制得细胞色素c溶液粗品，粗品经离子交换纯化，最终精制得细胞色素C溶液。

中国专利申请号201110268301.9(CN102295699A，西北大学)公开了一种细胞色素C的纯化新工艺，包括以下步骤:(1)从动物脏器或者酵母中提取得到细胞色素C的粗提液；(2)向粗提液中加入无机盐进行盐析，静置离心弃去沉淀的杂蛋白，收集上清液；(3)加缓冲液调节上清液中无机盐浓度至20%～35%，再用前沿疏水色谱法对其进行纯化，即将所得溶液连续上样于预先用20%～35%的无机盐溶液平衡过的疏水色谱柱中，收集穿透液；(4)用20%～35%无机盐溶液冲洗色谱柱至吸光度达到稳定，收集色谱流出液，与穿透液合并，即为纯化后的细胞色素C。本发明操作简便，分离纯化效果好，效率高，成本低。

中国专利申请号200710086421.0(CN101019836A，蔡海德)公开了细胞色素C纳米脂质体药物及其制备方法。其中细胞色素C纳米脂质体药物，包括如下重量份数的原料：中性磷脂40-80；谷甾醇10-20；胆固醇20-40；胞色素C10-30；聚乙二醇20-25；还原性谷胱甘肽5-10；维生素C40-50。据信该发明提供的脂质体药物可用于临床各种缺氧的急救或辅助治疗。

中国专利申请号201210578970.0(CN103055305A，丰原)公开了一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂，包括如下重量份的组分：细胞色素C75～300份；L-精氨酸30～60份；依地酸二钠2～5份；甘露醇150份。该冻干制剂选用依地酸二钠和L-精氨酸作为辅料，有利于提高细胞色素C的稳定性，药液配制过程选用甘露醇作为冻干赋形剂，选用磷酸或磷酸钠溶液作为pH值调节剂，可使产品质量更稳定；在甘露醇溶液中经活性炭处理后再加入细胞色素C，避免了细胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低的问题；该发明采用的制备方法，将冻干时间由23小时缩短至14～16小时，降低能耗30%，同时在不增加硬件投入的情况下，可提高产能30%左右，显著降低了生产成本。

由于细胞色素C是一种含铁元素的有色蛋白质，是生物体中酶氧化系统中一个非常重要的酶。细胞色素C是含铁卟啉盐基性结合蛋白质，由N、S、Fe、C、H五种元素组成。从猪心肌提取的细胞色素C的Fe含量为0.43%，分子量为13000，等电点pH10。

细胞色素C的大分子化学结构决定了其制剂配制存在诸多需要克服的困难。例如制剂的澄明度就是经常出现的问题。例如，郁福年(医药工业，细胞色素C注射液工艺改革，1980年08期)中探讨了细胞色素C注射液澄明度不够好，探讨其主要原因是细胞色素C原料中杂蛋白未除尽所致。又例如，姜洪志等(医药工业，细胞色素C注射液澄明度的改进，1986年10期)从提高原料纯度，改进过滤方法，控制配剂pH值等方面进进行研究以期获得具有更好澄明度的细胞色素C注射液。

因此，提供一种具有良好药学性能例如物理性质和/或化学性质和/或生物学性质的细胞色素C产品，仍然是本领域技术人员极其期待的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有良好药学性能例如物理性质和/或化学性质和/或生物学性质的细胞色素C产品，特别是一种可注射用的细胞色素C产品。本发明人已经出人意料地发现，具有本发明特征的细胞色素C药物组合物具有优良的药学性能。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，其中包含细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C	6～9mg，
		双甘氨肽	6～9mg，
亚硫酸氢钠	1～1.5mg，
		亚硫酸钠	1～1.5mg，
注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C	7～8mg，
		双甘氨肽	7～8mg，
亚硫酸氢钠	1.2～1.3mg，
		亚硫酸钠	1.2～1.3mg，
注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C	7.5mg，
		双甘氨肽	7.5mg，
亚硫酸氢钠	1.25mg，
		亚硫酸钠	1.25mg，
注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中还包含L-半胱氨酸。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C	6～9mg，
		双甘氨肽	6～9mg，
L-半胱氨酸	1～1.5mg，
		亚硫酸氢钠	1～1.5mg，
亚硫酸钠	1～1.5mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C	7～8mg，
		双甘氨肽	7～8mg，
L-半胱氨酸	1.1～1.3mg，
		亚硫酸氢钠	1.2～1.3mg，
亚硫酸钠	1.2～1.3mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C	7.5mg，
		双甘氨肽	7.5mg，

L-半胱氨酸	1.2mg，
		亚硫酸氢钠	1.25mg，
亚硫酸钠	1.25mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为溶液型的药物组合物。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为无菌注射液。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中还任选地包含酸碱调节剂。在一个实施方案中，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙酸、乙酸钠或其组合。在一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其pH值为6.0～8.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其pH值为6.0～7.5。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其pH值为6.5～7.5。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其pH值为7.0～7.5。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液，其在配制时经过活性炭吸附处理过程。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液，其在配制时经过活性炭吸附处理过程，所述活性炭吸附处理中与活性炭一起还添加有纸浆。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液，其在配制时经过活性炭吸附处理过程，该活性炭吸附处理过程是：向包含活性成分的药液中加入0.05～0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，搅拌10～30分钟。在一个实施方案中，所述的纸浆是以干滤纸配制的。在一个实施方案中，与活性炭一起加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%～0.2%(w/v)，优选0.05%～0.1%(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液，其是照以下方法配制得到的：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70～80%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至50-60℃，加入0.05～0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，保温搅拌10～30分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0～7.5，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得。

已经发现在进行炭吸附时，添加适量的纸浆获得的注射液在贮藏过程中具有更好的物理稳定性，特别是不溶性微粒变化(增加)不明显。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中所述步骤(3)中加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%～0.2%(w/v)，优选0.05%～0.1%(w/v)。本领域技术人员公知在配制注射液时纸浆的使用方式，例如可照以下方式配制纸浆：取普通大张滤纸撕成碎片，用适量注射用水浸泡适时，用捣碎机打碎成粥状即可。本领域还有其它制备纸浆的方法，例如记载中侯玉嵩的文献(侯玉嵩，等，中成药，1997年第19卷第4期第4页)。纸浆的浓度通常可以根据使用需要确定，例如通常可以是10%～50%的宽泛范围内。在本发明下文配制注射液的工艺中，如未另外说明，所用纸浆是使用30%的纸浆(相当于30g干滤纸用注射用水适量制成100ml的浆)；步骤(2)中加入的纸浆的量，折算成干滤纸计算，干滤纸在溶液中的浓度为0.05%～0.2%(w/v)，优选0.05%～0.1%(w/v)。

本发明提供的药物组合物典型地是一种注射液，其中作为注射液溶媒的注射用水，其在注射液中的加入量不必作特别的限定，本领域技术人员通常以“定容至全量”、“平衡至全量”、“加至处方全量”等类似表述确定，例如1ml注射液中当其它固体物料确定并加入后时，由于它们存在体积效应，因此注射用水可以以类似于“加至1ml”或“加至全量”或“加至处方全量”的方式记载。

进一步地，本发明第二方面提供了一种制备细胞色素C药物组合物例如本发明第一方面任一实施方案所述的细胞色素C药物组合物例如注射液的方法，所述细胞色素C药物组合物中包含：细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水；该方法包括以下步骤：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70～80%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至50-60℃，加入0.05～0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，保温搅拌10～30分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0～7.5，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的纸浆是以干滤纸配制的。在一个实施方案中，与活性炭一起加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%～0.2%(w/v)，优选0.05%～0.1%(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物每1ml中包含：

细胞色素C	6～9mg，
		双甘氨肽	6～9mg，
亚硫酸氢钠	1～1.5mg，
		亚硫酸钠	1～1.5mg，
注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物每1ml中包含：

细胞色素C	7～8mg，
		双甘氨肽	7～8mg，
亚硫酸氢钠	1.2～1.3mg，
		亚硫酸钠	1.2～1.3mg，
注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物每1ml中包含：

细胞色素C	7.5mg，
		双甘氨肽	7.5mg，
亚硫酸氢钠	1.25mg，
		亚硫酸钠	1.25mg，
注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物中还包含L-半胱氨酸。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物每1ml中包含：

细胞色素C	6～9mg，
		双甘氨肽	6～9mg，
L-半胱氨酸	1～1.5mg，
		亚硫酸氢钠	1～1.5mg，
亚硫酸钠	1～1.5mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物每1ml中包含：

细胞色素C	7～8mg，
		双甘氨肽	7～8mg，
L-半胱氨酸	1.1～1.3mg，
		亚硫酸氢钠	1.2～1.3mg，
亚硫酸钠	1.2～1.3mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物每1ml中包含：

细胞色素C	7.5mg，
		双甘氨肽	7.5mg，
L-半胱氨酸	1.2mg，
		亚硫酸氢钠	1.25mg，
亚硫酸钠	1.25mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物为溶液型的药物组合物。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物为注射液。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物为无菌注射液。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物中还任选地包含酸碱调节剂。在一个实施方案中，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙酸、乙酸钠或其组合。在一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物的pH值为6.0～8.0。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物的pH值为6.0～7.5。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物的pH值为6.5～7.5。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物的pH值为7.0～7.5。

进一步地，本发明第三方面提供了本发明第一方面任一实施方案所述细胞色素C药物组合物或者本发明第二方面任一实施方案所制备的细胞色素C药物组合物在制备用于各种组织缺氧急救及其的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗的药物中的用途。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

如上下文所述的，已经出人意料地发现，在配液过程中使用活性炭和纸浆组合，可以使获得的液体药物组合物例如注射液具有良好的物理稳定性。

本发明的包含细胞色素C的药物组合物，尽管在某些实施方案中是以溶液型的注射液提供的，但在是一些实施方案中，还可以将这些溶液型的组合物经常规的冷冻干燥法制成冻干粉针剂。冻干粉针剂的制备方法是本领域技术人员公知的，通常可以在水针的基础上将水除去即可。

【含量测定】本含量测定法用于本发明，可测定各种包含细胞色素C的试样中的细胞色素C的含量：

供试品溶液的制备：精密量取本品适量(约相当于细胞色素C100mg)，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度；

精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.38g与磷酸氢二钠31.2g，加水适量使溶解成1000ml，调节pH值至7.3)稀释至刻度，加连二亚硫酸钠约15mg，摇匀，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录IVA)，在约550nm的波长处，以间隔0.5nm找出最大吸收波长，测定吸光度，按细胞色素C的吸收系数()为23.0计算供试品中细胞色素C的含量(mg/ml)。

【活力测定】本活力测定法用于本发明，可以测定各种包含细胞色素C的试样的细胞色素C活力：

(1)磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)：取磷酸氢二纳71.64g，加水使溶解成1000ml，作为甲液。另取磷酸二氢钠27.60g，加水使溶解成1000ml，作为乙液。取甲液81ml与乙液19ml，混匀，调节pH值至7.3；

(2)磷酸盐缓冲液(0.lmol/L)：取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)500ml，加水稀释至1000ml，调节pH值至7.3；

(3)磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)：取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)100ml，加水稀释至1000ml，调节pH值至7.3；

(4)琥珀酸盐溶液：取琥珀酸与氢氧化钾各4.72g，加水使溶解成100ml，调节pH值至7.3；

(5)氰化钾溶液：取氰化钾0.65g，加水使溶解成100ml后，用稀硫酸调节pH值至7.3；

(6)去细胞色素C的心悬浮液：取新鲜猪(牛)心2只，除去脂肪与结缔组织，切成条，用绞肉机绞碎，置纱布兜中，用自来水冲洗约2小时(经常搅动，挤出血色素)，挤干，用水洗数次，挤干，置磷酸盐缓冲液(0.lmol/L)中浸泡约1小时，挤干，重复浸泡1次，用水洗数次，挤干，置组织捣碎机内，加磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)适量恰使猪(牛)心浸没，捣成匀浆，离心10分钟(普通离心机)，取上层混悬液，加冰块少量，迅速用稀醋酸调节pH值至约5.5，立即离心15分钟，取沉淀，加等体积的磷酸盐缓冲液(0.lmol/L)，用玻璃匀浆器磨匀后，贮存于冰箱中；临用时取1.0ml，加磷酸盐缓冲液(0.lmol/L)稀释至10ml；

(7)供试品溶液的制备：取供试品，加水制成每lml中含细胞色素C约3mg的溶液；

(8)测定法：取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)5ml、琥珀酸盐溶液1.0ml与供试品溶液0.5ml，置25ml具塞比色管中，加去细胞色素C的心悬浮液0.5ml与氰化钾溶液1.0ml，加水稀释至10ml，摇匀，以同样的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录IV A)，在550nm的波长处附近，间隔0.5min找出最大吸收波长，并测定吸光度，直至吸光度不再增大为止，作为酶还原吸光度；然后各加连二亚硫酸钠约5mg，摇匀，放置约10分钟，在上述同一波长处测定吸光度，直至吸光度不再增大为止，作为化学还原吸光度；按下式计算细胞色素C活力：

本发明提供的细胞色素C药物组合物，其活性成分为细胞色素C，可在临床上用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。

本发明提供的细胞色素C药物组合物作为溶液型的注射液，通常可制成规格为2ml：15mg。如果制成粉针剂，可以是每瓶装细胞色素C量为15mg。

在临床上，本发明提供的细胞色素C药物组合物的用法用量可以是：成人：静脉注射或滴注，一次15～30mg，每日30～60mg。静脉注射时，加25%葡萄糖注射液20ml混匀后缓慢注射。也可用5～10%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液稀释后静脉滴注。儿童：肌注：<1岁，每次1.5～7.5mg；1～8岁，每次15mg；9岁，每次15～30mg，每日1次。静注：<11岁，每次7.5mg；1～8岁，每次7.5～15mg；>9岁，每次15～30mg，每日1次；静滴：<l8岁，每次15mg；>9岁，每次15～30mg，每日1次。

通常而言，本发明提供的细胞色素C药物组合物用药前需做过敏试验，皮试划痕法系用0.03%溶液1滴，滴于前臂屈面皮肤上，用针在其上刺扎一下(单刺)或多下(多刺)，至少量出血程度。皮内注射法系用0.03mg/ml溶液0.03～0.05ml皮内注射。均观察20分钟，单刺者局部红晕直径10mm以上或丘疹直径>7mm以上，多刺和皮内注射者红晕直径15mm以上或丘疹直径10mm以上为阳性。皮试阳性者禁用。中止用药后再继续用药时，过敏反应尤易发生，须再做皮试，且应用用药量较小的皮内注射法。

本发明提供的细胞色素C药物组合物中，其活性成分细胞色素C是细胞呼吸激动剂，它存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质。细胞色素C担负传递电子的作用，是细胞呼吸不可少的物质。当组织缺氧时，外源性细胞色素C即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。本品是存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质，目前已能提纯分离。药用制剂是从动物心脏或酵母中分离出来的，细胞色素是呼吸链的一环。各种细胞色素按一定顺序排列组成细胞呼吸所不可少的。细胞色素C不能透过细胞膜，对正常人无作用，当组织缺氧时、细胞膜通透性增高，外源性制剂即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。

作为溶液型的本发明细胞色素C药物组合物，其性状通常可以是橙红色的澄明液体。作为粉针剂型的本发明细胞色素C药物组合物，其性状通常是粉红色的冻干块状物。这些本发明细胞色素C药物组合物通常的贮藏条件为：密闭，在凉暗处(避光并不超过20℃)保存，在此条件下保存通常有效期可达24个月。

已经发现，本发明细胞色素C药物组合物具有良好的药学性质。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中，使用的pH调节剂(在本发明中亦即酸碱调节剂)，如无另外说明，是1M氢氧化钠溶液或者1M盐酸溶液，其用量是使制备的水针剂(亦可以是粉针剂)用注射用水溶解和/或稀释成含活性成分3mg/ml的溶液时，达到以下例子中所规定的值或范围。

下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备冻干粉针剂或水针剂的方法。在下面配液制备各种组合物中，如未另外说明，每批的总配液量为1000ml。但是列明配方和制备过程时，对于水针剂，以每1ml药液中的组成阐明配方和制法，对于粉针剂，以冷冻干燥前每1ml药液中的组成阐明配方和制法。无论是水针还是粉针，在分装时，每瓶含活性成分细胞色素C均为15mg。

另外，水针剂或粉针剂的不溶性微粒检查的方法照中国药典2010版二部附录IX C不溶性微粒检查法中的“第一法(光阻法)”进行。

实施例1：制备细胞色素C注射液

细胞色素C	7.5mg，
		双甘氨肽	7.5mg，
亚硫酸氢钠	1.25mg，
		亚硫酸钠	1.25mg，
注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的75%(即约0.75ml，下同)；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至55℃，加入0.25%(w/v)活性炭，并加入纸浆(以干滤纸配制，加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.075%(w/v))，保温搅拌20分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.2，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得，该样品的编号记为Ex1。

实施例2：制备细胞色素C注射液

细胞色素C	6mg，
		双甘氨肽	9mg，
亚硫酸氢钠	1mg，
		亚硫酸钠	1.5mg，
注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至60℃，加入0.05%(w/v)活性炭，并加入纸浆(以干滤纸配制，加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%(w/v))，保温搅拌30分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.5，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得，该样品的编号记为Ex2。

实施例3：制备细胞色素C注射液

细胞色素C	9mg，
		双甘氨肽	6mg，
亚硫酸氢钠	1.5mg，
		亚硫酸钠	1mg，
注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的80%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至50℃，加入0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆(以干滤纸配制，加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.1%(w/v))，保温搅拌10分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得，该样品的编号记为Ex3。

补充实施例1：

参照实施例1的配方和制法，不同的仅仅是在步骤(3)中，使用纸浆的量加以改变，分别改为0、0.01%、0.02%、0.04%、0.05%、0.08%、0.1%、0.125%、0.15%、0.25%、0.5%(w/v)，得到11个注射液配方其编号分别记为Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex110、Ex111；

参照实施例1的配方和制法，不同的仅仅是在步骤(3)中，不使用活性炭，而纸浆的量分别改为0.05%、0.1%、0.25%、0.5%、1.0%(w/v)，得到5个注射液配方其编号分别记为Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125；

参照实施例2的配方和制法，不同的仅仅是在步骤(3)中，使用纸浆的量加以改变，分别改为0、0.02%、0.04%、0.05%、0.08%、0.1%、0.125%、0.25%、0.5%(w/v)，得到9个注射液配方其编号分别记为Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139；

参照实施例3的配方和制法，不同的仅仅是在步骤(3)中，使用纸浆的量加以改变，分别改为0、0.02%、0.04%、0.05%、0.08%、0.1%、0.125%、0.25%、0.5%(w/v)，得到9个注射液配方其编号分别记为Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145、Ex146、Ex147、Ex148、Ex149。

试验1：考察各组合物试样的药学性能

试样：实施例1～实施例3的各试样Ex1、Ex2、Ex3，补充实施例1的各试样Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex110、Ex111，Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125，Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139，Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145、Ex146、Ex147、Ex148、Ex149。

方法：将各注射液试样置于35℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为高温处置或35℃-5月或35℃-5月处置)，同时并行地将各注射液试样置于5℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为低温处置或5℃-5月或5℃-5月处置)，在5月时检查各样品的不溶性微粒，统计每个样品的≥10μm微粒数。对于每一个样品，计算≥10μm微粒数经上述高温处理后的变化百分数，该参数称为微粒变化百分数，计算式如下：

其中，高温处置后≥10μm微粒数和低温处置后≥10μm微粒数是样品照上文所述光阻法测定方法获得的。上述微粒变化百分数(%)越接近100%表明越稳定，高于100%则不溶性微粒增加，产品不稳定，值越高越不稳定。

结果：对于Ex1、Ex2、Ex3，Ex105、Ex106、Ex107，Ex134、Ex135、Ex136，Ex144、Ex145、Ex146这些纸浆用量0.05%～0.1%的试样，以及Ex108、Ex109、Ex110、Ex111，Ex137、Ex138、Ex139，Ex147、Ex148、Ex149这些纸浆用量大于0.1%的试样，它们的微粒变化百分数(%)均在96～122%范围内，例如Ex1、Ex2、Ex3三者的微粒变化百分数(%)分别为103%、98%、106%，显示非常令人满意的物理稳定性；

对于Ex101、Ex102、Ex103、Ex104，Ex131、Ex132、Ex133，和Ex141、Ex142、Ex143这些纸浆用量低于0.05%的试样，它们的微粒变化百分数(%)均在186～313%范围内，例如Ex101、Ex103二者的微粒变化百分数(%)分别为255%、236%，显示物理稳定性完全无法令人接受；

对于Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125这些仅用纸浆而未用活性炭的试样(尽管纸浆与活性炭一样通常也是注射剂的吸附剂)，它们的微粒变化百分数(%)均在242～387%范围内，例如Ex121、Ex123二者的微粒变化百分数(%)分别为324%、297%，显示物理稳定性完全无法令人接受。

以上结果显示，添加0.05%以上量的纸浆对于改善产品在后续长期贮藏过程中的物理稳定性是极其有益的，尽管纸浆这种通常作为注射剂配制过程中的吸附剂仅仅是在配制时用于吸附杂质，而现有技术并无任何关于纸浆这种常规吸附剂其可有助于改善注射剂物理稳定性的教导。

试验2：考察各组合物试样在配制过程中的活性成分损失

试样：实施例1～实施例3的各试样Ex1、Ex2、Ex3，补充实施例1的各试样Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex110、Ex111，Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125，Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139，Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145、Ex146、Ex147、Ex148、Ex149。

计算以上实施例1～实施例3以及补充实施例1的各试样在配制过程中的活性成分损失，计算方法为，确定原料投料量中活性成分的量(W1)，测定并计算步骤(5)中经0.22μm的微孔滤膜无菌过滤后所得全部药液中所含活性成分的量(W2)，按下式计算活性成分损失(%)：

活性成分损失(%)=[(W1-W2)÷W1]×100%

本领域技术人中公知，对于注射液的配制，在活性炭吸附过程中通常会有配液损失，这种损失对于细胞色素C这种价格较贵的药品而言是不利的，上述活性成分损失(%)可以有效地反映/评价产品配制过程中的这种损失。

结果：Ex1、Ex2、Ex3，Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107，Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125，Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136，Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145、Ex146这些纸浆用量较低的试样或者仅用纸浆而未用活性炭的试样，它们的活性成分损失(%)均在0.24%～2.43%范围内，例如Ex1、Ex2、Ex3三者的活性成分损失(%)分别为0.75%、1.13%、0.93%。但是出人意料的是，对于Ex108、Ex109、Ex110、Ex111，Ex137、Ex138、Ex139，Ex147、Ex148、Ex149这些在配制过程中的活性成分损失(%)均在9.4%～17.2%范围内，例如Ex108、Ex110二者的活性成分损失(%)分别为14.7%、12.3%。

根据以上结果可见，在步骤(3)的配液过程中，使用0.05～0.1%纸浆是有益的，用量过高是会引起活性成分的配液损失，而用量过低时得到的组合物在长期贮藏过程中物理稳定性不理想。

实施例4：制备细胞色素C注射液

细胞色素C	7.5mg，
		双甘氨肽	7.5mg，
L-半胱氨酸	1.2mg，
		亚硫酸氢钠	1.25mg，
亚硫酸钠	1.25mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的75%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至55℃，加入0.25%(w/v)活性炭，并加入纸浆(以干滤纸配制，加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.075%(w/v))，保温搅拌20分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.2，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得，该样品的编号记为Ex4。

实施例5：制备细胞色素C注射液

细胞色素C

6mg，

双甘氨肽	9mg，
		L-半胱氨酸	1mg，
亚硫酸氢钠	1mg，
		亚硫酸钠	1.5mg，
注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至60℃，加入0.05%(w/v)活性炭，并加入纸浆(以干滤纸配制，加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%(w/v))，保温搅拌30分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.5，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得，该样品的编号记为Ex5。

实施例6：制备细胞色素C注射液

细胞色素C	9mg，
		双甘氨肽	6mg，
L-半胱氨酸	1.5mg，
		亚硫酸氢钠	1.5mg，
亚硫酸钠	1mg，
		注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的80%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0～7.2；

(3)加热至50℃，加入0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆(以干滤纸配制，加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.1%(w/v))，保温搅拌10分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得，该样品的编号记为Ex6。

补充实施例2：

参照实施例4的配方和制法，不同的仅仅是将其中的L-半胱氨酸用量改为0mg、0.25mg、0.5mg、0.75mg、1.0mg、1.25mg、1.5mg、2mg、2.5mg、5mg，得到10个注射液配方其编号分别记为Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex210；

参照实施例4的配方和制法，不同的仅仅是将其中的L-半胱氨酸改为D-半胱氨酸0.75mg、1.0mg、1.25mg、1.5mg、2mg，得到5个注射液配方其编号分别记为Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215；以及将其中的L-半胱氨酸改为DL-半胱氨酸0.75mg、1.0mg、1.25mg、1.5mg、2mg，得到5个注射液配方其编号分别记为Ex216、Ex217、Ex218、Ex219、Ex220；

参照实施例5的配方和制法，不同的仅仅是将其中的L-半胱氨酸用量改为0mg、0.5mg、1.0mg、1.25mg、1.5mg、2mg、5mg，得到7个注射液配方其编号分别记为Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227；

参照实施例6的配方和制法，不同的仅仅是将其中的L-半胱氨酸用量改为0mg、0.5mg、1.0mg、1.25mg、1.5mg、2mg、5mg，得到7个注射液配方其编号分别记为Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235、Ex236、Ex237。

试验3：考察各组合物试样的药学性能

试样：实施例4～实施例6的各试样Ex4、Ex5、Ex6，补充实施例2的各试样Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex210，Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215，Ex216、Ex217、Ex218、Ex219、Ex220，Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227，Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235、Ex236、Ex237。

方法：参照试验1中的方法将各注射液试样置于35℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为高温处置或35℃-5月或35℃-5月处置)，同时并行地将各注射液试样置于5℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为低温处置或5℃-5月或5℃-5月处置)，在5月时检查各样品的不溶性微粒，统计每个样品的≥10μm微粒数。计算各试样的微粒变化百分数。

结果：所测试的实施例4～实施例6的各试样以及补充实施例2中Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207，Ex211、Ex212、Ex213、Ex214，Ex216、Ex217、Ex218、Ex219，Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225，Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235这些半胱氨酸用量低于等于1.5mg的试样，它们的微粒变化百分数(%)均在95～126%范围内，例如Ex4、Ex5、Ex6三者的微粒变化百分数(%)分别为112%、97%、103%，显示非常令人满意的物理稳定性。

但是对于Ex208、Ex209、Ex210，Ex215，Ex220，Ex226、Ex227，Ex236、Ex237这些半胱氨酸用量高于1.5mg的试样，它们的微粒变化百分数(%)均在163～265%范围内，例如Ex209、Ex215、Ex237三者的微粒变化百分数(%)分别为193%、223%、206%，显示无法令人满意的物理稳定性。

可见，对于以微粒变化百分数表征的物理稳定性而言，每1ml注射液中添加低于等于1.5mg的半胱氨酸对于产品以微粒变化百分数表征的物理稳定性而言是没有影响的。

试验4：考察各组合物试样在配制过程中的活性成分损失

试样：实施例4～实施例6的各试样Ex4、Ex5、Ex6，补充实施例2的各试样Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex210，Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215，Ex216、Ex217、Ex218、Ex219、Ex220，Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227，Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235、Ex236、Ex237。

参考试验2中的方法进行，考察各试样的活性成分损失(%)，结果显示全部试样(它们均在制备步骤(3)的配液过程中，使用0.05～0.1%纸浆)的活性成分损失(%)均在0.18%～3.26%范围内，例如Ex4、Ex5、Ex6三者的活性成分损失(%)分别为2.13%、0.74%、1.62%。可见，尽管实施例4～实施例6以及补充实施例2这些在制备步骤(3)中使用低于0.1%纸浆所得各试样中均添加有半胱氨酸，但是半胱氨酸对配液损失无影响。

试验5：考察各组合物试样的生物学稳定性

试样：实施例1～实施例3的各试样Ex1、Ex2、Ex3，补充实施例1的各试样Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex110、Ex111，Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125，Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139，Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145、Ex146、Ex147、Ex148、Ex149；以及实施例4～实施例6的各试样Ex4、Ex5、Ex6，补充实施例2的各试样Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex210，Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215，Ex216、Ex217、Ex218、Ex219、Ex220，Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227，Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235、Ex236、Ex237。

方法：将各注射液试样置于35℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为高温处置或35℃-5月或35℃-5月处置)，同时并行地将各注射液试样置于5℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为低温处置或5℃-5月或5℃-5月处置)，在5月时测定各样品的细胞色素C活力。对于每一个样品，计算其经高温处理后相对于低温处理后的相对活力(%)，相对活力计算式如下：

相对活力(%)=(高温处置后的活力÷低温处置后的活力)×100%

上述相对活力(%)越接近100%表明产品的生物学稳定性越好，越小则产品生物学稳定性越差。

结果：对于实施例1～实施例3以及补充实施例1的全部未添加L-半胱氨酸的试样，以及对于补充实施例2中Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215、Ex216、Ex217、Ex218、Ex219、Ex220、Ex221、Ex222、Ex231、Ex232这些添加L-半胱氨酸量较低或者添加的是D-半胱氨酸或DL-半胱氨酸的试样，它们在经5月处理后相对活力(%)均低于76%，均在63～76%范围内，例如Ex202、Ex222、Ex232三者在经5月处理后相对活力(%)分别为72.2%、67.6%、74.1%；

但是对于实施例4～实施例6试样Ex4、Ex5、Ex6，补充实施例2的试样Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex210，试样Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227，试样Ex233、Ex234、Ex235、Ex236、Ex237这些添加了大于等于1mg/ml的L-半胱氨酸的试样，它们在经5月处理后相对活力(%)均在94～103%范围内，例如Ex4、Ex5、Ex6三者在经5月处理后相对活力(%)分别为102.6%、97.4%、101.1%。

以上本试验5的结果表明，在本发明中添加有1mg/ml以上L-半胱氨酸的细胞色素C组合物具有良好的生物学稳定性。

而上文试验3的结果表明，每1ml注射液中添加低于等于1.5mg的半胱氨酸对于产品以微粒变化百分数表征的物理稳定性而言是没有影响的，但当添加大于1.5mg/ml的L-半胱氨酸时则对产品的物理稳定性有不利的影响。可见，为兼顾组合物的物理稳定性和生物学稳定性，本发明液体组合物中使用1～1.5mg/ml的L-半胱氨酸是特别有益的。

试验6：考察各组合物试样的化学稳定性

试样：实施例1～实施例3的各试样Ex1、Ex2、Ex3，补充实施例1的各试样Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex110、Ex111，Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125，Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139，Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145、Ex146、Ex147、Ex148、Ex149；以及实施例4～实施例6的各试样Ex4、Ex5、Ex6，补充实施例2的各试样Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex210，Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215，Ex216、Ex217、Ex218、Ex219、Ex220，Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227，Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235、Ex236、Ex237。

方法：将各注射液试样置于35℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为高温处置或35℃-5月或35℃-5月处置)，同时并行地将各注射液试样置于5℃暗处放置5个月(在本发明中可简称为低温处置或5℃-5月或5℃-5月处置)，在5月时测定各样品中细胞色素C的含量(mg/ml)。对于每一个样品，计算其经高温处理后的活性成分含量变化百分数(%)，计算式如下：

上述活性成分含量变化百分数(%)越接近0表明产品的化学稳定性越好，越大则产品化学稳定性越差。

结果：所测试的全部样品，经5个月处理后，活性成分含量变化百分数(%)均在-1.23%至3.73%范围内，显示全部试样均具有良好的化学稳定性。

尽管许多试样显示良好的化学稳定性，但是它们却显示出不同的生物学稳定性特征以及显示出以微粒变化情况所表征的物理稳定性特征，这种差异完全无法从配方中各辅料的功能所能解释的通的。

产业适用性

本发明提供了一种细胞色素C的药物组合物例如注射液。本发明的细胞色素C药物组合物可用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。

Claims (11)

1.一种药物组合物，其为注射液，其每1ml中包含：

细胞色素C 6~9mg， 双甘氨肽 6~9mg， L-半胱氨酸 1~1.5mg， 亚硫酸氢钠 1~1.5mg， 亚硫酸钠 1~1.5mg， 注射用水 适量，加至1ml；

该注射液在配制时经过活性炭吸附处理过程，该活性炭吸附处理过程是：向包含活性成分的药液中加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，搅拌10~30分钟；其中所述与活性炭一起加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%~0.1%(w/v)。

2.根据权利要求1的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C 7~8mg， 双甘氨肽 7~8mg， L-半胱氨酸 1.1~1.3mg， 亚硫酸氢钠 1.2~1.3mg， 亚硫酸钠 1.2~1.3mg， 注射用水 适量，加至1ml。

3.根据权利要求1的药物组合物，其每1ml中包含：

细胞色素C 7.5mg， 双甘氨肽 7.5mg， L-半胱氨酸 1.2mg， 亚硫酸氢钠 1.25mg， 亚硫酸钠 1.25mg， 注射用水 适量，加至1ml。

4.根据权利要求1的药物组合物，其中还包含酸碱调节剂。

5.根据权利要求4的药物组合物，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙酸、乙酸钠或其组合。

6.根据权利要求1的药物组合物，其pH值为6.0~8.0。

7.根据权利要求1的药物组合物，其pH值为6.0~7.5。

8.根据权利要求1的药物组合物，其pH值为6.5~7.5。

9.根据权利要求1的药物组合物，其pH值为7.0~7.5。

10.根据权利要求1-9任一项的药物组合物，其是照以下方法配制得到的：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70~80%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0~7.2；

(3)加热至50-60℃，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，保温搅拌10~30分钟；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0~7.5，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得。

11.制备权利要求1-9任一项的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70~80%；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0~7.2；

(3)加热至50-60℃，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，保温搅拌10~30分钟；所述纸浆是以干滤纸配制的，与活性炭一起加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%~0.1%(w/v)；

(4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0~7.5，充入氮气，4-6℃冷藏48h，依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜无菌过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得。