CN103536534A - 一种地黄多糖脂质体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种地黄多糖脂质体的制备方法，先取大豆磷脂、胆固醇和吐温80，溶于溶剂中，超声溶解；30～70℃减压蒸发除去有机溶剂，加入乙醚溶解；将地黄多糖的PBS溶液导入反应容器，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的W/O型乳剂；30～70℃减压蒸发形成胶态后加入PBS，继续旋蒸除去有机溶剂；置于超声细胞粉碎机进行超声处理，使地黄多糖融合到脂质体中，得到地黄多糖脂质体混悬液；再将混悬液分别挤压过微孔滤膜，得地黄多糖脂质体。本发明首次将地黄多糖制备成脂质体，建立了地黄多糖脂质体的制备方法为逆相蒸发法，通过响应面优化，能够最大可能地节约原材料同时获得较高的药物包封率；结合超声作用，使制备的脂质体更均一更具稳定性。
Description
技术领域
本发明属于药物制备技术领域，具体涉及一种地黄多糖脂质体（Rehmanniaglutinosa polysaccharide liposome,RGPL）的制备方法。
背景技术
地黄在我国有悠久的药用历史，地黄常以生地黄和熟地黄2种形式入药。生地黄具有清热凉血、养阴生津的作用，熟地黄具有滋阴补血、益精填髓的功效。地黄多糖（Rehmannia glutinosa polysaccharide,RGP）是地黄的主要活性成分之一，具抗炎、增强机体免疫力等功能。然而地黄多糖直接用于临床，存在着多糖在体内代谢快，作用时间短，作用范围不集中，临床用量大等缺点。
脂质体（liposomes）是人工合成的双分子层的单层磷脂或多层可溶性物质隔开的呈同心圆的微环体脂质小囊，可包裹各种物质及疫苗。进入机体后主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，它既是抗原也是免疫佐剂，由于其膜结构致密，抗原不易漏出，能长久的将抗原传递给适免疫细胞，促进抗原对抗原提呈细胞的定向作用。能显著增强机体对抗原的免疫应答，产生保护性抗体和细胞免疫应答。通过各种给药途径，它还可以使包裹的药物具有打靶作用，准确的击中病变部位、组织和细胞，从而增强药物的疗效，并具有较大的发展前景。
脂质体作为新型药物载体应用以来，在中药制剂中应用脂质体，可以防止药物快速降解，延缓药物释放而延长药物在体内的作用时间，提高药物的溶出度和稳定性，增加药物对靶区的指向性，降低对正常细胞的毒性，提高药物的生物利用度。以脂质体作药物包埋，不但能提高药物的靶向定位作用，还能减少药物的用量及降低毒副作用。
发明内容
发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种地黄多糖脂质体的制备方法，使其能够最大可能地节约原材料同时获得较高的药物包封率，满足使用需求。
技术方案：为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种地黄多糖脂质体的制备方法，为逆相蒸发法，具体包括如下步骤：
1）取大豆磷脂，胆固醇和吐温80，溶于溶剂中，超声使其充分溶解；其中，大豆磷脂与地黄多糖的质量比为20～160:1，大豆磷脂与胆固醇的质量比为2～10:1，大豆磷脂与吐温80的质量比为5～20:1；大豆磷脂与溶剂的mg/mL比为20～100:1；所述溶剂选自氯仿和甲醇中的一种或两种；
2）置于反应容器中，30～70℃减压蒸发除去有机溶剂，当容器壁上形成一层均匀的薄膜后，加入乙醚溶解；
3）将含地黄多糖的PBS溶液（2mg·mL-1）缓慢导入反应容器，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的W/O型乳剂；
4）30～70℃减压蒸发，形成胶态后加入PBS，继续旋转蒸发，除去有机溶剂；
5）置于超声细胞粉碎机进行超声处理（强度50%，2.5s开，2.5s停，作用1h），得到地黄多糖脂质体混悬液；
6）再将混悬液分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，得地黄多糖脂质体，置于4℃保存。
步骤1）中，大豆磷脂与地黄多糖的质量比为100:1。
步骤1）中，大豆磷脂与胆固醇的质量比为8:1。
步骤1）中，吐温80与大豆磷脂的质量比为1:10。
步骤1）中，大豆磷脂与溶剂mg/mL比为50:1。
步骤1）中，溶剂为氯仿与甲醇混合溶液，氯仿与甲醇的体积比为3:1～1:3。
步骤1）中，氯仿与甲醇的体积比为1:1。
步骤2）或4）中，旋转蒸发的温度均为60℃。
第一优选工艺为：大豆磷脂与胆固醇的质量比7.66:1，溶剂中氯仿与甲醇体积比为3.01:4.99，大豆磷脂和吐温80的质量比为10.06:1，蒸发温度为65.92℃。
第二优选工艺为：大豆磷脂与胆固醇的质量8:1，溶剂中氯仿与甲醇体积比为3:5，大豆磷脂和吐温80比为10:1，蒸发温度为66℃。
本发明将地黄多糖包封于脂质体中，制备出地黄多糖脂质体，利用脂质体的缓释作用和靶向作用可以有效维持地黄多糖在机体内的有效浓度，提高其生物利用度。
有益效果：与现有技术相比，本发明首次将地黄多糖制备成脂质体，建立了地黄多糖脂质体的制备方法为逆相蒸发法，通过响应面优化，能够最大可能地节约原材料同时获得较高的药物包封率；结合超声作用，使制备的脂质体更均一更具稳定性。其中，最佳制备工艺为：膜材比8:1，氯仿与甲醇比为3:5，磷脂和吐温80比为10:1，旋转蒸发温度为66℃；包封率平均值约为73%。
附图说明
图1是葡萄糖标准曲线图；
图2是磷脂用量对RGPL包封率的影响结果图；
图3是磷脂用量对RGPL载药量的影响结果图；
图4是脂药比对RGPL包封率的影响结果图；
图5是脂药比对RGPL的载药量影响结果图；
图6是膜材比对RGPL包封率的影响结果图；
图7是膜材比对RGPL载药量的影响结果图；
图8是吐温80与磷脂比对RGPL包封率的影响结果图；
图9是吐温80与磷脂比对RGPL载药量的影响结果图；
图10是磷脂与氯仿和甲醇体积和之比对RGPL包封率的影响结果图；
图11是磷脂与氯仿和甲醇体积和之比对RGPL载药量的影响结果图；
图12是氯仿与甲醇比对RGPL包封率的影响结果图；
图13是氯仿与甲醇比对RGPL载药量的影响结果图；
图14是旋转蒸发温度对RGPL包封率的影响结果图；
图15旋转蒸发温度对RGPL载药量的影响结果图；
图16是膜材比和旋转蒸发温度对脂质体包封率影响的响应面图；
图17是膜材比和旋转蒸发温度对脂质体包封率影响的等高线图；
图18是磷脂吐温80比和氯仿甲醇比对脂质体包封率影响的响应面图；
图19是磷脂吐温80比和氯仿甲醇比对脂质体包封率影响的等高线图；
图20是氯仿甲醇比和旋转蒸发温度对脂质体包封率影响的响应面图；
图21是氯仿甲醇比和旋转蒸发温度对脂质体包封率影响的等高线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，本具体实施方式在以本发明技术方案为前提下进行实施，应理解这些方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
以下实施例中所使用的主要药物、试剂、设备和计算方法具体如下：
试验药物：地黄多糖（陕西慈缘生物技术有限公司，生产批号CY120813）。
主要试剂：大豆磷脂（上海太伟药业有限公司，生产批号20120304），胆固醇（天津市博迪化学有限公司，批号20090908），鱼精蛋白（Sigma，USA，批号P4380），D-无水葡萄糖，分析纯，110833-200904，中国药品生物制品检定所，氯化钠、磷酸氢二钠（分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司），氯化钾（分析纯，南京化学试剂厂），磷酸二氢钾（分析纯，汕头市西陇化工厂），95%乙醇、硫酸、精制苯酚，分析纯，南京化学试剂有限公司。
主要仪器设备：超声处理器JAC-500，济宁奥波超声电气有限公司；JY92-ⅡDN型超声细胞粉碎机，宁波新芝生物科技有限公司；FA1104N型电子天平，上海精密科学仪器有限生产公司生产；旋转蒸发仪RE-52A，上海亚荣生化仪器厂；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵，上海亚荣仪器厂；754紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；离心机湘仪L-550，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；万用电炉，天津泰斯特仪器有限公司生产。
RGPL包封率的测定：采用鱼精蛋白凝聚法结合苯酚-浓硫酸法测定。
RGPL分离及包封率和载药量的测定：鱼精蛋白凝聚法。吸取空白脂质体以及制备的RGPL100μL，加入100μL鱼精蛋白溶液（10mg/mL），混匀后静置3min，再加入3mL生理盐水，离心，4000r·min-1，30min。取其中上清1mL，加生理盐水补足至2mL，测其中多糖含量，即得到未包封的RGP含量。对于沉淀，加入0.6mL的TritonX-100，破乳后，再加入2.6mL的生理盐水，充分混匀，同样取1mL的样，生理盐水补足至2mL，测其中多糖含量，即为包封的RGP含量。计算制备的RGPL的包封率，公式如下：
包封率EE%＝（1－Cf/C总）×100%
式中Cf为游离多糖量；C总为脂质体中包封的多糖与游离多糖之和。
脂质体的载药量按照下列公式计算：
载药量W%=[（WT－WF）/WP]×100%，
式中：WT为脂质体溶液中多糖的总质量；WF为游离多糖的质量；WP为卵磷脂和胆固醇的质量之和。
实施例1乙醇注入法制备RGPL
称取0.4g大豆磷脂，0.05g胆固醇和0.1g吐温80溶于10mL无水乙醇中，超声使其充分溶解；在50℃水浴摇床的振荡下，将20mL的含2mg·mL-1熟地多糖的PBS（pH7.0）溶液缓慢导入前者，保持50℃继续振荡30min；置于250mL圆底烧瓶中，60℃减压蒸发除去乙醇，随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理（强度50%，2.5s开，2.5s停，作用1h），使RGP充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得RGPL的粒径更均一，从而得到RGPL混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得RGPL溶液。置于4℃保存。
经计算，该方法制备RGPL包封率为30.495%。
实施例2薄膜分散法制备RGPL
称取0.4g大豆磷脂，0.05g胆固醇和0.1g吐温80溶于10mL氯仿和甲醇（1∶1）溶液中，超声使其充分溶解；置于250mL圆底烧瓶中，60℃减压蒸发除去有机溶剂，当烧瓶壁上形成一层均匀的薄膜后，导入20mL的含2mg·mL-1熟地多糖的PBS（pH7.0）溶液，60℃减压蒸发，使瓶壁薄膜洗脱；25℃水化1h；随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理（强度50%，2.5s开，2.5s停，作用1h），使RGP充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得RGPL的粒径更均一，从而得到RGPL混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得RGPL溶液。置于4℃保存。
经计算，该方法制备RGPL包封率为32.560%。
实施例3硫酸铵梯度法制备RGPL
称取0.4g大豆磷脂，0.05g胆固醇和0.1g吐温80溶于10mL无水乙醇中，超声使其充分溶解；在50℃水浴摇床的振荡下，将前者导入10mL10%硫酸铵溶液中，进而置于250mL圆底烧瓶中，60℃减压蒸发除去有机溶剂；置于PBS（pH7.0）中透析24h；在50℃水浴摇床的振荡下，将20mL的含2mg·mL-1熟地多糖的PBS（pH7.0）溶液缓慢导入前者，保持50℃继续振荡30min；随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理（强度50%，2.5s开，2.5s停，作用1h），使RGP充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得RGPL的粒径更均一，从而得到RGPL混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得RGPL溶液。置于4℃保存。
经计算，该方法制备RGPL包封率为29.545%。
实施例4逆相蒸发法制备RGPL
称取0.4g大豆磷脂，0.05g胆固醇和0.1g吐温80溶于10mL氯仿和甲醇（1∶1）溶液中，超声使其充分溶解；置于250mL圆底烧瓶中，60℃减压蒸发除去有机溶剂，当烧瓶壁上形成一层均匀的薄膜后，加入乙醚溶解，将20mL的含2mg·mL-1熟地多糖的PBS（pH7.0）溶液缓慢导入前者，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的W/O型乳剂，60℃减压蒸发，形成胶态后加入一定量PBS，继续旋蒸15min，除去有机溶剂，随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理（强度50%，2.5s开，2.5s停，作用1h），使RGP充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得RGPL的粒径更均一，从而得到RGPL混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得RGPL溶液。置于4℃保存。
经计算，该方法制备RGPL包封率为35.296%，高于实施例1-3的制备方法。故而，逆相蒸发法为制备RGPL的最适方法。
实施例5空白脂质体的制备
空白脂质体的制备方法分别同实施例1至实施例4，分别将其中20mL含2mg·mL-1熟地多糖的PBS（pH7.0）溶液换成20mL PBS（pH7.0）溶液即可。
实施例6标准曲线的制作
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100mg，定容至100mL，得1mg·mL-1的储备液，吸取10mL储备液定容至100mL，得0.1mg·mL-1的标准液。精密吸取标准液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL至试管中，加蒸馏水补足至2mL，以空白脂质体的透析液做为空白对照，吸取2mL至试管中，各加入5%精制苯酚1mL，浓硫酸5mL，混匀后热水浴加热10min，冷却后在分光光度计上测定490nm处的吸光度值，以吸光度为纵坐标，葡萄糖标准品溶液浓度为横坐标，绘制成标准曲线。
如图1所示，经计算得到回归方程，得Y=13.978X-0.0011(R2=0.9996)。表明葡萄糖在0.01～0.05mg·mL-1范围内线性关系良好。
实施例7
RGPL的制备方法同实施例4，其中，磷脂用量分别为200、400、600、800、1000mg，观察不同磷脂用量对RGPL包封率和载药量的影响。
不同磷脂用量对RGPL包封率和载药量的影响如图2和3。当磷脂用量为0.4g时，包封率和载药量达到最大值。以下的实验则在磷脂用量固定为0.4g的基础上进行。
RGPL的制备方法同实施例4，其中，大豆磷脂与地黄多糖的质量比（m/m）比分别为20:1、40:1、50:1、100:1、160:1，观察大豆磷脂与地黄多糖的质量比对RGPL包封率和载药量的影响。
不同脂药比对RGPL包封率和载药量的影响如图4和5。RGPL包封率随着脂药比的增大，在20:1～100:1范围内，呈逐渐上升趋势，在100:1时达到最大，而后又呈减小趋势。载药量随药脂比的改变也呈现类似的变化，亦在脂药比为100:1时载药量达到最大，故而选择100:1作为脂药比最佳比例。
RGPL的制备方法同实施例4，其中，大豆磷脂与胆固醇的质量比（m/m）比分别为10:1、8:1、5:1、4:1、2:1，观察大豆磷脂与胆固醇的质量比对RGPL包封率和载药量的影响。
不同膜材比对RGPL包封率和载药量的影响如图6和7。RGPL包封率和载药量随着膜材比的改变变化较显著，两者均随着膜材比的增大先增大后减小，当膜材比为8:1时，包封率和载药量均取得最大值。
RGPL的制备方法同实施例4，其中，吐温80与大豆磷脂的质量比（m/m）比分别为1:5、1:8、1:10、1:16、1:20，观察大豆磷脂与胆固醇的质量比对RGPL包封率和载药量的影响。
吐温80与大豆磷脂比对RGPL包封率和载药量的影响如图8和9。RGPL包封率和载药量随着吐温80与大豆磷脂比的改变变化不显著，基本呈现先增大后减小的趋势，当吐温80与大豆磷脂比为1:10时，包封率和载药量均取得最大值。
RGPL的制备方法同实施例4，其中，大豆磷脂与氯仿和甲醇体积和之比（mg/mL）比分别为20:1、40:1、50:1、80:1、100:1，观察大豆磷脂与氯仿和甲醇体积和之比对RGPL包封率和载药量的影响。
不同磷脂与氯仿和甲醇体积和之比对RGPL包封率和载药量的影响如图10和图11。结果表明，磷脂含量一定，氯仿与甲醇体积和为8mL时，所制得的RGPL包封率最高，达37.57%，其次为氯仿与甲醇体积和为10mL时，包封率为36.65%。而载药量在氯仿与甲醇体积和为10mL时，达到最大，为7.104%，其次为氯仿与甲醇体积和为8mL时，载药量为7.083%。综合考虑，选择8mL为氯仿与甲醇最优体积和。
RGPL的制备方法同实施例4，其中，氯仿与甲醇体积比（v/v）比分别为8:0、6:2、4:4、2:6、0:8，观察氯仿与甲醇体积比对RGPL包封率和载药量的影响。
不同氯仿与甲醇体积比对RGPL包封率和载药量的影响如图12和图13。结果表明，氯仿与甲醇各4mL时，所制得的RGPL包封率和载药量均为最高。
RGPL的制备方法同实施例4，其中，旋转蒸发的温度分别为30、40、50、60、70℃，观察旋转蒸发的温度对RGPL包封率和载药量的影响。
不同旋转蒸发温度对RGPL包封率和载药量的影响见图14和15。RGPL包封率和载药量均随着旋转蒸发温度的升高而先增大后减小，当旋转蒸发温度为60℃时，包封率和载药量均取得最大值。
实施例8
在实施例7的基础上，选出对脂质体包封率有较显著影响的4个因素：膜材比（X1）、氯仿甲醇体积比（X2）、磷脂与吐温80质量比（X3）和旋转蒸发温度（X4）。各自变量水平见表2以脂质体的包封率为响应值，膜材比、氯仿甲醇体积比、磷脂与吐温80质量比和水浴温度四个因子为自变量，采用Design-Expert8.0软件设计响应面试验见表2。选用BBD模型，以脂质体的包封率为响应值，做4因素3水平共27个试验点（5个中心点），二次回归正交组合试验。
表2试验各因素与水平
设该模型通过最小二乘法拟合的二次多项方程为：
Y=C0+C1X1+C2X2+C3X3+C4X4+C14X1X4+C23X2X3+C24X2X4+C11X1 2+C22X2 2+C33X3 2+C44X4 2
式中：Y为预测响应值，C0为常数项，C1、C2、C3、C4分别为线性系数，C14、C23、C24为交互项系数，C11、C22、C33、C44为二次项系数。
试验设计及结果见表3。由表3可见，包封率从28.345%到73.107%变化。对试验结果进行响应面分析，经过二次回归拟合后，得出Y与影响因素X之间关系的拟合方程式如下：Y=71.01+1.58X1-4.69X2+4.56X3+2.53X4-6.14X1X4+8.11X2X3-9.30X2X4-7.88X1 2-10.13X3 2-16.85X3 2-6.70X4 2。
表3Box-Behnken试验设计表及结果
模型方差分析结果见表4。从表4可知，本试验所选用的二次多项模型具有高度的显著性（P model<0.0001），失拟项的p=0.0950，不显著；模型中的X2（氯仿甲醇体积比）、X3（磷脂与吐温80比）、X4（旋转蒸发温度）、X1X4（脂药比和旋转蒸发温度交互作用）、X2X3（氯仿甲醇体积比和磷脂与吐温80比交互作用）、X2X4（氯仿甲醇体积比和旋转蒸发温度交互作用）等的“P”值均小于0.05，说明它们对脂质体包封率有显著影响；相关性R2=0.9649，校正决定系数RAdj 2=0.9341，精密度系数RPred 2=0.8221，与RAdj 2较一致。综上表明，此模型拟合度较好。
表4响应面模型方差分析表
响应面的3D图和等高线如图16～21所示，分别表示以膜材比、氯仿甲醇比、磷脂吐温80比和旋转蒸发温度4个因素中2个因素交互对脂质体包封率的影响。
从图16和17可知，包封率随着膜材比的增大而先增大后减小，随着旋转蒸发温度的增大亦呈先增大后减小趋势，且曲线表现平滑，表明这两个因素的交互作用对包封率的影响不太显著。据图像可知，包封率的最优值应该出现在膜材比介于7:1到8:1，旋转蒸发温度位于60℃左右。
从图18和19中可知，为氯仿甲醇比和磷脂吐温80比的交互影响对脂质体包封率的影响。如图所示，包封率随着氯仿甲醇比的减小先增大后减小，随磷脂吐温80比的减小也是先增大后减小，且曲线表现较陡峭，说明这两个因素的交互作用对包封率的影响显著。从图中可知，包封率最优值应该出现在氯仿甲醇比介于6:2到4:4，磷脂吐温80比约为10:1。
从图20和21可知，包封率随着氯仿甲醇比的增大先增大后减小，随着旋转蒸发温度的减小而逐渐减小，且曲线表现陡峭，说明这两个因素的交互作用对包封率的影响显著。从图中可知，包封率最优值应该出现在氯仿甲醇比介于4:4到6:2，温度约为60℃。
通过对膜材比、氯仿甲醇比、磷脂与吐温80比和旋转蒸发温度4个因素单独作用以及两两交叉作用对脂质体包封率的影响进行研究后，由Design-Expert8.0软件对制备工艺做进一步优化，得到最佳制备条件组合：膜材比7.66:1，氯仿与甲醇比为3.01:4.99，磷脂和吐温80比为10.06:1，旋转蒸发温度为65.92℃。包封率可达72.861%的预测值。考虑到大批量生产的实施可行性，简化最佳制备工艺为：膜材比8:1，氯仿与甲醇比为3:5，磷脂和吐温80比为10:1，旋转蒸发温度为66℃。
实施例9
为检测实施例8由模型预测得到的最优包封率与实测包封率的适合度，按照最优制备条件，参照实施例4的方法，重新制备4批脂质体。测得其包封率平均值为72.753±0.318%，与理论值72.861%仅有0.108%的相对误差。可见该工艺为制备RGPL的最优工艺。
Claims (10)
1.一种地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于，为逆相蒸发法，具体包括如下步骤：
1）取大豆磷脂、胆固醇和吐温80，溶于溶剂中，超声使其充分溶解；其中，大豆磷脂与地黄多糖的质量比为20～160:1，大豆磷脂与胆固醇的质量比为2～10:1，大豆磷脂与吐温80的质量比为5～20:1；大豆磷脂与溶剂的mg/mL比为20～100:1；所述溶剂选自氯仿和甲醇中的一种或两种；
2）置于反应容器中，30～70℃减压蒸发除去有机溶剂，当容器壁上形成一层均匀的薄膜后，加入乙醚溶解；
3）将含地黄多糖的PBS溶液缓慢导入反应容器，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的W/O型乳剂；
4）30～70℃减压蒸发，形成胶态后加入PBS，继续旋转蒸发，除去有机溶剂；
5）置于超声细胞粉碎机进行超声处理，得到地黄多糖脂质体混悬液；
6）再将混悬液分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，得地黄多糖脂质体，置于4℃保存。
2.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤1）中，大豆磷脂与地地黄多糖的质量比为100:1。
3.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤1）中，大豆磷脂与胆固醇的质量比为8:1。
4.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤1）中，吐温80与大豆磷脂的质量比为1:10。
5.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤1）中，大豆磷脂与溶剂mg/mL比为50:1。
6.根据权利要求1或5所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤1）中，溶剂为氯仿与甲醇混合溶液，氯仿与甲醇的体积比为3:1～1:3。
7.根据权利要求6所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤1）中，氯仿与甲醇的体积比为1: 1。
8.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：步骤2）或4）中，旋转蒸发的温度均为60℃。
9.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：大豆磷脂与胆固醇的质量比7.66:1，溶剂中氯仿与甲醇体积比为3.01:4.99，大豆磷脂和吐温80的质量比为10.06:1，蒸发温度为65.92℃。
10.根据权利要求1所述的地黄多糖脂质体的制备方法，其特征在于：大豆磷脂与胆固醇的质量8:1，溶剂中氯仿与甲醇体积比为3:5，大豆磷脂和吐温80比为10:1，蒸发温度为66℃。
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