CN103524584A

CN103524584A - 一种阿扎胞苷的合成方法

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Publication number: CN103524584A
Application number: CN201210231079.XA
Authority: CN
Inventors: 尹新明
Original assignee: TIANJIN JIUHAI MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD
Current assignee: TIANJIN JIUHAI MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD
Priority date: 2012-07-05
Filing date: 2012-07-05
Publication date: 2014-01-22

Abstract

本发明公开了一种阿扎胞苷的合成方法，其方法为：以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，经三甲基硅保护后与1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-核糖在路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯的催化下对接成苷，醇解脱保护基后重结晶得到阿扎胞苷。本发明以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，在对接成苷反应中以路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）代替四氯化锡，避免了原料药金属锡超标以及后处理易乳化不便的问题，其工艺原料易得，操作简单，收率较高，步骤少，环境友好，适合工业化生产。

Description

一种阿扎胞苷的合成方法

技术领域

本发明涉及药物合成工艺领域，具体涉及一种阿扎胞苷的合成方法。

背景技术

骨髓增生异常综合征(MDS) 是一种源于造血干或祖细胞水平损伤而产生的克隆性疾病，以难治性白血细胞减少和易转化为急性白血病为特征。新的治疗目的在于改善血液学指标和希望能可以阻止疾病进展。而阿扎胞苷注射液不仅仅是新的治疗中一条有效途径，并且还对后续延展的症状有很好的缓解作用。因此开展注射用阿扎胞苷的临床研究和注册上市工作可以使更多骨髓增生异常综合征患者得到有效治疗。对于国内企业而言，加快新产品的引进将会掌握市场的主动权，从而赢得先机。若能成功开发注射用阿扎胞苷，必将具有非常好的市场潜力和广泛的临床应用前景。在2014你那以前完成放大生产，快速抢占市场销售收入，预计销售收入可达4000万，利税达800万。

阿扎胞苷是由美国Pharmion公司研究开发的DNA甲基转移酶抑制剂。该药2004年在美国首次上市，商品名为Vidaza，临床上主要用于治疗骨髓增生异常综合症。其作用机制是阿扎胞苷经磷酸化后结合到DNA分子上，DNA甲基转移酶错误地识别氮杂胞苷，发生甲基化反应，形成共价结合产物，DNA甲基转移酶的活性被抑制发生降解，引起肿瘤组织中DNA甲基化水平降低，高甲基化抑癌基因去甲基化，使基因恢复表达从而抑制肿瘤细胞。阿扎胞苷是第一个开发成功的DNA甲基转移酶抑制剂，也是第一个基于肿瘤表基因异常开发的新型抗肿瘤药物。

而现有阿扎胞苷合成路线的包括如下三种：

合成路线一，试验步骤如下：

该方法以5-氮杂胞嘧啶为原料，经三甲基硅保护后与1-溴-2,3,5-三-O-乙酰基-D-核糖在无催化剂下发生成苷反应，然后氨解脱保护基，重结晶得到阿扎胞苷，其合成路线如下：

合成路线二，试验步骤如下：

该方法以5-氮杂胞嘧啶为原料，经三甲基硅保护后与1-O-乙酰基-2,3,5-三-苯甲酰基-β-D-核糖在路易斯酸四氯化锡的催化下对接成苷，醇解脱保护基后重结晶得到阿扎胞苷，其合成路线如下：

合成路线三，试验步骤如下：

该方法以5-氮杂胞嘧啶为原料，经三甲基硅保护后与1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-核糖在路易斯酸四氯化锡的催化下对接成苷，醇解脱保护基后重结晶得到阿扎胞苷，其合成路线如下：

三条路线的合成思路基本相同，都是以保护的β-D-核糖为原料与三甲基硅基保护的氮杂胞嘧啶在路易斯酸的催化下对接后去保护得到阿扎胞苷。

路线一的合成工艺中存在着明显的缺陷。首先，在无催化剂下进行反应，反应时间过长，在室温下反应3天。其次，阿扎胞苷粗品重结晶的得率较低，仅为35%，使得最终总得率仅为11%。

路线二的合成工艺中也存在着很大的缺陷。第一，使用路易斯酸四氯化锡为催化剂，使得最终原料药中的锡超标不适合人类使用。第二，使用路易斯酸四氯化锡为催化剂使得在后处理过程中容易乳化，不易分层。第三，为了分离不易溶的锡盐必须加入过滤一步，而锡盐一般过滤很慢，因而不适合工业化生产。

路线三以四乙酰核糖为原料，原料易得，质量较高，使用催化剂使反应时间缩短；采用醇解去保护的方法，操作简单。整个工艺原料易得，操作简单，收率较高，适合工业化生产。但以路易斯酸四氯化锡进行催化，同样存在着原料药金属锡超标以及后处理易乳化不便的问题。

发明内容

为克服现有技术上不足，本发明目的是在于提供一种原料易得，操作简单，收率较高的阿扎胞苷的合成方法，确保了质量，避免了原料药金属锡超标以及后处理易乳化不便的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：

一种阿扎胞苷的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，经三甲基硅保护后生成具有式（1）结构的化合物；

步骤二，式（1）结构的化合物与1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-核糖在路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）的催化下对接成式（2）结构的苷；

步骤二，上述式（2）结构的苷的醇解脱保护基后重结晶得到阿扎胞苷；本发明在对接成苷反应中以路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）代替四氯化锡，其合成路线如式表示：

步骤一中，所述5-氮杂胞嘧啶与四乙酰核糖的摩尔比为1∶2-4。

作为优选，步骤一中，所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.5。

作为优选，步骤三中，所述在碱性环境下醇解为用NaOH的甲醇溶液进行醇解。本发明以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，在对接成苷反应中以路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）代替四氯化锡，避免了原料药金属锡超标以及后处理易乳化不便的问题，其工艺原料易得，操作简单，收率较高，步骤少，环境友好，适合工业化生产。

具体实施方式

为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

实施例1：

本实施例一种阿扎胞苷的合成方法，包括以下步骤：

步骤一，以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，经三甲基硅保护后生成具有式（1）结构的化合物；其中，5-氮杂胞嘧啶与四乙酰核糖的摩尔比为1∶2.5。

本实施例中，在碱性环境下醇解为用NaOH的甲醇溶液进行醇解。

实施例2：

本实施例中，所述5-氮杂胞嘧啶与四乙酰核糖的摩尔比为1∶2.0。其工艺方法与实施例1相同。

实施例3：

本实施例中，所述5-氮杂胞嘧啶与四乙酰核糖的摩尔比为1∶3.5。其工艺方法与实施例1相同。

实施例4：

本实施例中，所述5-氮杂胞嘧啶与四乙酰核糖的摩尔比为1∶4.0。其工艺方法与实施例1相同。

本发明以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，在对接成苷反应中以路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）代替四氯化锡，避免了原料药金属锡超标以及后处理易乳化不便的问题，其工艺原料易得，操作简单，收率较高，适合工业化生产。

为更加详细阐述本发明的临床实验效果，以上四个实施例临床实验研究如下：

骨髓增生异常综合症是一种以红细胞生成障碍伴有多种白血转移可能性的干细胞紊乱综合症。该疾病以血细胞减少为主要表象并且经常在常规的实验室检测中即可诊断出来。病人有时无症状但是可能有低血细胞数，感染或者自动免疫表现的类似症状。每年可以诊断出近似1000例，并且普遍发生在年龄大于60岁的患者身上。基于最近的SEER数据，3年的存活率保持在35%。MDS的基因图谱没有完全明了；但是一些基因助长剂的甲基化已经研究出来并为发病机制做出贡献。尤其是5-染色体的间质性释放联合了各种亚类的MDS，这其中包括5q综合症以及治疗相关的MDS以及一些类型的白血病。关于在5-染色体区域的肿瘤抑制基因的调查引发了此种转变导致了位于该区域的候选肿瘤抑制基因的LIM（RIL）基因的减少。RIL的甲基化仅在6%的低风险病人身上发现同事有超过50%的中等以及高风险MDS病人表现了基因的异常甲基化。进一步来看，在更高风险的病人中那些有RIL甲基化的病人有仅仅55周的存活中值，而没有甲基化的样本中有119周的存活中值，这显示了在MDS的病原学中基因所扮演的角色。p15INK4b基因的甲基化阻断了依靠激酶4和6的细胞周期蛋白，这与MDS有关联并且同未成熟细胞数量的百分比也有相关性。随着基因的甲基化在MDS发展出的AML中的独特发现，甲基化很可能是疾病进化的一种象征。类似的结果表明随着病人的疾病进化为以白血细胞转移为表象的AML，p15INK4b甲基化细胞的比率增加。

1、骨髓增生异常综合征的治疗现状及常用药物

骨髓增生异常综合征(MDS) 是一种源于造血干或祖细胞水平损伤而产生的克隆性疾病，以难治性全血细胞减少和易转化为急性白血病为特征。目前，主要包括六类治疗方法：

1.1 免疫抑制剂和免疫调节剂

最近免疫抑制治疗，包括类固醇、抗胸腺细胞球蛋白、环孢素A (CsA) 用于治疗在某些MDS 患者的血细胞减少症。最近的临床试验也证实，免疫调节剂沙利度胺，在一定比例的年轻低危的MDS患者，可改善贫血，且对少数患者可改善血细胞减少(11 %～56 %)。

1.2抗甲基化药物

研究证明，在许多肿瘤中，细胞调节基因启动的甲基化与这些基因的沉默有关，也与恶性细胞表型异常有关。因为启动子甲基化相对来说是“肿瘤特异性”的，所以DNA 甲基化成为一个值得研究的靶向治疗。

1.3组蛋白去乙酰化酶抑制剂HDAC

Chen等在体外研究表明丙戊酸钠诱导MDS细胞株MU TZ21 凋亡，通过G0 / G1期阻滞，诱导MU TZ21细胞凋亡，从而抑制MU TZ21 细胞增殖。HDACI 能诱导多种细胞生长停滞、分化或凋亡。一种全新的抗肿瘤途径正引起关注。

1.4螯合剂治疗

螯合剂包括去铁草酰胺、去铁酮及去铁胺。从诊断开始，经螯合和未经螯合治疗的患者的总存活时间中位数是115和51个月(P<0.01)，在对其他预后指标(性别、年龄、IPSS、输血要求) 调整后，生存时间的差异依然有统计学意义。此前瞻性分析有力的表明铁螯合治疗为大量输血的MDS患者，尤其是低危和中危患者，有效的延长生存期。

1.5造血生长因子

MDS患者中90 %左右有贫血。EPO单用可使受损红系生长加快，改善MDS 患者贫血状况，和其他造血生长因子联用更好，故大量临床实验都对此加以研究。

1.6造血干细胞移植

异基因造血干细胞移植( HCT) 是目前惟一可能治愈MDS 的治疗方案。

2阿扎胞苷的临床应用特点 ^[2]

研究1是一项随机的，开放的，进行对照试验，在美国的53个地点进行，比较了皮下注射VIDAZA加上辅助治疗和仅仅只有辅助治疗的安全和有效性），该研究中的观察病人为MDS的FAB亚型患者：难治性贫血（RA），有环形铁粒幼细胞（RARS），原始细胞过多的难治性贫血（RAEB），在变换异常综合征RAEB（T-RAEB）以及慢性粒细胞白血病（CMMoL）。如果符合一个或更多下列条件：要求红细胞输血；有血小板计数≤50.0×109/L；需要血小板输血；或有中性粒细胞（ANC1.0×109/L）感染并且需要使用抗生素治疗。这时，RA和RARS病人应当包括进来。急性髓系白血病（AML）患者并没有包括在内。在这项研究中，持性治疗可以包括输血制品，抗生素，止吐，止痛药和退热药。禁止使用造血生长因子。基线病人和疾病特征总结在表3；有2组很相似。每四周有7天，皮下注射Vidaza75mg/m²。如果在两个治疗循环后没有有益效果，剂量可增至100mg/m²。应当依据血液学反应或肾毒性来适当减少或者延迟剂量。如果他们在骨髓原始细胞，血红蛋白下降的增长，使红细胞输血要求，或血小板减少，增加或如果他们需要血小板输血或开发出一种临床感染需要用抗生素治疗。为了评估效果的目的，主要终点是缓解率。

对191例包括在研究，独立审查（审理的诊断）发现，19名患者诊断出在基线上有AML。这些患者被排除了进行统计的初步反应率分析，虽然他们在意向性治疗（ITT）分析所有病人随机分析。大约55%随机观察的病人接受VIDAZA治疗。 15.7% 用Vidaza治疗的非AML的病人的总体反应率 (CR + PR) (所有使用VIDAZA的病人并且包括AML的16.2%)据统计明显高于观察组的反应率为0%(p<0.0001)。达到 CR 或者 PR的病人在基线上有2个或者3个细胞线异常(79%；11/14) 并且在基线上骨髓未成熟细胞上升或者在基线上输血。对Vidaza反应的病人在骨髓未成熟细胞的百分比上有所减少或者在血小板数血红蛋白或者白血细胞上有所增加。大于90% 的反应者在第五轮循环表现出这些改变。所有有输血依赖性的病人在PR或者CR阶段，改进了对于输血的依赖性。估测了PR或者更好的临床反应的耐受率的平均值和中值分别为512和330天；75% 的反映病人在治疗完成时，仍处于PR或者更好。反应在所有的MDS亚型以及所有审理的AML的基线诊断。

研究2：一项多中心，开放性，单臂的研究用到了72名患有RAEB， RAEB-T，CMMoL，或者AML的病人。使用上述的标准来看，皮下注射VIDAZA导致了反应率(CR + PR)为13.9%。PR或者更好的临床反应率的持续率的平均和中值据估计分别为810和430天；在研究完成阶段80%的反应病人仍处于PR或者更好的状态。

在研究3中，另外一项用48名患有RAEB，RAEB-T 或者 AML的病人使用如上的标准来评定，静脉注射VIDAZA治疗的研究结果为：反应率是18.8%。PR或者更好的临床反应的平均和中值的持续时间分别为389和281天； 67% 的反应病人在治疗结束时仍然处于PR或者更好的状态。所有MDS亚型以及在这些研究中的AML的基线诊断的病人都发生了反应。在这两个研究中的VIDAZA的剂量同控制组的剂量相类似。尚不符合PR或者更好的标准的病人获得了益处。大约有24%的Vidaza治疗的病人有改变，并且在那些失去输血依赖性的患者占了2/3。在观察组，仅仅5/83的病人符合改进的标准；尚未失去输血依赖性。在所有的三个研究中，大约有19%的病人有一个中值为195天的持续时间，符合了改进的标准。

研究四是一项国际的，多中心，开放，随机实验，采用了FAB分类来说为RAEB，RAEB-T或者修正性的CMMoL的MDS病人以及用IPSS分类为中性和高风险的MDS病人。在该研究中所包括的358名病人中，179名病人随机接受阿扎胞苷用药并且配给最好的辅助治疗（BSC）并且179名病人随机接受传统保健疗法(CCR)加上BSC (105名只用BSC，49名用低剂量的阿糖胞苷以及25名用阿糖胞苷和蒽环化疗)主要的有效关键点是全部存活。阿扎胞苷和CCR组对于基线参数是可比的。病人的平均年龄是69岁（从38-88岁），98%是高加索人，70%是男性。在基线上，通过FAB来看，95%的病人高风险：RAEB (58%)，RAEB-T (34%)，和CMMoL (3%)。通过IPSS分类，87% 高风险：Int-2(41%)，高(47%)。在基线，32%的病人符合WHO对于AML的标准。在一个疗程为28天的循环中，连续七天每天用阿扎胞苷皮下注射75mg/m²给药。病人继续接受治疗直至疾病发展，反应后复发或者有无法承受的毒性。使用阿扎胞苷治疗的病人经历了9个循环的中值。仅仅使用BSC的病人经历了7个循环的中值，用阿糖胞苷和蒽环类化疗的病人经历了4.5个循环（例如：诱导加上1或者2个巩固周期）。在意向治疗分析中，使用阿扎胞苷的病人同CCR治疗的病人相比，在总体存活率方面有明显的区别。(中值存活为24.5月比15.0月；分层对数p=0.0001)。在治疗效果方面描述的风险比率是0.58 (95%，CI：0.43，0.77)。

2.1化学结构和理化性质的特点

阿扎胞苷不同于其他胞苷类似物的地方在于用氮原子替代了杂环5位的碳原子。阿扎胞苷作为一种低甲基化试剂的作用机制是通过阻断复制细胞中DNA甲基转移酶来表达的。它同样通过联合一系列母体化合物5-氮胞苷的磷酸化和5-氮-脱氧胞苷3磷酸盐的RNA联合而具有细胞毒性。阿扎胞苷是有细胞毒性的药物，并且由于混同其他有潜在毒性的化合物，当处理或者制备阿扎胞苷悬浊液时应当小心谨慎。如果调好的阿扎胞苷接触皮肤应当立即彻底的用肥皂和水冲洗。如果接触粘膜，用水彻底冲洗。盛装阿扎胞苷的瓶子是单独使用的并且不能包含任何防腐剂。每个瓶子不用的部分应当适当地丢弃。不要保留任何未使用的部分来继续使用。大于4ml的剂量应当分成2个注射针。该产品可以在室温下放置1小时，但是必须在调配好后一小时内注射。皮下注射的调配应当在25℃（77℉）时1小时，或者在2-8℃之间，8个小时。阿扎胞苷在不调配时贮存在25o C (77o F)；可控制在15o-30o C (59o-86o F)。

2.2药理作用及作用机制方面的特点

体外研究表明阿扎胞苷的有效活性是在低剂量注射时使得DNA去甲基化。在2004年，FDA批准了阿扎胞苷注射液用于治疗按FAB分类为：难治性贫血（RA），环状铁粒幼细胞难治性贫血（RARS）（如果伴随有中性粒细胞减少，血小板减少或者需要输血的贫血症状），伴有过剩未成熟细胞的难治性贫血（RAEB），转移性RAEB(T-RAEB)，或者慢性骨髓粒细胞白血病。支持FDA批准阿扎胞苷用于MDS治疗的三个实验分别是癌症和白血病组B（CALGB9221，8921和8421）。CALGB9221是一个对比了皮下注射阿扎胞苷和给患有MDS病人最好辅助治疗的随机控制实验。随机实验在两个阶段二的研究中得出了阿扎胞苷的活性。CALGB8421和8921均是连续7天，每天给药阿扎胞苷75mg/m^2/天，然而前者是静脉注射后者是皮下注射。在CALGB8421中评估的43名病人中，21名病人有49%的反应率并且对于所有病人来说有一个13.3个月的中值存活率。对于最好的反应率的循环的平均数量为3.8并且范围在2到11个循环，这表明有延长用药的需要。CALGB8921产生了类似的结果，反应率为近似50%，完全反应率（CR）为27%，CALGB8421的完全反应率为12%。基于阿扎胞苷在阶段二的活性，推行了CALGB9221。在试验中，191名病人随机皮下注射7天阿扎胞苷75mg/m²/天，或者是最好的辅助性治疗。被定义为完全反应和部分反应以及血液改变，是在60%的用药患者身上以及5%的接受辅助治疗的患者身上检测出来的（p<0.001）。研究中允许交叉并且接受辅助治疗的半数病人最终接受了阿扎胞苷的用药。为了纠正该混淆的影响，我们通过3个不同的组做了存活分析。第一个组包括完全接受辅助治疗或者是6个月辅助治疗后中途转阿扎胞苷治疗的病人。第二个组包括在初期的6个月随机接受阿扎胞苷用药的辅助治疗的病人。最后一组包括接受阿扎胞苷用药的病人。该分析表明在以6个月为标记的前提下各组的中值存活时间分别为11，14和18个月。同时，在不考虑辅助治疗组交叉过晚或者基本无交叉（p=0.03）的前提下，接受阿扎胞苷组和辅助治疗组的存活率很明显地不同。在辅助治疗组的病人中，交叉早的病人同交叉较晚或者根本无交叉的病人相比有更长的存活率，然而这种不同并不是很明显（p=0.11）。

对于改进疗效来说，生活质量的评估表明在疲劳和心理因素等多方面阿扎胞苷比辅助治疗组更明显。在做该实验时，MDS的WHO分类，IWG反应标准以及IPSS还尚未投入使用。为了确定是否收录的CALGB实验的反应率可以适应WHO分类和IWG反应标准，我们添加了包括病理学复审在内的综合分析。该研究的反应率是40%到47%。排除使用WHO标准分类为AML的患者，其他病人的基线诊断无明显改变。三组AML病人的反应率为35%到48%，在所有的AML病人中，中值反应耐受为7.3个月，范围为2.2到25.9个月。尽管依据重分析在CALGB9221的病人中有7%被诊断为有AML，接受阿扎胞苷治疗的病人总体的存活时间为19.3个月而接受辅助治疗的病人仅有12.9个月。尽管常规的用药剂量有所不同，实验中仍是使用阿扎胞苷为75mg/m²/天的剂量。尽管不考虑是皮下给药还是静脉注射反应率都近似，该药缺少广泛的药代动力学数据促使了一个给MDS病人做的随机实验来确定生物等效性并且比较了2个过程的单一剂量的药代动力学。在用药期间病人接受75mg/m²的单一剂量，并且有最小7天最大28天的交叉设计。皮下注射的AUC值是静脉注射的89%，范围为70%到112%。皮下注射有明显的较长的半衰期，0.69小时± 0.14 小时，而静脉注射的半衰期为0.36小时± 0.02小时。该药代动力学实验帮助确认了皮下注射更加简单。更长远的是为了缓解MDS病人使用阿扎胞苷的症状，我们进行了多中心的阶段二的多种剂量方案的研究。高低风险的超过150名的病人通过各种方案接受了阿扎胞苷，这些方案包括：A) 连续五天给药阿扎胞苷剂量为75mg/m²/天，之后的两天停药，再用两天阿扎胞苷剂量为75mg/m²/天，B)连续五天给药50mg/m²/天，停药两天，之后连续五天给药剂量为50mg/m²/天，C)5天注射75mg/m²/天的阿扎胞苷。实验的初始的6个月的分析演示了在三个组中血液改变和输血依赖性的连续速率。尽管，级别3-4的血液不良反应是最大的——组A为44%，组C为18%，剂量规则却可以很好地耐受。尽管先前的结果看起来很好，12个月的临床阶段正在进行中，所以是否缩短7天的疗程还尚未决定。由于阶段三的实验对于接受阿扎胞苷治疗的MDS病人同仅仅接受辅助治疗的病人间的相比的绝对整体存活的优势，另外的阶段三的结果显示了接受阿扎胞苷治疗的病人比接受辅助治疗的病人更有整体存活优势，另一项阶段三的实验报告了阿扎胞苷同传统治疗方法的(CCR)的比较。患有按Int2或者更高的的IPSS分类为高风险的MDS的病人符合的标准为：CCR被定义为最好的辅助治疗，低剂量的阿糖胞苷或者是标准的减少或固定剂量。总共358名病人被随机分配在79个国际位置。阿扎胞苷组的整体存活率明显高于CCR组（24.4个月对比15个月，p=0.001）。当阿扎胞苷同3个CCR组对比时，总体存活率的中值的不同如下所示：最好辅助治疗组12.9个月(p = 0.0003)，低剂量阿糖胞苷组病人9.1个月(p = 0.016)以及标准减少或巩固组为8.7个月(p = 0.19)。在先前的实验中，阿扎胞苷无不良反应耐受性良好。尽管，假设中表明对于MDS病人的反应会得到很好的存活率，当建立起来的CR转移给患有AML的有存活希望的病人时，CR却没有被MDS病人所建立。AZA-001通过反应来分析存活优势对于部分消除起到了帮助作用。尽管无统计学上的意义(26.3月比21.9月，p = 0.078)，通过阿扎胞苷的治疗达到了CR，并且与CCR组达到的CR相比，延长了存活时间。相类似地来看，达到血液改变或者是部分反应的病人同样获利，因为获得CR对于延长存活时间是没有要求的。更主要的是，结果表明在缺少疾病发展的前提下，阿扎胞苷治疗的扩展对于提高存活质量和时间是一个很好的方法。阿扎胞苷的初始实验开始在20年前并且由于在许多试验中的显著效果，阿扎胞苷已经用于MDS的优先用药。

2.3药代动力学的特点

阿扎胞苷的药代动力学在6名MDS病人用单一剂量的75mg/m²皮下注射以及静脉注射75mg/m²的剂量。阿扎胞苷在SC注射后迅速吸收；阿扎胞苷在750±403ng/ml血浆峰值发生在0.5小时。基于曲线下的面积来看，SC的阿扎胞苷生物利用度是静脉注射生物利用度的89%。静脉注射的分布平均体积为76±26L。平均的明显的SC清除率是167±49L/小时并且在SC给药后平均半衰期为41±8分钟。

发表的研究表明，阿扎胞苷和其代谢产物主要通过尿液分泌排出。静脉给5名癌症病人标记注射阿扎胞苷，累积尿液排泌量为标记剂量的85%。在3天左右标记剂量有＜1%通过粪便排出。SC给药¹⁴C标记的阿扎胞苷的尿液平均排出率为50%。总体的标记（阿扎胞苷和其代谢产物）的排出半衰期在比较静脉注射和SC时是相似的，大约4小时左右。

3毒性及不良反应特点

致癌性，致突变，生育功能损伤

在小鼠和大鼠身上研究阿扎胞苷的潜在的致癌性。在52周中，每周3次腹腔注射阿扎胞苷诱导了雌性小鼠的在2.2mg/kg（6.6mg/m²，近似人体建议剂量的8%）的造血系统肿瘤。在50周内，每周一次在腹腔注射2.0mg/kg（6.0mg/m²，近似8%的人体建议剂量）的阿扎胞苷，淋巴系统，肺，乳腺和皮肤的肿瘤发生率有所增加。大鼠每周两次用药15mg/m²或者60mg/m²来研究治肿瘤作用（近似20-80%建议人体的剂量）表明睾丸癌的发生率同控制组相比有所增加。

阿扎胞苷的致突变和致畸变潜能在体外通过细菌系统用伤寒沙门氏菌株TA100的和trpE8多株，埃希氏菌WP14pro，WP3103P，WP3104P和CC103来检测；小鼠的淋巴细胞和人类的淋巴细胞的体外基因突变组；在体外小鼠淋巴瘤L5178Y细胞和叙利亚仓鼠胚胎细胞微核试验。阿扎胞苷在细菌和乳腺细胞系统中有致突变作用。通过在L5178Y小鼠细胞和叙利亚仓鼠胚胎细胞微核诱导显现了该药物的致畸变作用。

给雄性小鼠注射阿扎胞苷9.9mg/m²（人体每日建议剂量的约9％），在三天中每天一次，并且在以后的胚胎产后的发展中，在和未经处理的雌性小鼠交配之前降低了生育率和后代造成的损失。给雄性大鼠每周治疗3次用15-30 mg/m²的剂量坚持11或者16周（约20-40％，建议人体服用的每日剂量）睾丸和附睾重量下降，导致精子数量和以及怀孕率下降并且在交配雌性的胚胎损失有所增加。在一项相关研究中，雄性大鼠治疗16周，24mg/m²，在孕期第二天的妊娠检查中发现，导致了胚胎的异常。

主要考核指标：

阿扎胞苷临床研究用药品质量标准草案

本品为4-氨基-1-β-D-呋喃核糖基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮。按干燥品计算，含阿扎胞苷（C₈H₁₂N₄O₅）不得少于98.0%。

【性状】本品为白色至类白色粉末；无臭。

本品在二甲基亚砜中溶解，在水中略溶，在丙二醇中微溶，在丙酮、乙醇、甲基乙基酮中不溶。

熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C）为232-237℃。

比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1ml中含10mg的溶液，在26℃时，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E），比旋度为+21°至+24°。

【鉴别】 (1)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C）。

(2)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间应一致。

【检查】酸度取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录Ⅵ H），pH值应为5.0～7.0。

溶液的澄清度与颜色 取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，溶液应澄清无色。

氯化物 取本品0.10g，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ A），与标准氯化钠溶液1.0ml制成的对照品溶液比较，不得更浓（0.01%）

硫化盐 取本品0.25g，加水30ml溶解后，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ B），与标准硫酸钾溶液1.0ml制成的对照品溶液比较，不得更浓（0.04%）。

有关物质 取本品，用稀释液（80%甲醇溶液）溶解并制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液（临用现配）；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取本品约10mg，加0.01mol/L氢氧化钠溶液10ml使溶解，置30℃加热5分钟，取出，加0.01mol/L盐酸溶液至中性，摇匀，作为水解产物试验溶液。照高效液相色谱法（附录V D）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相A为磷酸缓冲液（每1000ml缓冲溶液含0.005mol磷酸二氢钠和0.005mol磷酸氢二钠，用磷酸调节值6.4）；流动相B为甲醇；检测波长为242nm，按下表线性梯度洗脱。取水解产物试验溶液2ul注入液相色谱仪，记录色谱图，阿扎胞苷与水解产物Ⅰ（相对保留时间约为0.6）、水解产物Ⅱ（相对保留时间约为0.3）的分离度均应大于2.0。取对照溶液2ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高为满量程的20%～25%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各2ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，水解产物Ⅰ峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2（0.5%），水解产物Ⅱ峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/10（0.1%），其他单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/10（0.1%），其他各杂质峰面积的和不得过对照溶液主峰面积的1/2（0.5%）。

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0	98	2
10	98	2
			30	70	30
50	70	30
			52	98	2
60	98	2

残留溶剂 甲醇、二甲基亚砜与二氯甲烷取本品约0.5g，精密称定，置5ml量瓶中，加入二甲基甲酰胺适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密称取甲醇、二氯甲烷和二甲基亚砜各适量，加二甲基甲酰胺稀释成每1ml中约含甲醇0.6mg、二氯甲烷0.12mg和二甲基亚砜1.0mg的混合溶液，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（中国药典2005年版附录Ⅷ P）测定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱为色谱柱，柱温50℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为300℃；进样口温度为200℃；载气为氮气；精密量取对照品溶液与供试品溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，应符合规定。

干燥失重 取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过0.5%（中国药典2005年版二部附录Ⅷ L）。

炽灼残渣 取本品1.0g，依法检查(中国药典2005年版二部附录Ⅷ N)，遗留残渣不得过0.1%。

重金属 取炽灼残渣项下的残渣，依法检查(中国药典2005年版二部附录Ⅷ H第二法)，含重金属不得过百万分之十。

细菌内毒素 取本品，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅺ E），每1mg阿扎胞苷中含内毒素的量应小于0.50EU。

【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸缓冲液（每1000ml缓冲溶液含0.005mol磷酸二氢钠和0.005mol磷酸氢二钠，用磷酸调节PH值6.4）-甲醇（98：2）为流动相；以流速为每分钟1.0ml；检测波长为242nm。理论板数按阿扎胞苷峰计算应不低于3000，阿扎胞苷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

测定法取本品适量，精密称定，用80%甲醇溶液溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，精密量取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿扎胞苷对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

【类别】抗肿瘤药。

【贮藏】密封，常温保存。

本发明基于对专利和文献的合成路线的分析，采用了现有合成路线三工艺原料易得，操作简单，收率较高，适合工业化生产，阿扎胞苷的合成主要参考路线三的方法。其以5-氮杂胞嘧啶和四乙酰核糖为原料，在对接成苷反应中以路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）代替四氯化锡，避免了原料药金属锡超标以及后处理易乳化不便的问题，其步骤少，产率比较高，适合放大生产，环境友好的优点。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种阿扎胞苷的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤二，式（1）结构的化合物与1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-核糖在路易斯酸三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯的催化下对接成式（2）结构的苷；

步骤二，上述式（2）结构的苷的醇解脱保护基后重结晶得到阿扎胞苷；

Figure 201210231079X100001DEST_PATH_IMAGE002

。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤一中，所述5-氮杂胞嘧啶与四乙酰核糖的摩尔比为1∶2-4。

3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤一中，所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.5。

4.根据权利要求1至3任意一项所述的合成方法，其特征在于，在步骤三中，所述在碱性环境下醇解为用NaOH的甲醇溶液进行醇解。