CN103520097B - 一种扎那米韦注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种扎那米韦注射液，其含有扎那米韦，氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮，注射用水，和/或聚乳酸，所述注射液的pH值为4.5-6.5。

Description

一种扎那米韦注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及扎那米韦的制剂，具体涉及扎那米韦注射剂及其制备方法。

背景技术

扎那米韦（Zanamivir），是一个流感病毒唾液酸抑制剂，主要用于流感的预防和治疗。其结构式如下：

扎那米韦，化学名为N-乙酰基-2，3-二去氧-4-胍基唾液酸（简称4-胍基-神经氨-5-乙酰-2-烯），或为5-乙酰氨基-4-[（氨基亚氨基甲基）-氨基]-2，6-氢-3，4，5-三去氧-D-丙三醇基-D-半乳糖-2-烯醇酸。由GlaxoWellcome公司研制，1999年8月被FDA批准用于治疗A型和B型流感，扎那米韦是自1993年金刚乙胺获准上市后第一个获得许可的流感治疗药物，其上市剂型为口腔喷雾剂，该制剂由5mg扎那米韦和20mg乳糖组成。

采用经口给药、鼻内给药、皮内或静脉注射给药等多种途径研究了扎那米韦在小鼠体内的药动学。实验结果表明，除口服给药外，其它途径给药均有较好的生物利用度。静注的消除半衰期为10min。经口、皮内和鼻内给药的尿液排泄率分别为3%、68%和43%。

在人体药动学研究中，分别过行了不同剂量下单剂量静脉注射给药和多剂量给药的药动学实验。静注扎那米韦后，体内消除迅速，消除半衰期为1.6h，多以原药形式经尿液排泄，尿中原药量为给药量的87%；体内分布仅限于细胞外液，Vdss为16L。经鼻给药后，尿中原药排泄量比静注给药少得多，为4%-10%，血浆半衰期为3.4h，生物利用度为10%-25%；吸入给药的半衰期为2.9h。在剂量为16mg时，每日4次，连续7日多剂给药，药动学线性未见改变。

现有给药方式，虽然可以克服消除半衰期短的问题，但使用不便，给药量低，难以满足临床需要，特别是重症病人的需要。静脉注射给药可以克服鼻腔给药给药量少的缺陷，但需要克服半衰期短的问题。

中国专利91103492.7描述了一种抗病毒的化合物通式结构的制备方法，其中写明了扎那米韦，扎那米韦采用鼻腔给药的方式，有溶液、干粉和喷雾。其中水溶液由活性成分、氯化鎓、苯乙醇和水组成，或者由活性成分、氯化鎓、丙二醇和纯水组成。

中国专利201010130926.4公开了一种扎那米韦吸入溶液，是在溶液中加有一定剂量的表面活性剂和渗透压调节剂，溶液的组成及重量百分比为扎那米韦0.1%-10%wt，表面活性剂0.01%-0.5%wt，渗透压调节剂0.9%-8%wt。

中国专利201210003901.7公开了一种高浓度的扎那米韦注射液，其浓度为10-100mg/ml。每1000体积份该注射液的原料组成为：扎那米韦10-100重量份，潜溶剂和/或增溶剂50-600体积份，其中使用了丙二醇，聚乙二醇，乙醇，甘油等增溶。

本发明经过研究，发现在注射液中加入吐温80和聚乙烯吡咯烷酮可以增加扎那米韦在水中的溶解度，为此本发明研究出了一种新的扎那米韦注射剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种扎那米韦注射液。

本发明提供的一种扎那米韦注射液，其成分包括，扎那米韦，氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮（重量比例为1:1），注射用水，注射液的pH值为4.5-6.5，优选注射液的pH值为5.4-5.6。

优选的本发明的扎那米韦注射液，含有以下重量百分比的成分：

扎那米韦0.5-1.5%

氯化钠0.85-0.959%

吐温80和聚乙烯吡咯烷酮0.4-0.6%

其余为注射用水。

进一步优选的本发明的扎那米韦注射液，含有以下重量百分比的成分：

扎那米韦0.8-1.2%

氯化钠0.85-0.95%

吐温80和聚乙烯吡咯烷酮0.4-0.6%

其余为注射用水。

更进一步优选的本发明的扎那米韦注射液，含有以下重量百分比的成分：

扎那米韦1%

氯化钠0.9%

吐温80和聚乙烯吡咯烷酮0.5%

其余为注射用水。

本发明的另一种扎那米韦注射液，含有以下成分：

本发明还提供了上述注射液的制备方法，该方法包括以下步骤：称取扎那米韦，加水搅拌使溶解，然后加入氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮，和其他成分，搅拌溶解后，加入0.05%的针用活性炭，搅拌10-15分钟，滤过除炭，然后经0.45μm滤芯滤至稀配罐，补加注射用水补足至全量，搅拌均匀，控制pH值在4.5-6.5范围内，半成品检测合格后，经0.22μm的滤芯精滤，灌封，110-130℃热压灭菌10-20分钟，即可。

本发明提供的注射液可以制成10ml、20ml、50ml、100ml等不同规格的注射液。

本发明提供的注射液可直接用于静脉推注及滴注。

本发明还提供了上述注射液在制备治疗A型和B型流感的药物中的应用。其中所述A型流感是H3N2流感、H1N1流感、H5N1流感。

本发明还提供了上述注射液的包装，可以为玻璃瓶或非PVC软袋包装，所述玻璃瓶为玻璃安瓿瓶、西林瓶或输液玻璃瓶。

本发明还提供了上述注射液的有效抗病毒量为每次0.01-1000mg，优选为1-800mg，更优选为1-600mg。每日用1-5次，优选1-3次。

本发明经过研究发现，扎那米韦注射液因半衰期短，药效难以持续，为此在本发明研究结果的基础上，在注射液中进一步加入聚乳酸，观察注射后的药物吸收情况，结果发现，本发明最优选的配方具有延长的吸收时间本发明最优选的配方可延长吸收时间，明显降低药物的毒副作用，减少药物的刺激性，提高药物的生物利用度，减少了药物的浪费，提高了药效。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：扎那米韦注射剂

1、组成：

2、制备方法：

1）取扎那米韦、加热搅拌10-20min，混匀。

2）取注射用水700ml，加入吐温80和聚乙烯吡咯烷酮，聚乳酸，氯化钠。

3）在氮气保护和搅拌条件下，将步骤1溶液溶液与步骤2溶液混合，用注射用水调节总量到1000ml，调节注射液的pH值为5.5，过滤，分装，通入氮气，密封，110-130℃热压灭菌10-20分钟，灯检合格后，包装。

实施例2：扎那米韦注射液

1、组成：扎那米韦180.0g、氯化钠170.0g，100g吐温80和聚乙烯吡咯烷酮，用注射用水加至20.0L。

2、制备方法：

在浓配罐中加入总量10L的注射用水，称取183.6g扎那米韦置配液罐中，搅拌使溶解，然后加入处方量的氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮搅拌溶解后，加入的5g针用活性炭（相当于浓配体积的0.05%），搅拌15分钟左右，滤过除炭，然后经0.45μm滤芯滤至稀配罐，补加注射用水至近全量，搅拌均匀，控制注射液的pH值为5.5，取样检测。半成品检测合格后，经0.22μm的滤芯精滤，灌封，120℃热压灭菌18分钟，灯检合格后，即得。

实施例3：扎那米韦注射液

1、组成：扎那米韦210.0g、氯化钠190.0g，100g吐温80和聚乙烯吡咯烷酮用注射用水加至20.0L。

2、制备方法：

在浓配罐中加入总量10L的注射用水，称取214.2g扎那米韦置配液罐中，搅拌使溶解，然后加入处方量的氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮搅拌溶解后，加入的5g针用活性炭（相当于浓配体积的0.05%），搅拌10分钟左右，滤过除炭，然后经0.45μm滤芯滤至稀配罐，补加注射用水至近全量，搅拌均匀，控制pH值在4.5-6.5范围内，取样检测。半成品检测合格后，经0.22μm的滤芯精滤，灌封，125℃热压灭菌15分钟，灯检合格后，即得。

实施例4：扎那米韦注射液

1、组成：扎那米韦160.0g、氯化钠180.0g，100g吐温80和聚乙烯吡咯烷酮用注射用水加至20.0L。

2、制备方法：

在浓配罐中加入总量10L的注射用水，称取163.2g扎那米韦置配液罐中，搅拌使溶解，然后加入处方量的氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮搅拌溶解后，加入的5g针用活性炭（相当于浓配体积的0.05%），搅拌10分钟左右，滤过除炭，然后经0.45μm滤芯滤至稀配罐，补加注射用水至近全量，搅拌均匀，控制pH值在4.5-6.5范围内，取样检测。半成品检测合格后，经0.22μm的滤芯精滤，灌封，130℃热压灭菌10分钟，灯检合格后，即得。

实施例5：扎那米韦注射液

1、组成：扎那米韦240.0g、氯化钠180.0g，100g吐温80和聚乙烯吡咯烷酮用注射用水加至20.0L。

2、制备方法：

在浓配罐中加入总量10L的注射用水，称取244.8g扎那米韦置配液罐中，搅拌使溶解，然后加入处方量的氯化钠，吐温80和聚乙烯吡咯烷酮搅拌溶解后，加入的5g针用活性炭（相当于浓配体积的0.05%），搅拌10分钟左右，滤过除炭，然后经0.45μm滤芯滤至稀配罐，补加注射用水至近全量，搅拌均匀，控制pH值在4.5-6.5范围内，取样检测。半成品检测合格后，经0.22μm的滤芯精滤，灌封，121℃热压灭菌15分钟，灯检合格后，即得。

本发明的主要研究成果如下：

实验例一、扎那米韦在不同溶剂中的溶解性研究

结果如下：

表1：不同溶剂中扎那米韦的溶解度

结果表明助溶剂的使用，可以有效的增加扎那米韦的溶解度。但同时随着助溶剂用量的增大，其溶解度也随之降低。其中5%（w/v）吐温80和聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乳酸的助溶效果最明显。

实验例二、扎那米韦注射液pH值筛选实验：

以溶液中单杂和总杂为检测指标，结果如下：

表2：不同pH值下扎那米韦注射液单杂及总杂结果

	单杂	总杂			单杂	总杂
							原料	0.051	0.456
							0天
未灭菌				灭菌
							PH8.5	0.090	0.594		PH8.5	0.102	0.698
PH7.0	0.087	0.582		PH7.0	0.092	0.591
							PH5.5	0.072	0.419		PH5.5	0.088	0.420
PH3.5	0.084	0.592		PH3.5	0.096	0.602
10天光照
							未灭菌				灭菌
PH8.5	0.106	0.580		PH8.5	0.111	0.612
							PH7.0	0.105	0.559		PH7.0	0.108	0.589
PH5.5	0.068	0.414		PH5.5	0.064	0.451
							PH3.5	0.109	0.632		PH3.5	0.103	0.682
							10天40℃
未灭菌				灭菌
							PH8.5	0.105	0.615		PH8.5	0.189	0.735
PH7.0	0.094	0.596		PH7.0	0.118	0.645
							PH5.5	0.084	0.479		PH5.5	0.034	0.376
PH3.5	0.124	0.644		PH3.5	0.093	0.635

10天60℃
							未灭菌				灭菌
PH8.5	0.070	0.596		PH8.5	0.157	0.703
							PH7.0	0.058	0.584		PH7.0	0.101	0.642
PH5.5	0.033	0.361		PH5.5	0.029	0.249
							PH3.5	0.045	0.513		PH3.5	0.056	0.514

结果表明本发明提供的扎那米韦的注射液，特别是本发明实施例1注射剂在pH值为5.5时各种条件下单杂和总杂含量最低。

实验例三、稳定性试验

取新鲜制备的本发明实施例1注射剂，置于离心管中，4000rpm离心15min后，未发现分层，也未见药物沉淀析出。室温阴凉处储存3个月，乳剂外观、粒径、Zeta电位等理化性质以及含量均未发生明显变化，表明本发明实施例1注射剂稳定。

检测实验

实验方法：取实施例1三批样品，模拟市售包装，在温度25℃±2℃、相对湿度60%±10%下放置，于0、3、6、9、12、18、24、36个月末取样，按稳定性重点考察项目检测，并将结果与0月比较。其中外观形状、溶液颜色、可见异物、pH值等观察指标的检测方法如下：

1、外观性状：目测，应为浅黄色澄明液体。

2、溶液颜色：取本品10ml，依法检测（中国药典2010年版二部附录ⅨA）。

3、可见异物：取本品20支，依法检测（照中国药典2010版二部附录ⅨH），应符合规定。

4、pH值：取本品，依法检测（照中国药典2010版二部附录ⅥH），pH值应在5.0～8.5之间。

5、有关物质检查：

色谱柱：AsahipakNH2P-504.6×250mm；波长：λ=234nm；流速:1.5ml/min；柱温：30℃。

测定方法：精密量取本品适量，加流动相稀释制成每1ml中含扎那米韦0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相稀释制成每1ml中约含扎那米韦6μg的溶液，作为对照溶液；精密量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，在波长210nm和234nm处分别检测，记录色谱图；按面积归一化计算杂质的量。

6、含量测定方法（HPLC法）：

色谱柱：AsahipakNH2P-504.6×250mm；波长：λ=234nm；流速:1.5ml/min；柱温：30℃。

流动相:以乙腈-0.005mol/L硫酸（60:40），用50%氨溶液调pH值至6.2±0.05。

测定方法：精密量取本品适量，加水稀释制成每1ml中含扎那米韦0.05mg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取扎那米韦对照品适量，精密称定，加乙腈-水（60:40）溶解并定量稀释制成每1ml中含扎那米韦0.05mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

结果见下表。

表3：稳定性试验结果

结果显示：本发明实施例1-5的注射液的三批样品在稳定性试验条件下放置6个月，三批样品的杂质个数均未增加，大小也无明显变化，帕拉米韦异构体也未见增加，其他各考察项目与0月比较，均无明显变化。结果说明：本发明的实施例1-5稳定性好。

实验例四、药效学试验

试验方法：小鼠感染A型流感病毒FM1（H1N1）的模型中，于病毒感染后1小时和感染后2、3、4、5天分别口腔吸入或腹腔注射给药，共观察14天，结果如下表。

表4：治疗小鼠感染A型流感病毒的效果

给药途径	给药剂量（mg/kg）	存活数	存活率
				口腔吸入	10	16/20	80%
腹腔注射	3.125	10/20	50%
				腹腔注射	6.25	17/20	85%
腹腔注射	12.5	19/20	95%
				腹腔注射	25	20/20	100%

实验例五、延长释放实验：

体内血清诱导渗漏实验：昆明种小鼠20只，随机分为2组，每组10只，分别于尾静脉注射5ml·kg^-1的扎那米韦氯化钠水溶液制剂及本发明实施例1注射剂。计时，于不同时间间隔从尾静脉取血10μl，稀释，离心，取上清液测定扎那米韦的含量。实验结果显示：本发明实施例1注射剂使扎那米韦的体内血循环清除显著减慢，清除速度为扎那米韦氯化钠水溶液制剂的3倍。

实验例六、溶血和凝聚试验

1、试验动物：大白兔，体重2.0-2.3kg。

2、试验药物：

氯化钠注射液，北京双鹤药业股份有限公司。

3、试验分组：

实施例1组、阴性对照组、阳性对照组。其中：

实施例1组给予实施例1制备的注射液；

阴性对照组为氯化钠注射液；

阳性对照组为蒸馏水。

4、试验方法：取健康家兔1只，心脏取血20ml，除纤维蛋白原，加氯化钠注射液，离心，用氯化钠注射液洗涤至上清液不显红色，按所得红细胞体积加氯化钠注射液制成2%红细胞混悬液备用。采用常规体外试管法（肉眼观察法），将2mg/ml实施例1提供的注射液、氯化钠注射液（阴性对照组）、蒸馏水（阳性对照组）分别与2%红细胞混悬液混匀，37±0.5℃的恒温箱中保温3小时，观察各管在0.25、0.5、0.75、1、2、3小时是否有溶血与红细胞凝聚现象，加样见下表：

表5：体外试验加样表

5、试验结果：见下表：

表6：扎那米韦注射液体外试验试验结果

结果显示：3小时内阴性对照管上层溶液呈无色透明，红细胞全部下沉，未见溶血现象，阳性对照管溶液呈澄明红色，管底无细胞残留，完全溶血。

结果显示：实施例1组注射液2mg/ml，各管3小时内红细胞全部下沉，未见红棕色絮状沉淀，上层溶液呈药液颜色透明状，未见溶血及凝聚现象。表明：实施例1未见明显的溶血及凝聚现象。

同理，对本发明的其他实施例和配比进行试验，结果同实施例1。

实验例七、血管刺激性实验：

试验方法：每日给家兔静脉注射3.0ml/kg供试品（按临床用药量折算），连续三次后，解剖动物血管作病理切片观察，无组织变性或坏死等显著刺激反应。

溶血性实验：按新药研究安全性试验指导原则的方法进行，无溶血现象出现。

实验例八、全身过敏性实验：

按《中华人民共和国药典》的方法规定进行试验，试验结果：在首次注射后第14天及21天，注射后30min内动物未出现竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、啰音、抽搐、虚脱等现象。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种扎那米韦注射液，其特征在于，所述注射液由以下成分组成：

所述注射液的pH值为5.0-6.0，其中吐温80和聚乙烯吡咯烷酮的重量比例为1:1。

2.根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述注射液的包装为玻璃瓶或非PVC软袋包装，所述玻璃瓶为玻璃安瓿瓶、西林瓶或输液玻璃瓶。

3.权利要求1所述的注射液在制备治疗A型和B型流感的药物中的应用。

4.一种制备权利要求1的注射液的方法，其特征在于，步骤如下：

1)取扎那米韦、加注射用水搅拌10-20min，混匀，

2)取注射用水700ml，加入吐温80和聚乙烯吡咯烷酮，聚乳酸，氯化钠，

3)在氮气保护和搅拌条件下，将步骤1溶液与步骤2溶液混合，用注射用水调节总量到1000ml，调节注射液的pH值为5.5，过滤，分装，通入氮气，密封，110-130℃热压灭菌10-20分钟，灯检合格后，包装。