CN103505413B - 石杉碱甲微粒长效注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种石杉碱甲微粒长效注射剂及其制备方法，石杉碱甲微粒长效注射剂由石杉碱甲和生物降解聚合物组成，石杉碱甲的重量百分比为9～30%。本发明的制备方法，不需乳化步骤，制备工艺简单，对设备要求低。制备的石杉碱甲微球无明显的突释作用，可以释放药物长达30天，避免了多次给药出现的血药浓度峰谷现象导致的副作用。是一次给药能维持疗效半个月至1个月，将有益于痴呆患者的治疗，并且具有给药方便的特点。

Description

石杉碱甲微粒长效注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种石杉碱甲微粒长效注射剂。

技术背景

石杉碱甲（huperzine A，Hup A）最早由上海药物研究所的刘嘉森等于20世纪80年代从蛇足石杉Huperzia serrata(Thunb.)Trev中分离出的一种具有抗乙酰胆碱酯酶活性的石松类生物碱有效单体（质量分数为0.0216%），发现其具有很强的抑制胆碱酯酶活性，引起了国内外药物科学家们的浓厚兴趣。

老年性痴呆亦称阿尔茨海默病（Alzheimers disease，AD），实质上是一种记忆减退、认知障碍、人格改变为特征的脑退行性疾病。它是现代社会最常见的老年性中枢神经系统疾病之一，是仅次于心血管病、癌症、脑中风之后严重威胁老人生命健康的高发病。老年痴呆症逐年增加的原因较为复杂，有社会、不良生活方式、遗传等因素，而胆碱能神经系统受损是公认的原因之一。临床研究表明，胆碱酯酶抑制剂可能是目前治疗老年性痴呆症最有效的一类药物，而Hup A所具有的药理活性，为老年痴呆症的治疗带来了希望。

Hup A不仅是一种高效、高选择性的可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，并具有提高学习、记忆效果的功能，它的选择性、生物利用度和改善记忆的作用好于已被FDA批准用于AD治疗的药物他克林和E2020。所以，Hup A是临床治疗AD很有前途的新一代乙酰胆碱酯酶抑制剂。Hup A是一种石松生物碱，化学名为（5R，9R，11E）-5-氨基-11-亚乙基-5,6,9,10-四氢-7-甲基-5,9-亚甲环芳辛并-2（1H）-吡啶酮，结构如下：

现有片剂、胶囊剂和注射剂3种剂型。尽管Hup A抗AD疗效确切，但目前常规剂型仍存在需改进的问题，如每日用药次数频繁，日服剂量200~400μg。这对于患者或护理都很困难，而且血药水平的峰谷现象将带来不良反应。

国内已有石杉碱甲微球注射剂发明专利公开的报道。CN 1393220A采用聚丙交酯-乙交酯为骨架材料，用喷雾干燥法和油/水（O/w）乳剂溶剂挥发法制成可缓释约20天的石杉碱甲微球注射剂。CN 1981744B采用聚丙交酯-乙交酯或聚DL-丙交酯，用油/油（O/O）乳剂-液中干燥法制备了能均匀释放药物长达14天的微球。

目前，已公开专利均采用喷雾干燥法或乳剂溶剂挥干法。喷雾干燥法需要使用昂贵的设备，制得的微球由于比表面大和骨架多孔性，要想获得均匀缓慢释放的药物对工艺参数要求较高，制备过程复杂、难度大，需高温条件对药物的稳定性不利。乳剂溶剂挥干法因工艺条件较温和，制备的微球空隙少，药物释放缓慢，为制备微球最常用的方法。目前有O/w型、O/O型、w/O/w型等。如果采用o/w型乳剂，由于石杉碱甲具有一定的水溶解度且剂量低，溶媒挥发时，油相中的药物易迁移至外水相，往往出现严重的突释效应。

发明内容

本发明的目的是提供一种石杉碱甲微粒长效注射剂及其制备方法，以克服现有技术存在的缺陷。

所述的石杉碱甲微粒长效注射剂，由石杉碱甲和生物降解聚合物组成，其中：石杉碱甲的重量百分比为9～30%；

优选的，石杉碱甲的重量百分比为6～17%；

本发明的方法，包括如下步骤：

（1）将生物降解聚合物溶解在有机溶媒中，加入石杉碱甲，搅拌，制成溶液；

所述生物降解聚合物包括聚L-乳酸（或称为聚左旋丙交酯，PLLA）、聚乙交酯、聚乙丙交酯或聚己内酯；

所述有机溶媒选自二氯甲烷、三氯甲烷或乙腈等中的一种以上；

以生物降解聚合物和石杉碱甲的总重量计，重量百分比为：

可生物降解聚合物               65～95%

石杉碱甲                       5～35%

所述有机溶剂溶媒中，生物降解聚合物和石杉碱甲的总重量为100～320mg/ml；

优选的，以生物降解聚合物和石杉碱甲的总重量计，重量百分比为：

可生物降解聚合物               70～91%

石杉碱甲                       9～30%

所述有机溶剂溶媒中，生物降解聚合物和石杉碱甲的总重量为120～300mg/ml；

（2）将步骤（1）获得的溶液搅拌，在搅拌的同时挥去有机溶媒，或者研磨，在研磨挥去有机溶媒，收集析出的载药颗粒；

（3）将步骤（2）的载药颗粒放入研磨管中，加入水，然后将其置于微粉化设备，将其中的载药颗粒研磨成载药微粒，获得含有载药微粒的悬浮液；

所述的微粉化设备为本领域通用的设备，如多功能样品匀质器、球磨机、高能磨试验机；

所述多功能样品匀质器，如法国Bertin公司牌号为precellys 24的样品匀质器；

多功能样品匀质器的转速和匀质时间，是影响微粒粒径的重要参数，优选的，匀质器的匀质速度为5000-6800rpm，研磨时间1~90s，连续做2～5个循环，每个循环间隔20～30s；

（4）将所述的悬浮液离心分离，依次进行洗涤、过滤和干燥，过100～140目筛网，收集微粒，即为所述的石杉碱甲注射用长效微粒，微粒粒径为1~120μm。

所述干燥，可升温减压干燥或经其它干燥方法干燥。

本发明的制备方法不需乳化步骤，将石杉碱甲和生物降解性聚合物共溶于有机溶剂后，用研钵研磨挥干有机溶剂，形成的载药颗粒空隙小，释药速度较慢。载药颗粒也可用一般的微粉化设备粉碎成载药微粒。本方法简便，制备工艺简单，对设备要求低。根据本发明的方法制备的石杉碱甲微球无明显的突释作用，可以释放药物长达30天，在减少给药次数的同时，有效控制了剂量，避免了多次给药出现的血药浓度峰谷现象导致的副作用。是一次给药能维持疗效半个月至1个月，将有益于痴呆患者的治疗，并且具有给药方便的特点。

附图说明

图1为石杉碱甲微粒的血药浓度经时曲线。

具体实施方式

实施例1

将420mg聚L-乳酸溶于5ml乙腈，加入180mg石杉碱甲，搅拌溶解。

加热至60℃，使有机溶媒逐渐蒸干，同时搅拌形成颗粒。

将上述颗粒分成6份，每个研磨管中加入0.5克纯水，用多功能样品匀质器将颗粒研磨成微粒；

多功能样品匀质器的转速为5500rpm，研磨时间为40s，研磨4次，每次间隔30s；

将形成的微粒离心分离，用纯水洗涤，于滤膜上减压收集微粒，微粒于40℃真空干燥箱中干燥，过120目筛，获得粒径小于120μm的石杉碱甲注射用长效微粒。

实施例2

将546mg聚L-乳酸（聚左旋丙交酯，PLLA）溶于2ml三氯甲烷，转移到玻璃研钵中，加入54mg石杉碱甲溶解，不断研磨至溶剂挥干，获得粒径均一的颗粒。

将上述颗粒分成6份，每个研磨管中加入0.5ml纯水，用多功能样品匀质器将颗粒研磨成微粒；

多功能样品匀质器的转速为6500rpm，研磨时间为30s，研磨3次，每次间隔25s，重复3次；

其他操作同例1。获得粒径小于120μm的石杉碱甲注射用长效微粒。

实施例3

石杉碱甲微粒的载药量和粒径如下：

载药量检测方法：

载药量是指微米粒中所含药物的重量百分率。

称取石杉碱甲微粒，加取石杉碱甲微粒重量50倍的三氯甲烷超声溶解后，用甲醇稀释至最终测定浓度，摇匀，离心，取上清液用HPLC法测定石杉碱甲的浓度，计算载药量。

粒径检测方法：取石杉碱甲微粒混悬液，用LS-230型激光散射粒度分析仪测定其粒径及分布。

混悬液的配比如下：石杉碱甲注射用长效微粒1%，含有吐温80的生理盐水99%，生理盐水中，吐温80的重量浓度0.1%。

实施例4

石杉碱甲微粒的体外释药

称取石杉碱甲微粒约10mg，加入6ml pH7.4磷酸盐缓冲液（含0.02%吐温80）为释放介质，于37℃、110rpm的水浴摇床中振摇。分别于0.167，1，3，8，9，10，15，21，30d取样3ml，离心取上清液，经HPLC测定其释放量，并补充相应的释放介质。

实施例1的石杉碱甲微粒的体外累积释药见下表：

0.167天	1天	3天	8天	9天	10天
						15%	22%	29%	56%	62%	66%
15天	21天	30
						78%	88%	95%

实施例2的石杉碱甲微粒的体外累积释药见下表：

0.167天	1天	3天	8天	9天	10天
						3%	4%	5%	15%	22%	32%
15天	21天	30天
						62%	82%	93%

实施例5

石杉碱甲微粒大鼠皮下注射给药的药动学研究

大鼠：SD大鼠，SPF级，上海西普尔-必凯实验动物有限公司

处方：（重量百分比）

石杉碱甲注射用长效微粒             1%

含有吐温80的生理盐水               99%

生理盐水中，吐温80的重量浓度0.1%。

将石杉碱甲注射用长效微粒与所述的含有吐温80的生理盐水混合，形成石杉碱甲微粒混悬液。

方法：大鼠经1%戊巴比妥钠生理盐水溶液麻醉后，背部剃毛，做一小切口，将石杉碱甲微粒混悬液注入大鼠皮下。经2h、4h、6h、8h、24h、48h、72h、6d、8d、10d、20d、24d、27d后分别经尾部静脉采血0.5ml，取血浆200μl，用LC-MS/MS法测定血浆中的石杉碱甲浓度。

实施例1和2的石杉碱甲微粒的血药浓度经时曲线见图1。

Claims (5)

1.石杉碱甲微粒长效注射剂，其特征在于，由石杉碱甲和生物降解聚合物组成，其中：石杉碱甲的重量百分比为9～30％；

所述石杉碱甲微粒长效注射剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将生物降解聚合物溶解在有机溶媒中，加入石杉碱甲，搅拌，制成溶液；

(2)将步骤(1)获得的溶液搅拌，在搅拌的同时挥去有机溶媒，或者研磨，在研磨挥去有机溶媒，收集析出的载药颗粒；

(3)将步骤(2)的载药颗粒放入研磨管中，加入水，然后将其置于微粉化设备，将其中的载药颗粒研磨成载药微粒，获得含有载药微粒的悬浮液；

(4)将所述的悬浮液离心分离，依次进行洗涤、过滤和干燥，过100～140目筛网，收集微粒，即为所述的石杉碱甲注射用长效微粒，微粒粒径为1～120μm。

2.根据权利要求1所述的石杉碱甲微粒长效注射剂，其特征在于，所述生物降解聚合物为聚L-乳酸、聚乙交酯、聚乙丙交酯或聚己内酯。

3.根据权利要求2所述的石杉碱甲微粒长效注射剂，其特征在于，所述有机溶媒选自二氯甲烷、三氯甲烷或乙腈中的一种以上。

4.根据权利要求3所述的石杉碱甲微粒长效注射剂，其特征在于，以生物降解聚合物和石杉碱甲的总重量计，重量百分比为：

可生物降解聚合物    70～91％

石杉碱甲            9～30％

所述有机溶剂溶媒中，生物降解聚合物和石杉碱甲的总重量为120～300mg/ml。

5.根据权利要求1所述的石杉碱甲微粒长效注射剂，其特征在于，所述的微粉化设备为多功能样品匀质器；所述多功能样品匀质器的匀质速度为5000-6800rpm，研磨时间1～90s，连续做2～5个循环，每个循环间隔20～30s。