CN103494746B - 檀香的新用途及一种中药复方防晒组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了檀香或其提取物在制备防晒剂中的用途。本发明还提供了一种防晒组合物及其用途。本发明发现，檀香及其提取物具有良好的防晒功效，将其制备成防晒制剂具有良好的应用价值。同时，本发明将檀香与槐米等药材配伍使用后，能够发挥协同增效作用，防晒效果显著提高，提供了一种新型绿色护肤产品。

Description

檀香的新用途及一种中药复方防晒组合物

技术领域

本发明提供了檀香的新用途及防晒组合物。

背景技术

半个世纪以来，由于紫外线辐射量随着臭氧层的破坏不断增加，使全球范围内日光性皮炎、皮肤衰老甚至皮肤癌患者明显增加，因此，防晒已日益收到医学界和化妆品行业的重视。但目前的防晒剂大多使用化学合成物，如肉桂酸酯、水杨酸酯、二苯甲酮衍生物；物理性防晒剂如二氧化钛和氧化锌等，这类防晒物质或易致皮肤过敏，或太厚重不易涂抹。

近年来，发现一些具有防晒和抗紫外线功能的天然植物，由于它们对皮肤的刺激小，在防晒同时，还具有美白祛斑、抗衰老等作用，因而植物防晒剂备受业内人士关注。

目前还未见将檀香或其相关的中药复方用于防晒的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供檀香的新用途。本发明的另一目的在于提供一种防晒组合物。

本发明提供了檀香或其水或乙醇提取物在制备防晒剂中的用途。

其中，所述檀香来源于檀香科植物檀香Santalum album L.树干的干燥心材；所述乙醇提取物为檀香的50～70v/v%乙醇提取物；优选为60%v/v乙醇提取物。

其中，所述防晒剂是抗UVB辐射的防晒剂。

进一步地，所述防晒剂是减少UVB辐射后成纤维细胞或/和角质形成细胞损伤，或者下调UVB辐射后基质金属蛋白酶表达的防晒剂。

本发明还提供了一种防晒组合物，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物0.5～2份、槐米乙醇提取物1.5～2份。

进一步地，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物1～2份、槐米乙醇提取物1.5～2份。

更进一步地，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物1～2份、槐米乙醇提取物2份。

上述组合物中，可以仅仅使用檀香和槐米提取物，也可以在此基础上添加其他防晒原料。

进一步地，它还含有紫草乙醇提取物2～2.5份、芦荟乙醇提取物1～1.5份、绿茶乙醇提取物0.25～1份。

优选地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物1.5份、槐米乙醇提取物1.5份、绿茶乙醇提取物0.25份、紫草乙醇提取物2.5份、芦荟乙醇提取物1.5份；或，檀香乙醇提取物1.5份、槐米乙醇提取物1.5份、绿茶乙醇提取物1.0份、紫草乙醇提取物1.5份、芦荟乙醇提取物1.5份。

其中，所述的各乙醇提取物为各药材的50-70%V/V乙醇提取物；优选为60%V/V乙醇提取物。

其中，所述防晒制剂中还包括乳化剂、保湿剂、助乳剂、赋形剂、油脂中的一种辅料或两种辅料以上的组合。

本发明还提供了上述防晒组合物的制备方法，它包括如下操作步骤：

（1）按重量配比称取原料药；

（2）取各原料药，加入适量外用制剂辅料制备成外用制剂。

本发明还提供了上述的防晒组合物在制备防晒剂中的用途。

进一步地，所述防晒剂是抗UVB辐射的防晒剂。

更进一步地，所述防晒剂是减少UVB辐射后成纤维细胞或/和角质形成细胞损伤，或者下调UVB辐射后基质金属蛋白酶表达的防晒剂。

本发明研究表明，檀香及其提取物具有良好的防晒功效，将其制备成防晒制剂具有良好的应用价值；同时，本发明将檀香与槐米等药材配伍使用后，能够发挥协同增效作用，防晒效果显著提高，提供了一种新型绿色护肤产品。

附图说明

图1UVB照射后HS68细胞生长曲线，其中，Control组为空白对照组

图2檀香提取物对UVB辐射后成纤维细胞HS68细胞增殖的影响，A:空白对照组B:UVB对照组C:UVB+檀香提取物组

图3檀香提取物对UVB致角质形成细胞HaCaT的影响，A:空白对照组B:UVB对照组C:UVB+檀香提取物组

具体实施方式

实施例1各种提取物的制备

分别取槐米、檀香、绿茶、紫草、芦荟，用60%v/v乙醇作为溶剂，采用超声提取法提取，减压浓缩后，冻干，即得提取物。

实施例2各种提取物的制备

分别取槐米、檀香、绿茶、紫草、芦荟，用50%v/v乙醇作为溶剂，在40℃浸渍提取，减压浓缩后，真空干燥，即得提取物。

实施例3各种提取物的制备

分别取槐米、檀香、绿茶、紫草、芦荟，用70%v/v乙醇作为溶剂，回流提取，减压浓缩，40℃烘干，即得提取物。

实施例5本发明防晒组合物的制备

取檀香提取物，加入适量乳化剂、油脂和水，混匀后，制备防晒组合物。

实施例6本发明防晒组合物的制备

取檀香提取物25g、槐米提取物100g，加入适量乳化剂、油脂和水，混匀后，制备防晒组合物。

实施例7本发明防晒组合物的制备

配方：

环五聚二甲基硅氧烷2%、鲸蜡硬脂醇1%、角鲨烷3.5%、辛酸/癸酸甘油三酯5.5%、鲸蜡醇磷酸酯钾0.2%、乳木果油1%、甘油硬脂酸酯0.4%、甲氧基肉桂酸乙基己酯5.0%、二苯酮-32.0%、丁二醇5.0%、去离子水62.6%、甘油4.0%、EDTA二钠0.1%、透明质酸0.025%、防腐剂0.4%、檀香提取物1.5%、槐米提取物1.5%、绿茶提取物0.25%、紫草提取物2.5%、芦荟提取物1.5%。

工艺：

①将丁二醇、去离子水、甘油、EDTA二钠、透明质酸在快速搅拌条件下加入水相锅中，分散均匀，加热升温至80℃保温维持30分钟以上，待原料完全溶胀（均匀细腻、无颗粒）备用，标记为A。

②将环五聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂醇、角鲨烷、辛酸/癸酸甘油三酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、乳木果油、甘油硬脂酸酯、甲氧基肉桂酸乙基己酯、二苯酮-3加入油相锅中，加热升温至80℃后备用，标记为B。

③将乳化锅升温至75-80℃后，抽入油相原料B，然后抽入水相原料A，开动均质，均质强度2000r/min，均质时间6分钟，均质完成后中速搅拌降温。

④待温度降至55-65℃时，开动均质（强度2000r/min），缓慢呈线性添加入防腐剂，待添加完成后均质2min，中速搅拌降温。

⑤将檀香提取物、槐米提取物、绿茶提取物、紫草提取物、芦荟提取物在无菌容器混合均匀后，待乳温降至40-50℃时缓慢加入，待完全分散均匀搅拌一致后，降温至室温，包装。

实施例8本发明防晒组合物的制备

配方：

环五聚二甲基硅氧烷2%、鲸蜡硬脂醇1%、角鲨烷3.5%、辛酸/癸酸甘油三酯5.5%、鲸蜡醇磷酸酯钾0.2%、乳木果油1%、甘油硬脂酸酯0.4%、甲氧基肉桂酸乙基己酯5.0%、二苯酮-32.0%、丁二醇5.0%、去离子水62.6%、甘油4.0%、EDTA二钠0.1%、透明质酸0.025%、防腐剂0.4%、檀香提取物1.5%、槐米提取物1.5%、绿茶提取物1.0%、紫草提取物12.5%、芦荟提取物1.5%。

工艺：

①将丁二醇、去离子水、甘油、EDTA二钠、透明质酸在快速搅拌条件下加入水相锅中，分散均匀，加热升温至80℃保温维持30分钟以上，待原料完全溶胀（均匀细腻、无颗粒）备用，标记为A。

②将环五聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂醇、角鲨烷、辛酸/癸酸甘油三酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、乳木果油、甘油硬脂酸酯、甲氧基肉桂酸乙基己酯、二苯酮-3加入油相锅中，加热升温至80℃后备用，标记为B。

③将乳化锅升温至75-80℃后，抽入油相原料B，然后抽入水相原料A，开动均质，均质强度2000r/min，均质时间6分钟，均质完成后中速搅拌降温。

④待温度降至55-65℃时，开动均质（强度2000r/min），缓慢呈线性添加入防腐剂，待添加完成后均质2min，中速搅拌降温。

⑤将檀香提取物、槐米提取物、绿茶提取物、紫草提取物、芦荟提取物在无菌容器混合均匀后，待乳温降至40-50℃时缓慢加入，待完全分散均匀搅拌一致后，降温至室温，包装。

以下通过试验例具体说明本发明的实际效果。下述各试验例所用提取物，均按照实施例1方法制备。

试验例1檀香或檀香与槐米配伍后的防晒作用

1.槐米提取物、檀香提取物对UVB辐射HS68细胞增殖的影响

1.1实验方法

1.1.1紫外线照射对细胞增殖的影响

当HS68细胞融合至80%-90%时接种细胞至96孔板；无血清培养16h-24h；吸干培养基，并用PBS清洗各孔两次；分为正常组和UVB辐射组，后者接受30mJ/cm²UVB照射；分别在照射后0，1，2，3，4，5天做CCK-8检测，每组4个复孔，实验重复3次。

1.1.2中药提取物对UVB辐射后成纤维细胞HS68细胞增殖的影响

HS68细胞融合至80%-90%时接种细胞至96孔板；无血清培养16h-24h，吸干培养基，并用PBS清洗各孔两次；分为正常组，药物组（以各药物提取物为原料给药），UVB组，UVB+药物组，照射后72h后行CCK-8检测，每组4个复孔，实验重复3次。

1.1.3檀香提取物对UVB致角质形成细胞HaCaT的影响

HaCaT细胞融合至80-90%时接种细胞至24孔板（50000cells/孔），每组设4个复孔。血清培养21hrs；除空白对照组外每组按40mJ/cm²UVB照射，后PBS清洗各孔3次，加入200μg/ml檀香提取物（设空白对照组及UVB照射组）继续培养；24hrs后光镜及Calcein-AM/PI双重染色荧光镜下的形态学表现。

1.2实验结果

1.2.1紫外线照射HS68后生长曲线的变化

30mJ/cm²UVB干预HS68细胞后分别于0、1、2、3、4、5天，用CCK-8检测HS68细胞增殖的影响，结果显示，细胞生长缓慢，细胞周期延长。表明UVB照射后细胞生长受抑制，以72h明显（见图1）。

1.2.2提取物对UVB辐射HS68细胞增殖影响

实验结果表明：

①檀香提取物能够减少UVB致成纤维细胞的损伤（见图2），具体地，其提取物50μg/ml、100μg/ml、125μg/ml、150μg/ml、200μg/ml组细胞增殖率较UVB照射组分别提高了3.10%、4.14%、4.53%、5.80%、6.97%，差异无统计学意义（p>0.05）。槐米50μg/ml、100μg/ml、125μg/ml、150μg/ml、200μg/ml组细胞增殖率较UVB照射组比较，0.94%，1.18%，2.35%、3.03%、3.76%，差异无统计学意义（p>0.05）。

②由图3可知，檀香提取物能够有效减少UVB致角质形成细胞的损伤。

③檀香25μg/ml+槐米100μg/ml、檀香50μg/ml+槐米100μg/ml、檀香100μg/ml+槐米100μg/ml各组细胞增殖率较UVB照射组均有增殖作用，分别提高了5.38%、10.40%、13.38%，相比相同浓度下单味药的增殖效果佳。

2.Real-time定量PCR分析UVB辐射后MMP-1、MMP-3的mRNA量

2.1实验方法

（1）细胞培养与分组

同批细胞接种于6孔板，分为:

当细胞生长至50-60%时，加入药物孵育细胞24h后，再用UVB照射(剂量30mJ/cm²)，并在照射过程中加入相应药物提取物（每孔加入100μl相应浓度的药物或DMSO），照射后继续培养24h后，收集细胞进行检测。

（2）总RNA提取

a)分别加入1ml Trizol reagent/孔，反复用枪吹打以裂解细胞，将Trizol裂解液转入EP管中，在室温（15℃-30℃）下放置5min；

b)按照每1ml Trizol加0.2mL l氯仿量加入4℃冰箱预冷的氯仿，剧烈摇晃15s，室温（15℃-30℃）静置2-3min，12000g、4℃离心15min；

c)离心后混合物分成3层：下层红色的为苯酚-氯仿层，中间层为细胞残渣，上层无色的为水相层，RNA存在于水相层中；将上层水相转移到新的1.5ml EP管中，按照每1mlTrizol加0.5ml异丙醇的量加异丙醇，室温静置10min，12000g、4℃离心10min，弃上清；

d)按照每1ml Trizol加1ml75%乙醇进行洗涤，颠倒洗涤离心管管壁，7500g4℃离心5min后，弃去乙醇；

e)将EP管盖打开，室温干燥沉淀10min；

f)每管加入30-50μl经DEPC处理的双蒸水，溶解沉淀，轻轻吹打融解，37℃反应5min，使RNA充分混融；

g)加入1μlDNA酶（30μl总RNA加1μlDNA酶），37℃反应30min以去除DNA，最后提取的RNA置于-80℃保存；

h)细胞总RNA琼脂糖凝胶电泳：提取的细胞总RNA分别取5μl与loading buffer混合，在1%琼脂糖凝胶中电泳，电压120V，20min，然后EB染色5min，在凝胶成像仪上经UV曝光、摄片，观察电泳带及其位置；

i)取5μlRNA样品，加75μl的ddH2O稀释后，用紫外分光光度计检测样品在260nm，280nm处的吸收值，分析纯度及浓度；

（3）反转录成cDNA

将RNA样品的浓度调整为1μg/μl，在0.5ml EP管中，建立20μl反应体系：

混匀，短暂离心，37℃1h，70℃10min灭活逆转录酶，-80℃保存样品。

（4）实时荧光定量PCR

序列见表1：

表1MMP-1和MMP-3引物核苷酸序列

反应体系及反应条件

反应体系：

反应条件：预变性95℃30ˊ，变性95℃10ˊ，62℃退火+延伸30ˊ。40Cycles。

内参为β-actin。实验结果根据域循环数（Ct）采用△△Ct法计算相对定量:

△△Ct=（Ct所测基因样本－Ctβ-actin样本）－（Ct所测基因对照－Ctβ-actin对照），样本相对量=2^-△△Ct

2.2实验结果

RNA抽取

Trizol法提取得到各组HS68细胞总RNA，测得A260/A280＝1.96，表明所提取的总RNA没有蛋白质污染，质量较好。HS68细胞提取的总RNA经1%琼脂糖凝胶电泳，发现28S、18SRNA条带清晰，且28S RNA条带亮度约为18S RNA条带亮度的2倍，说明RNA降解少，且没有DNA污染，可作为RT-PCR模板。

MMP-1、MMP-3的mRNA量

经实时荧光定量PCR检测檀香、槐米及二者组成的复方对UVB辐射HS68细胞的MMP-1、MMP-3mRNA表达量，实验结果显示檀香组降低UVB辐射后MMP-1、MMP-3的mRNA表达，与UVB组比较，有显著性差异（P<0.05）；槐米组对UVB辐射后的二者表达量无明显影响；而复方组明显降低MMP-1、MMP-3的mRNA表达，统计学具有显著性差异（p＜0.01）（见表2）。

表2中药提取物及复方对UVB辐射后的MMP-1、MMP-3mRNA表达影响

注:与未干预组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与UVB组比较，^△p<0.05，^△△p<0.01；

紫外线(UV)照射可诱导基质金属蛋白酶(MMPs)过度表达，继而降解胶原蛋白等细胞外基质成分，导致皮肤光老化，而抑制MMPs的上调可以达到抗光老化的作用。

试验例2本发明防晒组合物的配伍筛选及防晒考察

1添加量对产品性能的影响

表3添加量对产品性能的影响

结果：通过大量试验表明，几种添加物的添加量在8%以内比较合适，稳定性好，膏体颜色较好。

2单因素实验

2.1槐米提取物添加量的确定

①试验设计槐米提取物的添加量为基质的0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%，通过单因素实验确定槐米的适宜用量。

结果：槐米提取物添加量为1.5%时，膏体稳定性好，测得SPF值最高。

②试验设计槐米、檀香、紫草、芦荟、绿茶提取物的各添加量分别为基质的0.3%，合计1.5%，测SPF值。

结果：槐米提取物添加量为1.5%，合并添加量也为1.5%，即相同添加量下，测合并添加时SPF值高。

2.2檀香提取物添加量的确定

①试验设计檀香提取物的添加量为基质的0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%，通过单因素实验确定檀香的适宜用量。

结果：檀香提取物添加量为2.0%时，膏体稳定性好，测得SPF值最高。

②试验设计槐米、檀香、紫草、芦荟、绿茶提取物的各添加量分别为基质的0.3%，合计1.5%，测SPF值。

结果：檀香提取物添加量为1.5%，合并添加量也为1.5%，即相同添加量下，测合并添加时SPF值更高。

2.3紫草提取物添加量的确定

①试验设计紫草提取物的添加量为基质的0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%，通过单因素实验确定紫草的适宜用量。

结果：紫草提取物添加量为2.0%时，膏体稳定性好，测得SPF值最高。

②试验设计槐米、檀香、紫草、芦荟、绿茶提取物的各添加量分别为基质的0.4%，合计2.0%，测SPF值。

结果：紫草提取物添加量为2.0%，合并添加量也为2.0%，即相同添加量下，测合并添加时SPF值更高。

2.4芦荟提取物添加量的确定

①试验设计芦荟提取物的添加量为基质的0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%，通过单因素实验确定芦荟的适宜用量。

结果：芦荟提取物添加量为0.5%时，膏体稳定性好，测得SPF值最高。

②试验设计槐米、檀香、紫草、芦荟、绿茶提取物的各添加量分别为基质的0.1%，合计0.5%，测SPF值。

结果：芦荟提取物添加量为0.5%，合并添加量也为0.5%，即相同添加量下，测合并添加时SPF值更高。

2.5绿茶提取物添加量的确定

①试验设计绿茶提取物的添加量为基质的0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%，通过单因素实验确定绿茶的适宜用量。

结果：绿茶提取物添加量为1.0%时，膏体稳定性好，测得SPF值最高。

②试验设计槐米、檀香、紫草、芦荟、绿茶提取物的各添加量分别为基质的0.2%，合计1.0%，测SPF值。

结果：绿茶提取物添加量为1.0%，合并添加量也为105%，即相同添加量下，测合并添加时SPF值更高。

3复配最佳配比的确定

选择槐米（HM）、檀香（TX）、紫草（ZC）、芦荟（LH）、绿茶（LC）5因素，在单因素的基础上进行L16（5⁴）正交试验。

根据单因素试验结果，选择槐米提取物添加量HM（1.0%、1.5%、2%、2.5%），檀香提取物添加量TX（1.0%、1.5%、2%、2.5%），紫草提取物添加量ZC（1.5%、2%、2.5%、3.0%），芦荟提取物添加量LH（0.25%、0.5%、1.0%、1.5%），绿茶提取物添加量LC（0.25%、0.5%、1.0%、1.5%）进行L16（5⁴）正交试验，筛选出复配最佳配方。

结果见表3。

由表3可以看出各指标的主次顺序为：槐米＞檀香＞绿茶＞芦荟＞紫草。

以SPF为指标，最佳配方的范围为：槐米提取物添加量1.5～2%，檀香提取物添加量1～2%，紫草提取物添加量2～2.5%，芦荟提取物添加量1～1.5%，绿茶提取物添加量0.25～1.0%。

表4正交试验结果（SPF值）

综上所述，本发明发现，檀香及其提取物具有良好的防晒功效，将其制备成防晒制剂具有良好的应用价值。同时，本发明将檀香与槐米等药材配伍使用后，能够发挥协同增效作用，防晒效果显著提高，提供了一种新型绿色护肤产品。

Claims (8)

1.一种防晒组合物，其特征在于：它是含有如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物0.5～2份、槐米乙醇提取物1.5～2份；

所述的乙醇提取物为各药材的50-70％V/V乙醇提取物；

所述乙醇提取物的制备方法是：取原料，用60％v/v乙醇作为溶剂，采用超声提取法提取，减压浓缩后，冻干，即得提取物；或者，取原料，用50％v/v乙醇作为溶剂，在40℃浸渍提取，减压浓缩后，真空干燥，即得提取物；或者，取原料，用70％v/v乙醇作为溶剂，回流提取，减压浓缩，40℃烘干，即得提取物。

2.根据权利要求1所述的防晒组合物，其特征在于：它是含有如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物1～2份、槐米乙醇提取物1.5～2份。

3.根据权利要求2所述的防晒组合物，其特征在于：它是含有如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物1～2份、槐米乙醇提取物2份。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的防晒组合物，其特征在于：它还含有紫草乙醇提取物2～2.5份、芦荟乙醇提取物1～1.5份、绿茶乙醇提取物0.25～1份。

5.根据权利要求4所述的防晒组合物，其特征在于：它是由如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：

檀香乙醇提取物1.5份、槐米乙醇提取物1.5份、绿茶乙醇提取物0.25份、紫草乙醇提取物2.5份、芦荟乙醇提取物1.5份。

6.根据权利要求5所述的防晒组合物，其特征在于：所述的乙醇提取物为60％V/V乙醇提取物。

7.根据权利要求1-3任意一项所述的防晒组合物，其特征在于：所述防晒制剂中还包括乳化剂、保湿剂、助乳剂、赋形剂、油脂中的一种辅料或两种辅料以上的组合。

8.权利要求1-7任意一项所述的防晒组合物在制备防晒剂中的用途。