CN103484401B - 氨基杆菌h1及在氧化锰离子中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株氨基杆菌H1（Aminobacter sp.H1）及在氧化锰离子中的应用，所述应用为：将氨基杆菌H1经种子培养后的菌悬液以体积比1%的接种量接种至含铁PYCM培养液中，并向所述含铁PYCM培养液中加入MnCl₂，所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计0.25～50mmol/L，于25～35℃、160r/min振荡箱中培养5～7d，从而将锰离子氧化为氧化锰；本发明Aminobacter sp.H1取自成熟锰砂，是除锰滤池中常见的优势菌种，能适应复杂的环境条件，因而该菌株在水体和固体基质中氧化除Mn²⁺的应用前景广阔。

Description

氨基杆菌H1及在氧化锰离子中的应用

（一）技术领域

本发明涉及一株具有锰氧化能力的新菌株-氨基杆菌（Aminobactersp.）H1及其应用。

（二）背景技术

随着我国近些年经济的飞速发展，工业用水量快速增加，使得目前国内各大地表水系和地下水均遭到不同程度污染，其中锰便是主要污染元素之一。不仅是我国，在世界其他国家，地下水中铁、锰含量超标现象也很普遍，如美国、法国、意大利、瑞典、同本、德国、芬兰等许多国家和地区。锰(Mn)是地壳中仅次于铁(Fe)的第二大过渡金属，广泛存在于淡水、海水、沉积物和各种矿物中，是所有生物体必需的微量元素，是某些金属酶如过氧化物岐化酶、精氨酸酶和磷酸盐转移酶的成分。但锰摄入过量则可造成中毒，引起多种神经功能紊乱等症状，如嗜睡、头痛、乏力、记忆力减退，甚至出现末梢神经损害，四肢僵直等症状。此外，在人类生产生活中过量的锰也可导致一系列不利影响，如增加水的浊度和色度、使工业品着色等，不仅严重影响水的使用价值，而且还降低了某些工业产品的质量。因此研究水体中锰的净化技术便显得十分迫切和重要。

生物净化技术具有去除效率高、处理费用低、二次污染小等特点，逐渐被广泛应用于有毒污染物的降解和净化。采用生物技术氧化去除锰的关键之一便是获得具有高效氧化降解Mn²⁺能力的菌株。目前，国内外学者已对锰的生物去除进行了大量研究，迄今分离获得的锰细菌主要包括生盘纤发菌（Leptothrix discophora）、芽胞杆菌（Bacillus）、假单胞菌(Pseudomonas)等。大量研究表明，从环境中分离筛选的高效锰氧化菌，仍然是消除环境中锰污染的重要方法之一。

本发明中的氨基杆菌（Aminobacter sp.）是一种常见的短杆菌，经检索专利和其他相关文献，尚未发现利用该菌种氧化去除水体中Mn²⁺的报道。该菌株的发现对于工业废水中锰等重金属的高效净化具有重要意义，同时也丰富了微生物锰氧化的理论研究。

（三）发明内容

本发明目的是提供一株高效、耐受能力强的具有Mn²⁺氧化能力的氨基杆菌及其应用。

本发明采用的技术方案是：

本发明涉及一株氨基杆菌H1（Aminobacter sp.H1），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2012296，保藏日期2012年7月19日，保藏地址为中国武汉武汉大学，邮编：430072。

所述氨基杆菌（Aminobacter sp.）H1来源于沈阳某开发区水厂运行稳定的生物除锰滤池中成熟锰砂，经驯化、分离、纯化得到。菌株为革兰氏染色阴性菌，好氧，氧化酶阳性，生长在含铁PYCM固体培养基呈白色、边缘整齐、表面光滑的圆形菌落。透射电镜下观察该菌体的形态为短杆菌，有鞭毛。Aminobacter sp.H1的GenBank登录号为JX457318，其16S rDNA序列为SEQ.ID.NO1所示。

本发明还涉及一种所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，所述应用为：将氨基杆菌H1经种子培养后的菌悬液以体积比1%的接种量接种至含铁PYCM培养液中，并向所述含铁PYCM培养液中加入MnCl₂，所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计0.25～50mmol/L（不高于50mmol/L均可，MnCl₂加入量的计量中不包括菌悬液的体积，防止MnCl₂在高温灭菌时被氧化，待已灭菌的培养基冷却至室温后通过0.22μm微孔膜过滤除菌后加入培养基中），于25～35℃、160r/min振荡箱中培养5～7d，从而将锰离子氧化为氧化锰；所述含铁PYCM培养液的终浓度组成为：蛋白胨0.5～0.8g/L，酵母粉0.1～0.2g/L，K₂HPO₄0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～0.25g/L，NaNO₃0.1～0.3g/L，CaCl₂0.05～0.1g/L，(NH₄)₂CO₃0.05～0.15g/L和柠檬酸铁铵0.5～2g/L，溶剂为去离子水，pH6.8～7.2。

进一步，本发明所述的应用，优选所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计0.25～30mmol/L。

进一步，所述含铁PYCM培养液中柠檬酸铁铵的终浓度优选为1～2g/L。

进一步，所述菌悬液中细胞光密度(OD₆₀₀)为1.0。

进一步，优选所述培养温度为35℃，培养时间为5天，所述含铁PYCM培养液中柠檬酸铁铵终浓度为1g/L，所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计为1mmol/L，培养液pH值为7。

进一步，所述菌悬液按如下方法制备：

（1）斜面培养：将氨基杆菌H1接种至斜面培养基，并向斜面培养基内加入以斜面培养基体积计0.25～10mmol/L的MnCl₂，在25～35℃下培养48～72h，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨0.5～0.8g/L，酵母粉0.1～0.2g/L，K₂HPO₄0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～0.25g/L，NaNO₃0.1～0.3g/L，CaCl₂0.05～0.1g/L和(NH₄)₂CO₃0.05～0.15g/L，琼脂质量终浓度1.5～2.0%、溶剂为去离子水，pH6.8～7.2；

（2）种子培养：从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基，在30℃下培养60～72h，获得种子液，即菌悬液；所述种子培养基终浓度组成为：蛋白胨0.5～0.8g/L，酵母粉0.1～0.2g/L，K₂HPO₄0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～0.25g/L，NaNO₃0.1～0.3g/L，CaCl₂0.05～0.1g/L，(NH₄)₂CO₃0.05～0.15g/L和柠檬酸铁铵0.5～2g/L，溶剂为去离子水，pH6.8～7.2。

本发明的有益技术效果主要体现在：

本发明提供一株新菌株—氨基杆菌（Aminobacter sp.）H1，以体积比1%的接种量将氨基杆菌H1菌悬液接种至含铁PYCM培养基中，并在培养基中加入Mn²⁺，当培养基中存在1g/L柠檬酸铁铵时，在30℃，160r/min，pH值为7.0的条件下，培养3d内可以将10mmol/L的Mn²⁺完全去除，5d内可将60%左右的1mmol/L Mn²⁺氧化生成高价态不溶性的生物氧化锰；在Mn²⁺初始浓度高达50mmol/L的含铁PYCM培养基中，菌株能保持生长活性，并在Mn²⁺初始浓度高达40mmol/L含铁PYCM培养基中有Mn²⁺氧化活性，最佳温度为35℃，最佳pH值为7.0；本发明Aminobacter sp.H1取自成熟锰砂，是除锰滤池中常见的优势菌种，能适应复杂的环境条件，因而该菌株在水体和固体基质中氧化除Mn²⁺的应用前景广阔。

（四）附图说明

图1为Aminobacter sp.H1的革兰氏染色照片；

图2为Aminobacter sp.H1的透射电镜照片；

图3为Aminobacter sp.H1的系统发育树图；

图4为Aminobacter sp.H1的Biolog鉴定图；

图5为Aminobacter sp.H1的不同生长阶段对Mn²⁺的氧化去除曲线；

图6为Aminobacter sp.H1对锰抗性；

图7为Aminobacter sp.H1对高浓度Mn²⁺的去除率；

图8为Aminobacter sp.H1对低浓度Mn²⁺的氧化率。

（五）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法，其中所用的试剂，如无特别说明，均为常规市售试剂。

实施例1.氨基杆菌（Aminobacter sp.）H1的分离、纯化及其鉴定

1、Aminobacter sp.H1的分离及纯化

Aminobacter sp.H1是从沈阳经济开发区某水厂运行稳定的成熟活性锰砂中驯化、分离及纯化得到的一株革兰氏阴性菌，具体步骤如下：

取水厂运行稳定的成熟活性锰砂，自来水淘洗3～5次后，空曝48h，尽量去除残留的有机物。配制含铁PYCM培养液（pH=7），向含铁PYCM培养液中加入添加MnCl₂对活性污泥（即空曝48h后的锰砂）进行定向驯化，所述MnCl₂的加入量以培养液体积计10mmol/L，每3d更换新鲜培养液一次，每天测定培养液的pH。

配制MnCl₂初始浓度为10mmol/L（即MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养基体积计为10mmol/L）的含铁PYCM培养基方法如下：蛋白胨0.8g，酵母粉0.2g，MnCl₂·4H₂O2g，K₂HPO₄0.1g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaNO₃0.2g，CaCl₂0.1g，(NH₄)₂CO₃0.1g，柠檬酸铁铵2.0g，去离子水1L，pH7.0，分装于250mL的锥型瓶（100mL/个）中，121℃湿热灭菌20min后使用。防止MnCl₂在高温灭菌时被氧化，待已灭菌的培养基冷却至室温后通过0.22μm微孔膜过滤除菌后加入培养基中。

将驯化的污泥按体积分数为5%的量加入到上述含铁PYCM培养基（MnCl₂初始浓度为1mmol/L，柠檬酸铁浓度为1.0g/L）中，于30℃，160rpm的摇床振荡培养3d左右至对数生长期，随后以体积浓度10%的量转接到新鲜灭菌后的含铁PYCM培养基（MnCl₂初始浓度为1mmol/L，柠檬酸铁浓度为1.0g/L）中，30℃，160rpm摇床振荡培养。取少量培养液于含铁PYCM琼脂培养基平板上进行稀释涂布及划线分离，挑取单菌落接入含铁PYCM培养基（MnCl₂初始浓度为1mmol/L，柠檬酸铁浓度为1.0g/L）中，30℃、160rpm摇床继续振荡培养，直到获得在上述培养基中生长快、菌落规则和性状稳定的可氧化Mn²⁺的单菌株，记为菌株H1。

菌株H1生长稳定期的革兰氏染色如图1所示，透射电镜如图2所示。结果表明，该菌株H1是革兰氏阴性菌，好氧，30℃下在含铁PYCM琼脂固体培养基生长5天后呈白色、边缘整齐、表面光滑的圆形菌落；透射电镜下观察该菌体的形态为短杆菌，有鞭毛。

2、菌株H1的鉴定

通过16S rDNA序列分析、生理生化实验及Biolog等方法鉴定，确定菌株H1为氨基杆菌H1（Aminobacter sp.）。具体步骤如下：

采用3S柱离心式环境样品DNA回收试剂盒(V2.2，上海申能博彩生物科技有限公司)提取和纯化菌株H1的DNA，4℃保存。选用细菌的通用引物BSF27/20和BSR1492/20对纯化的DNA进行PCR扩增，引物序列分别为：

BSF27/20：5'-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3'

BSR1492/20：5'-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3'

PCR反应程序设定为：94℃预变性4min；然后94℃变性1min，53℃退火1min，72℃延伸2min，循环30个周期；然后72℃延伸5min；最后4℃保持10min。将PCR产物进行测序（上海英潍捷基），菌株H1的16S rDNA序列为SEQ.ID.NO1所示。

将菌株H1的16S rDNA序列上传到Genbank，获得Genbank的登录号JX457318，同时与Genbank中的基因序列进行同源性比较，发现其从属于Aminobacter属，与Aminobacter sp.CL-9.08（HQ113207）同源性最高，达到99%。图3为该菌株的系统发育树。

菌株H1生理生化鉴定参照《微生物学实验》（沈萍等，2007）方法进行，结果如表1所示。

菌株H1的Biolog鉴定具体步骤：将待测菌接种至含铁PYCM琼脂（MnCl₂终浓度1mmol/L，柠檬酸铁铵终浓度1g/L）平板培养基上活化，随后挑取单菌落接入新鲜的BUG+B培养基，30℃培养过夜。用无菌棉签挑取已经培养好的菌落，在无菌超净台中缓慢接种到浊度管（选用IF-A接种液）中，调整浊度至98%，用排枪小心地接种到Biolog碳源板（选用GN-III）上，置于30℃恒温培养箱中培养。分别在培养4～6h、16～24h后用Biolog鉴定仪通过计算机读取相应的数据，得到菌株鉴定的结果，如图4所示。结果表明，菌株H1为氨基杆菌（Aminobacter aminovorans），与16S rDNA及生理生化结果一致，因此将菌株H1命名为氨基杆菌（Aminobacter sp.）H1。

BUG+B培养基配置如下：取250mL锥形瓶一个，加入95mL超纯水，5.7g BUG琼脂培养基（Cabot Blvd,Hayward,CA984545,USA），煮沸溶解（冷却后pH一般为7.3±0.1），包好，121℃灭菌15min，冷却至45～50℃后，加5mL新鲜的脱纤羊血，倒平板。

菌株Aminobacter sp.H1已于2012年7月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M2012296，保藏地址中国武汉武汉大学，邮编：430072。

表1菌株H1生理生化结果

试验项目	结果
		革兰氏染色	-
淀粉水解试验	-
		吲哚试验	-
甲基红试验	-
		V-P试验	-
氧化酶试验	+
		明胶液化试验	-
过氧化氢酶试验	+
		硫化氢试验	-
产氨试验	+
		硝酸盐还原试验	+

实施例2：Aminobacter sp.H1在不同生长阶段对Mn²⁺的氧化去除能力

在最佳环境因子条件（培养液pH=7.0，培养温度30℃，1g/L柠檬酸铁铵）下，考察了菌株H1在不同生长阶段对Mn²⁺的氧化去除特性，如图5所示。结果表明，菌株Aminobacter sp.H1在不同生长阶段对Mn²⁺的氧化去除能力显著不同，且以对数生长期后期和稳定期最强。菌株在培养20h时对锰离子具有氧化去除效果，85%左右Mn²⁺在72h内被去除，其中有37%左右Mn²⁺生成了氧化物。在培养168h时，锰离子去除率达到最大值，培养基中94.8%的Mn²⁺被去除，其中50%形成锰氧化物。具体实施步骤如下：

（1）菌悬液的配制：

斜面培养：将氨基杆菌H1接种至斜面培养基，并向斜面培养基内加入以斜面培养基体积计1mmol/L的MnCl₂，在30℃下培养72h，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨0.8g/L，酵母粉0.2g/L，K₂HPO₄0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，NaNO₃0.2g/L，CaCl₂0.1g/L，(NH₄)₂CO₃0.1g/L，柠檬酸铁铵2g/L，琼脂质量终浓度1.5%、溶剂为去离子水，pH7.0。

种子培养：从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基，在30℃下培养60h，获得种子液，即菌悬液，细胞光密度(OD₆₀₀)为1.0；所述种子培养基终浓度组成为：蛋白胨0.8g/L，酵母粉0.2g/L，K₂HPO₄0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，NaNO₃0.2g/L，CaCl₂0.1g/L，(NH₄)₂CO₃0.1g/L，柠檬酸铁铵1.0g/L，溶剂为去离子水，pH7.0。

（2）锰离子的氧化：

配制一定量pH=7、含铁PYCM培养液（含1g/L柠檬酸铁铵），分装于250mL的锥形瓶中，每瓶100mL培养液，121℃湿热灭菌20min，培养液室温自然冷却。将步骤（1）制备的氨基杆菌H1菌悬液按1%（V/V）接种于上述灭菌处理的含铁PYCM培养液中，并向培养液中加入MnCl₂，所述的加入量以所述培养液体积计1mmol/L，以不接菌培养基为空白对照。锥形瓶封口后于30℃、160r/min振荡箱中培养，定时测定培养液中残留的Mn²⁺、吸附的Mn²⁺及被氧化的Mn²⁺浓度。检测方法如下所述：

（a）残留的Mn²⁺浓度：每隔12h取2mL培养液，于12000r/min、4℃条件下离心10min，获得上清液和沉淀，上清液用0.22μm滤膜过滤后用原子吸收光谱仪测锰浓度，为培养液中剩余的Mn²⁺浓度；

（b）吸附的Mn²⁺浓度：将步骤（a）离心后的沉淀用等体积的50mmol/L CuSO₄水溶液复溶，160rpm震荡反应过夜至待吸附的Mn²⁺彻底被Cu²⁺置换后，于12000r/min、4℃条件下离心10min，获得上清液和沉淀，上清液用0.22μm滤膜过滤后用原子吸收光谱仪测锰，为被吸附的Mn²⁺浓度；

（c）被氧化的Mn²⁺：再将步骤（b）离心后沉淀用等体积的20mmol/L盐酸羟胺溶液复溶，于30℃、160r/min震荡箱中处理12h，将高价态（氧化态，3价和4价）的锰氧化物还原成Mn²⁺，于12000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.22μm滤膜过滤后用原子吸收光谱仪测锰，为被生物氧化成生物氧化锰的Mn(Ⅱ)浓度。

以上所述使用的原子吸收光谱仪为美国Perkin Elmer公司的A.Analyst800型。

实施例3：Aminobacter sp.H1对Mn²⁺的抗性

在最佳环境因子条件（培养液pH=7.0，培养温度30℃，1g/L柠檬酸铁铵）下，考察了菌株Aminobacter sp.H1对Mn²⁺的抗性，如图6所示。当培养基中Mn²⁺浓度为10～30mmol/L时，细菌生长几乎没有影响且具有较高的锰氧化活性；但当培养基中Mn²⁺浓度为40～50mmol/L时，细菌生长和锰氧化活性均受到明显抑制；当Mn²⁺浓度继续增加至60～70mmol/L时，氨基杆菌H1不能在该浓度Mn²⁺培养液中生长且对Mn²⁺无氧化作用。结果表明，氨基杆菌H1对Mn²⁺的最高耐受浓度为50mmol/L，具有广阔的应用前景。具体实施步骤如下：

配制一定量pH=7、含铁PYCM培养液（1g/L柠檬酸铁铵），分装于250mL的锥形瓶中，每瓶100mL培养液，121℃湿热灭菌20min，培养液室温自然冷却。将氨基杆菌H1菌悬液（配制方法同实施例2，细胞光密度(OD₆₀₀)为1.0）按1%（V/V）接种于上述灭菌的培养液中，并分别向培养液中加入MnCl₂，所述MnCl₂的加入量以培养液体积计为10、20、30、40、50、60、70mmol/L，分别以含0mmol/L MnCl₂但接种菌悬液的培养液和不接菌悬液但含等量MnCl₂的培养液为空白对照。锥形瓶封口后于30℃、160r/min振荡箱中培养3d和5d后，取培养液分别测定菌密度（OD₆₀₀）和Mn²⁺氧化量（同实施例2）。菌密度：用北京瑞利UV9200型紫外-可见光分光光度计，在波长为600nm处检测菌液吸光度。

实施例4：Aminobacter sp.H1对不同浓度Mn²⁺的氧化去除特性

在最佳环境因子条件（培养液pH=7，培养温度30℃，1g/L柠檬酸铁铵）下，考察了氨基杆菌H1对不同浓度Mn²⁺的去除和氧化性能。结果表明，氨基杆菌H1可完全去除10mmol/L以下的Mn²⁺，但只能部分去除初始浓度为20-50mmol/L Mn²⁺（图7所示）；对0.1-1mmol/L的Mn²⁺有较强的氧化能力，氧化率最高达60%左右（图8所示）。具体实施步骤如下：

配制一定量pH=7、含铁PYCM培养液（含1g/L柠檬酸铁铵），分装于250mL的锥形瓶中，每瓶100mL，121℃湿热灭菌20min，培养液室温自然冷却。（a）取其中7瓶加入1%（V/V）氨基杆菌H1菌悬液（实施例2方法配制，细胞光密度(OD₆₀₀)为1.0），并分别向培养液中加入MnCl₂，所述MnCl₂的加入量以培养液体积计分别为10、20、30、40、50、60、70mmol/L，分别以含0mmol/L MnCl₂但接种菌悬液的培养液和不接菌悬液但含等量MnCl₂的培养液为空白对照。锥形瓶封口后于30℃、160r/min振荡箱中培养3d后，测定培养液中Mn²⁺剩余量（方法同实施例2所述）。根据公式（1）计算氨基杆菌H1对不同浓度Mn²⁺的去除率，结果见图7所示。（b）另取其中7瓶加入1%（V/V）处于对数生长期的氨基杆菌H1菌悬液，并加入终浓度0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、2、4mmol/LMnCl₂，以0mmol/L MnCl₂为空白对照。锥形瓶封口后于30℃、160r/min振荡箱中培养，分别于0、1、3、5、7d后，测量生物氧化锰（BioMnOx）生成量（方法同实施例2所述）。根据公式（2）计算氨基杆菌H1对不同浓度Mn²⁺的氧化率，结果见图8所示。上述操作均设置三个平行。

图7和图8分别为氨基杆菌H1对不同浓度Mn²⁺的去除率（图7）和氧化率（图8）。结果表明，菌株对Mn²⁺有较强的氧化去除能力。当Mn²⁺初始浓度为10mmol/L时，3d内几乎被完全去除，去除率为95.6%；但随Mn²⁺浓度继续增加，菌体对其去除率明显下降，当环境中Mn²⁺浓度为70mmol/L时，Mn²⁺去除率几乎为零。此外随着培养基中添加Mn²⁺浓度的升高，氨基杆菌H1生成的氧化锰浓度持续增加；并且随培养时间的延长，培养液中生物氧化锰的含量也随之增加，当Mn²⁺浓度为1mmol/L时，Mn²⁺氧化率达到最高，为60%左右。

氨基杆菌H1对不同浓度Mn²⁺的去除率采用公式（1）计算，氧化率采用公式（2）计算：

Mn²⁺去除率=（初始Mn²⁺浓度-测量Mn²⁺浓度）/初始Mn²⁺浓度  公式（1）

Mn²⁺氧化率=生物氧化锰浓度×100%/初始Mn²⁺浓度  公式（2）。

Claims (7)

1.一株氨基杆菌H1（Aminobacter sp.H1），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2012296，保藏日期2012年7月19日，保藏地址为中国武汉武汉大学，邮编：430072。

2.一种权利要求1所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，其特征在于所述应用为：将氨基杆菌H1经种子培养后的菌悬液以体积比1%的接种量接种至含铁PYCM培养液中，并向所述含铁PYCM培养液中加入MnCl₂，所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计0.25～50mmol/L，于25～35℃、160r/min振荡箱中培养5～7d，从而将锰离子氧化为氧化锰；所述含铁PYCM培养液的终浓度组成为：蛋白胨0.5～0.8g/L，酵母粉0.1～0.2g/L，K₂HPO₄0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～0.25g/L，NaNO₃0.1～0.3g/L，CaCl₂0.05～0.1g/L，(NH₄)₂CO₃0.05～0.15g/L和柠檬酸铁铵0.5～2g/L，溶剂为去离子水，pH6.8～7.2。

3.如权利要求2所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，其特征在于所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计0.25～30mmol/L。

4.如权利要求2所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，其特征在于所述含铁PYCM培养液中柠檬酸铁铵的终浓度为1～2g/L。

5.如权利要求2所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，其特征在于所述菌悬液中细胞OD₆₀₀为1.0。

6.如权利要求2所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，其特征在于所述培养温度为35℃，培养时间为5天，所述含铁PYCM培养液中柠檬酸铁铵终浓度为1g/L，所述MnCl₂的加入量以含铁PYCM培养液体积计1mmol/L，培养液pH值为7。

7.如权利要求2所述氨基杆菌H1在氧化锰离子中的应用，其特征在于所述菌悬液按如下方法制备：

（1）斜面培养：将氨基杆菌H1接种至斜面培养基，并向斜面培养基内加入以斜面培养基体积计0.25～10mmol/L的MnCl₂，在25～35℃下培养48～72h，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨0.5～0.8g/L，酵母粉0.1～0.2g/L，K₂HPO₄0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～0.25g/L，NaNO₃0.1～0.3g/L，CaCl₂0.05～0.1g/L和(NH₄)₂CO₃0.05～0.15g/L，琼脂质量终浓度1.5～2.0%，溶剂为去离子水，pH6.8～7.2；

（2）种子培养：从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基，在30℃下培养60～72h，获得种子液，即菌悬液；所述种子培养基终浓度组成为：蛋白胨0.5～0.8g/L，酵母粉0.1～0.2g/L，K₂HPO₄0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～0.25g/L，NaNO₃0.1～0.3g/L，CaCl₂0.05～0.1g/L，(NH₄)₂CO₃0.05～0.15g/L和柠檬酸铁铵0.5～2g/L，溶剂为去离子水，pH6.8～7.2。