CN103483194A - 一种2-氟代富马酸酯(结构式i)及其制备方法及应用 - Google Patents

一种2-氟代富马酸酯(结构式i)及其制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种2-氟代富马酸酯(结构式I)及其制备方法。实验显示，该类化合物可显著的抑制TNF-α诱导的NF-kB转录活性，从而可用于治疗NF-kB介导的疾病如：牛皮癣，多发性硬化，关节炎，眼部炎症或过敏，哮喘，红斑狼疮，及器官移植时用作免疫抑制剂。

Description

一种2-氟代富马酸酯(结构式I)及其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及新药研发领域，具体涉及一种2-氟代富马酸二烷基酯(结构式I)及其制备方法和作为免疫抑制剂的应用。 
背景技术
式一： 
Figure BSA00000814677200011
富马酸(延胡索酸，式一)是一植物的有效成分，在美国，新西兰，澳大利亚民间被用来治疗粉刺，牛皮癣等皮肤紊乱的疾病。正常情况下，人类的皮肤细胞在阳光照射下会生成富马酸。而牛皮癣病人由于生化缺陷，皮肤细胞中富马酸的合成受阻。 
成立于1983年的德国制药公司FUMAPHARMA，在1994年被批准用富马酸的单乙酯和富马酸二甲酯的盐混合物治疗中度到重度牛皮癣(商品名FUMADERM)。在2006年5月，美国生物制药公司BIOGEN购买了FUMAPHARMA公司及FUMADERM的进一步开发权利，并随后推出富马酸二甲酯(BG-12，式二)临床实验治疗多发性硬化，牛皮癣，和风湿性关节炎。现牛皮癣，风湿性关节炎已进行到二期临床阶段，而治疗多发性硬化已完成三期临床试验，预计明年三月上市。其相关专利为WO-09852549；WO-09949858；WO-00012072；WO-02055066；US-06355676；US-06436992；US-06509376；CN1182844C； 
式二： 
Figure BSA00000814677200021
Wesley G.Nigh和John H.Richards报道了氟代富马酸亦可被体内的富马酸水解酶作用(Journal of the American Chemical Society，1969，91(21)，5847-8)。 
Jack Cousseau，还有Herman Gershon报道了氟代富马酸二甲酯，二乙酯，二丙酯，二丁酯的合成(Journal of the Chemical Society，chemical communications，(19)，1493-4，1989；Bulletin de la SocieteChimique de France，910，1986；Journal of Pharmaceutical Sciences，578，67(4)，1978)；John E.Castle和Gunter Haufe分别报道了氟代富马二酸的合成(J.Am.Chem.Soc.，81，2678，1959；TetrahedronLetters 42，5429，2001). 
Herman Gershon在1977年又报道了氟代富马酸二甲酯，二乙酯，二丙酯，二丁酯对于霉菌的抑制作用(Journal of Medicinal Chemistry，606，20(4)，1977；Journal of Pharmaceutical Sciences，578，67(4)，1978).但氟代富马酸的免疫抑制作用尚无人研究。 
发明内容
本发明的目的之一是提供一种氟代富马酸酯(结构式I)。 
本发明的的目的之二是提供一种氟代富马酸酯(结构式I)化合物的制备方法。 
本发明的的目的之三是提供一种氟代富马酸酯(结构式I)化合物用于NF-kB活化抑制剂的新用途。 
本发明的这些以及其它目的将通过下列详细描述和说明来进一步体 现。 
本发明的2-氟代富马酸二烷基酯，其特征在于具有如下的结构式： 
Figure BSA00000814677200031
其中：R1和R2相同或不同，可以代表直链的、支链的、环状的、饱和或不饱和的C1-8烷基，这些烷基可以任选地被卤素或C1-4烷氧基取代。 
较好的是，R1和R2相同或不同，可以代表直链的、支链的、环状的、饱和或不饱和的C3-8烷基，所述的C3-8烷基除正丙基，正丁基外，这些烷基可以任选地被卤素或C1-4烷氧基取代。 
本发明的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法，包括以下步骤： 
A、化合物III经酯化反应生成化合物II 
Figure BSA00000814677200032
B、化合物II经与氟化钾/水反应生成化合物I 
Figure BSA00000814677200033
在本发明的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法中，在步骤A中丁炔二酸与醇反应的摩尔比为1∶2.2-3.5，反应溶剂为1，2-二氯乙烷或甲苯，并且使用催化量的酸(其与丁炔二酸的摩尔比为0.02∶1)，如硫酸或对甲苯磺酸；步骤B中丁炔二酸酯(II)与氟化钾与水反应的摩尔比为1∶2-3∶4-6。反应所用溶剂为N，N-二甲基甲酰胺或乙腈，较好的是使用N，N-二甲基甲酰胺和乙腈的混合溶剂，二者体积比为1∶1。 
在本发明的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法中，包括以下步骤：A、在室温下，将醇，丁炔二酸(结构式III)和催化量的对甲苯磺酸搅 拌加入适量1，2-二氯乙烷中，回流8-15小时后，加入甲苯继续回流分水5-9小时，浓缩除去溶剂，浓缩液用短硅胶柱过滤得丁炔二酸酯(II)； 
B、将丁炔二酸酯(结构式II)，氟化钾(KF)，水与N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，乙腈的混合液在70-80℃搅拌2-6小时。冷却至室温后，以有机溶剂(乙酸乙酯，或己烷)萃取、洗涤、干燥、过滤和浓缩除去溶剂，浓缩液用硅胶柱层纯化即得氟代富马酸酯(结构式I)。 
本发明所提供的氟代富马酸酯(I)及其制备方法与现有技术相比具有以下优点： 
1、本发明选择首先从丁炔二酸(III)酯化得到丁炔二酸酯(II)，其再与KF/水反应得到氟代富马酸酯(I)，两步反应的总收率高达58％；而如文献方法先从丁炔二酸(III)与KF/水反应得到氟代富马二酸，或由2，2-二氟代丁二酸脱氟化氢制备氟代富马二酸，再成酯得到氟代富马酸酯(I)，两步反应的总收率只有22％。因这种先氟代再成酯的方法会使氟代物在成酯条件下发生副反应，从而加大纯化难度，降低收率。 
2、丁炔二酸酯(I I)，在与KF/水反应得到氟代富马酸酯(I)时，我们首次采用了混合溶剂DMF/乙腈。混合溶剂的采用使得产品易于纯化，且纯度高。 
3、反应条件温和，易于控制，且重复性好。 
本发明提供的一种具有如下结构式化合物的用途， 
Figure BSA00000814677200041
其中：R1和R2相同或不同，可以代表直链的、支链的、环状的、饱和 或不饱和的C1-8烷基，这些烷基可以任选地被卤素或C1-4烷氧基取代。 
其可抑制TNF-α诱导的NF-kB转录活性，抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症细胞因子分泌，抑制IFN-γ诱导的HaCaT细胞趋化因子的分泌，从而在治疗牛皮癣，多发性硬化，关节炎，眼部炎症或过敏，哮喘，红斑狼疮，及器官移植时用作免疫抑制剂的应用 
NF-Kappa-B(nuclear factor-kappa B，NF-kB)是存在于细胞中的一种转录因子。它可以被不同刺激物(如紫外线，氧化剂、细菌、病毒、免疫刺激剂、或TNF-α、IL-1、神经生长因子、蛋白激酶C激活剂等)刺激后转录激活，以调节下游靶基因的表达。NF-kB调节的下游靶基因包括多种细胞因子、趋化因子、生长因子、转录因子、粘附分子、氧化应激相关酶以及急性周期蛋白等。NF-kB激活的信号通路参与了感染、炎症、免疫反应、细胞凋亡等病理过程以及细胞周期调控与细胞分化等。因而NF-kB信号通路与人类疾病密切相关，是新药筛选的重要靶点，阻断NF-kB信号通路已成为开发新的免疫抑制剂以及甾体和非甾体抗炎药物的重要手段。 
我们对所有合成的氟代富马酸酯(I)进行了抑制TNF-α诱导的NF-kB转录活性，抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症细胞因子分泌，抑制IFN-γ诱导的HaCaT细胞趋化因子的分泌实验，所有实验均以富马酸二甲酯(BG-12，式二)作为阳性对照物。实验结果表明在上述各抑制活性试验中，绝大部分合成的氟代富马酸酯(I)的抑制活性都要强于或等于阳性对照物BG-12(见附表1)。因而，氟代富马酸酯(I)具有可作为治疗NF-kB介导疾病的应用价值。 
附图说明
图1是YYK-1对THP-1细胞分泌IL-6的影响的数据分析柱状图； 
图2是YYK-1对THP-1细胞分泌IL-8的影响的数据分析柱状图； 
图3是YYK-1对THP-1细胞分泌TNF-α的影响的数据分析柱状图； 
图4是YYK-1对HaCaT细胞分泌CLCX9的影响的数据分析柱状图； 
图5是YYK-1对HaCaT细胞分泌CLCX10的影响的数据分析柱状图。 
以下通过具体实施方式的实例再对本发明的上述内容作进一步的详 细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例.在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。 
具体实施方式：
实施例一： 
2-氟代富马酸二乙酯(化合物YYK-1)的制备及其生物活性 
1、将乙醇(1.2g，26mmol)，丁炔二酸(1g，8.77mmol)，对甲苯磺酸(30mg，0.17mmol)及1，2-二氯乙烷(50mL)加入到250mL的圆底烧瓶中。回流12小时后，加入50mL甲苯继续回流分水(用分水器)8小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA＝98/2)纯化得丁炔二酸二乙酯(1.35g，收率91％)。 
2、将丁炔二酸二乙酯(1.1g，6.46mmol)，氟化钾(0.73g，12.6mmol)，DMF(50mL)，乙腈(50mL)加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水(0.48mL，26.7mmol)并于80℃搅拌2小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤(4×30mL)，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA＝98/2)纯化得到2-氟代富马酸二乙酯(0.76g，HPLC纯度98.32％，收率62％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.34(d，J＝28.4Hz，，1H)，4.38-4.32(q，，2H)，4.28-4.32(q，，2H)，1.38-1.29(m，6H). 
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ(ppm)：161.5，159.2，158.9，155.0，152.2，107.1，62.2，60.5，13.2，13.1 
MS(ESI)m/z(M++Na)：213.2 
1)抑制TNF-α诱导的NF-kB转录活性 
首先，将NF-kB报告基因质粒(NFkB-MetLuc，含NF-kB结合位点的Igk启动子重复序列)瞬时转染至HEK293细胞；然后在37℃培养16小时。更换培养基并加入不同浓度的预先以培养液稀释的受试样品，在37℃条件下培养半小时，再加入TNF-α(100ng/mL)继续培养6小时。参照商家提供的一步反应法试剂盒加入底物，30分钟后置多功能检测仪上进行荧光素酶活性分析。根据设置的相关对照以及检测的相对荧光单位，计算TNF-α诱导的荧光素酶活性倍数，即TNF-α激活NF-kB的活性倍数。并以同样方法测得受试样品对荧光素酶即NF-kB活性的抑制率。 
炎症刺激因子TNF-α显著激活NF-kB，而阳性对照样品BG-12(式二)显示了明显的抑制作用；同一条件下，受试样品YYK-1也显示明显抑制TNF-α诱导的NF-kB活性。通过进一步计算并比较IC50值，结果显示：YYK-1样品的IC50值为1.58μM，BG-12的IC50值为20.46μM，表明样品YYK-1抑制TNF-α诱导的NF-kB活性作用明显优于阳性对照样品BG-12。 
2)抑制LPS诱导的THP-1细胞的炎症细胞因子分泌 
在培养至适当密度的THP-1单核细胞中，加入含LPS(1μg/mL)的培养基并作用6小时。参照检测试剂盒说明书分别检测IL-6、IL-8、TNF-α分泌至细胞外的水平，在加入LPS的同时加入含不同浓度受试药物YYK-1的培养基，检测药物对LPS诱导的细胞因子分泌的抑制作用。结果显示：LPS作用THP-1细胞48h，可显著诱导各细胞因子水平升高，但在YYK-1样品同时加入的细胞，其细胞因子分泌受到明显的抑制，进一步比较了样品抑制细胞因子分泌的有效浓度，其中抑制IL-6的有效浓度分别为：80.46μM(BG-12)、4.22μM(YYK-1)；抑制IL-8的有效浓度分 别为：＞100μM(BG-12)、＞10μM(YYK-1)；抑制TNF-α的有效浓度分别为：＞100μM(BG-12)、＞10μM(YYK-1)；对三种细胞因子分泌的抑制作用，YYK-1明显优于阳性对照样品BG-12。 
3)抑制I FN-γ诱导的HaCaT细胞趋化因子的分泌 
在培养至适当密度的HaCaT角质细胞中，加入含干扰素γ(I FN-γ，1μg/mL)的培养基并作用8小时。参照检测试剂盒说明书分别检测分泌至胞外的趋化因子CLCX9和CLCX10的水平，在加入IFN-γ的同时加入含不同浓度受试药物YYK-1的培养基。以BG-12作为阳性对照，检测药物对IFN-γ诱导的趋化因子分泌的抑制作用，结果显示：I FN-γ作用于HaCaT细胞8小时，可显著诱导趋化因子水平升高，在80μM浓度的YYK-1样品同时加入的细胞中，两种趋化因子的分泌均被明显抑制。进一步比较了样品抑制趋化因子分泌的有效浓度，其中抑制CLCX9分泌的有效浓度分别为：30.69μM(BG-12)、4.23μM(YYK-1)抑制CLCX10分泌的有效浓度分别为：29.41μM(BG-12)、3.98μM(YYK-1)；对两种趋化因子分泌的抑制作用，YYK-1明显优于阳性对照样品BG-12。 
实施例二： 
2-氟代富马酸二甲酯(化合物YYK-2)的制备 
将甲醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-12小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-8小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得丁炔二酸二甲酯(收率93％)。 
将丁炔二酸二甲酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩 得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到2-氟代富马酸二甲酯(HPLC纯度98.56％，收率65％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.35(d，J＝29.6Hz，1H，＝CH)，3.90(s，3H，0Me)，3.81(s，3H，0Me) 
13C-NMR(CDC13，100MHz)δ(ppm)：162.2，159.9，159.5，155.0，152.1，107.17，107.15，52.9，51.7 
MS(ESI)m/z(M+1+)：163.3 
实施例三 
双-(2’-乙氧基乙基)-2-氟代富马酸酯(化合物YYK-3)的制备 
将2-乙氧基乙醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-16小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-10小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得双-(2’-乙氧基乙基)丁炔二酸酯(收率78％)。 
将双-(2’-乙氧基乙基)丁炔二酸酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到双-(2’-乙氧基乙基)-2-氟代富马酸酯(收率47％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.44(d，J＝28.4Hz，1H)，4.44-4.41(t，2H)，4.37-4.34(t，2H)，3.71-3.67(m，4H)，3.57-3.52(m，4H)，1.25-1.20(m，6H). 
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ(ppm)：161.7，159.3，158.8，155.0，152.1，107.9，107.3，67.2，67.1，66.1，65.3，63.9，63.6，14.7，14.5 
MS(ESI)m/z(M+Na+)：301.0 
实施例四 
2-氟代富马酸二稀丙醇酯(化合物YYK-4)的制备 
将烯丙醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-16小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-10小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得丁炔二酸二烯丙醇酯(收率83％)。 
将丁炔二酸二烯丙醇酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到2-氟代富马酸二烯丙醇酯(收率51％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.40(d，J＝28.8Hz，1H)，5.99-5.89(m，2H)，5.42-5.27(m，4H)，4.77(d，J＝6.0Hz，2H)，4.70(d，J＝5.6Hz，2H). 
13C-NMR(CDCl 3，100MHz)δ(ppm)：161.6，159.2，158.6，155.2，152.4，131.1，130.7，119.5，118.5，108.7，107.5，66.8，66.0 
MS(ESI)m/z(M+Na+)：237.2 
实施例五  2-氟代富马酸二辛酯(化合物YYK-5)的制备 
将正辛醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-16小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-10小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得丁炔二酸二辛酯(收率85％)。 
将丁炔二酸二辛酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下 加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到2-氟代富马酸二辛酯(收率55％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.33(d，J＝28.8Hz，1H)，4.31-4.25(t，2H)，4.23-4.17(t，2H)，1.75-1.68(m，4H)，1.36-1.25(m，20H)，0.95-0.87(m，6H). 
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ(ppm)：162.0，159.5，159.2，155.1，152.3，107.3，66.4，66.2，65.4，65.3，31.4，29.4，28.9，28.8，28.1，28.08，28.00，25.5，25.4，22.3，14.8，13.6 
MS(ESI)m/z(M+Na+)：381.3 
实施例六 
2-氟代富马酸二环己酯(化合物YYK-6)的制备 
将环己醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-12小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-8小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得丁炔二酸二环己酯(收率92％)。 
将丁炔二酸二环己酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到2-氟代富马酸二环己酯(收率58％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.31(d，J＝29.2Hz，1H)，4.97-4.88 (m，2H)，1.88-1.85(m，4H)，1.76-1.73(m，4H)，1.57-1.49(m，4H)，1.47-1.25(m，8H). 
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ(ppm)：161.4，158.9，158.5，155.1，152.2，108.2，107.6，75.0，73.1，30.9，30.8，30.7，24.9，24.7，23.2，23.1 
MS(ESI)m/z(M+Na+)：321.0 
实施例七 
2-氟代富马酸二异丙酯(化合物YYK-7)的制备 
将异丙醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-12小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-8小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得丁炔二酸二异丙酯(收率89％)。 
将丁炔二酸二异丙酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到2-氟代富马酸二异丙酯(收率60％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.30(d，J＝28.8Hz，1H)，5.19-5.11(m，2H)，1.31(dd，J1＝8.4Hz，J2＝14.4Hz，12H). 
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ(ppm)：161.4，158.9，158.6，155.1，152.3，107.6，107.5，70.5，68.4，21.2，21.06，21.00，20.9 
MS(ESI)m/z(M+Na+)：241.2 
实施例八 
双-(2’-氯乙基)-2-氟代富马酸酯(化合物YYK-8)的制备 
将2-氯代乙醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-12小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-8小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得双-(2’-氯乙基)丁炔二酸酯(收率79％)。 
将双-(2’-氯乙基)丁炔二酸酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到双-(2’-氯乙基)-2-氟代富马酸酯(收率54％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.44(d，J＝28.4Hz，1H)，4.56-4.53(m，2H)，4.49-4.46(m，2H)，3.78-3.73(m，4H). 
MS(ESI)m/z  (M+2+)：261.2 
实施例九 
2-氟代富马酸二正丙酯(化合物YYK-9)的制备 
将正丙醇，丁炔二酸，对甲苯磺酸及1，2-二氯乙烷加入到250mL的圆底烧瓶中。回流8-12小时后，加入甲苯继续回流分水(用分水器)6-8小时。浓缩，经闪层析(洗脱剂PE/EA)纯化得丁炔二酸二正丙酯(收率94％)。 
将丁炔二酸二正丙酯，氟化钾，DMF，乙腈加入圆底烧瓶中，搅拌下加入水并于80℃搅拌2-3小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯并将溶液转入分液漏斗中，用饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得棕色液体，经硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA)纯化得到2-氟代富马 酸二正丙酯(收率66％)。 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.34(d，J＝29.2Hz，1H)，4.26-4.20(t，，2H)，4.19-4.13(t，，2H)，1.78-1.67(m，4H)，1.01-0.94(m，6H). 
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ(ppm)：161.8，159.2，158.3，154.1，152.0，107.1，67.7，66.4，30.0，29.8，21.2，9.5 
MS(ESI)m/z(M+Na+)：241.2 
实施例十 
2-氟代富马二酸(化合物YYK-10)和2-氟代富马酸单甲酯(化合物YYK-11)的制备 
将1.3g(8.03mmol)2-氟代富马酸二甲酯加入18％盐酸(10mL)中，搅拌下滴加甲醇至2-氟代富马酸二甲酯完全溶解，于室温搅拌24h。反应液用乙酸乙酯(30mL×4)提取，乙酸乙酯层主要含单甲酯产物及少量彻底水解产物2-氟二酸。浓缩，加粗硅胶旋干，干法上样，经硅胶柱层析，先用CH2Cl2或PE/EA＝20/1洗脱剂洗脱收集极少量原料，后用洗脱剂CH2Cl2/CH3COCH3＝6/1(300mL，8滴甲酸)，5/1(150mL，4滴甲酸)洗脱并分别收集单甲酯产物和二酸产物。浓缩，分别得单甲酯产物0.66g，二酸产物80mg；水层中含大量2-氟代富马二酸，放置8h析出白色固体，过滤，油泵抽干得白色粉末状固体0.35g，2-氟代富马二酸收率为41％，单甲酯收率为56％。 
2-氟代富马二酸(化合物YYK-10)： 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.23(d，J＝30.4Hz，1H) 
2-氟代富马酸单甲酯(化合物YYK-11)： 
1H NMR(400M，CDCl3)δ(ppm)：6.44(d，J＝28.4Hz，1H)，3.83(s，3H) MS(ES I)m/z  (M+K+)：187.1 
mp 205.8-206.0℃ 
表1：2-氟代富马酸酯(I)的生物活性测试结果 
Figure BSA00000814677200151

Claims (8)

1.2-氟代富马酸二烷基酯，其特征在于具有如下的结构式
Figure FSA00000814677100011
其中：R1和R2相同或不同，可以代表直链的、支链的、环状的、饱和或不饱和的C3-8烷基，所述的C3-8烷基除正丙基，正丁基外，这些烷基可以任选地被卤素或C1-4烷氧基取代。
2.根据权利要求1所述的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A、化合物III经酯化反应生成化合物II
Figure FSA00000814677100012
B、化合物II经与氟化钾/水反应生成化合物I
Figure FSA00000814677100013
3.根据权利要求2所述的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法，其特征在于步骤A中丁炔二酸与醇反应的摩尔比为1∶2.2-3.5，反应溶剂为1，2-二氯乙烷或甲苯；步骤B中丁炔二酸酯(II)与氟化钾与水反应的摩尔比为1∶2-3∶4-6，反应所用溶剂为N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。
4.根据权利要求3所述的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法，其特征在于步骤A中使用催化量的酸，所述的催化量的酸与丁炔二酸的摩尔比为0.02∶1，如硫酸或对甲苯磺酸，优选对甲苯磺酸。
5.根据权利要求3所述的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法，其特征在于步骤B中使用N，N-二甲基甲酰胺和乙腈的混合溶剂，二者体积比为1∶1。
6.根据权利要求1或2所述的2-氟代富马酸二烷基酯的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A、在室温下，将醇，丁炔二酸(结构式III)和催化量的对甲苯磺酸搅拌加入适量1，2-二氯乙烷中，回流8-15小时后，加入甲苯继续回流分水5-9小时，浓缩除去溶剂，浓缩液用短硅胶柱过滤得丁炔二酸酯(II)；
B、将丁炔二酸酯(结构式II)，氟化钾，水与N，N-二甲基甲酰胺，乙腈的混合液在70-80℃搅拌2-6小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯或己烷有机溶剂萃取、洗涤、干燥、过滤和浓缩除去溶剂，浓缩液用硅胶柱层纯化即得氟代富马酸酯(结构式I)。
7.根据权利要求1或2所述的2-氟代富马酸二烷基酯的用途，其可抑制TNF-α诱导的NF-kB转录活性，抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症细胞因子分泌，抑制IFN-γ诱导的HaCaT细胞趋化因子的分泌，从而在治疗牛皮癣，多发性硬化，关节炎，眼部炎症或过敏，哮喘，红斑狼疮，及器官移植时用作免疫抑制剂的应用。
8.一种具有如下结构式化合物的用途，
Figure FSA00000814677100021
其中：R1和R2相同，且分别是CH3，CH2CH3，CH2CH2CH3，CH2CH2CH2CH3，或H之一；
其可抑制TNF-α诱导的NF-kB转录活性，抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症细胞因子分泌，抑制IFN-γ诱导的HaCaT细胞趋化因子的分泌，从而在治疗牛皮癣，多发性硬化，关节炎，眼部炎症或过敏，哮喘，红斑狼疮，及器官移植时用作免疫抑制剂的应用。
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