CN103468574A - 牟氏角毛藻的培养基配方及全人工快速培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微藻养殖领域，涉及一种牟氏角毛藻的培养基配方及全人工快速培养方法。培养基配方包括尿素0.1~0.3g/L，碳酸氢钠0.05~0.1g/L，硅酸钠水结晶0.1~0.5g/L，磷酸二氢钾0.01~0.02g/L，EDTA3~5g/L，VB11~5mg/L,VB121.0~3μg/L，配方溶剂为海水；培养方法为对培养罐、海水消毒后，以海水为溶剂按照以上配方配培养基，将接藻种接入装有培养基的培养罐中，密封后培养，培养时进行三基色灯光光照并充入经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气，培养3~5天后采收。本发明培养基配方营养均衡、成本低，培养方法使角毛藻快速生长，过程操作简单。
Description
技术领域
本发明属于海洋微藻养殖领域，具体地说是一种牟氏角毛藻的培养基配方及全人工快速培养方法。
背景技术
牟氏角毛藻细胞小型，细胞壁薄。大多数单个细胞，也有2-3个细胞相连成群体。壳面椭圆形至圆形，中央略凸起或少数平坦。壳环面成长方形至四角形，环面观一般细胞大小通常宽3.45-4.6微米，长4.6-9.2微米，壳环带不明显。角毛细而长，末端尖，自细胞四角生出，几乎与纵轴平行，一般长20.7-34.5微米。壳面观，两端的角毛以细胞体为中心略呈“S”形。色素体一个，呈片状，黄褐色。在培养过程中，细胞常常变形。变形的细胞拉长或弯曲，或膨大为圆、椭圆及其他不同于正常形态的形状，角毛缩短或一个壳面的角毛完全消失。变形后的藻体都比正常的大。牟氏角毛藻因其繁殖快、耐高温，且富含不饱和脂肪酸和蛋白质等具有较高营养，成为对虾、鲍鱼、泥蚶、海参等海珍品育苗过程中的优质饵料。
目前牟氏角毛藻培养多采用f/2培养基，存在的问题是营养不均衡，角毛藻生长缓慢、产量低；随着水产动物家系选育育种方法的兴起，大水体培养角毛藻的方法不能满足水产动物育种对角毛藻的需要；并且由于近年来气候变化无常，依靠自然光源等自然条件培养牟氏角毛藻的难度加大。
现有技术专利CN201210301019.0，一种牟式角毛藻培养基配方及白塑料桶充气培养方法，公布了该牟氏角毛藻培养基配方为CO(NH2)2(尿素)21.5mg，KH2PO48mg，FeC6H5O7·5H2O(柠檬酸铁)0.5mg，Na2SiO3·9H2O8mg，NaHCO3 500mg，九二0植物生长刺激素(即赤霉素)5国际单位，VB125×104mg，VB10.1mg，海水1000mL；培养方法为采用白塑料桶充气培养方法，塑料桶用酒精消毒，培养用海水用次氯酸钠消毒，采用以上培养基配方，接入培养好的角毛藻种子，冲入空气和二氧化碳体积比=15:1，充气方式为夜间停止充气，白天间歇充气（充一小时、停一小时），经过5-7天培养，可采收。该方法虽能提高角毛藻的产量，但是其培养时间过程5-7天，生产效率低，且培养基成分过于复杂多样，成本加大，采用的是间歇充气，难以控制，光照光源为日光灯，不利于刺激角毛藻的快速生长。
发明内容
本发明的目的是克服现有牟式角毛澡培养基及其方法存在营养不均衡、角毛藻生长速度慢、原料成本高、充气方法难度高等问题，提供一种牟氏角毛藻的培养基配方及全人工快速培养方法。
本发明的方案是通过这样实现的：一种牟氏角毛藻的培养基配方，其特征在于，该培养基配方中各组分及其浓度为尿素CO(NH2)2 0.1~0.3g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.05~0.1g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.1~0.5g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.01~0.02g/L, EDTA 3~5g/L, VB1 1~5mg/L, VB12 1.0~3μg/L，配方溶剂为海水。EDTA为乙二胺四乙酸，VB1为维生素B，VB12为维生素B12。
作为本发明牟氏角毛藻的培养基配方的进一步限定，该培养基配方中各组分及其浓度为尿素CO(NH2)2 0.17g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.075g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.1g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.01g/L, EDTA 3~5g/L, VB1 2mg/L, VB12 1.5μg/L，配方溶剂为海水。
作为本发明牟氏角毛藻的培养基配方的进一步限定，所述的海水为消毒后的海水。
一种牟氏角毛藻的全人工快速培养方法，对培养罐、海水进行消毒后，以海水为溶剂配培养基，将接藻种接入装有培养基的培养罐中，密封培养罐开始培养，培养的同时对培养罐进行光照并充入空气，培养3~5天后采收，其特征在于，所述的培养基其配方为以上所述牟氏角毛藻的培养基配方；所述的光照为利用三基色灯光光源照射，光线照度为3500~5000lx；所述的充入空气为以8-10L/min的速度充入经过过滤的空气。尿素代替硝酸盐作为氮源，并采用连续充气培养角毛藻，可加快牟氏角毛藻的生长速度，加入VB1、VB12使牟氏角毛藻中的营养更全面；利用人工三基色光源作为主要光源，可实现牟氏角毛藻的全人工全天候培养。由于三基色灯管显色性好、光衰小、光效高，三基色灯发出的光更接近日光的光学特性，人眼的亮度感觉更好，相对于日光灯、白炽灯、普通灯光照射，更能促进微藻类等水生植物的生长，其繁殖生长速度得到提高，培养时间变短，生产效率提高。
作为本发明牟氏角毛藻的全人工快速培养方法的进一步限定，所述经过过滤的空气为经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气。过滤后的空气避免了空气中存在的颗粒物及微生物对培养液的污染。
作为本发明牟氏角毛藻的全人工快速培养方法的进一步限定，所述的培养罐为5L玻璃三角瓶或18L矿泉水桶中的任一种，培养罐进行培养时装液量为其容积的50~80%。采用三角瓶或矿泉水桶小水体充气培养，操作灵活不易污染，可大规模培养，能满足对虾等水产动物家系选育育种方法的需要。所述的接藻种其接入密度为30~40×104个/mL。待接藻种要求生长良好、色泽鲜艳的藻种，镜检无原生动物、细菌污染。
作为本发明牟氏角毛藻的全人工快速培养方法的进一步限定，所述培养罐消毒其方式为高锰酸钾消毒；所述的海水消毒为1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10-20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g。
本发明具备以下良好效果：
（1）本发明用尿素代替硝酸盐作为氮源，加入VB1、VB12使牟氏角毛藻中的营养更全面，可加快牟氏角毛藻的生长速度，使培养基成分相对于现有技术简单明了，减少对于赤霉素的依赖。
（2）本发明利用人工三基色光源作为主要光源，可实现牟氏角毛藻的全人工全天候培养。由于三基色灯管显色性好、光衰小、光效高，三基色灯发出的光更接近日光的光学特性，人眼的亮度感觉就更好，且其发射出来的三基色光与海底冷色系光线相似，相对于日光灯、白炽灯、普通阳光照射，更能促进小藻类海底植物的生长，其繁殖生长速度得到提高，培养时间变短，生产效率提高。
（3）本发明采用三角瓶或矿泉水桶小水体充气培养，并采用连续充气培养角毛藻，操作灵活不易污染，可大规模培养，能满足对虾等水产动物家系选育育种方法的需要，培养时间从现有技术的5~7天缩短到了3~4天，且产量平均达200×104个/mL，最高可达300~400×104个/mL。
具体实施方式
以下结合实施例和描述本发明一种牟氏角毛藻的培养基配方及全人工快速培养方法，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。
实施例1
本实施例中牟氏角毛藻的培养基配方中各组分及其浓度：尿素CO(NH2)2 0.17g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.075g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.1g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.01g/L, EDTA 3~5g/L, VB1 2mg/L, VB12 1.5μg/L，配方溶剂为消过毒的海水。
18L矿泉水桶，高锰酸钾消毒后，用消毒海水冲洗2遍备用，矿泉水桶放置于木架上，木架侧面设置3个三基色灯光光源，使到达三角瓶或矿泉水桶的光线照度为4000lx，培养用海水采用漂白液消毒，消毒方法是1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10~20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g，消毒后的海水使用前要经过淀粉碘化钾溶液测试。按照上述牟氏角毛藻培养基配方添加培养基，培养罐中培养基的装液量为其容积的50%，待接藻种要求生长良好、色泽鲜艳的藻种，镜检无原生动物、细菌污染，接种密度为40×104个/mL，接种后放入消毒好的气石，以10L/min的速度充入经过经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气培养，用锡纸或透明薄膜封住瓶口，经过4天培养，即可采收。本实施例培养得到的牟氏角毛藻密度可达400×104个/mL。
实施例2
本实施例中牟氏角毛藻的培养基配方中各组分及其浓度：尿素CO(NH2)2 0.1g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.05g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.5g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.02g/L, EDTA 5g/L, VB1 5mg/L, VB12 3μg/L，配方溶剂为消过毒的海水。
取5L玻璃三角瓶，高锰酸钾消毒后，用消毒海水冲洗2遍备用，三角瓶放置于木架上，木架侧面设置3个三基色灯光光源，使到达三角瓶或矿泉水桶的光线照度为5000lx，培养用海水采用漂白液消毒，消毒方法是1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10~20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g，消毒后的海水使用前要经过淀粉碘化钾溶液测试。按照上述牟氏角毛藻培养基配方添加培养基，培养罐中培养基的装液量为其容积的60%，待接藻种要求生长良好、色泽鲜艳的藻种，镜检无原生动物、细菌污染，接种密度为40×104个/mL，接种后放入消毒好的气石，以8L/min的速度充入经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气培养，用锡纸或透明薄膜封住瓶口，经过3天培养，即可采收。本实施例培养得到的牟氏角毛藻密度可达200×104个/mL。
实施例3
本实施例中牟氏角毛藻的培养基配方中各组分及其浓度：尿素CO(NH2)2 0.3g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.1g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.3g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.02g/L, EDTA 4g/L, VB1 1mg/L, VB12 3μg/L，配方溶剂为消过毒的海水。
取18L矿泉水桶，高锰酸钾消毒后，用消毒海水冲洗2遍备用，矿泉水桶放置于木架上，木架侧面设置3个三基色灯光光源，使到达三角瓶或矿泉水桶的光线照度为3500lx，培养用海水采用漂白液消毒，消毒方法是1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10~20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g，消毒后的海水使用前要经过淀粉碘化钾溶液测试。按照上述牟氏角毛藻培养基配方添加培养基，培养罐中培养基的装液量为其容积的80%，待接藻种要求生长良好、色泽鲜艳的藻种，镜检无原生动物、细菌污染，接种密度为40×104个/mL，接种后放入消毒好的气石，以9L/min的速度充入经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气培养，用锡纸或透明薄膜封住瓶口，经过4天培养，即可采收。本实施例培养得到的牟氏角毛藻密度可达250×104个/mL。
实施例4
本实施例中牟氏角毛藻的培养基配方中各组分及其浓度：尿素CO(NH2)2 0.25g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.08g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.4g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.03g/L, EDTA 3.5g/L, VB1 4mg/L, VB12 1.0μg/L，配方溶剂为消过毒的海水。
取18L矿泉水桶，高锰酸钾消毒后，用消毒海水冲洗2遍备用，矿泉水桶放置于木架上，木架侧面设置3个三基色灯光光源，使到达三角瓶或矿泉水桶的光线照度为3500lx，培养用海水采用漂白液消毒，消毒方法是1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10~20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g，消毒后的海水使用前要经过淀粉碘化钾溶液测试。按照上述牟氏角毛藻培养基配方添加培养基，培养罐中培养基的装液量为其容积的80%，待接藻种要求生长良好、色泽鲜艳的藻种，镜检无原生动物、细菌污染，接种密度为40×104个/mL，接种后放入消毒好的气石，以10L/min的速度充入经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气培养，用锡纸或透明薄膜封住瓶口，经过4天培养，即可采收。本实施例培养得到的牟氏角毛藻密度可达300×104个/mL。
实施例5
本实施例中牟氏角毛藻的培养基配方中各组分及其浓度：尿素CO(NH2)2 0.2g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.075g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.3g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.015g/L, EDTA 4g/L, VB1 3.5mg/L, VB12 2.5μg/L，配方溶剂为消过毒的海水。
取5L玻璃三角瓶，高锰酸钾消毒后，用消毒海水冲洗2遍备用，三角瓶放置于木架上，木架侧面设置3个三基色灯光光源，使到达三角瓶或矿泉水桶的光线照度为4500lx，培养用海水采用漂白液消毒，消毒方法是1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10~20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g，消毒后的海水使用前要经过淀粉碘化钾溶液测试。按照上述牟氏角毛藻培养基配方添加培养基，培养罐中培养基的装液量为其容积的70%，待接藻种要求生长良好、色泽鲜艳的藻种，镜检无原生动物、细菌污染，接种密度为40×104个/mL，接种后放入消毒好的气石，以9L/min的速度充入经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气培养，用锡纸或透明薄膜封住瓶口，经过4天培养，即可采收。本实施例培养得到的牟氏角毛藻密度可达300×104个/mL。
本发明上述实施例方案仅是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求中指出了本发明产品组成成分、成分比例、制备方法参数的范围，而上述的说明并未指出本发明参数的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应当认为是包括在权利要求书的范围内。本发明是经过多位牟氏角毛藻培养研究人员长期工作经验积累，并通过创造性劳动创作而出，具有突出的实质性特点和显著的进步。
Claims (7)
1.一种牟氏角毛藻的培养基配方，其特征在于，该培养基配方中各组分及其浓度为尿素CO(NH2)2 0.1~0.3g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.05~0.1g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.1~0.5g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.01~0.02g/L, EDTA 3~5g/L, VB1 1~5mg/L, VB12 1.0~3μg/L，配方溶剂为海水。
2.根据权利要求1所述的牟氏角毛藻的培养基配方，其特征在于，该培养基配方中各组分及其浓度为尿素CO(NH2)2 0.17g/L，碳酸氢钠NaHCO3 0.075g/L, 硅酸钠水结晶Na2SiO3·9H2O 0.1g/L, 磷酸二氢钾KH2PO40.01g/L, EDTA 3~5g/L, VB1 2mg/L, VB12 1.5μg/L，配方溶剂为海水。
3.根据权利要求1或2所述的牟氏角毛藻的培养基配方，其特征在于，所述的海水为消毒后的海水。
4.一种牟氏角毛藻的全人工快速培养方法，对培养罐、海水进行消毒后，以海水为溶剂配培养基，将接藻种接入装有培养基的培养罐中，密封培养罐开始培养，培养的同时对培养罐进行光照并充入空气，培养3~5天后采收，其特征在于，所述的培养基其配方为权利要求1或2任一项所述牟氏角毛藻的培养基配方；所述的光照为利用三基色灯光光源照射，光线照度为3500~5000lx；所述的充入空气为以8-10L/min的速度充入经过过滤的空气。
5.根据权利要求4所述的所述的牟氏角毛藻的全人工快速培养方法，其特征在于，所述经过过滤的空气为经过孔径小于0.1μm空气滤芯过滤的空气。
6.根据权利要求4或5所述的牟氏角毛藻的全人工快速培养方法，其特征在于，所述的培养罐为5L玻璃三角瓶或18L矿泉水桶中的任一种，培养罐进行培养时装液量为其容积的50~80%；所述的接藻种其接入密度为30~40×104个/mL。
7.根据权利要求6所述的牟氏角毛藻的全人工快速培养方法，其特征在于，所述培养罐消毒其方式为高锰酸钾消毒；所述的海水消毒为1m3海水中加入250ml漂白液，使海水中有效氯含量达到10~20mg/L, 消毒24h后，用硫代硫酸钠中和余氯，硫代硫酸钠的用量为1m3消毒海水硫代硫酸钠50g。
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