CN103461320A - 一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液，其特征在于，包括下列重量份的原料：甲醛9-11份、乙醇13-16份、甘氨酸9-9.5份、脲3-3.5份、盐酸普鲁卡因1.8-2.2份、丙二醇1.3-1.6份、二甲基亚砜1.4-1.6份、磷酸钠0.8-1.2份、胰蛋白酶3.4-3.6份、乙酸0.1-0.3份、磷酸氢二钠1-1.1份、磷酸二氢钠0.3-0.32份、水51-52份。本发明与现有技术相比，具有以下优点：本发明配方缓冲液固定细胞便于组织化学染色；利用非离子溶液依数性的不等张溶液在醛化过程中裂解红细胞、溶解粘液蛋白，从而使镜检背景清晰，大大提高阳性细胞的检出率。

Description

一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液
技术领域
本发明涉及医学临床检验中液基薄层脱落细胞检测的宫颈刮片、胸腹水、痰液脱落细胞等标本的稀释、细胞固定、粘液溶解、抑菌防腐用保存液。
背景技术
现在医学临床检验中液基薄层细胞检测的宫颈刮片等脱落细胞用标本保存液，各生产商品种繁多，但该类产品主要功能有：（1）溶解粘液蛋白防止包裹阳性细胞；（2）裂解红细胞减少背景细胞，让染色镜检背景清晰；（3）固定白细胞、上皮细胞和组织细胞；（4）维持巴氏或组织化学染色的中性PH值。现行主流产品液基薄层细胞保存液主要成分和功能是以醇类作为细胞固定剂和红细胞溶血剂，但浓度要求很高，达到95％，这就带来许多问题：（1）高浓度醇类使蛋白质和粘液蛋白快速性凝固，包裹了阳性细胞为粘液溶解处理带来很大困难；（2）醇类为非水介质使溶液的酸碱缓冲系统减弱了缓冲能力；（3）若醇浓度在30-40%左右起不到固定细胞的作用；（4）用10%甲醛固定细胞，但红细胞经醛化后，现行的液基薄层细胞保存液配方是无法裂解醛化的红细胞，造成涂片背景细胞增多，增加镜检难度和假阴性判定的风险。
溶液的等张性是个生物概念，即：等张溶液是指与红细胞张力相等的溶液，在等张溶液中、红细胞既不发生体积改变、也不发生溶血。
市场上使用的醇类液基薄层脱落细胞保存液，醇类浓度为30-40%的起不到细胞固定作用；醇类浓度为95%的虽能起到固定细胞作用，但这种高浓度醇类非水溶液使液基薄层脱落细胞保存液的酸碱缓冲能力散失。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于液基薄层细胞的不等张保存液，解决液基薄层细胞保存液溶解红细胞、粘液蛋白、非晶形盐结晶，固定白细胞、上皮细胞、组织细胞；即：保留全部阳性细胞，去除杂质，红细胞、粘液、抑制细菌增殖，使染片后镜检背景清晰。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液，其特征在于，包括下列重量份的原料：
甲醛                                            9-11份
乙醇                                            13-16份
甘氨酸                                          9-9.5份
脲                                              3-3.5份
盐酸普鲁卡因                                    1.8-2.2份
丙二醇                                          1.3-1.6份
二甲基亚砜                                      1.4-1.6份
磷酸钠                                          0.8-1.2份
胰蛋白酶                                        3.4-3.6份
乙酸                                            0.1-0.3份
磷酸氢二钠                                      1-1.1份
磷酸二氢钠                                      0.3-0.32份
水                                              51-52份。
本发明原料组分进一步优选为：
甲醛                                            10份
乙醇                                            15份
甘氨酸                                          9.2份
脲                                              3.2份
盐酸普鲁卡因                                    2份
丙二醇                                          1.5份
二甲基亚砜                                      1.5份
磷酸钠                                          1份
胰蛋白酶                                        3.5份
乙酸                                            0.2份
磷酸氢二钠                                      1.09份
磷酸二氢钠                                      0.31份
水                                              51.5份。
本发明液基薄层脱落细胞的不等张保存液的制备方法为：将所述原料投料入到玻璃容器中，充分溶解混匀后用0.1μm滤膜抽滤，得到滤液在塑料或玻璃容器中密封待用。
本发明是在液基薄层细胞检测保存液通过改变溶液内红细胞膜的表面张力，从而溶解红细胞，保持固定的白细胞、上皮细胞、组织细胞的自然状态，便于涂片染色镜检。
本发明的有益效果：本发明与现有技术相比，具有以下优点：（1）本发明配方缓冲液固定细胞便于组织化学染色。（2）利用非离子溶液依数性的不等张溶液在醛化过程中裂解红细胞、溶解粘液蛋白，从而使镜检背景清晰，大大提高阳性细胞的检出率。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述。本发明中每“份”为10g。
实施例1
一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液，由以下重量份的组分组成：甲醛10份、乙醇15份、甘氨酸9.2份、脲3.2份、盐酸普鲁卡因2份、丙二醇1.5份、二甲基亚砜1.5份、磷酸钠1份、胰蛋白酶3.5份、乙酸0.2份、磷酸氢二钠1.09份、磷酸二氢钠0.31份、水51.5份。其制备方法为：将所述原料投料与玻璃容器中，充分溶解混合均匀后用0.1μm滤膜抽滤，得到滤液在塑料或玻璃容器中密封待用。
实施例2
一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液，由以下重量份的组分组成：甲醛9.5份、乙醇15.3份、甘氨酸9.1份、脲3.1份、盐酸普鲁卡因1.9份、丙二醇1.4份、二甲基亚砜1.6份、磷酸钠1.1份、胰蛋白酶3.6份、乙酸0.1份、磷酸氢二钠1份、磷酸二氢钠0.3份、水52份。其制备方法为：将所述原料投料与玻璃容器中，充分溶解混合均匀后用0.1μm滤膜抽滤，得到滤液在塑料或玻璃容器中密封待用。
实施例3
一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液，由以下重量份的组分组成：甲醛10.6份、乙醇14.7份、甘氨酸9.4份、脲3.3份、盐酸普鲁卡因2.1份、丙二醇1.35份、二甲基亚砜1.4份、磷酸钠0.9份、胰蛋白酶3.4份、乙酸0.25份、磷酸氢二钠1.1份、磷酸二氢钠0.32份、水51.18份。其制备方法为：将所述原料投料与玻璃容器中，充分溶解混合均匀后用0.1μm滤膜抽滤，得到滤液在塑料或玻璃容器中密封待用。
测定方法：按照下面要求分别测定实施例1-3所制备的用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液的密度、渗透压、pH值，见下表1。
（1）密度：以液体密度检测仪严格按说明书直接测试。测试液体温度20℃，单位：克/毫升（g/ml）。每例实施配方的保存液，连续测定10次。
（2）渗透压：以渗透压测定仪（冰点法），严格按说明书直接测试，单位：毫渗透压摩尔浓度（mosmol/L）。每例实施配方的保存液，连续测定10次。
（3）pH值：以pH值测定仪（以磷酸盐PH 6.4缓冲校准）严格按说明书直接测试。每例实施配方的保存液，连续测定10次。
（4）保存液内部红细胞表面张力与人体血液中红细胞表面张力比较（推算值）：所谓“张力”实际是指溶液中不能透过细胞膜大分子颗粒所造成的渗透压。三个实例配方保存液均为低张溶液。
表1
  密度（单位g/ml） 渗透压（单位mosmol/L） 保存液内部红细胞表面张力与人体血液中红细胞表面张力比较 pH
实施例1 1.025 305 低张 7.0
实施例2
Figure 61284DEST_PATH_IMAGE001
 1.035 340 低张 7.4
实施例3
Figure 456494DEST_PATH_IMAGE001
 1.019 270 低张 6.8
    从以上实施例可以看出，本发明液基薄层脱落细胞不等张保存液，与人体内血液相比为等渗、中性、低张。当脱落细胞标本投入保存液时，出现两个方面的反应：一方面，保存液配方组份中甲醛、乙醇与标本中所有细胞膜发生醛化反应和固定作用，速度缓慢；另一方面，保存液配方组份中能自由进出红细胞内的脲、盐酸鲁卡因，从高浓度的保存液中快速进入红细胞中，使红细胞膨胀破裂。胰蛋白酶、乙酸，软化和溶解粘液蛋白，很好的解决了液基薄层细胞保存液在保存脱落细胞标本的过程中溶解红细胞、粘液蛋白、非晶形盐结晶，固定白细胞、上皮细胞、组织细胞。即保留全部阳性细胞，去除杂质红细胞、粘液，抑制细胞增殖，使染片后镜检背景清晰，提高检测阳性率。

Claims (2)

1.一种用于液基薄层脱落细胞的不等张保存液，其特征在于，包括下列重量份的原料：
甲醛                                            9-11份
乙醇                                            13-16份
甘氨酸                                          9-9.5份
脲                                              3-3.5份
盐酸普鲁卡因                                    1.8-2.2份
丙二醇                                          1.3-1.6份
二甲基亚砜                                      1.4-1.6份
磷酸钠                                          0.8-1.2份
胰蛋白酶                                        3.4-3.6份
乙酸                                            0.1-0.3份
磷酸氢二钠                                      1-1.1份
磷酸二氢钠                                      0.3-0.32份
水                                              51-52份。
2.根据权利要求1所述的保存液基薄层脱落细胞的不等张保存液，其特征在于，所述原料组分进一步优选为：
甲醛                                            10份
乙醇                                            15份
甘氨酸                                          9.2份
脲                                              3.2份
盐酸普鲁卡因                                    2份
丙二醇                                          1.5份
二甲基亚砜                                      1.5份
磷酸钠                                          1份
胰蛋白酶                                        3.5份
乙酸                                            0.2份
磷酸氢二钠                                      1.09份
磷酸二氢钠                                      0.31份
水                                              51.5份。
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