CN103458884A - 用于治疗肾病的方法及组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用环己烯酮化合物治疗肾小球硬化如局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)或肾小球肾炎如免疫球蛋白A肾病(IgAN)的方法。

Description

用于治疗肾病的方法及组合物
交叉引用
本申请要求于2011年1月21日提交的美国申请61/435,201和于2011年10月7日提交的美国申请61/544,910的权益，所述申请各自通过引用整体并入本文。
发明背景
许多疾病或病症通过攻击肾小球而影响肾功能。肾小球疾病包括具有多种遗传性及环境诱因的许多病状，但其主要分为两类：肾小球肾炎和肾小球硬化。
肾小球硬化是指肾脏中的肾小球的硬化。它是用于描述肾脏的微小血管、肾小球以及从血液过滤尿液的肾功能单位的瘢痕形成的通用术语。蛋白尿(尿中含大量蛋白质)是肾小球硬化的指征之一。瘢痕形成妨碍了肾脏的过滤过程，并使得蛋白质从血液渗漏到尿液中。然而，肾小球硬化是蛋白尿的众多病因中的一个。可能有必要进行肾活检以确定患者是否患有肾小球硬化或另一种肾脏问题。更具体地，肾小球硬化可指局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)和结节性糖尿病肾小球硬化。
局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)由局灶性肾小球硬化和足突扁平化(foot process effacement)的特征性病变来定义。根据长达20年的随访研究，所报道的FSGS患者的终末期肾病的频率处于13-78%的宽范围内。虽然仍不清楚FSGS的病因及发病机理，但人们认为其主要起因于肾小球上皮细胞的内在病变，这激活了肾小球内复杂的相互作用，从而导致肾小球硬化。
结节性糖尿病肾小球硬化或毛细血管间肾小球肾炎，也称为糖尿病肾病(nephropatia diabetica)或基-威综合征(Kimmelstiel-Wilsonsyndrome)，是由肾小球中的毛细血管的血管病所引起的进行性肾脏疾病。其特征为肾病综合征和弥漫性肾小球硬化。它是由于长期的糖尿病而引起的，并且在许多国家是透析的主要适应证。
目前，尽管皮质类固醇和免疫调节剂常用于治疗原发性FSGS患者，但其在肾病变进展方面的治疗结果较差，另外还有各种副作用，并且这些治疗方案更多地基于经验假定而不是致病证据。(参见，例如Matalon等人,Semin Nephrol,20:309-317,2000；Braun等人,Cochrane Database Syst Rev:CD003233,2008)。
肾小球肾炎描述了在肾脏中充当从血液中分离废物和额外流体的过滤器的膜组织的炎症。
免疫球蛋白A肾病(IgAN)(最常见的原发性肾小球肾炎类型)期间的加速与进展，是相对不可预测的，且在临床上在预防和治疗方面仍然面临挑战，并且已被认为是肾小球病症的慢性肾功能衰竭的后续发展中的关键步骤。在这方面，IgAN患者肾脏中系统性T细胞活化和淋巴细胞/巨噬细胞/嗜中性粒细胞浸润的异常增强已被认为是IgAN向慢性肾功能衰竭转化中的主要有害过程(Kamei等人,Clin.J.Am.Soc.Nephrol.2011,14；Chan等人,Clin.Exp.Nephrol.2004,8:297-303；Chao等人,Kidney Int.70:283-297(2006)；Lai,K.N.,Nephron.92:263-270(2002))，尽管也可归因于其它免疫学、临床和病理学因素。此外，已将氧化应激与患者和动物模型中IgAN的形成和进展高度关联；已报道在众多人类及实验性肾小球病症(包括IgAN)的发展中，活性氧(ROS)发挥了直接的致病作用。
虽然糖皮质激素类固醇已用于治疗IgAN患者，但对于其保护肾功能以及减轻IgAN中蛋白尿的功效仍不清楚，且由于长期使用所致的潜在无法控制的免疫抑制效果，不良副作用仍然是备受关注的问题。
发明内容
一方面，本文提供了用于治疗受试者的肾小球疾病(例如，肾小球硬化或肾小球肾炎)的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000031
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于减轻受试者的肾功能障碍或肾小球病变的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000032
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于增强受试者中的肾核因子E2相关因子2(Nrf2)的活性的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000041
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于抑制受试者中的肾NF-κB活化和/或转化生长因子(TGF)-β1蛋白质表达的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000051
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于抑制受试者中的ROS/NO和/或p47phox的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于减少受试者中的CD3+/CD69+T细胞的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000061
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于增强肾脏中的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000071
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于减少受试者中的促炎细胞因子的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000081
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于降低肾脏中的肾胱天蛋白酶-1蛋白质表达和/或抑制肾脏中的肾NLRP3活化的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000082
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
又一方面，本文提供了用于降低肾脏中的肾NF-κB水平的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
又一方面，本文提供了用于抑制肾脏中的细胞凋亡的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000101
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
另一方面，本文提供了用于保护或预防受试者的肾脏免于肾小球硬化和/或间质性纤维化和/或肾小球肾炎的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物降低肾脏中TGF-β1蛋白质的表达水平和胶原蛋白I、III和IV蛋白质积累，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000102
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
又一方面，提供了用于治疗受试者的局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物(i)增强肾脏中的Nrf2活性和/或(ii)抑制肾脏中的NF-κB依赖性炎性及TGF-β1介导的纤维化，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000111
其中
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
又一方面，提供了用于治疗受试者的肾小球肾炎的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物(i)阻断肾NLRP3炎性体(inflammasome)活化和/或(ii)抑制T细胞活化的增强，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000121
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
又一方面，提供了用于将受试者的免疫球蛋白A肾病(IgAN)维持在缓解期的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物(i)增强肾脏中的Nrf2活性和/或(ii)抑制肾脏中的NF-κB依赖性炎性和TGF-β1介导的纤维化，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000122
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
援引并入
本说明书中所提到的所有出版物、专利和专利申请均通过引用以同种程度并入本文，犹如特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入。
附图说明
本发明的新特征在随附的权利要求中具体阐述。通过参考以下对在其中利用到本发明原理的示例说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将获得对本发明的特征和优点更好的理解，在附图中：
图1A-C示出了示例性环己烯酮化合物1减少尿蛋白质以及改善肾功能的说明性结果。(1A)尿蛋白质时程研究。(1B)血清血尿素氮(BUN)水平。(1C)血清肌酸酐水平。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。#无法检出。
图2A-B示出了用示例性环己烯酮化合物1预防肾组织病理学进展的说明性结果。(2A)在治疗的第7、14和21天通过苏木精伊红染色进行的肾组织病理学评价。(2B)在治疗的第7、14和21天通过对结蛋白的免疫组织化学染色而对肾小球中的足细胞损伤的检测。黑色箭头、白色箭头和箭头符号分别指示上皮增生性病变(EPHL)、硬化和足细胞。原始放大倍数：400×。在右侧区域示出了半定量分析。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。#无法检出。
图3A-F示出了示例性环己烯酮化合物1预防FSGS小鼠产生ROS/NO的说明性结果。(3A)血清中的超氧阴离子水平。(3B)血清中的NO水平。(3C)尿中的超氧阴离子水平。(3D)尿中的NO水平。(3E)肾蛋白中的超氧阴离子水平。(3F)通过二氢乙锭(DHE)标记所证明的肾原位ROS产生。原始放大倍数：400×。在右侧区域示出了半定量分析。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图4A-E示出了示例性环己烯酮化合物1增强肾脏中核Nrf2表达并降低细胞溶质p47phox表达的说明性结果。(4A)肾组织中细胞溶质p47phox的代表性Western印迹，和(4B)肾组织中核Nrf2的代表性Western印迹。β-肌动蛋白和组蛋白H3分别用作细胞溶质蛋白和核蛋白的内部对照。(4C)p47phox/β-肌动蛋白比值和(4D)Nrf2/组蛋白H3比值的定量。(4E)肾脏中的GPx活性。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图5A-B示出了采用示例性环己烯酮化合物1的T细胞和巨噬细胞浸润的说明性结果。通过免疫组织化学染色对(5A)CD3+T细胞或(5B)F4/80单核细胞/巨噬细胞的检测。原始放大倍数：400×。红箭头指示CD3+T细胞。在右侧区域示出了半定量分析。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图6A-C示出了示例性环己烯酮化合物1抑制肾脏中IL-6表达和NF-κB活化的说明性结果。通过免疫组织化学染色对(6A)IL-6蛋白质和(6B)NF-κB p65的检测。原始放大倍数：400×。在下方区域示出了半定量分析。(4C)肾NF-κB活性。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图7A-C示出了示例性环己烯酮化合物1预防胶原蛋白I、III和IV在肾脏中积累的说明性结果。通过免疫组织化学染色对(7A)胶原蛋白I、(7B)胶原蛋白III或(7C)胶原蛋白IV的检测。原始放大倍数：400×。在右侧区域示出了半定量分析。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。**p＜0.01，***p＜0.005。
图8A-C示出了示例性环己烯酮化合物1用于防止血清和肾组织中的TGF-β1表达的说明性结果。(8A)血清中的TGF-β1水平。(8B)肾蛋白质中的TGF-β1水平。(8C)通过免疫组织化学染色对TGF-β1的检测。原始放大倍数：400×。在右侧区域示出了半定量分析。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图9A-9E示出了示例性环己烯酮化合物1在AcP-IgAN小鼠中减少尿蛋白质以及改善肾功能和严重的肾组织病理学的说明性结果。(9A)尿蛋白质时程研究。(9B)血清血尿素氮(BUN)水平。(9C)血清肌酸酐水平。在治疗的第3天和第28天通过苏木精伊红染色(9D)和PAS染色(9E)进行的肾组织病理学评价。原始放大倍数：400×。在下方区域示出了受所示参数影响的肾小球百分比的得分。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。#无法检出。
图10A-D示出了以示例性化合物1饲养的AcP-IgAN小鼠中TGF-β1和Col-IV的mRNA和蛋白质水平的说明性结果。通过实时PCR对TGF-β1(10A)和胶原蛋白I(10B)的肾mRNA水平的检测。通过免疫组织化学染色对TGF-β1(10C)和胶原蛋白I(10D)的肾蛋白质水平的检测。原始放大倍数：400×。在下方区域示出了得分。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。**p＜0.01，***p＜0.005。
图11A-C示出了通过对脾细胞的血细胞计数所得到的，IgAN发病机制中细胞介导的免疫的说明性结果。治疗第3天和第28天CD3+脾细胞中CD3+CD69+细胞的百分比(11A)或CD19+脾细胞中CD19+CD69+细胞的百分比(11B)。(11C)T细胞增殖。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。#无法检出。
图12A-F示出了评价在Acp-IgAN小鼠肾脏中浸润的单核白细胞的表型表达的说明性结果。(12A-C)通过免疫荧光染色对CD3+T细胞(12A)、CD4+T细胞(12B)或CD8+T细胞(12C)的检测。(12D-F)通过免疫组织化学染色对CD11b巨噬细胞/嗜中性粒细胞(12D)、CD11c树突细胞(12E)或F4/80单核细胞/巨噬细胞(12F)的检测。原始放大倍数：400×。在下方区域示出了得分。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。#无法检出。
图13A-F示出了示例性环己烯酮化合物1防止AcP-IgAN小鼠产生ROS/NO的说明性结果。(图13A和13B)超氧阴离子(13A)或NO(13B)的血清水平。(图13C和13D)超氧阴离子(13C)或NO(13D)的尿水平。(图13E)肾脏中的超氧阴离子水平。(图13F)通过二氢乙锭(DHE)标记所证明的肾原位ROS产生。原始放大倍数：400×。在右侧区域示出了得分。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图14A-F示出了AcP-IgAN小鼠中Nrf2的mRNA和蛋白质的表达水平的说明性结果。(14A-C)通过实时PCR对Nrf2(14A)、NQO1(14B)或HO-1(14C)的肾mRNA水平的检测。(14D-E)通过ELISA对核Nrf2(14D)或细胞溶质HO-1(14E)的肾水平的检测。(14F)肾脏中的GPx活性。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图15A-D示出了AcP-IgAN小鼠中炎性细胞因子的血清水平的说明性结果。(15A)IL-6。(15B)MCP-1。(15C)IL-1β。(15D)IL-18。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图16A-F示出了AcP-IgAN小鼠中的肾NLRP3炎性体活化的说明性结果。(16A-D)通过实时PCR对NLRP3(16A)、胱天蛋白酶-1(16B)、IL-1β(16C)或IL-18(16D)的肾mRNA水平的检测。(16E-F)肾组织中NLRP3(16E)或胱天蛋白酶-1(Casp1)(16F)的代表性Western印迹。Casp1p20亚单位的出现指示活化。β-肌动蛋白用作内部对照。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图17A-F示出了示例性环己烯酮化合物1抑制AcP-IgAN小鼠肾脏中的IL-6和MCP-1表达以及NF-κB活化的说明性结果。(17A)通过免疫组织化学染色对NF-κB p65的检测。原始放大倍数：400×。在下方区域示出了得分。(17B)使用基于ELISA的TransAM NF-κB试剂盒对肾NF-κB活性的测定。(17C-D)通过实时PCR对MCP-1(17C)和IL-6(17D)的肾mRNA水平的检测。(17E-F)通过免疫组织化学染色对MCP-1(17E)和IL-6(17F)的肾蛋白质水平的检测。原始放大倍数：400×。在下方区域示出了得分。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
图18A-B显示了AcP-IgAN小鼠肾脏中的细胞凋亡的说明性结果。(A)通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测肾脏中的细胞凋亡。原始放大倍数：400×。(B)肾脏中细胞凋亡阳性细胞的得分。数据为每组六只小鼠的平均值±SEM。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.005。
具体实施方式
肾小球疾病包括具有多种遗传性和环境诱因的许多病状，但其主要分为两类：肾小球肾炎和肾小球硬化。据认为肾小球硬化，尤其是FSGS，主要起因于激活肾小球内复杂的相互作用的肾小球上皮细胞的内在病变。这些复杂的相互作用可包括氧化应激、伴有巨噬细胞募集的炎症以及促进基质产生和/或基质降解的因子。已越来越多地将肾脏中高水平的系统性T细胞活化和嗜中性粒细胞/淋巴细胞/巨噬细胞浸润与免疫球蛋白A肾病(IgAN)(原发性肾小球肾炎的最常见类型)的加速和进展相关联。然而，到目前为止，对IgAN的侵袭期和恶化期的预防与治疗仍主要处于研究阶段。本文提供了通过向受试者(例如，人)施用本文提供的环己烯酮化合物来治疗肾功能障碍尤其是肾小球硬化或肾小球肾炎的方法。该环己烯酮化合物为受试者(尤其在肾脏中)提供用于治疗肾小球硬化(见实施例1-6和14)和/或肾小球肾炎(见实施例7-13和14)的治疗效果。
在一些实施方案中，提供了用于治疗受试者的肾小球疾病(如肾小球硬化或肾小球肾炎)的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，提供了用于治疗肾小球硬化的方法。在某些实施方案中，肾小球硬化是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)或结节性糖尿病肾小球硬化。在某些实施方案中，肾小球硬化是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)。在一些实施方案中，环己烯酮化合物阻断氧化应激。在某些实施方案中，通过降低TGF-β1和细胞外基质蛋白表达来阻断氧化应激。在一些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，通过增强核因子E2相关因子2(Nrf2)的活性来减少氧化应激。
在一些实施方案中，提供了用于治疗肾小球肾炎的方法。在某些实施方案中，肾小球肾炎是免疫球蛋白A肾病(IgAN)。在一些实施方案中，该环己烯酮化合物减少受试者中的CD3+/CD69+T细胞。在某些实施方案中，该环己烯酮化合物减少受试者中的促炎细胞因子。在某些实施方案中，促炎细胞因子包括MCP-1、IL-6、IL-1β、IL-18或其组合。在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，具有
Figure BDA0000385088630000191
结构的环己烯酮化合物由任何合适的起始材料经合成或半合成方式制备。在其它实施方案中，该环己烯酮化合物通过发酵等制备。例如，在一些情况下，化合物1(也称为安卓奎诺尔(
Figure BDA0000385088630000192
)或“Antroq”)或化合物3由4-羟基-2,3-二甲氧基-6-甲基环己-2,5-二烯酮制备。以下示出了非限制性的示例性化合物。
Figure BDA0000385088630000193
Figure BDA0000385088630000201
在其它实施方案中，具有
Figure BDA0000385088630000202
结构的环己烯酮化合物从牛樟芝(Antrodia camphorate)的有机溶剂萃取物中分离得到。在一些实施方案中，该有机溶剂选自：醇类(例如，甲醇、乙醇、丙醇等)、酯类(例如，乙酸甲酯、乙酸乙酯等)、烷烃(例如，戊烷、己烷、庚烷等)、卤代烷烃(例如，氯甲烷、氯乙烷、氯仿、二氯甲烷等)等。例如，示例性化合物1-7从有机溶剂提取物中分离得到。在某些实施方案中，有机溶剂是醇。在某些实施方案中，该醇是乙醇。在一些实施方案中，环己烯酮化合物从牛樟芝的水性萃取物中分离得到。
在一些实施方案中，提供了用于减轻受试者的肾功能障碍或肾小球病变的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000211
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，肾小球病变包括上皮增生性病变(EPHL)。在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，本文提供的环己烯酮化合物具有在肾脏中增强核因子E2相关因子2(Nrf2)活性但抑制NF-κB依赖性炎性和TGF-β1介导的纤维化途径的治疗效果。见实施例5、6和14。
在一些实施方案中，提供了用于增强受试者中的肾核因子E2相关因子2(Nrf2)活性的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000212
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于抑制受试者中的肾NF-κB活化和/或转化生长因子(TGF)-β1蛋白质表达的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000221
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，施用本文提供的环己烯酮化合物(例如，化合物1)抑制了肾脏中的ROS/NO和p47phox NAD(P)H氧化酶的产生，但明显强化了导致环己烯酮化合物对FSGS受试者的效果的Nrf2信号传导途径。见实施例3、5和14。
在一些实施方案中，提供了用于抑制受试者中的ROS/NO和/或p47phox的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000231
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于减少受试者中的CD3+/CD69+T细胞的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000241
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
研究发现，对照FSGS小鼠在疾病诱导后的第7天显示出显著增强的GPx活性(实施例4和14)。氧化应激及其经常伴发的炎症也是慢性肾病的共同特征(Kim等人,Am J Physiol Renal Physiol,298:F662-671,2010；Yoon等人,Kidney Int,71:167-172,2007)，并且在肾小球硬化的进展中起着关键作用。值得注意是，氧化应激与炎症密切相关，因为它们彼此动员(recruit)并放大，从而引发恶性循环。例如，氧化应激可通过激活NF-κB诱发炎症，并随后诱导促炎细胞因子和趋化因子的产生，由此导致白细胞的活化及ROS/NO的产生与释放，同时这些事件又反过来促进氧化应激(Anrather等人,J Biol Chem,281:5657-5667,2006；Vaziri等人,Nat Clin Pract Nephrol,2:582-593,2006；Rodrigo等人,Free Radic Biol Med,33:409-422,2002)。此外，与野生型小鼠相比，在Nrf2基因敲除小鼠中，对NF-κB活化的炎性应答以及随后对环加氧酶2、诱导型一氧化氮合酶、IL-6和TNF-α的诱导更加强烈(Chen等人,Am J Physiol Heart Circ Physiol,290:H1862-1870,2006；Li等人,Biochem Pharmacol,76:1485-1489,2008)。也已报道，由Nrf2调节的HO-1的缺陷已显示加重肾小球肾炎(Datta等人,J Am Soc Nephrol,10:2540-2550,1999)。
在一些实施方案中，施用本文提供的环己烯酮化合物(例如，化合物1)显著地降低肾脏中的肾IL-6表达并阻断NF-κB活化。通过在FSGS+Antroq小鼠中T细胞和巨噬细胞向肾脏中的浸润显著受到抑制而证实了这一点(实施例5、11和14)。在一些实施方案中，此效应是负责预防间质性炎症和EPHL的机制，后者是FSGS的肾进展的关键指标(D'Agati,V Semin Nephrol,23:117-134,2003；Nagata等人,LabInvest,80:869-880,2000)。
在一些实施方案中，提供了用于增强肾脏中的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000251
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于减少受试者中的促炎细胞因子的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000261
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在某些实施方案中，促炎细胞因子包含MCP-1、IL-6、IL-1β、IL-18或其组合。在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于降低肾脏中的肾胱天蛋白酶-1蛋白质表达和/或抑制肾脏中的肾NLRP3活化的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000271
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于降低肾脏中的肾NF-κB活化的方法，该方法包括向受试者施用有效量环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000272
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于抑制肾脏中的细胞凋亡的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000281
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些情况下，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于保护或预防受试者的肾脏免于肾小球硬化和/或间质性纤维化和/或肾小球肾炎的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物降低肾脏中TGF-β1蛋白质的表达水平以及胶原蛋白I、III和IV蛋白质的积累，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000291
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
由活性氧(ROS)和/或一氧化氮(NO)的产生增加与抗氧化能力受损组合导致的氧化应激，导致促使坏死、细胞凋亡、炎症、纤维化以及其它肾脏病症(例如，参见Kim等人,Am J Physiol Renal Physiol,298:F662-671,2010)。剖析肾纤维化/硬化机制的新进展已提供了证据表明浸润的白细胞与内部肾细胞的NAD(P)H氧化酶复合物在肾脏病变中的超氧化物产生中起着重要作用(IBID;Jones等人,J Am Soc Nephrol,5:1483-1491,1995；Radeke等人,J Biol Chem,266:21025-21029,1991)。氧化应激的阻断可通过抗炎和抗细胞凋亡过程减轻肾硬化。此外，发现核因子E2相关因子2(Nrf2)是数种类型的细胞和组织中的关键转录因子，其与编码众多抗氧化剂和二相酶(如谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶)的大量基因的启动子区域中的抗氧化剂效应元件结合(Itoh等人,Biochem Biophys Res Commun,236:313-322,1997；Nguyen等人,J Biol Chem,284:13291-13295,2009)。Nrf2介导的对细胞抗氧化剂产生和抗炎机制的调节在对抗氧化应激方面起着重要作用，并且已证明Nrf2信号传导途径经由转化生长因子(TGF)-β1相关的上皮-间质转化而对大鼠管状上皮细胞中的肾纤维化(Shin等人,Free Radic Biol Med,48:1051-1063,2010)和链脲菌素诱导的糖尿病肾病(Jiang等人,Diabetes,59:850-860,2010)起到保护作用。
促纤维化细胞因子，尤其是TGF-β1的表达是肾硬化/纤维化的关键性决定因素(Ka等人,J Am Soc Nephrol,18:1777-1788,2007；Lan,HY.Front Biosci,13:4984-4992,2008；Zhao等人,Am J Nephrol,28:548-554,2008)。据报道氧化应激的阻断通过降低TGF-β1和细胞外基质蛋白表达来减轻肾小球硬化(Hahn等人,Pediatr Nephrol,13:195-198,1999；Kashihara等人,Curr Med Chem；Manning等人,Am JNephrol,25:311-317,2005)。另外，已表明涉及Nrf2转录因子及其相关的二相酶的抗氧化应激信号传导途径对于大鼠管状上皮细胞中的纤维化和链脲菌素诱导的糖尿病肾病起到肾保护作用。
在一些实施方案中，利用本文提供的环己烯酮化合物(例如，化合物1)的治疗降低了肾脏中TGF-β1蛋白质的表达水平及其下游胶原蛋白I、III和IV蛋白质的积累(实施例6和14)；这提示本文提供的环己烯酮化合物能够通过阻断TGF-β1介导的纤维化途径保护肾脏免于肾小球硬化和间质性纤维化，如所处理的FSGS小鼠中所示。
在一些实施方案中，提供了用于治疗局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物(i)增强肾脏中Nrf2的活性和/或(ii)抑制肾脏中NF-κB依赖性炎性以及TGF-β1介导的纤维化，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000311
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，提供了用于治疗受试者的肾小球肾炎的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物(i)阻断肾NLRP3炎性体活化和/或(ii)抑制T细胞活化的增加，且具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000321
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
根据本发明，示例性环己烯酮化合物1在AcP-IgAN小鼠中改变T细胞活性并预防肾脏炎症，示例性环己烯酮化合物适合于将IgAN维持在缓解期。
在某些实施方案中，本文提供了用于将受试者的免疫球蛋白A肾病(IgAN)维持在缓解期的方法，该方法包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure BDA0000385088630000322
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
某些术语
除非另有说明，否则本申请(包括说明书和权利要求)中使用的以下术语具有以下给定的定义。应当指出，如在本说明书和随附的权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式的指示物，除非上下文明确指出不是这样。除非另有说明，否则使用质谱分析、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药物学的常规方法。在本申请中，除非另有说明，否则“或”或“和”的使用意即“和/或”。此外，术语“包括”以及其他形式的使用并非限制性的。本文所用的章节标题仅仅是为了组织目的，不应理解为限制所述主题。
“烷基”指脂肪族烃基。烷基可以是饱和烷基(意即其不含有任何碳-碳双键或碳-碳叁键)，或者烷基可以是不饱和烷基(意即其含有至少一个碳-碳双键或碳-碳叁键)。烷基部分不管是饱和的还是不饱和的，都可为支链或直链。
“烷基”可具有1-10个碳原子(数值范围如“1-10”在本文中无论什么时候出现，都是指所给定范围内的每个整数；例如“1-10个碳原子”意即烷基可由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等直至且包括10个碳原子组成，但本定义也涵盖了其中存在未指明数值范围的术语“烷基”的情况)。本文所述化合物的烷基可指定为“C1-C6烷基”或相似的指定。仅举例来说，“C1-C6烷基”表示在烷基链中有1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子。在一个方面，所述烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。典型的烷基包括但绝不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、烯丙基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基等。在一个方面，烷基是C1-C6烷基。
术语“亚烷基”是指二价的烷基基团。任何上述单价烷基都可以通过从烷基中抽离第二个氢原子而成为亚烷基。在一个方面，亚烷基是C1-C6亚烷基。在另一方面，亚烷基是C1-C4亚烷基。典型的亚烷基包括但不限于-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-等。
如本文所用的术语“芳基”是指其中构成环的每一个原子均为碳原子的芳香环。芳基环由5、6、7、8、9个或多于9个碳原子形成。芳基任选地被取代。在一个方面，芳基是苯基或萘基。在一个方面，芳基是苯基。在一个方面，芳基是C6-C10芳基。根据结构，芳基可为单价的或双价的(即亚芳基)。在一个方面，亚芳基是C6-C10亚芳基。示例性的亚芳基包括但不限于1,2-亚苯基、1,3-亚苯基和1,4-亚苯基。
术语“芳香族”是指具有含有4n+2个π电子的离域π-电子体系的平面环，其中n为整数。芳香环可由5、6、7、8、9、10个或多于10个原子形成。芳香族化合物任选地被取代。术语“芳香族”包括碳环芳基(“芳基”，例如苯基)和杂环芳基(或“杂芳基”或“芳香杂环”)基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即，共用相邻的碳原子对的环)基团。
术语“卤代”或者另外的“卤素”或“卤化物”意即氟代、氯代、溴代或碘代。
术语“内酯”是指可被视为同一分子中的羟基-OH和羧基-COOH的缩合产物的环酯。其特征为由两个或更多个碳原子与单一氧原子所组成的、在邻近另一个氧的一个碳原子上存在酮基=O的闭环。
术语“杂环”或“杂环的”是指环中含有1-4个杂原子的芳香杂环(也称为杂芳基)和杂环烷基环(也称为杂脂环基团)，其中环中的各个杂原子选自O、S和N，其中各个杂环基团在其环体系中含有4-10个原子，且条件是任何环都不含两个相邻的O或S原子。非芳香族杂环基团(也称为杂环烷基)包括在其环体系中仅含有3个原子的基团，但芳香族杂环基团在其环体系中必须含有至少5个原子。杂环基团包括苯并稠合的环体系。3元杂环基团的一个例子是吖丙啶基。4元杂环基团的一个例子是氮杂环丁基(azetidinyl)。5元杂环基团的一个例子是噻唑基。6元杂环基团的一个例子是吡啶基，而10元杂环基团的一个例子是喹啉基。非芳香族杂环基团的例子有吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、噁唑烷酮基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、吖丙啶基、氮杂环丁基、氧杂环丁基(oxetanyl)、硫杂环丁基(thietanyl)、高哌啶基、氧杂环庚基(oxepanyl)、硫杂环庚基(thiepanyl)、氧氮杂
Figure BDA0000385088630000353
基(oxazepinyl)、二氮杂
Figure BDA0000385088630000351
基(diazepinyl)、硫氮杂
Figure BDA0000385088630000352
基(thiazepinyl)、1,2,3,6-四氢吡啶基、吡咯啉-2-基、吡咯啉-3-基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊环基(1,3-dioxolanyl)、吡唑啉基、二噻烷基、二硫戊环基(dithiolanyl)、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、3H-吲哚基和喹嗪基。芳香族杂环基团的例子有吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基(cinnolinyl)、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。如果可能的话，前述基团可以是C连接的或N-连接的。例如，由吡咯衍生的基团可以是吡咯-1-基(N-连接的)或吡咯-3-基(C连接的)。此外，由咪唑衍生的基团可以是咪唑-1-基或咪唑-3-基(均为N-连接的)或咪唑-2-基、咪唑-4-基或咪唑-5-基(均为C-连接的)。杂环基团包括苯并稠合的环体系。非芳香族杂环可以被一个或两个氧代(=O)部分取代，例如吡咯烷-2-酮。
联合治疗
一般而言，本文所述的组合物和(在采用联合疗法的实施方案中)其它药剂无须在同一药物组合物中进行施用，并且在一些实施方案中，由于化合物的不同的物理及化学特性，它们通过不同的途径给药。在一些实施方案中，根据确立的方案进行初始给药，而后由熟练的临床医生基于所观察到的效果改变剂量、给药方式及给药时间。
在一些实施方案中，当药物在联合治疗中使用时，治疗有效剂量发生变化。联合治疗进一步包括在不同的时间开始和结束的定期治疗，以帮助患者的临床控制。对于本文所述的联合疗法，共施用的化合物的剂量根据所使用的联合药物的类型，所使用的具体药物，所治疗的疾病、病症或病状等而变化。
应当理解，在一些实施方案中，根据多种因素改变用于治疗、预防或改善寻求缓解的病状的剂量方案。这些因素包括：受试者所患的病症，以及受试者的年龄、体重、性别、饮食及医疗状况。因此，在其它实施方案中，实际使用的剂量方案变化很大，且因此偏离本文所述的剂量方案。
意在涵盖化合物(即，本文所述的环己烯酮化合物)与其它固醇和/或免疫抑制剂的组合。在一些实施方案中，免疫抑制剂的实例包括但不限于以下各项：糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体、作用于抑免蛋白的药物和其它药物如干扰素、阿片类药物、TNF结合蛋白和霉酚酸酯。
在一些实施方案中，提供了用于早期治疗肾脏病症(如肾小球肾炎、肾小球硬化等)的组合物，其包含有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，和一种或多种固醇和/或免疫抑制剂，该环己烯酮化合物具有结构：
Figure BDA0000385088630000371
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；R为氢或C(=O)C1-C8烷基；R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；m=1-12；且n=1-12。在一些实施方案中，肾脏病症是肾小球硬化(例如，肾纤维化或FSGS中的硬化)。在其它实施方案中，肾脏病症是肾小球肾炎(例如，免疫球蛋白A肾病(IgAN))。
“糖皮质激素”是指与存在于几乎每一个脊椎动物细胞中的糖皮质激素受体(GR)结合的一类类固醇激素。名称糖皮质激素来源于其在葡萄糖代谢调节中的作用、其在肾上腺皮质中的合成及其类固醇结构。糖皮质激素的实例包括但不限于氢化可的松(Cortisol)、醋酸可的松、强的松、泼尼松龙、甲泼尼龙、地塞米松、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、醋酸氟氢可的松、醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和醛固酮。
作用于抑免蛋白的药物的实例包括但不限于环孢菌素、他克莫司、伏环孢素和其它钙依赖磷酸酶抑制剂，以及西罗莫司。
某些药学及医学术语
本文中与制剂、组合物或成分结合使用的术语“可接受的”是指对所治疗的受试者的一般健康没有持久的不利影响。
薄孔菌属(Antrodia)是薄孔菌科(Meripilaceae)的一个真菌属。薄孔菌属的种的子实体一般呈扁平状或在生长的表面上展开，其子实层暴露于外部；其边缘可能会卷起，从而形成小括号状(narrow brackets)。大多数的种可见于温带和北方森林中，且导致褐腐病(brown rot)。该属内的一些种具有药用价值，并且在台湾已用作中药。
本文使用的术语“载体”是指促进化合物引入细胞或组织中的相对无毒的化学化合物或药剂。
本文使用的术语“共施用”或类似用语意在包括对一名患者施用多种选定的治疗剂，并且旨在包括通过相同或不同的施用途径或者在相同或不同的时间施用多种药剂的治疗方案。
术语“稀释剂”是指用于在递送前稀释目标化合物的化学化合物。稀释剂也可用于稳定化合物，因为它们可提供更稳定的环境。利用溶解于缓冲溶液(其也可提供pH控制或维持)中的盐作为本领域的稀释剂，包括但不限于磷酸盐缓冲盐溶液。
本文使用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以在一定程度上缓解所治疗的疾病或病状的一种或多种症状的药剂或化合物的给药量。结果可以是疾病的体征、症状或起因的减轻和/或缓解，或者生物系统的任何其它期望的变化。例如，用于治疗性应用的“有效量”是包含本文公开的化合物的组合物的量，该量是导致疾病症状的临床上显著的减轻所需要的。在任何单独情况下，适当的“有效”量可以使用例如剂量递增研究等技术来确定。
本文使用的术语“增强”是指所需效果的效力或持续时间的提高或延长。因此，关于增强治疗剂的效果，术语“增强”是指在效力或持续时间方面提高或延长其它治疗剂对系统的效果的能力。本文使用的“增强有效量”是指足以增强另一种治疗剂在所需系统中的效果的量。
本文公开的化合物的“代谢物”是化合物代谢时形成的该化合物的衍生物。术语“活性代谢物”是指化合物代谢时形成的该化合物的生物活性衍生物。本文使用的术语“代谢”是指特定物质被生物体改变的过程(包括但不限于水解反应和酶催化的反应)的总和。因此，酶可以对化合物产生特定的结构改变。例如，细胞色素P450催化多种氧化和还原反应，而尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶催化活化的葡糖醛酸分子向芳香醇、脂肪醇、羧酸、胺和游离巯基的转移。任选地通过对宿主施用化合物并分析来自宿主的组织样品，或者通过化合物与肝细胞一起在体外孵育并分析得到的化合物，来鉴定本文公开的化合物的代谢物。
本文使用的术语“药物组合”是指通过混合或组合超过一种活性成分而得到的产物，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指将活性成分例如化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)和联合药剂以单一实体或剂量形式同时施用于患者。术语“非固定组合”是指将活性成分例如化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)和联合药剂作为单独的实体同时、并行地或相继地施用于患者，而没有具体的间隔时间限制，其中这样的施用在患者体内提供这两种化合物的有效水平。后者也应用于鸡尾酒疗法，例如三种或更多种活性成分的施用。
术语“药物组合物”是指化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)与诸如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂等其它化学组分的混合物。药物组合物有利于将化合物施用于生物体。本领域存在多种施用化合物的技术，包括但不限于：静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、经眼、经肺和局部给药。
术语“受试者”或“患者”包括哺乳动物。哺乳动物的例子包括但不限于哺乳纲的任何成员：人，非人灵长类动物，例如黑猩猩以及其它猿和猴物种；农场动物，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家畜，例如兔、狗和猫；实验动物，包括啮齿动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等等。在一个实施方案中，哺乳动物是人。
本文使用的术语“治疗”包括预防性地和/或治疗性地缓解、消除或改善疾病或病状的至少一种症状，预防另外的症状，抑制疾病或病状，例如阻止疾病或病状的发展、缓解疾病或病状、使疾病或病状消退、缓解疾病或病状引起的状况，或者终止疾病或病状的症状。
给药途径
合适的给药途径包括但不限于口服、静脉内、直肠、气雾剂、肠胃外、经眼、经肺、经粘膜、透皮、经阴道、经耳、经鼻和局部给药。另外，仅举例来说，肠胃外递送包括肌肉内、皮下、静脉内、髓内注射以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴管内和鼻内注射。
在某些实施方案中，如本文所述的化合物通常在储库型制剂(depot preparation)或持续释放制剂中，以局部而不是全身方式给药，例如，通过将化合物直接注射到器官中来给药。在特定实施方案中，通过植入(例如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射来施用长效制剂。此外，在其它实施方案中，在靶向药物递送系统中，例如，在用器官特异性抗体包被的脂质体中递送药物。在此类实施方案中，脂质体靶向至器官并且被器官选择性吸收。在另外的实施方案中，如本文所述的化合物以快速释放制剂形式、以延长释放制剂形式或以立即释放制剂形式提供。在另外的实施方案中，局部施用本文所述的化合物。
药物组合物/制剂
在一些实施方案中，将本文所述的化合物配制成药物组合物。在特定实施方案中，使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制药物组合物，该生理学上可接受的载体包括赋形剂和辅剂，其有助于将活性化合物加工为可以药用的制剂。合适的制剂取决于选定的给药途径。任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂均可适当地用于配制本文所述的药物组合物：Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第十九版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995);Hoover,John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences,MackPublishing Co.,Easton,Pennsylvania1975;Liberman,H.A.和Lachman,L.编,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980;以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第七版(Lippincott Williams & Wilkins1999)。
本文提供了包含化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物。在某些实施方案中，如同在联合疗法中一样，所述化合物以药物组合物形式给药，在该药物组合物中化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)与其它活性成分相混合。本文包括在以下联合疗法章节中和整个公开内容中所阐述的活性成分的所有组合。在特定实施方案中，药物组合物包含一种或多种化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)。
本文使用的药物组合物是指化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)与其它化学组分如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。在某些实施方案中，药物组合物有助于将化合物施用于生物体。在一些实施方案中，为实施本文提供的治疗或使用方法，将治疗有效量的化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)以药物组合物的形式施用于患有待治疗的疾病或病状的哺乳动物。在特定实施方案中，该哺乳动物是人。在某些实施方案中，治疗有效量根据疾病的严重程度、受试者的年龄及相对健康状况、所使用的化合物的效力及其它因素而变化。此外，本文所述的化合物单独使用，或与一种或多种作为混合物成分的治疗剂联合使用。
在一个实施方案中，将化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)配制成水溶液。在特定实施方案中，仅举例来说，水溶液选自生理学上相容的缓冲液，如汉克氏溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。在其它实施方案中，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)配制为供经粘膜给药。在特定实施方案中，经粘膜制剂包括适合于待渗透的屏障的渗透剂。在配制本文所述的化合物以供其它肠胃外注射的其它实施方案中，合适的制剂包括水性或非水性溶液。在特定实施方案中，这类溶液包括生理学上相容的缓冲液和/或赋形剂。
在另一个实施方案中，本文所述的化合物配制为供口服给药。包括化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)在内的本文所述的化合物通过将活性化合物与例如药学上可接受的载体或赋形剂混合而进行配制。在各种实施方案中，将本文所述的化合物配制成口服剂型，仅举例来说，其包括片剂、粉末剂、丸剂、糖锭剂、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、酏剂、膏剂、混悬剂等。
在某些实施方案中，供口服使用的药物制剂通过以下步骤获得：将一种或多种固体赋形剂与一种或多种本文所述的化合物混合，任选地研磨获得的混合物，在加入合适的辅料(如果需要)后，加工颗粒的混合物，以获得片剂或糖锭剂核心。特别地，合适的赋形剂是：填充剂，如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或其它物质，如聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。在特定实施方案中，任选地添加崩解剂。仅举例来说，崩解剂包括：交联羧甲纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐如藻酸钠。
在一个实施方案中，诸如糖锭剂核心和片剂等剂型具有一层或多层合适的包衣。在特定实施方案中，使用浓缩糖溶液来包覆剂型。糖溶液任选地包含其它成分，仅举例来说，例如阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶(carbopol gel)、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料和/或色素也任选地添加至包衣中以用于辨识目的。此外，任选地使用染料和/或色素来标示活性化合物剂量的不同组合。
在某些实施方案中，治疗有效量的至少一种本文所述的化合物配制成其它口服剂型。口服剂型包括由明胶制成的推入配合式胶囊以及由明胶和塑化剂(如甘油或山梨糖醇)制成的密封软胶囊。在特定实施方案中，推入配合式胶囊含有与一种或多种填充剂混合的活性成分。仅举例来说，填充剂包括乳糖，诸如淀粉的粘合剂，和/或诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂，和任选的稳定剂。在其它实施方案中，软胶囊含有一种或多种溶解或悬浮在合适的液体中的活性化合物。仅举例来说，合适的液体包括一种或多种脂肪油、液体石腊或液态聚乙二醇。此外，任选地添加稳定剂。
在其它实施方案中，治疗有效量的至少一种本文所述的化合物配制为用于含服或舌下给药。仅举例来说，适合含服或舌下给药的制剂包括片剂、锭剂或凝胶剂。在其它实施方案中，本文所述的化合物配制为用于肠胃外注射，包括适合推注或连续输注的制剂。在特定的实施方案中，注射用制剂在单位剂型(例如，在安瓶中)或多剂量容器中提供。任选地向注射制剂中添加防腐剂。在其它实施方案中，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的药物组合物以适合于肠胃外注射的形式配制为在油性或水性载体中的无菌悬浮液、溶液或乳液。肠胃外注射制剂任选地含有配制用剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。在特定实施方案中，用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。在其它实施方案中，活性化合物的悬浮液制备成合适的油性注射悬浮液。仅举例来说，用于本文所述的药物组合物中的合适的亲脂性溶剂或载体包括诸如芝麻油的脂肪油，或诸如油酸乙酯或甘油三酯的合成脂肪酸酯，或脂质体。在某些特定实施方案中，水性注射悬浮液含有可增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，悬浮液含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解度以便允许制备高度浓缩溶液的试剂。或者，在其它实施方案中，活性成分为粉末形式，以在使用前用合适的载体(例如无菌无热原水)配制。
在一个方面，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)制备为如本文所述的或本领域已知的用于肠胃外注射的溶液，并且使用自动注射器施用。自动注射器是已知的，如美国专利4,031,893、5,358,489、5,540,664、5,665,071、5,695,472和WO/2005/087297(其各自的公开内容通过引用并入本文)中所公开的自动注射器。通常，所有自动注射器都含有一定体积的待注射溶液，该溶液包含化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)。通常，自动注射器包括：用于容纳溶液的储器，该储器与针头流体连通以用于递送药物；以及用于自动部署针头的机构，该机构将针头插入患者并将剂量递送至患者体内。示例性的注射器提供约0.3mL、0.6mL、1.0mL或其它适当体积的溶液，其浓度约为每1mL溶液含有0.5mg至50mg的化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)。每个注射器能够仅递送一个剂量的化合物。
在其它实施方案中，局部施用化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)。本文所述的化合物配制成多种可局部给药的组合物，如溶液、悬浮液、洗液、凝胶、糊剂、药棒、香膏、乳膏或软膏。此类药物组合物任选地含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
在另外的其它实施方案中，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)配制为用于透皮给药。在特定实施方案中，透皮制剂采用透皮递送装置和透皮递送贴剂，并且可以是溶解和/或分散于聚合物或粘合剂中的亲脂性乳液或水性缓冲溶液。在各种实施方案中，构建这样的贴剂，以用于药物制剂的连续、脉冲或按需递送。在其它实施方案中，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的透皮递送通过离子电渗贴剂或类似方式来完成。在某些实施方案中，透皮贴剂提供化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的受控递送。在特定实施方案中，通过使用速率控制膜或通过将化合物捕获在聚合物基质或凝胶中来减缓吸收速率。在备选的实施方案中，使用吸收促进剂来增强吸收。吸收促进剂或载体包括帮助穿过皮肤的可吸收的药学上可接受的溶剂。例如，在一个实施方案中，透皮装置为绷带的形式，其包含：背衬部件，包含化合物以及任选地包含载体的储库，任选的用于在延长的时间段内以受控和预定的速率将化合物递送至宿主皮肤的速率控制屏障，以及将该装置固定于皮肤上的工具。
本文所述的透皮制剂可使用多种本领域已经描述的装置进行给药。例如，此类装置包括但不限于美国专利3,598,122、3,598,123、3,710,795、3,731,683、3,742,951、3,814,097、3,921,636、3,972,995、3,993,072、3,993,073、3,996,934、4,031,894、4,060,084、4,069,307、4,077,407、4,201,211、4,230,105、4,292,299、4,292,303、5,336,168、5,665,378、5,837,280、5,869,090、6,923,983、6,929,801和6,946,144中所述的装置。
本文所述的透皮剂型可掺入某些本领域常规的、药学上可接受的赋形剂。在一个实施方案中，本文所述的透皮制剂包含至少三种成分：(1)化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的制剂；(2)渗透促进剂；和(3)水性佐剂。此外，透皮制剂还可包含其它成分，例如但不限于：胶凝剂、乳膏和软膏基质等。在一些实施方案中，透皮制剂进一步包含织造或非织造的背衬材料，以增强吸收并防止透皮制剂从皮肤上脱离。在其它实施方案中，本文所述的透皮制剂维持饱和或过饱和状态，以促进向皮肤内的扩散。
在其它实施方案中，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)配制为用于通过吸入给药。各种适合通过吸入给药的形式包括但不限于气雾剂、薄雾剂(mist)或粉末。化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的药物组合物方便地利用合适的推进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)从加压包或雾化器以气雾喷雾形式递送。在特定实施方案中，加压气溶胶的剂量单位通过设置用来递送计量的量的阀来确定。在特定实施方案中，仅举例来说，配制例如在吸入器或吹药器中使用的明胶胶囊和药筒，其含有化合物和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
鼻内制剂是本领域已知的，并且在例如美国专利4,476,116、5,116,817和6,391,452(各自特别地通过引用并入本文)中描述。使用苯甲醇或本领域已知的其它合适的防腐剂、氟碳化合物和/或其它增溶剂或分散剂，将根据这些和其它本领域公知技术制备的、包含化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的制剂在盐水中制备成溶液。例如，参见Ansel,H.C等人.Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystem,第六版(1995)。优选地，这些组合物和制剂用合适的药学上可接受的无毒成分制备。这些成分可见于许多资料中，如本领域中的标准参考书REMINGTON:THE SCIENCE AND PRACTICE OFPHARMACY，第21版,2005。合适的载体的选择高度取决于期望的经鼻剂型的确切性质，例如：溶液、悬浮液、软膏或凝胶。经鼻剂型除活性成分外通常含有大量的水。也可存在少量的其它成分，如pH调节剂、乳化剂或分散剂、防腐剂、表面活性剂、胶凝剂或缓冲剂及其它稳定剂和增溶剂。优选地，经鼻剂型应当与鼻分泌物等渗。
对于吸入给药，本文所述的化合物可以是气雾剂、薄雾剂或粉末的形式。本文所述的药物组合物方便地利用合适的推进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)从加压包或雾化器以气雾喷雾形式递送。在加压的气雾剂的情况下，可以通过设置用来递送计量的量的阀来确定剂量单位。仅举例来说，可以配制例如在吸入器或吹药器中使用的明胶胶囊和药筒，其含有本文所述的化合物和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
在另外的其它实施方案中，化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)配制为直肠组合物，如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等的灌肠剂、直肠凝胶剂、直肠泡沫剂、直肠气雾剂、栓剂、胶状栓剂或保留灌肠剂。在组合物的栓剂形式中，首先熔化低熔点蜡，例如但不限于任选地与可可脂组合的脂肪酸甘油酯的混合物。
在某些实施方案中，使用一种或多种包含有助于将活性化合物加工成可药用制剂的赋形剂和助剂的生理学上可接受的载体，以任何常规方式配制药物组合物。合适的制剂取决于选定的给药途径。适当的且如本领域所理解的，任选地使用任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂。包含化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的药物组合物可以以常规的方式生产，例如，仅举例来说，通过常规混合、溶解、制粒、制锭、磨细、乳化、胶囊化、捕获或压制工艺生产。
药物组合物包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂以及作为活性成分的至少一种本文所述的化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)。活性成分为游离酸或游离碱的形式，或为药学上可接受的盐的形式。此外，本文所述的方法和药物组合物包括使用晶形(也被称为多晶型物)以及这些化合物的具有相同活性类型的活性代谢物。本文所述的化合物的所有互变异构体也包括在本文所述化合物的范围内。此外，本文所述的化合物包括非溶剂化的形式以及用药学上可接受的溶剂如水、乙醇等溶剂化的形式。本文提出的化合物的溶剂化形式也被认为在此公开。此外，药物组合物任选地包含其它医用或药用试剂、载体、佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用以调节渗透压的盐、缓冲液和/或其它具有治疗价值的物质。
用于制备包含本文所述化合物的组合物的方法包括将该化合物与一种或多种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体一起配制，以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括但不限于粉末、片剂、可分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂。液体组合物包括化合物溶解于其中的溶液、包含化合物的乳液或包含含有如本文公开的化合物的脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液。半固体组合物包括但不限于凝胶、悬浮液和乳膏。本文所述的药物组合物的形式包括液体溶液或悬浮液，适于使用前在液体中溶解或悬浮的固体形式，或乳液。这些组合物任选地也含有少量的无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等等。
在一些实施方案中，包含至少一种化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的药物组合物说明性地采用液体形式，其中药剂存在于溶液中、悬浮液中或两者中。一般当组合物作为溶液或悬浮液给药时，药剂的第一部分存在于溶液中，而药剂的第二部分则以颗粒形式悬浮在液态基质中。在一些实施方案中，液体组合物包括凝胶制剂。在其它实施方案中，液体组合物是水性的。
在某些实施方案中，水性药物悬浮液包含一种或多种聚合物作为悬浮剂。聚合物包括诸如纤维质聚合物(例如：羟丙甲基纤维素)的水溶性聚合物以及诸如交联的含羧基聚合物的非水溶性聚合物。本文所述的某些药物组合物包含粘膜粘附聚合物，其选自例如：羧甲基纤维素、卡波姆(carbomer)(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、藻酸钠和葡聚糖。
药物组合物也任选地包含增溶剂，以有助于化合物(即本文所述的环己烯酮化合物)的溶解度。术语“增溶剂”通常包括导致形成药剂的胶束溶液或真溶液的试剂。某些可接受的非离子型表面活性剂如聚山梨酯80的可用作增溶剂，也可使用眼部可接受的二醇、聚二醇(例如聚乙二醇400)和二醇醚。
此外，药物组合物任选地包含一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；和缓冲剂，如柠檬酸盐(酯)/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。以维持组合物的pH处于可接受范围内所需的量包含此类酸、碱和缓冲剂。
此外，药物组合物任选地以使组合物的渗透压摩尔浓度处于可接受范围内所需的量包含一种或多种盐。此类盐包括含有钠、钾或铵阳离子以及氯、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
其它药物组合物任选地包含一种或多种防腐剂，以抑制微生物的活性。合适的防腐剂包括：含汞物质如硼酸苯汞(merfen)和硫柳汞(thiomersal)；稳定化的二氧化氯；以及季铵化合物如苯扎氯铵、西曲溴铵和西吡氯铵。
另外的其它药物组合物包含一种或多种表面活性剂，以增强物理稳定性或用于其它目的。合适的非离子型表面活性剂包括：聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；以及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯昔醇10(octoxynol10)、辛苯昔醇40。
另外的其它药物组合物可包含一种或多种抗氧化剂，以在需要时增强化学稳定性。仅举例来说，合适的抗氧化剂包括抗坏血酸和焦亚硫酸钠。
在某些实施方案中，药物组合物水性悬浮液包装于不可重复封闭的单剂量容器中。或者，使用可重复封闭的多剂量容器，在这种情况下，通常在组合物中包含防腐剂。
在备选的实施方案中，使用其它用于疏水性药物化合物的递送系统。脂质体和乳液是本文的递送媒介或载体的实例。在某些实施方案中，也使用有机溶剂如N-甲基吡咯烷酮。在另外的实施方案中，使用持续释放系统，如含有治疗剂的固态疏水性聚合物的半渗透性基质，来递送本文所述的化合物。各种持续释放材料在此处是有用的。在一些实施方案中，持续释放胶囊释放化合物数小时，最多超过24小时。根据治疗剂的化学性质及生物稳定性，可使用另外的蛋白质稳定策略。
在某些实施方案中，本文所述的制剂包含一种或多种抗氧化剂、金属螯合剂、含巯基化合物和/或其它普通稳定剂。这类稳定剂的实例包括但不限于：(a)约0.5%至约2%w/v的甘油，(b)约0.1%至约1%w/v的甲硫氨酸，(c)约0.1%至约2%w/v的单硫代甘油，(d)约1mM至约10mM的EDTA，(e)约0.01%至约2%w/v的抗坏血酸，(f)0.003%至约0.02%w/v的聚山梨酯80，(g)0.001%至约0.05%w/v的聚山梨酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(l)多硫酸戊聚糖酯及其它类肝素，(m)二价阳离子如镁离子和锌离子；或(n)它们的组合。
实施例
实施例1.示例性化合物1的制备
示例性化合物1(即Antroq)是按照已知的方法从牛樟芝的固态发酵菌丝体中分离得到的(Lee等人,Planta Med,73:1412-1415,2007)。基于以前的研究及使用经验，化合物1在10-50mg/kg体重的范围内是有效的(Chang等人,Evid Based Complement Alternat Med,2008)。除非另有说明，否则在以下实验中使用50mg/kg体重的化合物1的剂量。
或者，示例性化合物1可由4-羟基-2,3-二甲氧基-6-甲基环己-2,5-二烯酮等制备。
同样地，具有结构的其它环己烯酮化合物是从牛樟芝中分离的或由适当的起始材料经合成或半合成方式制备的。本领域普通技术人员将很容易地利用合适的条件来进行这种合成。
实施例2.FSGS模型及试验方案的确立
对8周龄的雌性BALB/c小鼠进行本文所述的试验。对FSGS小鼠静脉内注射单剂量的阿霉素(0.1mg/10g体重)。在处死小鼠前，每日在注射阿霉素前6小时通过管饲法给予小鼠化合物1。腹膜内注射生理盐水的BALB/c小鼠用作正常对照，而通过管饲法给予载体(玉米油)的ASLN小鼠用作疾病对照。在疾病诱导后的第7、14或21天处死小鼠，收集脾脏、肾皮质组织和血液样品，并在分析之前适当储存。所有动物试验都是在Institutional Animal Care and Use Committeeof The National Defense Medical Center的伦理批准下进行的，并且按照NIH试验动物管理及使用指南中的伦理准则进行。
临床和肾功能评价
在第3、7、14和21天在代谢笼中收集尿样，并如以前所述测定尿蛋白质(Shui等人,Nephrol Dial Transplant,21:1794-1802,2006)。在第7、14或21天处死小鼠时收集血清样品以测定BUN和Cr的血清水平。
病理学评价
如Shui等人所述制备经福尔马林固定和石蜡包埋的肾切片，以进行肾病理学评价(Shui等人,Transl Res,150:216-222,2007)。根据Shui公开的已知方法进行肾病理学评价和肾病变评分。为了评价EPHL和硬化，每个案例在肾组织切片中至少检查50个肾小球。根据以前公开的方法，将具有EPHL的肾小球的数目表示为所评价的肾小球总数的百分比(参见，例如Shui等人,Nephrol Dial Transplant,21:1794-1802,2006；Ka等人,Nephrol Dial Transplant,21:288-298,2006)。
对于IHC，制备经福尔马林固定和石蜡包埋的肾切片，并与抗小鼠结蛋白(Lab Vision,CA,USA)、CD3(全-T细胞；Serotec,NC,USA)、F4/80(单核细胞/巨噬细胞；Serotec)、IL-6(R&D Systems,MN,USA)、NF-κB p65(Cell Signaling Technology,MA,USA)、胶原蛋白I、III和IV(Southern Biotech,AL,USA)或TGF-β1(Santa CruzBiotechnology,CA,USA)的第一抗体、生物素化的第二抗体(Dako,Glostrup,Denmark)和抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物(Dako)一起孵育。对染色进行半定量评价。
实施例3.ROS和NO测定
根据已知方法通过DHE标记测定肾原位超氧阴离子的产生(Wu等人,Nephrol Dial Transplant,2008,23:3082-3090或Ka等人,J.Am.Soc.Nephrol.2007,18:2473-2485)。通过计算每个肾脏横切面的全部核中的阳性核的百分比，对荧光图像进行定量。根据已知方法估计血清和肾组织的超氧阴离子(Wu等人,J Pineal Res,2001,30:147-156或Ka等人,J.Am.Soc.Nephrol.2007,18:2473-2485)。对于血清、尿和肾组织的ROS水平，样品与Krebs-HEPES缓冲液一起孵育，并且将1.25mM的光泽精(lucigenin)(Sigma-Aldrich Chemical Co,MO)用作底物。如以前所述(Kretzler等人.Virchows Arch,425:181-193,1994)，通过微孔板光度计(Hidex Microplate Luminometer,Finland)以15秒的间隔一式两份地获得发光计数。超氧阴离子活性表示为每mg器官干重每15分钟的相对发光单位(RLU)(即，RUL/15min/mg)或RLU/15min/ml。
根据生产商的说明书，基于重氮化作用(Griess法)，使用NO检测试剂盒(iNtRON Biotechnology,Seongnam,Korea)检测血清中的NO水平。
实施例4.肾脏中细胞GPx活性的测定
根据生产商的说明书，使用商业谷胱甘肽过氧化物酶分析试剂盒(Cayman,MI,USA)测定肾组织中的GPx活性。酶活性相对于肾小球匀浆的蛋白质浓度进行表示。
实施例5.对Nrf2和p47 phox 的Western印迹分析
根据生产商的说明书，使用核提取试剂盒(Nuclear Extract Kit)(Active Motif,Tokyo,Japan)提取肾组织的细胞质及细胞核蛋白质的制品。使用抗小鼠Nrf2或p47phox(Santa Cruz)的兔抗体，通过Western印迹分析测定肾组织的细胞质和/或细胞核部分中的靶蛋白。抗组蛋白H3(Cell Signaling,CO,USA)和β-肌动蛋白(Santa Cruz)的抗体分别用于测定细胞核和细胞质靶蛋白的持家蛋白。
实施例6.TGF-β1的测定
根据生产商的说明书，使用商业ELISA试剂盒(R&D Systems)测定血清和肾组织中的TGF-β1蛋白质水平。将样品用1N HCl酸化并用1.2N NaOH/0.5M HEPES中和，以测定TGF-β1的量。
实施例7：B细胞缺陷小鼠中的AcP-IgAN模型
B细胞缺陷小鼠(B6.129S2-Igh-6tm1Cgn/J)从台湾中央研究院(John T.Kung教授，分子生物学研究所)获得，并饲养于台湾台北国防医学中心(National Defense Medical Center,Taipei,Taiwan)动物中心。如以前所述(Chao等人,Kidney Int.70:283-297;2006)，通过每天注射纯化的IgA抗磷酸胆碱抗体和肺炎球菌C-多糖(PnC)在小鼠中诱导AcP-IgAN。所有动物试验都在台湾国防医学中心动物管理及使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee of The NationalDefense Medical Center,Taiwan)的批准下进行，并且符合NIH试验动物管理及使用指南。
临床及病理学评价
每周测量小鼠的体重。每周在代谢笼中收集尿样，并按照已知方法测定尿蛋白质(Chao等人,Kidney Int.70:283-297;2006)。在第3天和第28天收集血清样品以测定血尿氮素(BUN)和肌酸酐(Cr)的血清水平。
对于肾组织病理学，将组织在10%缓冲福尔马林中固定并包埋于石蜡中，然后制备切片(4μm)，并用苏木精和伊红(H&E)进行染色。通过放大倍数为400x的光学显微镜检查，计数50个随机采样的肾小球中显示出增殖、半月体形成、硬化或肾小球周围炎症的肾小球的比例。
实施例8：免疫荧光(IF)、免疫组织化学(IHC)及细胞凋亡的检测
对于IF，如以前所述制备冷冻的肾组织，并与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联的山羊抗小鼠IgA或C3抗体(Cappel,NC)一起孵育。如Chao等人,Kidney Int.70:283-297(2006)中所述对染色强度进行评分。
对于IHC，经福尔马林固定和石蜡包埋的组织切片或冷冻切片与抗IL-6(R&D Systems,MN)、MCP-1(Santa Cruz,CA)、F4/80(单核细胞/巨噬细胞；Serotec,NC)、胶原蛋白IV(Southern Biotech,AL)、TGF-β1(Santa Cruz)、磷酸-NFκB p65(Cell Signaling,MA)、CD3(全-T细胞；Serotec)、CD4(T辅助细胞；BioLegend,CA)、CD8(细胞毒性T细胞)、CD11b(巨噬细胞/嗜中性粒细胞)或CD11c(树突细胞)(BDBiosciences,CA)抗体一起孵育。然后将FITC-偶联的、Alexa Fluor488-偶联的(Invitrogen,CA)或辣根过氧化物酶(HRP)偶联的第二抗体(DAKO,Denmark)应用于切片。在细胞核的对比染色中使用苏木精或4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAKO)。
对于细胞凋亡的检测，使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)。根据生产商的说明书，用原位细胞凋亡检测试剂盒(Chemicon,CA)中的ApopTag和过氧化物酶对经福尔马林固定和石蜡包埋的组织切片进行染色。对于评分，检查肾皮质区域(包括肾小球和肾小球周围区域)并将其表示为细胞/肾小球横切面。
实施例9：流式细胞术
将来自小鼠的脾细胞用Tris缓冲的氯化铵处理以清除红细胞，洗涤，重悬于补充有10%胎牛血清、HEPES缓冲液、L-谷氨酰胺和青霉素/链霉素(全部来自Invitrogen)的RPMI1640中。用针对T或B细胞活化的表面标志对细胞进行染色。FITC偶联的抗小鼠CD3、CD4、CD8或CD19(B细胞)抗体和藻红蛋白(PE)偶联的抗小鼠CD69抗体(全部来自BD Biosciences)用FACSCalibur(BD Biosciences)进行分析。
实施例10：T细胞增殖分析
如上所述准备来自小鼠的脾细胞，然后一式三份培养在96孔平底微量滴定板的孔(5×105个细胞，200μl/孔)中，该滴定板预先以0.25μg/ml的抗小鼠CD3抗体(BD Biosciences)于4℃下包被过夜。48小时后，用1μCi的3H-甲基胸苷(Amersham Pharmacia Biotech,NJ)脉冲处理培养物，16小时后收获，并使用TopCount(Packard,PerkinElmer,MA)测定掺入的3H-甲基胸苷。
实施例11：IL-1β、IL-6、IL-18和MCP-1的酶联免疫吸附测定(ELISA)
根据生产商的说明书，使用商业ELISA试剂盒测定IL-1β(eBiosceience,CA)、IL-6(eBiosceience)、IL-18(MBL,Japan)和MCP-1(eBiosceience)的血清水平。
使用细胞核提取试剂盒(Active Motif,Japan)提取核蛋白。根据生产商的说明书，使用Trans-AM ELISA分析试剂盒(Active Motif)测定肾组织核蛋白提取物中的磷酸-NF-κB p65和核因子-类红细胞-2-相关因子2(NrF2)。使用RIPA缓冲液(Cell signaling)提取肾细胞溶质蛋白质。根据生产商的说明书，使用商业ELISA试剂盒测定细胞溶质谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)(Cayman,MI)和细胞溶质血红素加氧酶1(HO-1)(Enzo Life Sciences,NY)。两者都相对于裂解液中的蛋白质浓度进行表示。
在所有ELISA中，使用ELISA读板仪(Bio-Tek,MA)测量450nm下的吸光度。
实施例12：实时PCR分析
用TriZOL试剂(Invitrogen)从肾皮质组织中提取总皮质肾RNA。对于第一链cDNA合成，在单轮逆转录酶反应中使用1.5μg的总RNA。反应混合物由0.9μl的Oligo(dT)12至18引物、1.0mM的脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、1μl的第一链缓冲液、0.4mM的二硫苏糖醇、80U的RNaseout重组核糖核酸酶抑制剂和300U的superscript IIRNase H(Invitrogen)组成。实时PCR在ABI Prism7700SequenceDetection System(Applied Biosystems,CA)上进行。所有探针和引物都是Assays-on-Demand Gene的表达产物(Applied Biosystems)。实时PCR反应使用在25μl总体积中混合的10μl的cDNA、12.5μl的TaqManUniversal PCR Master Mix(Applied Biosystems)和1.25μl的特异性探针/引物。热循环条件如下：50℃下2分钟，95℃下10分钟，40个循环的变性(95℃下15秒)以及合并的退火/延伸(60℃下1分钟)。
实施例13：Western印迹分析
每种蛋白质样品都在10%SDS-PAGE凝胶上运行。将凝胶电转印到聚偏二氟乙烯硝酸纤维素膜(Amersham Int.,UK)上；在封闭缓冲液(含5%脱脂牛奶的Tris缓冲盐水)中孵育1小时；并与兔抗nacht域、富含亮氨酸的重复序列和含热蛋白域(PYD)的蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1或β-肌动蛋白(全部来自Santa Cruz)的抗体于4℃下孵育过夜。洗涤后，膜与HRP偶联的山羊抗兔(DAKO)抗体于室温下孵育1h。所检测到的膜结合抗体与化学发光试剂+(PerkinElmer Life Sciences,MA)一起孵育，并捕获于X射线胶片上。
实施例14.数据分析
结果表示为平均值±SEM。使用Student t检验进行两组之间的比较。使用用于事后分析的Tukey法，以单因素方差分析(ANOVA)确定多组之间的差异。p值＜0.05被认为具有统计学意义。
FSGS模型
作为疾病对照，用载体处理的FSGS小鼠(即，对照FSGS小鼠)从处理第7天开始显示出尿蛋白质水平升高，并持续上升直到第21天研究结束(见图1A)。在化合物1治疗的FSGS小鼠(FSGS+Antroq小鼠)中这种效果受到极大的抑制，其中尿蛋白质水平与正常对照小鼠的尿蛋白质水平相似。此外，与对照FSGS小鼠(其从第14天至第21天显示出血清血尿素氮(BUN)水平(图1B)和血清肌酸酐(Cr)水平(图1C)显著且持续升高)相比，FSGS+Antroq(即，化合物1)小鼠展现出更好的肾功能。在第7天，正常对照、对照FSGS和FSGS+Antroq小鼠之间的BUN水平或Cr水平无显著性差异。
在各个时间点对肾脏切片进行组织病理学检查(图2A)。与正常对照小鼠相比，在对照FSGS小鼠中，于第7天偶然发现细胞外基质的扩张和肾小球中透明蛋白团(hyaline mass)的沉积，并且它们从第14天至第21天变成明显的硬化病变。重要的是，小鼠从第14天至第21天展现出含有EPHL的肾小球的百分比以及肾小球周围单核白细胞浸润的显著且稳定的增加，提示进行性病理学状态。相反，在FSGS+Antroq小鼠中，这些进行性肾病变大幅减少。此外，已提出足细胞损伤和损失作为FSGS发展中的关键的病原性事件。为了评价在Antroq治疗FSGS期间的足细胞表型的改变，我们通过免疫组织化学(IHC)研究了结蛋白(一种足细胞特异性的标志)的表达。如图2B中所示，与对照FSGS小鼠相比，FSGS+Antroq小鼠在第14和第21天显示出结蛋白的表达显著降低，但与正常对照小鼠相比，在第21天观察到轻度结蛋白表达水平。
这些结果显示示例性化合物1改善了蛋白尿、肾功能和肾病变，包括上皮增生性病变(EPHL)，这是肾小球损伤的一项重要指标。
血清和尿中氧化应激的系统性抑制
第7天和第14天对照FSGS小鼠(FSGS+载体)中的血清超氧阴离子水平与正常对照小鼠相比显著增加，随后于第21天略有降低，但仍高于正常对照小鼠。施用示例性化合物1(Antroq)从第7天至第21天有效地将超氧阴离子水平降低至与在正常对照小鼠中观察到的相似的水平(图3A)。此外，第7天对照FSGS小鼠的血清NO水平显著增加，并且在第14天和第21天仍保持高水平。当向FSGS小鼠(FSGS+Antroq)施用示例性化合物1时，高血清NO水平得到显著抑制(图3B)。与正常对照小鼠相比，FSGS对照小鼠尿中的超氧阴离子水平在第7天显著增加，并保持到第21天。相反，施用示例性化合物1显著地降低了FSGS+Antroq小鼠中的超氧阴离子的水平(图3C)。虽然对照FSGS小鼠中的尿NO水平从第14天至第21天显著地增加，但再次施用示例性化合物1有效地缓解了FSGS+Antroq小鼠中的这些效果(图3D)。在第7天，正常对照、FSGS+载体和FSGS+antroq小鼠的尿NO水平之间无可检测的差异。
对肾组织中ROS产生的局部抑制
如图3E中所示，与正常对照小鼠相比，对照FSGS小鼠肾脏中的超氧阴离子水平在第14天显著增加，并持续上升直至第21天。Antroq施用在第14天和第21天有效地将超氧阴离子的水平降低至与在正常对照小鼠中观察到的相似的水平。
为了进一步定位肾脏中的ROS产生，使用二氢乙锭(DHE)试验来分析肾组织中的原位ROS产生。如图3F中所示，从第14至第21天，DHE荧光在对照FSGS小鼠的肾脏中(主要在肾小球和一些肾小管中)显著增加，显示出与正常小鼠相比增加的原位ROS产生。相反，在第14天和第21天，在FSGS+Antroq小鼠中仅观察到非常低的DHE荧光。
Nrf2-介导的抗氧化剂信号传导途径
进一步测定肾脏中的NAD(P)H氧化酶亚单位p47phox蛋白质表达水平、Nrf2向细胞核内的易位(活化)和GPx活性，以确定Antroq对于抗氧化剂信号传导途径的影响。
如图4A和4C中所示，从第14天至第21天，对照FSGS小鼠中的NAD(P)H氧化酶亚单位p47phox的蛋白质水平显著增加，并且通过施用Antroq消除了这些效果。相反，与对照FSGS小鼠或正常对照相比，FSGS+Antroq小鼠从第14天显示出强烈增强的Nrf2向细胞核内的易位，并且这一现象在第21天仍然很高(图4B和4D)。
此外，如图4E中所示，从第7天至第21天，与正常对照小鼠相比，在对照FSGS小鼠中观察到GPx(Nrf2的下游II相酶之一)的活性显著降低。然而，与对照FSGS小鼠相比，FSGS+Antroq小鼠在第7天显示出肾脏中的GPx活性得到恢复，并保持到第21天小鼠被处死时。
这些结果表明示例性化合物1抑制了ROS/NO的产生，但增强了Nrf2活化和GPx活性。
T细胞和巨噬细胞浸润
作为炎性和促纤维化介质的主要来源的巨噬细胞和淋巴细胞的间质募集在FSGS的进展中起着重要作用1,38。接下来评价了施用示例性化合物1对肾脏中T细胞和/或单核细胞/巨噬细胞浸润的影响。与对照FSGS小鼠(其显示在第14天和第21天在肾间质的肾小球周围区域注意到明显的T细胞(CD3+)和单核细胞/巨噬细胞(F4/80+)浸润)相比，FSGS+Antroq小鼠显示出与正常对照小鼠相似的模式(图5A和5B)。
IL-6的产生
进一步测定肾脏中IL-6的产生。如图6A中通过IHC所示，IL-6的蛋白质表达早在第7天就显著增加，并持续上升直到第21天小鼠被处死。然而，与对照FSGS小鼠相比，FSGS+Antroq小鼠显示出IL-6的肾蛋白质表达水平显著降低。
NF-κB活化的阻断
研究了施用示例性化合物1对肾组织中NF-κB活化的效果。如图6B中所示，与对照FSGS小鼠(在第14天和第21天显示出核NF-κBp65表达受到显著刺激)相比，FSGS+Antroq小鼠中的NF-κB活化明显受到抑制。与IHC一致，对肾组织核蛋白提取物的ELISA分析也证明：与正常对照小鼠相比，对照FSGS小鼠中的NF-kB p65的核蛋白表达倾向于在第14天增加并在第21天显著增加。在FSGS+Antroq小鼠中，这些效果在第14天被化合物1(Antroq)的施用轻微阻断，并在第21天受到显著抑制。早在第7天，对照FSGS小鼠或FSGS+Antroq小鼠无显著性差异(图6C)。
因此，当施用本文提供的环己烯酮化合物时，肾脏中NF-kB活化的阻断提供了对炎症有益的效果。
进一步评估了施用本文提供的环己烯酮化合物对FSGS模型中的肾小球硬化的效果，重点放在纤维化相关蛋白质—胶原蛋白I、III和IV上。如图7A-C中所示，IHC证明：与正常对照小鼠相比，对照FSGS小鼠的胶原蛋白I和IV从第14天至第21天有显著的肾表达，而胶原蛋白III在第21天有显著的肾表达；并且化合物1的施用与这些蛋白质表达的显著抑制有关，这些蛋白质在FSGS+Antroq小鼠中的水平与正常对照小鼠中的水平无显著性差异。TGF-β1是肾纤维化和新月体形成中的基本生长因子和细胞因子。ELISA表明：与正常对照小鼠相比，对照FSGS小鼠的血清中(图8A)和肾组织中(图8B)的TGF-β1蛋白质在第14天显著上调，并且在第21天大幅增加。然而，施用示例性化合物1大大消除了血清和肾脏中TGF-β1蛋白质水平的增加。进一步进行IHC以确定肾组织中的TGF-β1蛋白质表达水平的变化。同样地，通过IHC所证明，FSGS+Antroq小鼠显示出显著低于对照FSGS小鼠的肾脏中的TGF-β1蛋白质表达(图8C)。因此，当使用本文提供的环己烯酮化合物时，对TGF-β1表达的抑制提供了对肾小球硬化治疗有益的效果。
IgAN模型
作为疾病对照，用载体处理的AcP-IgAN小鼠(对照AcP-IgAN小鼠)从疾病诱导的第7天开始显示出尿蛋白质水平增加，并且其持续上升直到第28天研究结束时(图9)。在用化合物1治疗的AcP-IgAN小鼠(AcP-IgAN+Antroq小鼠)中，这种效果受到极大的抑制，但与正常对照相比它们仍显示出轻度的蛋白尿。此外，与对照AcP-IgAN小鼠(其在第28天显示出显著增加的血清BUN水平(图9B)和血清肌酸酐水平(图9C))相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠显示出更好的肾功能，尽管在第3天，对照AcP-IgAN、AcP-IgAN+Antroq和正常对照小鼠之间的血清BUN和Cr水平无显著性差异。
每周记录小鼠的体重。对照AcP-IgAN和AcP-IgAN+Antroq小鼠的生长与正常对照的生长无差异。此外，任一组的所有小鼠都显示出正常的活动，并且没有毛发脱落或食欲改变的证据。
肾病理学
如图9A-E中所示，在第28天，对照AcP-IgAN小鼠在肾小球中发展出与嗜中性粒细胞浸润、局灶性但典型的新月体和/或节段性硬化相关的弥散性增生，伴有强烈的肾小球周围单核白细胞浸润和散布的肾小管萎缩(与蛋白质管型有关)，这提示了与所报道的肾脏中的肾小球组织病理学(Lai,K.N.Nephron.92:263-270(2002)；Lai等人,Nephron.69:1-8(1995)；Chen等人,J.Clin.Lab.Analysis.6:35-39(1992)；Kashem等人,Kidney Int.45:868-875(1994))和间质组织病理学(Falk等人,Kidney Int.47:177-185(1995)；van Es等人,Kidney Int.73:1426-1433(2008)；Torres等人,Kidney Int.73:327-333(2008)；Walsh等人,Clin J Am Soc.Nephrol.5:425-430(2010)；Fujinaka等人,J.Nephrol.20:357-363(2007))相比，患病肾脏的侵袭性和恶化状态。除了由肾小球免疫沉积物所导致的肾病变，在AcP-IgAN+Antroq小鼠中所有这些肾病变基本上都受到抑制。在第3天，对照AcP-IgAN小鼠开始发展病灶，但对AcP-IgAN+Antroq小鼠施用化合物1再度显著抑制了该肾组织病理学。
肾纤维化相关基因和蛋白质表达
对小鼠进行TGF-β1和Col-IV的mRNA和蛋白质水平的检测。尽管与正常对照相比，对照AcP-IgAN小鼠在第28天显示出肾脏中的TGF-β1和Col-IV的mRNA表达分别大幅增强，但对AcP-IgAN+Antroq小鼠施用化合物1大大抑制了这两种效果(图10A-D)。在第3天，在两组小鼠中仅观察到两种纤维化相关基因的基础mRNA水平。平行地，通过IHC证明，对照AcP-IgAN小鼠中的TGF-β和Col-IV蛋白质水平在第28天均大幅增加，但这种效果在AcP-IgAN+Antroq小鼠中基本被抑制。
细胞免疫与肾脏炎症
长期以来认为细胞介导的免疫与IgAN的发病机制相关。在脾细胞中执行流式细胞术以分别鉴定CD3、CD4和CD8的活化。如图11A-C中所示，与正常对照相比，早在第3天，在对照AcP-IgAN小鼠中观察到CD3+/CD69+、CD4+/CD69+或CD8+/CD69+细胞百分比明显增加，但在此后的第28天，所有的T细胞亚型均无此效果。相反，与对照AcP-IgAN小鼠相比，在AcP-IgAN+Antroq小鼠中施用化合物1在第3天诱导了CD3+/CD69+T细胞百分比的显著降低。第3天，对照AcP-IgAN和AcP-IgAN+Antroq小鼠之间的CD4+/CD69+或CD8+/CD69+T细胞百分比无显著性差异。第28天，所有3种T细胞亚型各自的百分比与正常对照无差异。如通过胸苷摄取分析所证明的，早在第3天，AcP-IgAN小鼠显示出脾细胞中CD3+T细胞的增殖较AcP-IgAN+Antroq小鼠大幅增加(图11A-C)，并且在此后的第28天，任一组小鼠均显示出与正常对照相似的接近基线的增殖水平。平行地，进行了IHC以评估在小鼠肾脏中浸润的单核白细胞的表型表达。如图12A-F中所示，与正常对照相比，第28天在对照AcP-IgAN小鼠的肾间质组织中，主要在肾小球周围区域，识别到局灶性的但强烈的CD3+(全-T)细胞(图12A-C)、CD4+Th细胞、CD8+Tc细胞、CD11c+嗜中性粒细胞、F4/80+单核细胞/巨噬细胞和CD11b+单核细胞/巨噬细胞(图12D-F)，尽管在第3天在肾脏中仅观察到极少数的炎性细胞。相反，与AcP-IgAN小鼠相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠在第28天显示出显著降低的肾脏中此类炎性细胞的浸润，并且第3天无可检测的信号，提示AcP-IgAN+Antroq小鼠的肾脏中全-T细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞的浸润。
氧化应激、Nrf2和相关途径
ROS已被认为是导致多种类型的肾脏病症(包括IgAN)的加速与恶化的主要有害化学介质。在血液中系统性地检测了ROS的表达水平，并在肾组织中局部地检测了ROS的表达水平。与正常对照相比，AcP-IgAN小鼠在第3天和第28天均显示出大幅升高的血清ROS水平，并且在第28天在尿和肾组织中ROS水平大幅升高(图13A-F)。相反，与对照AcP-IgAN小鼠相比，对AcP-IgAN+Antroq小鼠施用本发明的示例性化合物1早在第3天就导致血清ROS水平大幅降低，并于之后第28天导致血清、尿和肾组织中的ROS水平大幅降低。此外，对照AcP-IgAN小鼠早在第3天一直到第28天显示出比正常对照显著更高的尿一氧化氮(NO)水平。然而，与对照AcP-IgAN小鼠相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠在第3天和第28天均显示出显著降低的尿NO水平。虽然第3天对照AcP-IgAN小鼠与AcP-IgAN+Antroq小鼠之间的NO血清水平无显著性差异，但与对照AcP-IgAN小鼠相比，在第28天在AcP-IgAN+Antroq小鼠中观察到大幅降低的NO血清水平。
通过施用本发明的示例性化合物1，进一步研究了可能与这些发现有关的潜在的机械事件。如图14A-F中所示，与对照AcP-IgAN小鼠(伴随有mRNA和蛋白质的接近正常的基线水平)相比，从早在第3天开始一直到第28天动物被处死时，在AcP-IgAN+Antroq小鼠中发现Nrf2的mRNA和蛋白质的表达水平均大幅升高。此外，与对照AcP-IgAN小鼠相比，第28天在AcP-IgAN+Antroq小鼠的肾组织中发现谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)—Nrf2的下游蛋白质—具有显著更高的表达水平，而在第3天两组小鼠之间无差异。
促炎细胞因子的血清水平
首先，如图15B中所示，早在第3天，对照AcP-IgAN小鼠中MCP-1的血清水平显著升高，并且直到第28天动物被处死之前这种效果持续增大。相反，在AcP-IgAN+Antroq小鼠中这种效果受到很大抑制，仅显示基线水平。此外，虽然在第3天在对照AcP-IgAN、AcP-IgAN+Antroq和正常对照小鼠之间的血清IL-6水平无差异，但与显示出比正常对照显著增加的血清IL-6水平的对照AcP-IgAN小鼠相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠在第28天显示出大幅降低的IL-6血清水平(图15A)。在第28天，相对于正常对照，对照AcP-IgAN小鼠显示出显著增加的IL-1β血清水平，但在AcP-IgAN+Antroq小鼠中这种效果受到很大抑制(图15C)。在第3天，与正常对照相比，对照AcP-IgAN和AcP-IgAN+Antroq小鼠中的IL-18水平均没有可检测的增加。在第28天，在对照AcP-IgAN小鼠中观察到显著升高的IL-18血清水平，而AcP-IgAN+Antroq小鼠中血清IL-18水平受到很大抑制，尽管与正常对照相比，在第3天两组小鼠具有类似地升高的血清IL-18水平。
NLRP3炎性体活化(肾脏中)
越来越多的证据支持含有NACHT、LRR和PYD域的蛋白3(NALP3)炎性体是先天免疫应答中活跃且关键的参与者，并且与适应性免疫有关。虽然NLRP3在宿主对病原体相关分子的应答中的作用已有明确记载，但其在免疫复合物介导的肾小球病症中的作用迄今为止研究较少。由于小鼠中AcP-IgAN模型的开发涉及肾脏中局部炎症应答的增强，所以要确定NALP3炎症活化是否在AcP-IgAN小鼠中运行。在第3天和第28天，与正常对照相比，虽然在AcP-IgAN小鼠的肾脏中观察到大幅增加的NLRP3蛋白质水平，但在AcP-IgAN+Antroq小鼠中这种效果受到显著抑制。与正常对照相比，第3天对照AcP-IgAN和AcP-IgAN+Antroq小鼠中的NLRP3mRNA表达水平大幅增加，但在AcP-IgAN+Antroq小鼠中施用化合物1显示出对NLRP3mRNA表达水平没有影响。然而，与对照AcP-IgAN小鼠相比，在第28天，发现AcP-IgAN+Antroq小鼠具有显著降低的NLRP3的肾mRNA水平，对照AcP-IgAN小鼠仍显示出比正常对照显著更高的该基因的肾mRNA水平。重要的是，通过实时定量PCR分析证明，早在第3天一直到此后的第28天，AcP-IgAN+Antroq小鼠中的胱天蛋白酶-1和IL-18的肾mRNA表达水平均显著升高，但在AcP-IgAN+Antroq小鼠中这两种效果受到很大抑制(图16A-F)。平行地，施用Antroq导致与对照AcP-IgAN小鼠相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠的肾胱天蛋白酶-1蛋白质水平的增加在第3天和第28天受到大幅抑制，尽管仅在第28天观察到AcP-IgAN+Antroq小鼠中显著抑制的肾IL-18蛋白质产生。在第28天，对照AcP-IgAN小鼠显示大幅升高的IL-1β的mRNA水平，但在AcP-IgAN+Antroq小鼠中这种效果受到显著抑制，尽管在第3天所有小鼠中的肾IL-1βmRNA表达都没有可检测的增加。
肾NF-κB活化及其相关的细胞因子
基于AcP-IgAN小鼠肾脏中明显的单核白细胞浸润，肾脏中局部活跃的炎症应答似乎是响应于IgAN的加速与恶化的重要途径。在此研究并提出了NF-κB在肾脏中的作用。首先，如图17A-F中所示，与对照AcP-IgAN小鼠(与正常对照相比，其在第28天显示出显著增加的肾核NF-kB蛋白质水平)相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠显示出显著降低的肾脏中核NF-kB蛋白质水平，尽管早在第3天，与正常对照相比，对照AcP-IgAN和AcP-IgAN+Antroq小鼠的肾蛋白质水平均无可检测的增加。通过第28天对肾组织的IHC证明，与显示出显著增加的核易位的对照AcP-IgAN小鼠相比，AcP-IgAN+Antroq小鼠中显著降低的NF-kB核易位进一步证实了化合物1的效果(图17A和17B)。接下来，分别对MCP-1(图17C)和IL-6(图17D)进行肾mRNA和蛋白质表达的定量分析。与对照AcP-IgAN小鼠相比，对AcP-IgAN+Antroq小鼠施用化合物1在第28天显著降低了MCP-1和IL-6的mRNA和蛋白质的肾表达水平，尽管在第3天对照AcP-IgAN、AcP-IgAN+Antroq和正常对照小鼠之间无此效果(图17E和17F)。
肾脏中的细胞凋亡
肾脏中的细胞凋亡与IgAN的发病机理有关。如图18A-B中所示，通过TUNEL证明，与正常对照相比，第28天对照AcP-IgAN小鼠显示出肾脏中显著增加的细胞凋亡，但通过对AcP-IgAN+Antroq小鼠施用Antroq大大抑制了这一效果，尽管早在第3天在所有检查的小鼠中仅存在不显著的细胞凋亡。
实施例15：肠胃外制剂
为了制备适合通过注射给药的肠胃外药物组合物，将100mg本文所述的化合物或其盐溶解在DMSO中，然后与10mL0.9%无菌盐水混合。将该混合物加入到适合注射给药的剂量单位形式中。
实施例16：口服制剂
为了制备用于口服给药的药物组合物，将100mg示例性化合物1与100mg玉米油混合。将该混合物加入到适合口服给药的胶囊中的口服剂量单位中。
在一些情况下，将100mg本文所述的化合物与750mg淀粉混合。将该混合物加入到适合口服给药的口服剂量单位如硬明胶胶囊中。
实施例17：舌下(硬质锭剂)制剂
为了制备用于含服给药的药物组合物，如硬质锭剂，将100mg本文所述的化合物与已与1.6mL低度玉米糖浆、2.4mL蒸馏水和0.42mL薄荷提取物混合的420mg糖粉混合。将该混合物轻轻混合，并倒入模具中，以形成适合含服给药的锭剂。
实施例18：吸入组合物
为了制备用于吸入给药的药物组合物，将20mg本文所述的化合物与50mg无水柠檬酸和100mL0.9%氯化钠溶液混合。将该混合物加入到适合吸入给药的吸入递送单元如喷雾器中。
实施例19：直肠凝胶制剂
为了制备用于直肠给药的药物组合物，将100mg本文所述的化合物与2.5g甲基纤维素(1500mPa)、100mg对羟基苯甲酸甲酯(methylparapen)、5g甘油和100mL纯水混合。然后将得到的凝胶混合物加入到适合直肠给药的直肠递送单元如注射器中。
实施例20：局部凝胶组合物
为了制备局部凝胶药物组合物，将100mg本文所述的化合物与1.75g羟丙基纤维素、10mL丙二醇、10mL肉豆蔻酸异丙酯和100mLUSP级纯化酒精混合。然后将得到的凝胶混合物加入到适合局部给药的容器如管中。
实施例21：眼用溶液组合物
为了制备眼用溶液药物组合物，将100mg本文所述的化合物与溶于100mL纯水的0.9g NaCl混合，并使用0.2微米滤器进行过滤。然后将得到的等渗溶液加入到适合眼部给药的眼部递送单元如滴眼剂容器中。
虽然本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是对本领域技术人员而言显而易见的是，此类实施方案仅作为示例提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现在将会想到许多变化、改变和替代。应当理解，在实施本发明时，可以采用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案。旨在用下列权利要求限定本发明的范围，由此也涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等价物。

Claims (31)

1.一种用于治疗受试者的肾小球硬化或肾小球肾炎的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000011
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
2.一种用于减轻受试者的肾功能障碍或肾小球病变的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000012
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
3.一种用于增强受试者中的肾核因子E2相关因子2(Nrf2)活性的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000021
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
4.一种用于抑制受试者中的肾NF-κB活化和/或转化生长因子(TGF)-β1蛋白质表达的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000031
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
5.一种用于抑制受试者中的ROS/NO和/或p47phox的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000032
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
6.一种用于减少受试者中的CD3+/CD69+T细胞的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000041
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
7.一种用于增强肾脏中的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的药物组合物，包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000051
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
8.一种用于减少受试者中的促炎细胞因子的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000052
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
9.如权利要求8所述的组合物，其中所述促炎细胞因子包括MCP-1、IL-6、IL-1β、IL-18或其组合。
10.一种用于降低肾脏中的肾胱天蛋白酶-1蛋白质表达和/或抑制肾脏中的肾NLRP3活化的药物组合物，包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000061
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
11.一种用于降低肾脏中的肾NF-κB水平的药物组合物，包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000071
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
12.一种用于抑制肾脏中的细胞凋亡的药物组合物，包括向受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000072
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
13.一种用于保护或预防受试者的肾脏免于肾小球硬化和/或肾小球肾炎的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物降低肾脏中的TGF-β1蛋白质表达水平和胶原蛋白I、III和IV蛋白质积累，且具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000081
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
14.一种用于治疗受试者的局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物在肾脏中(i)增强Nrf2的活性和/或(ii)抑制NF-κB依赖性炎性及TGF-β1介导的纤维化，且具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000091
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
15.一种用于治疗受试者的肾小球肾炎的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物(i)阻断肾NLRP3炎性体活化和/或(ii)抑制T细胞活化的增加且具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000101
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
16.一种用于将受试者的免疫球蛋白A肾病(IgAN)维持在缓解期的药物组合物，包括向该受试者施用有效量的环己烯酮化合物或其药学上可接受的盐、代谢物、溶剂化物或前药，该环己烯酮化合物具有以下结构：
Figure FDA0000385088620000102
其中X和Y各自独立地为氧、NR5或硫；
R为氢或C(=O)C1-C8烷基；
R1、R2和R3各自独立地为氢、甲基或(CH2)m-CH3；
R4为NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、卤素、5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、葡糖基，其中所述5元或6元内酯、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基和葡糖基任选地被一个或多个选自NR5R6、OR5、OC(=O)R7、C(=O)OR5、C(=O)R5、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基和C1-C8烷氧基的取代基所取代；
R5和R6各自独立地为氢或C1-C8烷基；
R7为C1-C8烷基、OR5或NR5R6；
m=1-12；且
n=1-12。
17.如权利要求1所述的组合物，其中肾小球硬化是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)或结节性肾小球硬化。
18.如权利要求1所述的组合物，其中肾小球硬化是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)。
19.如权利要求1所述的组合物，其中肾小球肾炎是免疫球蛋白A肾病(IgAN)。
20.如权利要求1所述的组合物，其中所述环己烯酮化合物阻断氧化应激。
21.如权利要求20所述的组合物，其中通过降低TGF-β1和细胞外基质蛋白表达来阻断所述氧化应激。
22.如权利要求1所述的组合物，其中所述环己烯酮化合物减少所述受试者中的CD3+/CD69+T细胞或促炎细胞因子。
23.如权利要求22所述的组合物，其中所述促炎细胞因子包括MCP-1、IL-6、IL-1β、IL-18或其组合。
24.如权利要求2所述的组合物，其中所述肾小球病变包含上皮增生性病变(EPHL)。
25.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述化合物从牛樟芝中分离而来。
26.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R为氢或C(=O)CH3。
27.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R1为氢或甲基。
28.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R2为氢或甲基。
29.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中R4为CH2CH=C(CH3)2。
30.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述化合物为
Figure FDA0000385088620000121
31.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述受试者是人。
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