CN103458690B - 治疗肺动脉高压的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含治疗有效量的安立生坦或其药学上可接受的盐和他达拉非或其药学上可接受的盐的制剂，以及通过给药所述制剂以治疗和/或预防肺动脉高压的方法。

Description

治疗肺动脉高压的组合物和方法

相关申请的引用

本申请要求于2010年10月15日提交的美国临时申请号61/393,529、于2011年5月26日提交的美国临时申请号61/490,454和于2011年6月15日提交的美国临时申请号61/497,475的权益和优选权。本段落中指定的这些申请的全部公开内容都通过引用并入本文。

技术领域

本公开涉及通过给予治疗有效量的选择性A型内皮素受体拮抗剂和磷酸二酯酶5型抑制剂以治疗和/或预防肺动脉高压的方法。本公开还涉及适于这种给药的药物制剂。

背景技术

先前已经将肺动脉高压（PH）分类为原发性（特发性）和继发性。最近，世界卫生组织（WHO）已经将肺动脉高压分类为五组：

组1：肺动脉高血压（PAH）；

组2：具有左心疾病的PH；

组3：具有肺部疾病和/或低氧血症的PH；

组4：由于慢性血栓和/或栓塞性疾病引起的PH；和

组5：杂病症（例如，结节病、组织细胞增多病X、淋巴管瘤病和肺血管压缩）。

参见例如Rubin(2004)Chest126:7-10。

肺动脉高血压（PAH）是一种特定类型的PH且是一种严重的、渐进性的且危及生命的肺血管系统疾病，其特征在于极度的血管收缩和肺动脉壁中平滑肌细胞的异常增生。肺中血管的严重收缩导致非常高的肺动脉压力。这些高压使得心脏难以泵送血液通过肺部以进行氧化。由于心脏努力地对抗这些高压进行泵送，患有PAH的患者遭受极度的呼吸短促。患有PAH的患者典型地产生肺血管阻力（PVR）的显著增加和肺动脉压力（PAP）的持续升高，这最终导致右心室衰竭以及死亡。诊断患有PAH的患者具有不良的预后且生活质量受到同样的影响，如果不进行治疗，从诊断时起的平均寿命预期为2～5年。

内皮素-1（ET-1）是有效的血管收缩肽家族中的主要成员，已知其在哺乳动物心血管生理学中发挥了至关重要的作用。ET-1是从头(denovo)合成的且响应于多种因子（包括血管紧张素II、儿茶酚胺类、细胞因子类、缺氧和切变应力）从内皮细胞中释放。两种受体亚型（内皮素受体A型（ET_A）和内皮素受体B型（ET_B））介导ET-1的效应。在人类中，ET_A受体优先地在血管平滑肌细胞中表达，并且主要负责ET-1的血管收缩效应。相反地，发现ET_B受体主要在血管内皮中，且它们的活化通过产生一氧化氮和前列环素而导致血管舒张。该ET_B受体还通过影响内皮素转化酶（ECE-1）的表达和通过内皮细胞合成及再吸收ET-1来参与调节ET-1的循环浓度。

安立生坦是针对ET_A受体具有高亲合性(～12pM)的非磺酰胺、丙酸类内皮素受体拮抗剂（ERA）。安倍生坦由美国食品和药物管理局（FDA）批准出售，用于每日一次治疗PAH，并且以商品名销售。其他选择性A型受体拮抗剂包括西他生坦、阿曲生坦和BQ-123。

另外的药物如磷酸二酯酶5型抑制剂（PDE5抑制剂）也被批准用于治疗PAH。PDE5抑制剂是用于阻断在肺部动脉壁平滑肌中和在供应阴茎海绵体的血管内层的平滑肌细胞中磷酸二酯酶5型对环式GMP的降解作用的药物。

他达拉非是目前以名称销售的用于治疗肺动脉高血压的PDE5抑制剂。用于肺动脉高血压的批准剂量为40mg（两个20-mg药片），每日一次。他达拉非的副作用包括低血压、视力减退、听力丧失和阴茎异常勃起。因此，增加选择性A型ERA和PDE5抑制剂的抗-PH功效以及减少潜在的副作用的方法是非常可取的。市售的或处于开发阶段的其他PDE5抑制剂包括阿伐那非、罗地那非、米罗那非、枸橼酸西地那非、伐地那非和乌地那非。

美国专利公开号2008/0139593描述了一种治疗肺动脉高压的方法，包括向患者给予治疗有效量的安立生坦，其中，在基线处，从首次诊断受试者体内病症起的时间不大于约两年。还描述了将安立生坦与选自以下的一种或多种适合的药物相结合：前列腺素类、PDE5类抑制剂（如西地那非、他达拉非和伐地那非）、ERA类、钙通道阻断剂类、芳烷胺类、二氢吡啶衍生物类、哌嗪衍生物类和其他适于在联合治疗中使用的化合物。

现在已经发现选择性A型ERA和PDE5抑制剂的组合具有导致肺动脉收缩有效松弛的有益的共同作用。例如，安立生坦和他达拉非的共同作用在降低内皮素-诱导的大鼠肺动脉和主动脉的收缩上提供了增强的功效。

发明内容

本公开描述了选择性A型内皮素受体拮抗剂（选择性A型ERA）与磷酸二酯酶5型抑制剂（PDE5抑制剂）联合给药，它们共同作用以松弛肺动脉收缩和/或抑制缺氧-诱导的肺动脉压（PAP）。松弛肺动脉收缩或抑制PAP的能力用于治疗和预防患者体内的肺动脉高压以及本文所描述的各种其他病症。当以治疗有效剂量给予选择性A型ERA且以治疗有效剂量给予PDE5抑制剂时，这种联合治疗导致增强的治疗效果。由于它们的共同作用，选择性A型ERA和PDE5抑制剂中任何一个或两者都能够以低于它们各自标准治疗剂量的量给药。

特定比例的两种药剂甚至增加了共同作用的效力，从而使其显著地大于单一给予每个药剂（即给予单个药剂）的效力的总和。在一方面，为了获得这种增强的效力，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率可以是约2:1至约1:3。可替代地，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率可以在从1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10至约1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:15或1:20的范围。在另一方面，这种组合可以获得的效力比单一给予每个药剂的效力的总和大至少约5%，可替代地10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%或100%。

选择性A型ERA的非限制性例子包括安立生坦和西他生坦及它们的药学上可接受的盐。在一方面，选择性A型ERA是安立生坦。PDE5抑制剂的例子包括但不限于他达拉非、阿伐那非、罗地那非、米罗那非、枸橼酸西地那非、伐地那非和乌地那非及它们的药学上可接受的盐。在一方面，PDE5抑制剂是他达拉非。

因此，在一方面，本公开针对的是用于治疗和/或预防在需要它的患者体内的肺动脉高压的方法。该方法包括给予治疗量的安立生坦或其盐与他达拉非或其盐的组合，其中安立生坦或其盐的量和他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内，或者可替代地约1:2至约1:5，或者可替代地约1:3。

本公开的另一方面提供了用于治疗或预防在需要它的患者体内的肺动脉高压的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦或其盐与他达拉非或其盐的组合，其中给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%，或者可替代地40%或50%。

在一方面，进一步提供了用于治疗或预防在需要它的患者体内的肺动脉高压的方法，包括每日一次向患者给予治疗量的安立生坦或其盐与他达拉非或其盐的组合，其中安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率为约1:3。

在本文所述的任一实施方式中，肺动脉高压包含肺动脉高血压（PAH），包括但不限于特发性PAH、家族性PAH或与其他疾病或病症相关的PAH。在一方面，PAH在基线处为WHO的I级、II级、III级或IV级。

在另一方面，提供了用于抑制在需要它的患者体内的内皮素-诱导的血管收缩的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦或其盐与他达拉非或其盐的组合，其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

在一方面，还提供了用于治疗或预防在需要它的患者体内疾病的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦或其盐与他达拉非或其盐的组合，其中所述病症选自由以下组成的组中：高血压、肺动脉高压、心肌梗死、心绞痛、急性肾功能衰竭、肾功能不全、脑血管痉挛、脑缺血、蛛网膜下腔出血、哮喘、动脉粥样硬化、血管内凝血、血管成形术后的再狭窄、缺血或中毒所致高血压、缺血或中毒引起的肾功能衰竭、雷诺氏综合征和哮喘气道病症，并且其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

另外进一步提供了减少安立生坦或其盐的不希望的副作用的方法，包括向患者给予治疗量的他达拉非或其盐，其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

还提供了减少安立生坦或其盐的治疗有效剂量的方法，所述方法包含向患者给予治疗量的他达拉非或其盐，其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

还在一方面，本公开提供了减少他达拉非或其盐的不希望的副作用的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦或其盐，其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

在另一方面，提供了减少他达拉非或其盐的治疗有效剂量的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦或其盐，其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)给予安立生坦和他达拉非的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

还提供了药物制剂。一方面提供了一种药物制剂，其包含治疗量的他达拉非或其盐和安立生坦或其盐、以及药学上可接受的载体，其中(a)安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率在约1:1至约1:10的范围内和/或(b)安立生坦和他达拉非的组合的效力比单一给予安立生坦和他达拉非的效力的总和大至少约25%。

在一方面，本公开提供了用于治疗在患者体内的肺动脉高压的方法，包括给予治疗有效量的联合治疗，该联合治疗包括选择性A型内皮素受体拮抗剂与PDE5抑制剂及其代谢产物的组合，它们共同作用以在约1:1至约1:10范围内的治疗有效比率下在缺少显著的有害副作用下为患有肺动脉高压的患者提供治疗益处。

在另一方面，本发明公开了用于治疗患者体内的肺动脉高压的方法，包括给予治疗有效量的联合治疗，该联合治疗包括选择性A型内皮素受体拮抗剂、PDE5抑制剂和有效治疗肺动脉高压或相关病症的第三活性剂及它们的代谢产物，它们共同作用以在约1:1至约1:10范围内的治疗有效摩尔比率下在缺少显著的有害副作用下为患有肺动脉高压的患者提供治疗益处。

在一方面，本公开提供了包括治疗量的选择性A型内皮素受体拮抗剂和PDE5抑制剂的联合治疗的药物制剂，它们共同作用以在约1:1至约1:10范围内的治疗有效比率下在缺少显著的有害副作用下为患有肺动脉高压的患者提供治疗益处。

在一方面，本公开提供包括治疗量的他达拉非或其盐和安立生坦或其盐、以及药学上可接受的载体的药物制剂，其中安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率为约1:3。

在另一方面，本公开提供包括选择性A型内皮素受体拮抗剂、PDE5抑制剂、和有效治疗肺动脉高压或相关病症的第三活性剂、和它们的代谢产物的联合治疗的药物制剂，它们共同作用以在约1:1至约1:10范围内的治疗有效摩尔比率下在缺少显著的有害副作用下为患有肺动脉高压的患者提供治疗益处。

附图说明

如在整个附图中使用的，术语“AMB”是指安立生坦，“TAD”是指他达拉非，“BOS”是指波生坦，且“MAC”是指马西替坦。

图1显示安立生坦(10nM)和他达拉非(30nM)向结合比单一给予各药物显著地更加有效地松弛了大鼠肺动脉和主动脉的内皮素诱导的收缩。数据表示为平均值±SEM，n=3。相对于10nM安立生坦或30nM他达拉非的单一治疗，*p<0.01。

图2显示安立生坦和他达拉非的组合展示出大于各药物单一治疗的加合效应，因此，安立生坦和他达拉非之间存在有益的共同作用。但是，当与他达拉非一起给药时，在非选择性ERA（如波生坦和马西替坦）和他达拉非之间并未观察到这种共同作用。相比于安立生坦(AMB)或他达拉非(TAD)，*p<0.01。相比于单一给予波生坦(BOS)、马西替坦(MAC)和TAD或ABM与TAD的组合，#p<0.05。---:表示预测的AMB与TAD的加合效应。

图3显示TAD与AMB或BOS减弱ET-1-诱导的大鼠主动脉环收缩的效应。数据表示为平均值±SEM。相比于10nMAMB或30nMTAD，*P<0.01。相比于100nMBOS或30nMTAD，#p<0.05。---:表示AMB与TAD的加合效应。数据显示AMB和TAD的组合的效应大于各药物的加合效应（由虚线表示），而BOS和TAD的组合效应则并非如此。

图4为收缩图，显示TAD与AMB或BOS的组合对ET-1-诱导的大鼠主动脉环收缩的效应（上：未治疗的；中：AMB+TAD；下：BOS+TAD）。显示AMB和TAD的组合(中)比BOS和TAD的组合(下)更加显著地松弛了收缩。

图5显示内皮参与了ET受体拮抗剂与TAD的共同作用或加合效应。

图6显示在BQ-788（一种选择性B型内皮素受体拮抗剂）存在下，AMB与TAD的组合效应显著地降低。这表明ETB型受体参与了AMB与TAD的共同作用效应。

图7说明了内皮细胞和平滑肌细胞中的ET-1和PDE5信号传导。

图8说明了从两种不同途径靶向血管舒张的选择性A型ERA和PDE5抑制剂之间共同作用的根本机理。

图9说明了靶向相同的途径的非选择性ERA或选择性B型ERA和PDE5抑制剂之间缺少有益的共同作用。

图10说明在活体内肺动脉高血压（PAH）动物模型中TAD与AMB之间的共同作用。

具体实施方式

1.定义和通用参数

如在本说明书中所使用的，以下词语及短语，除了在使用它们的上下文中另有指示，一般旨在具有以下所阐明的含义。

应当指出的是，如在本文和权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及组合物中的“一种药学上可接受的载体”包括两种或多种药学上可接受的载体，等等。

“包含”意指所述组合物和方法包括所列举的元素，但不排除其他元素。“基本由…组成”，当用来限定组合物和方法时，是指排除对预定用途的组合任何至关重要的其他元素。因此，如本文所限定的基本由元素组成的组合物不排除来自分离和纯化方法的微量污染物以及药学上可接受的载体，例如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等。“由…组成”是指排除超过其他成分微量元素的以及用于给予本公开的组合物的实质方法步骤。通过这些过渡术语的每一个限定的实施方式都处于本公开的范围内。

“内皮素受体拮抗剂（ERA）”是阻断内皮素受体的药剂。存在至少两种主要已知的内皮素受体ET_A和ET_B，这两者都是G蛋白偶联受体，它们的活化导致细胞内游离钙升高。存在三种主要类型的ERA：影响内皮素A受体的选择性A型受体拮抗剂，例如西他生坦、安立生坦、阿曲生坦、BQ-123；影响内皮素A和B受体两者的双拮抗剂，例如波生坦、马西替坦、替唑生坦；和影响内皮素B受体的选择性B型受体拮抗剂，例如BQ-788。

“选择性A型内皮素受体拮抗剂”或“选择性A型ERA”选择性地靶向A型内皮素受体。

“安立生坦”或“AMB”描述于美国专利号5,703,017、5,932,730和7,109,205中。其是指化合物(2S)-2-[(4,6-二甲基嘧啶-2-基)氧代]-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸并且具有以下化学式：

安立生坦由美国食品和药物管理局(FDA)批准出售以每日一次治疗PAH，并且以商品名上市。在欧洲，安立生坦以商品名被批准。

如本文所使用的“安立生坦”意指包括描述于美国专利公开号2010/0204163中的安立生坦的代谢产物。安立生坦的代谢产物包括具有以下化学式的化合物：

其中R¹为–OH或–OCH₃；R²为–H、低级烷基或糖苷基；且R³和R⁴独立地为–CH₃、–C(O)H或–CH₂OR⁶，其中R⁶为–H或具有1～20个碳原子的烃基。

“西他生坦”是指化合物N-(4-氯-3-甲基-1,2-噁唑-5-基)-2-[2-(6-甲基-2H-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)乙酰基]噻吩-3-磺酰胺及其药学上可接受的盐。西他生坦描述于BarstRJetal.,(2004)AmericanJournalofRespiratoryCriticalCareMedicine169(4):441-7中。西他生坦具有以下化学式：

西化生坦于2008年作为上市以治疗PAH，但后来于2010年从市场上清除。

“磷酸二酯酶5型抑制剂”或“PDE5抑制剂”是指阻断磷酸二酯5型对在肺部内的动脉壁平滑机中以及在供应阴茎海绵体的血管内层的平滑肌细胞中的环式GMP的降解作用的药剂。PDE5抑制剂用于治疗肺动脉高压以及治疗勃起功能障碍。PDE5抑制剂的例子包括但不局限于他达拉非、阿伐那非、罗地那非、米罗那非、枸橼酸西地那非、伐地那非和乌地那非以及它们的药学上可接受的盐。在一方面，PDE5抑制剂是他达拉非。

“他达拉非”或“TAD”描述于美国专利5,859,006和6,821,975中。其是指化合物(6R-反式)-6-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2,3,6,7,12,12a-六氢-2-甲基-吡嗪并[1’,2’:1,6]吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-酮并且具有以下化学式：

他达拉非目前以丸剂形式销售，商品名用以治疗勃起功能障碍(ED)且商品名用以治疗PAH。

“阿伐那非”是指化合物4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲酰胺及其药学上可接受的盐。阿伐那非描述于LiminM.etal.,(2010)ExpertOpinInvestigDrugs,19(11):1427-37中。阿伐那非具有以下化学式：

阿伐那非正针对勃起功能障碍而开发。阿伐那非目前没有与其相关的商标名，但正由VivusInc.开发中。

“罗地那非”是指化合物双-(2-{4-[4-乙氧基-3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-苯磺酰基]哌嗪-1-基}-乙基)碳酸酯，并且具有以下化学式：

有关罗地那非更多的信息可以在ToqueHAetal.,(2008)EuropeanJournalofPharmacology,591(1-3):189-95中获得。罗地那非由巴西的CristáliaProdutosQuímicoseFarmacêuticos制造，并且在当地以商品名销售。它已经经历了III期临床试验，但美国FDA还没有批准其在美国使用。

“米罗那非”是指化合物5-乙基-3,5-二氢-2-[5-([4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]磺酰基)-2-丙氧基苯基]-7-丙基-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮，并且具有以下化学式：

关于米罗那非更多的信息可以在PaickJSetal.,(2008)TheJournalofSexualMedicine,5(11):2672-80中找到。米罗那非目前还没有批准在美国使用，但正进行临床试验。

“枸橼酸西地那非”以名称上市，描述于美国专利5,250,534中。其是指1-[4-乙氧基-3-(6,7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)苯基磺酰基]-4-甲基哌嗪，并且具有以下化学式：

枸橼酸西地那非作为以及多种其他商品名称销售，指明用于治疗勃起功能障碍和PAH。

“伐地那非”是指化合物4-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基)磺酰基-苯基]-9-甲基-7-丙基-3,5,6,8-四氮杂二环[4.3.0]壬-3,7,9-三烯-2-酮，并且具有以下化学式：

伐地那非描述于美国专利6,362,178和7,696,206中。伐地那非以商品名称上市用于治疗勃起功能障碍。

“乌地那非”是指化合物3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-4,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-N-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-4-丙氧基苯磺酰胺，并且具有以下化学式：

有关乌地那非的更多信息可以在KouvelasD.etal.,(2009)CurrPharmDes,15(30):3464-75中找到。乌地那非以商品名称上市，但在美国未批准使用。

如通篇使用的，上述每种化合物均旨在包括其游离酸、其游离碱或其药学上可接受的盐。

如本文所用的，术语“盐”是指化合物的药学上可接受的盐，其衍生自多种生理学可接受的有机和无机反离子。此种反离子为本领域所熟知，且当分子含有酸性官能度时，其包括(仅举例来说)钠、钾、钙、镁、铝、锂和铵(例如，四烷基铵)等；而当分子含有碱性官能度时，为有机或无机酸的盐，例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、苯磺酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和草酸盐等。适合的药学上可接受的盐还包括列举于Remington’sPharmaceuticalSciences,17thEdition,pg.1418(1985)和P.HeinrichStahl,CamilleG.Wermuth(Eds.),HandbookofPharmaceuticalSaltsProperties,Selection,andUse;2002中的那些。酸加成盐的例子包括由酸(例如氢碘酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸)形成的那些盐，和用有机酸形成的盐，例如海藻酸、抗坏血酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、樟脑硫酸、柠檬酸、双羟萘酸（embonic）(双羟萘酸（pamoic）)、乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、龙胆酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、异烟酸、异硫羰酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、泛酸、苯乙酸、丙酸、糖二酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、亚磺酸（sulfinilic）、三氟乙酸和芳基磺酸(如苯磺酸和对甲苯磺酸)。使用碱金属和碱土金属和有机碱形成的碱加成盐的例子包括氯普鲁卡因、胆碱、N,N-二苄基乙二胺、二乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、甲基葡胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因以及内部形成的盐。具有非生理学可接受的阴离子或阳离子的盐在本公开的范围内，作为用于制备生理学可接受的盐和/或用于非治疗性(例如在体外)情况的有用中间体。

本公开具体地考虑使用安立生坦和他达拉非两者的盐并进一步考虑他达拉非和/或安立生坦的盐的混合物。

在某些实施方式中，本文所使用的安立生坦和/或他达拉非未充分地电离，并且可以为共结晶的形式。在一个实施方式中，本公开提供一种共结晶组合物，其包含安立生坦和/或他达拉非的共结晶，其中所述共结晶包含安立生坦和/或他达拉非以及共结晶前体。术语“共结晶”是指包含安立生坦和/或他达拉非以及一种或多种共结晶前体的结晶材料，例如药学上可接受的盐。在某些实施方式中，与游离形式(即，游离分子、两性离子、水合物、溶剂化物等)或盐(其包括盐水合物和溶剂化物)相比，该共结晶可以具有提高了性质。在进一步的实施方式中，所述提高的性质选自由以下组成的组：增加的溶解度、增加的溶解作用、增加的生物利用度、增加的剂量响应、降低的吸湿性、通常无定形化合物的结晶形式、难以形成盐或不能成盐化合物的结晶形式、降低的形式多样性、更希望的形态等。制造和表征共结晶的方法为本领域技术人员所熟知。

术语“联合治疗”，在限定选择性A型内皮素受体拮抗剂和PDE5抑制剂的用途中，是指包括在可以提供药物组合的有益效果的治疗方案中以顺序方式给予每种药剂，并且还旨在包括以基本上同时的方式共同给予这些药剂，例如通过口服具有固定比率的这些活性剂的单一胶囊或者口服各药剂的多个独立的胶囊。“联合治疗”还包括通过静脉内、肌内或其他非肠道途径向体内同时地或顺序地给药，包括通过黏膜组织的直接吸收（如在窦通道（sinuspassage）中发现的）。顺序给药还包括药物组合，其中各元素可以在不同的时间和/或通过不同的途径给予，但它们联合地起作用以提供有益效果，例如增强的效力。

在一个具体实施方式中，联合治疗基本上由两种活性剂组成，即选择性A型内皮素受体拮抗剂和PDE5抑制剂。

在另一个实施方式中，联合治疗是一种三路组合，包含选择性A型内皮素受体拮抗剂、PDE5抑制剂和有效治疗肺动脉高压病症或与其相关病症的第三活性剂。说明性地且非限制地，该组合可以包括选自由以下组成的组中的第三活性剂：前列腺素类、除了他达拉非的磷酸二酯酶抑制剂类、除了安立生坦的内皮素受体拮抗类、钙通道阻断剂类、利尿剂类、抗凝血剂类、氧和它们的组合。

词语“治疗有效”是指限定用于联合治疗的各药剂的量（所述联合治疗能实现改善肺功能的目标），同时避免或减少通常与各药剂相关的不良副作用。治疗有效量基于所使用的治疗剂的比活性、患者疾病状态的严重程度、以及患者的年龄、健康状况、存在的其他疾病状态和营养状态而改变。另外，患者可能接受的其他药物治疗会影响给药者对治疗剂的治疗有效量的确定。

“共同作用”是指当与选择性A型内皮素受体拮抗剂（例如安立生坦）联合给药时（或反之亦然）PDE5抑制剂（例如他达拉非）的疗效大于当单独给药时药剂的疗效的总和。本文使用的术语“治疗量”包括少于一种或两种药物的标准治疗量，意思是期望效果所需要的量少于当单独使用药物时的量。治疗量还包括当一种药物以标准治疗剂量提供时，另一种药物则以小于标准治疗剂量给药。例如，安立生坦能够以治疗剂量提供而他达拉非能够以小于标准治疗剂量提供，以便提供增强的结果。在一些实施方式中，两种药物能够以标准治疗剂量给药以获得更大的功效。

术语“治疗”或“治疗了”是指受试者（例如哺乳动物）体内疾病或病症的任何治疗，包括：1)预防或防止疾病或病症，也就是说，使临床症状不发展；2)抑制疾病或病症，也就是说，阻止或抑制临床症状的发展；和/或3)缓解疾病或病症，也就是说，使临床症状消退。

如本文使用的，术语“预防”是指预防性治疗对其有需要的患者。该预防性治疗可以通过向处于遭受疾病风险的受试者提供适合剂量的治疗剂来完成，从而实质上避免疾病的发病。

在人类医学领域的技术人员应当理解的是，并不总是能够区分“预防”和“抑制”，因为直到最终诱导的一个或多个事件发生之后很久所述一个或多个事件才可能是已知的、非潜伏的或患者确定的。因此，如本文所使用的，术语“预防”意指为“治疗”的一种元素以包含如本文定义的“预防”和“抑制”两者。如本文所使用的，术语“保护”是指包括“预防”。

术语“易感者”是指已经具有至少一次出现的指示病症的患者。

术语“患者”通常是指“哺乳动物”，其包括但不限于人类、猴子、兔子、小鼠、家养动物（如狗和猫）、家畜（如牛、马或猪）和实验动物。

如本文中所使用的，“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。此种介质和试剂用于药学活性物质为本领域所熟知。除去与活性成分不相容的任何常规介质或试剂，考虑了其在治疗组合物中的用途。辅助的活性成分也可以结合至所述组合物中。

“静脉给药”为直接地或“静脉内地”将物质给药到静脉中。与其他给药途径相比，静脉注射（IV）途径是将流体和药物递送全身的最快方式。输液泵可以精确控制流速和递送的总量，但是在流速变化不会有严重后果的情况下或不可使用泵的情况下，通常简单地通过将滴注袋置于高于患者的水平而使滴液流动，并且使用夹钳来调节速率。可替代地，如果患者需要高流速且IV接入装置具有足够大的直径来接纳它，可以使用快速注入器。这是置于流体袋周围以迫使流体进入患者体内的可充气袖套或者为还可以加热被注入流体的类似电装置。当患者只在某些时间需要药物治疗时，使用间歇性输注，其不需要额外的流体。它可以使用与静脉内滴注相同的技术（泵滴注或重力滴注），但是在已经提供全部剂量药物后，将管材与IV接入装置断开。有些药物也通过IV推注或注射来提供，意思是将注射器连接至IV接入装置并将药物直接注入（如果可能刺激静脉或导致过快的效应，则缓慢地进行）。一旦药物注入IV管的流体流中，必须有一些方法来确保它从管道到达患者。通常，这是通过使流体流正常流动进而将药物携带至血流中来完成的；但是，在注射后有时使用第二流体注入（“冲洗（flush）”）以将药物更快地推入血流中。

“口服给药”是通过口腔服用物质的给药途径，并且包括颊部给药、唇下给药和舌下给药、以及肠内给药，以及通过呼吸道给药，除非通过例如管给药，使得药物不直接接触任何口腔粘膜。用于口服给予治疗剂的典型形式包括使用片剂或胶囊剂。

2.方法

一般来说，本公开涉及治疗或预防肺动脉高压的方法。该方法包括给予治疗量的选持性A型内皮素受体拮抗剂（选择性A型ERA）和磷酸二酯酶5型抑制剂（PDE5抑制剂）。在一个具体方面，该方法包括给予治疗量的他达拉非或其盐和治疗量的安立生坦或其盐。在一个实施方式中，以有效量给予安立生坦或他达拉非之一或两者。所述两种药剂可以分开地给药或分别地一起给药或以组合剂量单位形式给药。如果分开地给药，可以在给予他达拉非之前或之后给予安立生坦。

如在实施例中进一步讨论，在此介绍的是安立生坦(AMB)和他达拉非(TAD)的组合共同作用以在肺动脉高血压(PAH)动物模型中松弛内皮素-诱导的收缩以及抑制缺氧诱导的肺动脉压(PAP)的证据。所述共同作用的此种增强的功效是明显的，因为组合效应大于单一给予各药物的加合效应。在一方面，与单一给予各药物的加合效应相比，此种增强的效应达到至少约5%的增强效应。可替代地，此种增强为至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%或100%。换句话说，所述组合能够达到的效应比单一给予任一药剂的效应的总和大至少约5%、可替代地10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%或100%。

如实施例中所表明，此种增强的效应在TDA和非选择性ERA（如波生坦（BOS）或马西替坦（MAC））之间不存在。因此，这些结果表明内皮中的B型内皮素受体有助于安立生坦和他达拉非在血管舒张上的增强效应。如图8和图9中所示，所述增强效应是由于安立生坦和他达拉非分别在内皮素受体A型途径和PDE5途径中共同作用所引起的。因此，在任何选择性A型ERA和任何PDE5抑制剂之间都发现了类似的增强效应。此外，选择性A型ERA和PDE5抑制剂的组合还在治疗与内皮素受体A型活性有关的其他疾病和病症中产生了增强效应。

如通过上述机制所表明的，选择性A型ERA和PDE5抑制剂的共同作用的增强效应取决于每种个体药剂的量和/或所述量的比率。在一方面，为了实现此种增强效应，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率可以从约2:1，或者可替代地从1:1,1:1.5,1:2,1:2.5,1:3,1:4,1:5,1:6,1:7,1:8,1:9或1:10至约1:3，或者可替代地至约1:4,1:5,1:6,1:7,1:8,1:9,1:10,1:11,1:12,1:15或1:20。

在一方面，所述量的比率为每种药剂的摩尔量的比率。在另一方面，所述量的比率是每种药剂的重量比。

在一些实施方式中，为了实现增强效应，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率为约1:3，例如其可以是从约1:1.5至约1:5，或者可替代地从约1:2至约1:4。在一方面，该选择性A型ERA为安立生坦或其盐。在一方面，该PDE5抑制剂为他达拉非或其盐。在另一方面，该比率为每种药剂的重量比。在一方面，对于人类受试者，安立生坦或其盐的量为每日从约5mg至约10mg。在另一方面，对于人类受试者，他达拉非或其盐的量为每日从约15mg至约30mg。

在一些实施方式中，为了实现增强效应，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率为约1:1，例如其可以是从约2:1至约1:2，或者可替代地从约1:1至约1:2。在一方面，该选择性A型ERA为安立生坦或其盐。在一方面，该PDE5抑制剂为他达拉非或其盐。在另一方面，该比率为每种药剂的重量比。在一方面，对于人类受试者，安立生坦或其盐的量为每日从约5mg至约10mg。在另一方面，对于人类受试者，他达拉非或其盐的量为每日从约5mg至约10mg。

在一些实施方式中，为了实现增强效应，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率为约1:10，例如其可以是从约1:5至约1:15，或者可替代地从约1:8至约1:12。在一方面，该选择性A型ERA为安立生坦或其盐。在一方面，该PDE5抑制剂为他达拉非或其盐。在另一方面，该比率为每种药剂的重量比。在一方面，对于人类受试者，安立生坦或其盐的量为每日从约2mg至约5mg。在另一方面，对于人类受试者，他达拉非或其盐的量为每日从约20mg至约40mg。

在一些实施方式中，为了实现增强效应，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率为约1:4，例如其可以是从约1:2至约1:7，或者可替代地从约1:3至约1:5。在一方面，该选择性A型ERA为安立生坦或其盐。在一方面，该PDE5抑制剂为他达拉非或其盐。在另一方面，该比率为每种药剂的重量比。在一方面，针对人类受试者，安立生坦或其盐的量为每日从约5mg至约10mg。在另一方面，针对人类受试者，他达拉非或其盐的量为每日从约30mg至约40mg。

在一些实施方式中，为了实现增强效应，选择性A型ERA的量与PDE5抑制剂的量的比率为约1:8，例如其可以是从约1:5至约1:10，或者可替代地从约1:7至约1:9。在一方面，该选择性A型ERA为安立生坦或其盐。在一方面，该PDE5抑制剂为他达拉非或其盐。在另一方面，该比率为每种药剂的重量比。在一方面，针对人类受试者，安立生坦或其盐的量为每日从约2mg至约5mg。在另一方面，针对人类受试者，他达拉非或其盐的量为每日从约30mg至约40mg。

选择性A型ERA的非限制性例子包括安立生坦和西他生坦及它们的盐。在一方面，该选择性A型ERA为安立生坦。PDE5抑制剂的例子包括但不限于他达拉非、阿伐那非、罗地那非、米罗那非、枸橼酸西地那非、伐地那非和乌地那非以及它们的盐。在一方面，该PDE5抑制剂为他达拉非。

与内皮素受体A型的活性相关的疾病或病症的非限制性例子包括高血压、肺动脉高压、心肌梗死、心绞痛、急性肾功能衰竭、肾功能不全、脑血管痉挛、脑缺血、蛛网膜下腔出血、哮喘、动脉粥样硬化、血管内凝血、血管成形术后的再狭窄、由缺血或中毒引起的高血压、由缺血或中毒引起的肾功能衰竭、雷诺氏综合征和哮喘气道病症。

2.1肺动脉高压(PH)

本公开的方法所治疗的肺动脉高压病症可以包含根据世界卫生组织(WHO)或威尼斯（Venice）(2003)分类(参见，例如，Rubin(2004)Chest126:7-10)或最新的达纳点分类（DanaPointclassification）(Simonneau(2009)JACC54;54:S43-S54)所识别的任何一种或多种病症：

组1：肺动脉高血压(PAH)

1.1特发性PAH

1.2家族性PAH

1.3与以下相关的PAH

1.3.1胶原血管病

1.3.2先天性全身性体肺分流（congenitalsystemic-to-pulmonaryshunt）(包括艾森曼格氏综合征)

1.3.3门静脉高压症

1.3.4HIV感染

1.3.5药物和毒素

1.3.6其他（甲状腺疾病、糖原贮积病、高雪病、遗传性出血性毛细血管扩张症、血红蛋白病、脊髓增生病、脾切除）

1.4与重大静脉或毛细血管受累有关的PAH（PAHassociatedwithsignificantvenousorcapillaryinvolvement）

1.4.1肺静脉闭塞性疾病(PVOD)

1.4.2肺毛细血管瘤病(PCH)

1.5新生儿持续性肺动脉高压

组2：具有左心疾病的肺动脉高压

2.1左侧心房或心室的心脏疾病

2.2左侧瓣膜心脏病

组3：与肺部疾病和/或低氧血症有关的肺动脉高压

3.1慢性阻塞性肺疾病(COPD)

3.2间质性肺疾病

3.3睡眠障碍性呼吸

3.4肺泡通气不足障碍

3.5长期的暴露于高海拔

3.6发育异常

组4：由于慢性血栓和/或栓塞性疾病所致的肺动脉高压

4.1近端肺动脉的血栓栓塞梗阻

4.2远端肺动脉的血栓栓塞梗阻

4.3非血栓肺栓塞(肿瘤、寄生虫、异物)

组5：杂项（结节病、组织细胞增多病X、淋巴管瘤病、肺血管压缩（腺病、肿瘤、纤维性纵隔炎））

在一方面，肺动脉高压病症包含PAH(WHO组1)，例如特发性PAH、家族性PAH或与其他疾病或病症有关的PAH。

例如通过WHO功能分类测量的，肺动脉高压在基线可以是轻度、中度或重度，其是患有肺动脉高压患者的疾病严重程度的量度。该WHO功能分类是对纽约心脏病学会(NYHA)系统的改进，并且通常地用于定性地评估活性耐受性，例如监测疾病进展和对治疗的响应(Rubin(2004)Chest126:7-10)。在WHO系统中确认有四个功能级：

I级：肺动脉高压未导致体力活动受限；普通体力活动不引起过度呼吸困难或疲乏、胸痛或近乎晕厥；

II级：肺动脉高压导致体力活动轻度受限；患者休息时没有不适；但普通体力活动会引起过度呼吸困难或疲乏、胸痛或近乎晕厥；

III级：肺动脉高压导致体力活动明显受限；患者休息时没有不适；但低于普通活动就会引起过度呼吸困难或疲乏、胸痛或近乎晕厥；

IV级：肺动脉高压导致无法进行任何体力活动，没有症状；患者出现右心衰竭的体征；甚至休息时可能出现呼吸困难和/或疲乏；任何体力活动都会使不适加重。

在一方面，在基线受试者表现出至少WHOI级的肺动脉高压(例如，PAH)，例如WHOI级、II级或III级。

在另一方面，在基线受试者表现出休息时的平均PAP为至少约30mmHg，例如至少约35，至少约40，至少约45或至少约50mmHg。

当应用于受试者时，将本公开的方法可以实现一个或多个下列目标：

(a)将一个或多个血流动力学参数朝向更加正常的水平调整，例如相对于基线，降低平均PAP或PVR、提高心输出量或指数、或降低PCWP或LVEDP；

(b)相对于基线，改善肺功能，例如增加运动能力或活动（说明性地如在6分钟步行距离（6MWD）测试中的测量或活动的测量）、或降低Borg呼吸困难指数(BDI)；

(c)相对于基线，改善一个或多个生命质量参数，例如增加在至少一个健康调查功能标度上的得分；

(d)相对于基线，总体改善病症的严重程度，例如移动至较低的WHO功能分级；

(e)相对于在没有治疗时的预期，一段时间的治疗后，改善临床结果（例如在临床试验设置中，如通过与安慰剂的比较测量的），包括改善的预后、延长临床恶化的时间或降低临床恶化的可能性、延长生命质量(例如，延迟向较高WHO功能分级的进展或减慢一个或多个生命质量参数的下降，例如健康调查参数)、和/或延长寿命；和/或

(f)将能够预测临床结果的一种或多种分子标记朝向更加正常的水平调整(例如，内皮素-1(ET-1)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)或B型钠尿肽(BNP)的血浆浓度)。

构成用于治疗PH或特别是PAH的治疗有效量的事物可以根据有待治疗的具体肺动脉高压病症、病症的严重程度、个体受试者的体重或其他参数而改变，并且医师或临床医生基于本文的公开无需过多的试验即可容易地确定。

以下描述了用于测量PH治疗有效性的各种临床参数和标准，且在本领域中也是公知的。因此，PH治疗的有效性(例如本公开的任何组合制剂的有效性)可以通过这些参数或标准来测量。此外，治疗的相对有效性(例如与单一给予各药剂的有效性相比，两种药剂的组合的相对有效性)可以使用这些临床参数或标准以及在非临床设置中来确定。此种非临床设置的例子包括但不限于体外测定或动物研究。在实施例中提供了体外测定的非限制性例子。

A．临床参数的改善

在一方面，正接受治疗的受试者在治疗期间或之后，经历以下至少一种：

(a)相对于基线，将指示肺动脉高压病症的一个或多个血流动力学参数朝向更加正常的水平调整；

(b)相对于基线，增加运动能力；

(c)相对于基线，降低BDI；

(d)相对于基线，改善一个或多个生命质量参数；和/或

(e)移动至较低的WHO功能分级。

可以使用运动能力的任何适合的量度；特别适合的量度是在6分钟步行测试(6MWT)中获得的，其测量受试者在6分钟内可以步行多远，即6分钟步行距离(6MWD)。

Borg呼吸困难指数(BDI)是用于评估感觉的呼吸困难(呼吸不适)的数值标度。它测量在完成6分钟步行测试(6MWT)后呼吸急促的程度，其中BDI为0表示无呼吸急促，而10表示最大的呼吸急促。

在多个方面，有效量的PH治疗将指示肺动脉高压的一个或多个血流动力学参数朝向更加正常的水平调整。在一个这样的方面，相对于基线，平均PAP降低例如至少约3mmHg或至少约5mmHg。在另一个这样的方面，PVR降低。在又另一个这样的方面，PCWP或LVEDP升高。

在多个方面，相对于基线，有效量的PH治疗提高了肺功能。可以使用肺功能的任何量度；说明性地，6MWD增加或BDI降低。

在一个这样的方面，6MWD从基线增加了至少约10m，例如至少约20m或至少约30m。在许多情况下，发现本实施方式的方法能有效地增加6MWD多达50m或甚至更多。

在另一个这种方面，说明性地如在6MWT后测量的，BDI从基线降低了至少约0.5个指数点。在许多情况下，发现本实施方式的方法能有效地降低BDI多达1个完整指数点或甚至更多。

健康调查提供了测量八个健康参数的自行报告、多项目标度：身体机能、由于身体健康问题所致的角色限制、身体疼痛、一般性健康情况、活力(能量和疲劳)、社交机能、由于情绪问题所致的角色限制、和心理健康(心理困扰和心理健康)。该调查还提供身体分量汇总和心理分量汇总。

在多个方面，有效量的PH治疗能够改善受试者的生命质量，说明性地如通过在调查中记载的一个或多个健康参数测量的。例如，相对于基线，在SF-36身体健康相关参数(身体健康、角色体格、身体疼痛和/或一般性健康情况)的至少一个中和/或SF-36心理健康相关参数(活力、社交机能、角色情绪和/或心理健康)的至少一个中获得了改善。此种改善可以采取对于任何一个或多个参数在标度上增加至少1点(例如至少2或至少3点)的形式。

B.预后的改善

在另一个实施方式中，本公开的治疗方法可以改善具有肺动脉高压病症的受试者的预后。本实施方式的治疗可以提供(a)在治疗期间降低临床恶化事件的概率，和/或(b)从基线降低血清中脑利钠肽(BNP)或NTpro-BNP或其N-末端激素原、NTpro-BNP浓度，其中在基线，从首次诊断受试者体内病症起的时间不大于约2年。

在多个方面，从首次诊断起的时间可以是例如不大于约1.5年，不大于约1年，不大于约0.75年或不大于约0.5年。在一方面，当诊断时，就可以基本上立即地开始给予安立生坦，例如在约一个月内或在约一个星期内。

在本实施方式中，治疗期间足够长以产生所述的效果。典型地，治疗持续时间越长，益处越大且越持久。说明性地，治疗期可以为至少约一个月，例如至少约3个月，至少约6个月或至少约1年。在一些情况下，可以连续给药持续基本上受试者生命的剩余部分。

临床恶化事件(CWE)包括死亡、肺移植、住院治疗肺动脉高血压病症、心房间隔切开术、启动额外的肺动脉高压治疗或它们的集合。因此，本公开的治疗能够有效降低至少约25%(例如至少约50%、至少约75%或至少约80%)的死亡、肺移植、住院治疗肺动脉高血压病症、心房间隔切开术和/或在治疗期间启动额外的肺动脉高压治疗的可能性。

将肺动脉高压病症的临床恶化的时间定义为从启动安立生坦治疗方案至首次出现CWE的时间。

在另一个具体方面，该方法有效地从基线降低BNP或NP-pro-BNP浓度至少约15%，例如至少约25%，至少约50%或至少约75%。

根据本实施方式的肺动脉高压病症可以包含上述WHO、威尼斯（Venice）(2003)或达纳点（DabaPoint）(2009)分类中的任何一种或多种病症。在一方面，该病症包含PAH(WHO组1)，例如特发性PAH、家族性PAH或与其他疾病有关的PAH。

在本实施方式的多个方面，在基线的受试者表现出WHOI-IV级的PH(例如PAH)，例如上述的I级、II级、III级或IV级。

在一个更具体的实施方式中，在基线的受试者具有至少约25mmHg的休息PAP，例如至少约30mmHg，至少约35mmHg或至少约40mmHg。

在本实施方式的多个方面，在治疗期间或之后，受试者可以经历以下的至少一种：

(a)相对于基线，将指示改善心肺动脉高压病症的一个或多个血流动力学参数朝向更加正常的水平调整；

(b)改善心肺功能；说明性地相对于基线，增加了运动能力或其代替物(例如，CPET测量如VO₂峰、VE/VCO₂、PETCO₂等)或降低BDI；

(c)相对于基线，改善一种或多种生命质量参数；和/或

(d)维持或移动至较低的WHO功能分级。

例如，在一方面，相对于基线，受试者可以经历心肺功能的改善。可以使用心肺功能的任何量度；说明性地增加了6MWD或降低了BDI。

在一个这种方面，6MWD从基线增加了至少约10m，例如至少约20m或至少约30m。在许多情况下，发现本实施方式的方法可有效增加6MWD多达50m或甚至更多。

在另一个这种方面，说明性地如在6MWT后测量的，BDI从基线降低了至少约0.5点。在许多情况下，发现本实施方式的方法有效降低BDI多达1个完整指数点或甚至更多。

在另一方面，受试者可以经历生命质量的改善，说明性地如通过调查中记载的一个或多个健康参数测量的。例如，相对于基线的改善可以在SF-36身体健康相关参数(身体健康、角色体格、身体疼痛和/或一般性健康情况)的至少一个中和/或在SF-36心理健康相关参数(活力、社交机能、角色情绪和/或心理健康)的至少一个中获得。此种改善可以采取在针对任何一个或多个参数的标度上增加至少1点(例如至少2或至少3点)的形式。

在另一方面，受试者可以经历维持或改善WHO功能分级。

C．生命的延长

在又另一个实施方式中，本公开的治疗方法可以延长患有肺动脉高压病症的受试者的生命，从治疗开始时起至少约30天。以上阐明了这种方法的变型或说明性形态。

D．延长临床恶化的时间

在又另一个实施方式中，本方法可以延长患有肺动脉高压病症的受试者临床恶化的时间，并且降低临床恶化事件的概率至少约25%。以上阐明了本方法的变型或说明性形态。

E．其他治疗目标

在上文所述的任一方法中，受试者可以是男性或女性。例如可以根据任一上述方法(包含其指示的变型或说明性形态)向女性受试者给予结合药物。可替代地，可以根据任一上述方法(包含其指示的变型或说明性形态)向男性受试者（例如具有生殖活性的男性受试者）给予安立生坦。

在另一个实施方式中，本文所提供的方法用于治疗生殖活性男性受试者体内的肺动脉高压病症，其中受试者的生育力基本上不受损害。“基本上不受损害”在本发明上下文中是指所述治疗基本上并未减少精子发生且不会诱导指示或与减少精子发生有关的激素变化。可以直接评估男性的生育能力（例如通过来自精液样品的精子计数），或通过激素的变化来间接评估（例如促卵泡激素(FSH)、促黄激素(LH)、抑制素B和睾酮）。

在一个实施方式中，提供了用于治疗受试者体内PAH的方法，其中该PAH与以下一种或多种有关：(a)先天性心脏缺陷、(b)门静脉高压症、(c)使用除了anorexigen以外的药物或毒素、(d)甲状腺疾病、(e)糖原贮积病、(f)高雪病、(g)遗传性出血性毛细血管扩张症、(h)血红蛋白病、(i)髓增生殖性疾病、(j)脾切除、(k)肺静脉闭塞病和/或(l)肺毛细血管血管瘤病。上文阐明了本方法的变形和说明性形态。

进一步地，在另一个实施方式中，提供了用于治疗受试者体内分类为WHO组2-5的肺动脉高压病症的方法。上文阐明了该方法的变形和说明性形态。在一方面，所述病症包含左心房或心室的心脏疾病和/或左侧瓣膜心脏疾病。在另一方面，所述病症与以下一种或多种有关：慢性阻塞性肺疾病(COPD)、间质性肺病(ILD)、睡眠障碍性呼吸、肺泡通气不足的障碍、长期暴露于高海拔、发育异常、近端和/或远端肺动脉的血栓栓塞梗阻、非血栓形成肺栓塞、结节病、组织细胞增多病X、淋巴管瘤病、和/或肺血管压缩。

2.3组合的其他用途

内皮素增加或异常释放导致外周、肾脏和脑血管中持续的血管收缩，这将导致疾病。文献中已经报道，在患有高血压、急性心肌梗死、肺动脉高血压、雷诺氏综合症、动脉粥样硬化的患者中和在哮喘患者的气道中发现了升高的血浆内皮素水平(参见，例如，美国专利7,601,730)。因此，特异性地抑制内皮素与受体结合的物质也应该拮抗内皮素的上述各种生理效应，因此是有价值的药物，例如安立生坦和他达拉非。同样地，此类药物的组合也能够有效治疗此种疾病和病症。

因此，在一方面，本公开提供用于治疗或预防在需要其的患者体内疾病的方法，包括向患者给予治疗量的选择性A型ERA和PDE5抑制剂，其中所述疾病选自由以下组成的组中：高血压、肺动脉高压、心肌梗死、心绞痛、急性肾功能衰竭、肾功能不全、脑血管痉挛、脑缺血、蛛网膜下腔出血、哮喘、动脉粥样硬化、血管内凝血、血管成形术后的再狭窄、由缺血或中毒引起的高血压、由缺血或中毒引起的肾功能衰竭、雷诺氏综合症和哮喘气道病症。

还提供了用于抑制在需要其的患者体内的血管收缩的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦和他达拉非或它们药学上可接受的盐。在一方面，所述血管收缩是内皮素诱导的。

还考虑了可以通过结合安立生坦和他达拉非，来减少任何不希望的副作用。例如，向已经接受他达拉非治疗的患者给予安立生坦减少了他达拉非的副作用。联合给药的共同作用效应能够减少为了实现治疗效果所需要的他达拉非的量，从而导致不希望的副作用的减少的发生率。这样，在一个实施方式中，本公开针对用于减少他达拉非或其盐的不希望的副作用的方法，包括给予治疗量的安立生坦或其盐。

如上所讨论，通过给予安立生坦，减少了他达拉非的治疗有效量。这样，在一个实施方式中，本公开针对用于减少他达拉非或其盐的治疗有效剂量的方法，包括向患者给予治疗量的安立生坦或其盐。

2.3剂量

对于刚才所描述的所有方法，安立生坦或其盐或者他达拉非或其盐中的至少一种以低于标准治疗剂量给药，由于其与其他药物的一起给药，其变得治疗有效。但是，还考虑了他达拉非和安立生坦两者也都可以以治疗有效量给药。在一些实施方式中，以有效剂量给予他达拉非且以标准治疗有效剂量给予安立生坦。在其他实施方式中，以低于标准治疗剂量给予安立生坦且以标准治疗有效剂量给予他达拉非。在又其他实施方式中，安立生坦和他达拉非两者都以低于标准治疗剂量给药。表述“治疗量的他达拉非和安立生坦或它们的盐”意指包括标准和低于标准治疗剂量的安立生坦及其治疗上可接受的盐和他达拉非或其治疗上可接受的盐的所有可能的组合。

在一些实施方式中，他达拉非或其盐和安立生坦或其盐在有效地提供增强功效的时限内独立地给药或顺序地给药。

可以通过具有类似效用的药剂的任何可接受的给药模式、以单剂量或多剂量向患者提供安立生坦和他达拉非，例如如通过引用结合的那些专利和专利申请中所述，包括颊部、通过动脉内注射、静脉内地、腹腔内地、肠胃外地、肌肉内地、皮下地、口服地、或通过浸渍或涂覆装置(例如，如支架或动脉插入的圆柱形聚合物)。在一个实施方式中，安立生坦或其盐和他达拉非或其盐是静脉内给药的。

在一个实施方式中，口服给予安立生坦或其盐和他达拉非或其盐。他达拉非或其盐和安立生坦或其盐也可以作为组合剂量单位给药，例如，如以片剂形式。

如上所述，他达拉非或其盐和安立生坦或其盐能够以治疗量或有效量给药。因此，在一些实施方式中，安立生坦或其盐的给药量为每日约0.5mg于约100mg，或每日约1mg至约100mg，或每日约2mg至约50mg，或每日约2mg至约20mg。进一步地，他达拉非或其盐的给药量为每日1mg至约500mg或每日约5mg至约500mg，或每日约5mg至约200mg，或每日约10mg至约200mg，或每日约10mg至约100mg。这些集合体的每日剂量可以向患者给药每天一次或两次。

在一个实施方式中，无论安立生坦和他达拉非是一起或独立地给药，安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率可以在约1:1至约1:10的范围内，或者可替代地从约1:1至1:8，或者可替代地从约1:2至约1:5，或者可替代地从约1:2.5至约1:3.5或者在特定的方面，为约1:3。

此外，安立生坦或其盐作为持续释放制剂给药和/或他达拉非或其盐作为即时释放或持续释放制剂给药。这在下一节做了更充分地讨论。

然后在一个实施方式中，接受治疗的患者已经在服用维持剂量的他达拉非（范围为20至40mg，具有典型剂量），每日一次。然后，向该种给药方案中加入约5mg至约10mg的安立生坦。通过给予此种治疗剂量的安立生坦，他达拉非的量可以从约20-40mg降低至约15-30mg或约10-20mg每日，从而极大的减少不良事件的发生率。同样地，通过给予此种治疗剂量的他达拉非，安立生坦的量可以从约5-10mg降低至约3-8mg或约2-5mg每日，从而极大的减少不良事件的发生率。

3.活性成分和组合物

3.1药物制剂

如上所述，他达拉非和安立生坦的组合可以独立地配制。含有每种活性成分的单独的剂型可以顺序地或在相似的时间(即，一起或一个接一个地)给药。在另一个实施方式中，他达拉非和安立生坦共同配制为组合剂量单位。因此，在一个实施方式中，本公开针对药物制剂，其包含治疗量的他达拉非或其盐、治疗量的安立生坦或其盐、和药学上可接受的载体。

在另一个实施方式中，所述制剂包含有效量的安立生坦或其盐和/或他达拉非或其盐。在某些实施方式中，所述制剂配制用于静脉内给药或口服给药之一。在又其他实施方式中，所述两种活性成分共同配制为组合剂量单位。在又其他实施方式中，所述两种活性成分独立地配制用于联合治疗给药。

3.2复方制剂

在本公开的某些实施方式中，安立生坦和他达拉非共同配制为适合口服给药的组合剂量单位或单一剂型。在某些实施方式中，安立生坦配制为持续释放的制剂。在某些实施方式中，他达拉非配制为即时释放或持续释放的制剂。

在一个实施方式中，所述制剂为片剂形式或胶囊剂形式。在一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约1mg至约500mg的他达拉非或其药学上可接受的盐。在另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约5mg至约500mg的他达拉非或其药学上可接受的盐。在又另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约5mg至约200mg的他达拉非或其药学上可接受的盐。在又另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约10mg至约200mg的他达拉非或其药学上可接受的盐。在又另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约10mg至约100mg的他达拉非或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约0.5mg至约100mg的安立生坦或其药学上可接受的盐。在另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约1mg至约100mg的安立生坦或其药学上可接受的盐。在又另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约2mg至约50mg的安立生坦或其药学上可接受的盐。在又另一个实施方式中，所述片剂或胶囊剂包含约2mg至约20mg的安立生坦或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，在制剂中，安立生坦或其盐的量与他达拉非或其盐的量的比率可以为约1:1至约1:10，或者可替代地为约1:1至约1:8，或者可替代地为约1:2至约1:5，或者可替代地为约1:2.5至约1:3.5或者在一个特定的方面，为约1:3。

在一个这种实施方式中，将安立生坦组合物置于片剂的一部分中，该部分与含有他达拉非组合物的片剂部分分离但与其接触。应当理解的是所述单一剂型可以包括简单地将安立生坦组合物和他达拉非组合物压制成多层片剂或常规地加工成其他常规单一剂型，如胶囊剂。适于在本公开中使用的所述多层片剂和胶囊剂可以使用本领域公知的方法使用标准机器来制造。

所述片剂可以包含两层，即包含他达拉非并配制成即时释放或持续释放的第一层，和包含安立生坦并配制成持续释放的第二层。可替代地，所述多层片剂可以包含内层和外层，其中所述内层包含持续释放的安立生坦制剂且其中所述外层包含即时释放或持续释放的他达拉非层。在另一个实施方式中，安立生坦和他达拉非共同配制成胶囊剂，其中该胶囊剂可以即时释放或持续释放他达拉非并持续释放安立生坦。例如，所述胶囊可以含有他达拉非和安立生坦两者的颗粒，其中所述胶囊经过配制使得他达拉非可用于即时释放或持续释放且安立生坦配制成持续释放。可替代地，所述胶囊可以含有他达拉非的液体即时释放或持续释放制剂和安立生坦的固体持续释放制剂。但是，这类实施方式为示例性地且并不旨在限制本公开的制剂。

多层片剂可以可选地使用一种或多种辅助成分通过压制或模制来制得。压制片剂可以通过在适合的机器中压缩自由流动形式的活性成分(例如可选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂，表面活性剂或分散剂混合的粉末或颗粒)来制备。模制片剂可以通过在适合的机器中模制使用惰性液体稀释剂润湿的粉末活性成分的混合物来制得。所述片剂可以可选地被包衣或刻痕。

所述片剂可以含有一种或多种药剂，包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，从而提供可口的制剂。含有与适合制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分物的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、乳糖一水合物、交联羧甲基纤维素钠、聚维酮、磷酸钙或磷酸钠；粒化剂和崩解剂，如玉米淀粉、或藻酸；粘合剂，如纤维素、微晶纤维素、淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以未包衣或通过已知的技术包衣，包括微胶囊化以延缓崩解和在胃肠道中的吸附，从而在较长的时期内提供持续的作用。例如，可以使用延时材料如单独的甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯或与蜡一起使用。

3.3其他制剂

本公开还考虑的制剂也可以用于通过注射给药，包括具有芝麻油、玉米油、棉子油、或花生油、以及酏剂、甘露糖醇、右旋糖、或无菌水溶液、和类似的药物载体的水或油悬浮液或乳液。处于盐水中的水溶液还常规地用于注射，但在本公开的上下文中较少优选。还可以使用乙醇、甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等(以及它们的合适的混合物)、环糊精衍生物和植物油。例如，通过使用包衣如卵磷脂、在分散体的情况下通过维持所需粒径和通过使用表面活性剂可以维持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂可以带来防止微生物的作用，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等等。相同的制剂考虑用于独立地给予安立生坦和他达拉非。

无菌注射液是通过将组分以所需量与如上面所列举的各种其他成分（根据需要）一起结合到适当溶剂中、随后过滤灭菌来制备的。一般而言，分散体是通过将各种灭菌的活性成分结合到无菌载体中来制备的，该无菌载体含有基本分散介质和来自上面所列举那些的所需的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分的粉末，加上来自其先前无菌过滤溶液的任何另外的所需成分。

因此，用于给予用于肺动脉高压的新型组合的器械的理想形式和本公开其他方法的由以下组成：(1)包括包含2种备用活性物质的2个区室的注射器或(2)包含备用的两个注射器的套件。

在制造包括安立生坦和他达拉非的药物组合物中，活性成分通常通过赋形剂或载体稀释和/或包封于可以是胶囊、香囊、纸或其他容器形式的载体中。当赋形剂用作稀释剂时，其可以是固体、半固体、或液体物质(如上)，其作为活性成分的运载体、载体或介质。因此，所述组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、香囊剂、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆剂、气雾剂(为固体或在液体介质中)、含有例如达到10%重量的活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、无菌注射液和无菌包装粉剂的形式。

适合的赋形剂的一些例子包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆、和甲基纤维素。所述制剂还可另外地包括：润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂如甲基和丙基羟基苯甲酸盐；甜味剂和调味剂。

可以配制本公开的组合物，从而在通过使用本领域公知的方法向患者给药后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。如上所讨论，考虑到降低的安立生坦生物利用度，持续释放制剂通常是优选的。用于口服给药的控释药物递送系统包括渗透泵系统和含有聚合物涂覆的储集层的溶解系统或药物-聚合物基质制剂。在美国专利号3,845,770；4,326,525；4,902,514和5,616,345中给出了控释系统的例子。

优选地将组合物配制为单位剂型。术语“单位剂型”或“组合剂量单位”是指适合作为人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的物理分散的单位，每个单位含有预定量的经计算能产生所需疗效的活性材料与适合的药物赋形剂结合(例如，片剂、胶囊剂、安瓿)。本公开的活性剂在较宽的剂量范围内有效并且通常以药学有效量给药。但是，应当理解的是，鉴于相关情形（包括有待治疗的病症、选择的给药途径、给予的实际化合物以及它们的相对活性、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等）医生可以确定实际给予的各活性剂的量。

为制备固体组合物如片剂，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有本公开化合物的均质混合物的固体预制剂组合物。当提及这些预制剂组合物为均质时，其是指活性成分均匀地分散在整个组合物中，使得该组合物可以容易地细分为同等有效的单位剂型如片剂、丸剂和胶囊剂。

本公开的片剂或丸剂可以包衣或另外地混合（compound）以提供得到延长作用的优点的剂型、或保护以避免胃的酸性条件。例如，所述片剂或丸剂可包含内剂量和外剂量元素，后者是在前者上的包膜形式。可以使用肠溶层将安立生坦和共同给药的药剂隔开，所述肠溶层用于抵抗在胃中的崩解并使内部元素能够完整地进入十二指肠或能够延迟释放。各种材料可用于这样的肠溶层或包衣，此类材料包括大量的聚合物酸以及聚合物酸与如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素等材料的混合物。

本公开的另外的实施方式包括包含治疗量的安立生坦或其盐和治疗量的他达拉非或其盐的试剂盒。

包括以下实施例以说明本公开的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是在下面的实施例中公开中的技术的领域中的技术人员提出了由发明人公开的技术，以在本公开的实践中运作良好，从而可以认为构成针对其实践优选的模式。但是，在本公开的启发下，本领域技术人员应当理解的是在不偏离本公开的精神和范围下，所公开的具体实施方式中可以做出许多改变并且仍然能够获得相同或类似的结果。

实施例

如在本公开中使用的，他达拉非是市售的并且可以通过常规方法来制备，如以美国专利号5,859,006中公开的方式。安立生坦也是市售的或者可以通过常规方法来制备，例如以美国专利号5,703,017中公开的方式。两个专利的整体公开通过引用结合在此。此外，整篇中使用的缩写具有以下含义：

μM=微摩尔

μm=微米

cm=厘米

kg=千克

mA=毫安

min=分钟

mm=毫米

mM=毫摩尔

mpk=毫克每千克(体重)

ms=毫秒

nM=纳摩尔

AMB=安立生坦

TAD=他达拉非

BOS=波生坦

MAC=马西替坦

ET-1=内皮素-1

实施例1

安立生坦和他达拉非松弛内皮素诱导的大鼠肺动脉和主动脉收缩

相对于其松弛分离的大鼠肺动脉和胸主动脉制剂的能力，本实施例检验了安立生坦和他达拉非的组合与它们之一单独使用时相比较的药理学效应。

目前使用选择性A型内皮素受体拮抗剂安立生坦和磷酸二酯酶5型抑制剂他达拉非来治疗肺动脉高血压。通过10nM安立生坦(来自GileadSciences,Inc.)和30nM他达拉非(来自SequoiaResearchProductsLtd,Pangbourne,UK)来分别将与8nM内皮素-1(ET-1)接触的分离的大鼠完整肺内动脉环松弛30±13%(平均值±SEM,n=3)和12±5%(n=3)，而两种药物的组合将完整肺内动脉环松弛了77±5%(图1,n=3,相比于单一给予安立生坦或他达拉非，P<0.01)。

类似地，在8nMET-1的存在下，单一给予10nM安立生坦和30nM他达拉非分别将分离的大鼠完整胸主动脉环松弛了32±3%(n=3)和16±4%(n=3)。10nM安立生坦和30nM他达拉非的组合将ET-1诱导的完整胸主动脉环收缩松弛了81±7%(图1,n=3;相比于单一给予安立生坦或他达拉非，P<0.01)。在10nM安立生坦的存在下，他达拉非松弛ET-1收缩的主动脉环的IC₅₀值由79nM减少至16nM。

在内皮剥去的主动脉环中，他达拉非不能抑制ET-1诱导的收缩，而10nM安立生坦将收缩减少了26±7%(n=4)；所述药物组合与单一给予安立生坦相比没有更加有效。

这些数据表明安立生坦和他达拉非的组合抑制内皮素诱导的血管收缩，并且需要内皮以在血管收缩上产生它们的增强效应。

实施例2

选择性A型ERA和PDE5抑制剂在松弛内皮素诱导的肺动脉收缩上显示共同作用而非选择性ERA和PDE5抑制剂缺少此种共同作用

本实施例证实了实施例1中观察到的安立生坦和他达拉非的有利的共同作用并且进一步研究了此种共同作用内在的机制。

安立生坦是经批准用于治疗PAH的选择性A型内皮素受体拮抗剂。波生坦是用于PAH的非选择性(A型&B型)内皮素受体拮抗剂。马西替坦(第二代波生坦)是处于III期的用于PAH的非选择性内皮素受体拮抗剂。他达拉非(和)是用于PAH和勃起功能障碍(ED)的PDE5抑制剂。

方法：离体血管功能测定

从SpragueDawley大鼠(300-320g)中分离出肺内动脉(200-500μm)和主动脉并切成1-2mm的环。将环安装于肌动描记器上并使用次最大浓度(8nM)的ET-1收缩。在ET-收缩的环中评价了安立生坦、波生坦、马西替坦和他达拉非（单独地以及组合地）。

结果：

图2显示了他达拉非与安立生坦、波生坦或马西替坦一起弱化ET-1诱导的大鼠肺动脉环收缩的效应。

通过10nM安立生坦和30nM他达拉非分别将用8nM的内皮素-1(ET-1)收缩的分离的大鼠完整肺内动脉环松弛了29±1%(平均值±SEM,n=4)和22±2%(n=4)，而两种药物的组合将完整肺内动脉环松弛了85±3%(图2,n=4,相比于单一给予安立生坦或他达拉非，P<0.01)。

相反，30nM他达拉非与100nM波生坦或30nM马西替坦(两种非选择性A型&B型内皮素受体拮抗剂)的组合将ET-1-依赖性的完整肺内动脉环的收缩松弛了50±4%(图2,n=4,相比于单一给予波生坦和他达拉非或安立生坦与他达拉非的组合，P<0.05)或48±8%(图2,n=7,相比于单一给予马西替坦和他达拉非或安立生坦与他达拉非的组合，P<0.05)。单一给予100nM波生坦和30nM马西替坦产生了与10nM安立生坦相似的血管舒张效果，并且分别将用8nMET-1收缩的分离的完整肺内动脉环松弛了25±1%(n=4)和31±2%(n=4)。

图3显示了TAD与AMB或BOS一起弱化ET-1诱导的大鼠主动脉环的收缩的效应。再次，AMB和TAD组合的效应几乎为单一给予各药物的效应总和的两倍。相反，此种增强的效应对于TAD和BOS的组合并没有观察到。

在图4中，收缩图显示了TAD与AMB或BOS的组合在ET-1诱导的大鼠主动脉环收缩上的效应(上：未治疗；中：AMB+TAD；下：BOS+TAD)。明显地，AMB和TAD的组合比BOS与和AD的组合更加有效。

在内皮剥去的肺动脉环中，30nM他达拉非不能抑制由ET-1诱导的收缩，而10nM安立生坦将收缩减少了23±4%(n=4)；与单一给予安立生坦相比，药物组合没有更加有效(图5)。因此，图5显示内皮参与了ET受体拮抗剂与TAD的加合效应。

在1μMBQ-788、选择性B型内皮素受体拮抗剂的存在下，10nM安立生坦和30nM他达拉非的组合效应显著地由85±3%(n=4)降低至56±7%(图6,n=4,相比于安立生坦与他达拉非的组合，P<0.05)，其接近于30nM他达拉非与100nM波生坦或30nM马西替坦的加合效应。BQ-788对通过他达拉非与波生坦的组合的松弛没有产生影响(图6)。

这些数据表明安立生坦和他达拉非的共同作用抑制内皮素诱导的血管收缩并且内皮中B型内皮素受体有助于它们在血管舒张上的增强效应。在图7-图9中解释和说明了机制。图7说明了内皮细胞和平滑肌细胞中的ET-1和PDE5信号传递。选择性A型ERA(如AMB)和PDE5抑制剂(如TAD)从两个不同的途径靶向血管舒张，导致增强效应(图8)，而非选择性ERA或选择性B型ERA和PDE5抑制剂没有此种益处，因为它们靶向相同的途径(图9)。

基于该机制，因此，在本实施例中观察到的基于安立生坦和他达拉非的组合的共同作用可以外推至其他选择性A型ERA和PDE5抑制剂。

实施例3

选择性A型ERA和PDE5抑制剂弱化缺氧诱导的肺动脉高血压(PAH)

本实施例展示了安立生坦和他达拉非在肺动脉高血压(PAH)动物模型中的共同作用。

方法：肺动脉高血压(PAH)动物模型

将雄性SD鼠(225-250g)收容于小室中处于正常含氧(海平面)或缺氧(10%氧)条件下持续3周。

从大鼠被置于所述小室的当天开始，给大鼠服以载体(处于水中的0.5%羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2%吐温80和0.9%苯甲醇)、AMB或TAD（经常死亡）。当终止动物生命时收集血浆。表1列举了本项研究中使用的动物以及它们接受的治疗。

表1

对于AMB，当独立给药时1毫克/千克体重(mpk)时，导致了约17nM游离或未结合的血浆浓度，或当与TAD一起给药时为约13nM游离或未结合的血浆浓度。在两种情形下，10mpkAMB剂量的游离或未结合的血浆浓度为约104nM。当独立地给药时，TAD的游离或未结合的血浆浓度为约24nM，或当与AMB(无论是1mpk或10mpk)一起给药时，为约26nM。

结果：

与使用载体治疗的动物相比，用单一给予TAD或AMB的治疗抑制了缺氧诱导的平均肺动脉压(mPAP)(图10)。TAD、1mpkAMB和10mpkAMB分别显示出23.2±1.3%、28.4±1.1%和42.1±2.4%的PAP抑制(mPAP±SEM)。

当一起给药时，TAD和1mpkAMB产生60.8±3.7%的PAP抑制，其统计学上显著地大于单一给予各药剂的加合效应(51.6±1.8%,p<0.05)。同样地，共同给予TAD和10mpkAMB实现了71.7±2.3%的PAP抑制，其统计学上也显著地大于单一给予各药剂的加合效应(65.3±1.9%,p<0.05)。

因此，本实施例表明了活体内安立生坦和他达拉非在抑制PAH上的共同作用。

Claims (15)

1.一种用于治疗人类患者体内的肺动脉高血压(PAH)的组合物，所述组合物包括：治疗有效量的安立生坦和治疗有效量的他达拉非，

其中安立生坦与他达拉非的重量比在1:1至1:10的范围内。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中安立生坦与他达拉非的重量比在1:2至1:5的范围内。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中安立生坦与他达拉非的重量比为1:2。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中安立生坦与他达拉非的重量比为1:3。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中安立生坦与他达拉非的重量比为1:4。

6.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述组合物口服或肠胃外给药。

7.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述组合物是片剂或胶囊剂。

8.根据权利要求1或2所述的组合物，其中安立生坦的治疗量为每日1mg至100mg。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中安立生坦的治疗量为每日2mg至20mg。

10.根据权利要求1或2所述的组合物，其中他达拉非的治疗量为每日5mg至500mg。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中他达拉非的治疗量为每日10mg至100mg。

12.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述组合物每日给药一次。

13.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述PAH为特发性PAH、家族性PAH或与其他疾病或病症相关的PAH。

14.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述PAH在基线处具有WHOII类，III类或IV类。

15.一种组合物，用于抑制人类患者体内内皮素诱导的血管收缩，所述组合物包括：治疗有效量的安立生坦与治疗有效量的他达拉非的结合，

其中安立生坦的量与他达拉非的量的重量比为1:1至1:10的范围。