MX2010001255A - Metabolitos y derivados de ambrisentan. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a derivados y metabolitos de ambrisentan, incluyendo compuestos de la fórmula general (l) o sales, hidratos, solvatos, racematos o isómeros ópticos de los mismos, en donde Rl es -H o -OCH3; R2 es -HJ, alquilo bajo (por ejemplo alquilo C1-C4) o glicosidil, y R3 y R4 son independientemente -CH3, -C(O)H o -CH2OR6, en donde R6 es -H o un grupo de hidrocarbilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono. En algunas modalidades, los compuesto de la Fórmula (1) exhibe afinidad selectiva para receptores ETA y sirven como antagonistas de receptor de endotelina. En algunas modalidades, los compuestos corresponden a metabolitos de ambrisentan producidor por la acción enzimática de citocromo P450 o enzimas de uridina difosfato glucuronosil transferasa, por ejemplo como se demuestra en los estudios pre-clínicos o álínicos.

Description

METABOLITOS Y DERIVADOS DE AMBRISENTAN Campo de la Invención La enseñanzas de la presente invención se relacionan a metabolitos y derivados de ambrisentan, un antagonista !de receptor de endotelina selectivo (ERA).

Antecedentes de la Invención Las endotelinas son una familia de péptidos sintetizados y liberados por las células endoteliales en el sistema vascular, de pulmón, riñon, células gastrointestinales y macrófagos. La familia de endotelina está comprendida de tres 21-a isopéptidos de amino ácido (ET-1, ET-2 y ET-3). Endotelina-1 (ET-1.) ha sido identificada como el mayor isopéptido cardiovascular.

ET-1 actúa en de una forma autocrina y paracr|ina mediante el tipo A (ETA) y el tipo B (ETB) de los subtipos del receptor de endotelina. Los receptores ETA están ubicado.s: en células de músculo suaves vasculares y su activación : que media la vasoconstricción y mitogénesis. Los receptores ETB están primeramente ubicados en células endoteliales, donde estimulan la vasodilatación mediante la activación de una síntesis de óxido nítrico de célula endotelial y la liberación de ET-1 mediante la endocitosis mediada por el receptor. Sin embargo, algunos receptores ETB también están ubicados en. las células de músculo suaves donde median la vasoconstricción y la proliferación celular. La activación del receptor ETA' es también un estímulo poderoso para una hipertrofia de miocito cardíaca y proliferación de fibroblastoma en los ríñones.

En los vasos sanguíneos, 85% de la población del receptor ET es hecha de los receptores ETA, que sugiere que ¦ el antagonismo de este receptor por su cuenta puede ser primeramente de otro beneficio terapéutico. De forma adicional, el antagonismo selectivo de ETA es concebida para ser ventajosa al preservar el vasodilatador natural y las respuestas de liberación inducidas por ET-1 mediante los receptores ETB en las células endoteliales.

Con base en los resultados de estos modelos animales, son las únicas indicaciones clínicas potenciales de ERAs, que incluye hipertensión pulmonar, hipertensión sistémica, enfermedad de riñon crónica y restenosis que lleva a la angioplastia.

Ambrisentan es un ácido (S)-2-[(4,6-dimetilpirimidm-2-il)oxi]-3-metoxi-3,3-d¡fenilpropiónico. Es únicamente oralmente activo, sin sulfonamida, antagonista de receptor de endotelina de la clase de ácido propiónico (ERA) que es selectivo para el receptor del tipo A de endotelina (ETA). La mezcla racémica $/R es descrita, por ejemplo, en Riechers y asociados., de Patente Norteamericana No. 7,109,205, cuya descripción es incorporada a la presente invención como referencia. Los estudios llevados a cabo en un tejido ventricular humano con ambrisentan, han demostrado una alta afinidad (K¡ menor) para el receptor ETA y un >1000 más de la selectividad ETA comparada con el recept'or ETB. La inhibición selectiva del receptor ETA inhibe la vasoconstricción de fosfolipasa C-mediada y la proliferación de célula C-mediada de una proteína de quinasa, mientras que se preserva el óxido nítrico y la producción de prostaciclina GMP. y la vasodilatación mediada por AMP, y la liberación de endotelina-1 (ET-1) que es asociada con el receptor (ETB) tipo B de endotelina.

Ambrisentan ha sido sujeto de pruebas clínicas en humanos.

Myogen, Inc. Liberación de Noticias, Diciembre 4, 2003 (http://www.prneewswire.com/cgi- ; bin/stories.pl?ACCT=104&STORY = /www/story/12-04-2003/0002069898&EDATE = ) anunció la finalización de la prueba Fase II de ambrisentan en PAH y la iniciación de las pruebas Fase III. La liberación menciona que las pruebas de Fase ,??? evaluaran 2.5 mg, 5-0 mg y 10.0 mg de dosis orales; de ambrisentan administradas una vez al día.

Myogen, Inc. Liberación de Noticias, Enero 8, 2004, (http:// i nvestor. myogen. com/phoenix-zhtml?c = 135160&p = irol-newsArticle%ID = 759080&highlight = ) anunció la participación del paciente en las pruebas clínicas de la Fase III de ambrisentan para al tratamiento de PAH. De acuerdo con la liberación de noticias, las pruebas de fase II han demostrado un aumento significantemente estadístico y clínicamente significativo en.1 el punto final de eficacia primario (capacidad de ejercicio medida por 6MWD) en todos los cuatro grupos de dosis de ambrisentan probados.

Myogen, Inc. Liberación de Noticias, Febrero 16, 2004 (http://investor. myogen. com/phoenix. zhtml?c= 135160&p = irol-newsArticle&ID = 759478&highlight = ) anunció la presentación próxima de los resultados detallados del estudio de la fase II de ambrisentan en PAH, en la Conferencia Internacional de la Sociedad Torácica Americana (ATS) 2004. (Rubín (2004) "Ambrisentan Mejora la Capacidad para hacer Ejercicio ', y Medidas Clínicas en Hipertensión Arterial Pulmonar", ATS Mayo 21 a 26 del 2004).

Myogen, Inc. Liberación de Noticias, Mayo 24, 2004 (http://investor. myogen. com/phoenix. zhtml?c=135160&pPirol-newsArticle&l D=.759460&highlight = ) reportó mejoras en clasificaciones funcionales 6MWD, BDI y WHO vistas en .jel estudio de Fase II. De forma adicional, la liberación de noticias mencionó la adaptabilidad de ambrisentan mediante una dosis de una vez al día.

Myogen, Inc. Liberación de Noticias, Febrero 10, 2005 (htt o ://investor. myogen.com/ Phoenix.zhtml?c = 135160&p = irol-bewsArticle&l D = 759971 &highlight = ) anunció que dos resúmeles que describen los efectos de ambrisentan en paciente con PAH fueron seleccionados para la presentación de ATS 2005 en San Diego. (Galié (2005) "Ambrisentan Seguridad a Largo Plazo' y Eficacia en Hipertensión Arterial Pulmonar, Seguimiento de 1-Año", ATS Mayo 23, 2005; Frost (2005) "Ambrisentan Mejora 6MWD de forma Comparativa para WHO Clase II y M en Pacientes PAH", ATS, Mayo 22, 2005).

Myogen, Inc. Liberación de Noticias, Mayo 19, 2005 (http://¡nvestor. myogen.com/ Phoenix.zhtml?c = 135160&p = irol-newsArticle&ID = 759658&highlight = ) reportó la iniciación de una prueba clínica para evaluar ambrisentan en pacientes con PAH que han descontinuado previamente terapia de bose'ntan o sitaxsentan debido a la prueba de función de anormalidades de hígado, concentraciones de suero de aminotransferasa específicamente elevadas.

Rubín y asociadas. (2005) Cardiología del Futuro (Future Cardiol.) 1 (4): 1 -8 reportó el mejoramiento del 6MWD medio para todos los pacientes después de 12 semanas de tratamiento con ambrisentan, con un aumento medio de vaselina de 36 metros.

Galié y asociados (2005) J. Am. Col I . Cardiol. 46(3'):529 a 535 reportó resultados de un estudio que varía la dosis de forma aleatoria que examina la eficacia y seguridad : ,; de ambrisentan en pacientes con PAH.

Breve Descripción de la Invención Los metabolitos de ambrisentan han sido identificados; en y determinados en un humano, ratón, rata, conejo y perro. En un aspecto, los metabolitos son compuestos que tienen la fórmula (I) Dónde R1 es -OH o -OCH, R2 es -H o glucuronidilo, y R3 y R4 son independientemente -CH3 o -CH2OH. De forma adicional, los metabolitos difieren en la estructura de ambrisentan. De forma adiciona, en varias modalidades R1 es -OH, R2 es g ucuronidilo, R3 es -CH2OH, o R4 es -CH2QH. De forma adicional a los metabolitos, los compuestos sintéticos incluyen compuestos de la fórmula (I) así como sus sales farmacéuticamente aceptables, solventes, hidratos, racematos o isómeros ópticos.. En varias modalidades, los metabolitos; son proporcionados de una forma aislada, que han sido identificados en y aislados o separados de tejidos de cuerpo o fluidos de un animal de prueba. En varias modalidades, los compuestos son proporcionados de forma sintética, en una forma sólida o cristalina y/o en composiciones de 50% de pureza o mayor, preferentemente 90% de pureza o mayor. En varias modalidades, los compuestos también comprenden derivados de las estructuras de metabolito anteriores, que incluyen éteres de hidrocarbilo, ésteres de alquilo menor, intermedios sintéticos y sus similares.

Los metabolitos ópticamente activos de ambrisentan tienen una configuración S alrededor del carbono asimétrico y son representados por (II), con las mismas definiciones anteriores para R -R4.

En varias modalidades, los metabolitos de ambrisentan incluyen un ambrisentan O-demetilado, un ambrisentan 4-hidroxilado y un ambrisentan 4,6-dihidroxilado, así como glucuronidas de ambrisentan y el O-dimetilado y derivados hidroxilados de glucuronidas. Los metabolitos que difieren en1 la estructura de ambrisentan al ser dimetilados o hidroxilados en varias posiciones donde se encuentran los productos de los llamados caminos de la Fase I metabólica, mientras que los metabolitos de ambrisentan contienen un éster de glucuronida de los productos de los llamados caminos de fase II metabólicos.

Las formas de dosis útiles para el tratamiento de estados de enfermedades incluyen materiales activos seleccionados a partir de los compuestos, así como un transportador adecuado para la administración a los sujetos.

Breve Descripción de los Dibujos La figura 1 proporciona una vista superior de la molécula de ambrisentan (en una forma ópticamente activa) que muestra los principales sitios del metabolismo.

La figura 2 proporciona la estructura de varios metabolitos de ambrisentan identificados en una variedad de mamíferos, incluyendo humanos.

Descripción Detallada de la Invención El término "ambrisentan", tal y como fue utilizado err la presente invención se refiere a un ácido (S)-2-[(4,6-dimet¡lpirimidin-2-il)oxi]-3-metox¡-3,3-difenilpropiónico. En ciertos lugares, es referido como el compuesto "padre" de ambrisentan únicamente para indicar su relación con varios compuestos de la presente invención que son descritos como derivados (por ejemplo, un ambrisentan "dimetilado" es un derivado donde un metilo ha sido removido). La estructura de ambrisentan corresponde a la estructura II donde R es -QCH3, R2 es -H, R3 es CH3 y R4 es -CH3. El a-carbono en la médula espinal del ácido carbónico de ambrisentan es asimétrica.

En varias modalidades, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula (I) general en una forma aislada. o sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, racematos o isómeros ópticos de los mismos. Los compuestos pueden existir en formas ópticamente activas (configuración S o R acerca del a-carbono), en una forma racémica (S/R), o ;en cualquier combinación. En varias modalidades los compuestos sirven como antagonistas del receptor de endotelina con una afinidad selectiva para los receptores ETA. En algunas modalidades, la estructura de los compuestos corresponden a metabolitos producidos durantes las pruebas clínicas; /en humanos. Los metabolitos pre-clínicos y los metabolitos de fase clínica han sido encontrados e identificados en varios tejidos, fluidos corporales y medios de excreción. ·, En la fórmula (I), R1 es -OH o -OCH3; R2 es -H, alquilo menor (por ejemplo, C1-C4 alquilo) o glicosidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3, -C(0)H o -CH2OR6, donde R6 es -H o un grupo hidrocarbilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono. De forma ilustrativa, donde R6 es diferente a -H, sirve como un grupo de protección de hidroxilo, el cual es útil para síntesis y/o para facilitar la identificación o separación cromatográficá y preparación. Los ejemplos no limitativos de R6 incluyen metilo y bencilo. Para ilustrar de forma adicional, cuanto ya sea R3 ó(R4 es -C(0)H, los compuestos sirven como intermedios sintéticos para preparar el grupo alcohol -CH2OH. Al menos uno. de R1, R2, R3 y R4 muestran una derivación con respecto al compuesto ' padre de ambrisentan. Eso quiere decir que, los compuestos novedosos descritos en la presente invención no incluyen ambrisentan. De forma adicional, en varias modalidades; R1 es - OH, R2 es glucuronidilo, R3 es -CH2OH o R4 es -CH2OH. ' ' En varios aspectos, el grupo glicosidilo R2 es ya sea glucosidilo (por ejemplo, derivados de glucosa) o glucuronidilo (por ejemplo, derivado de ácido glucurónico), donde los hidroxilos en los grupos glicosidilo son opcionalmente acilados (por ejemplo con el grupo acetilo -C(0)CH3) y carboxilos, en el grupo glicosidilo son opcionalmente esterificados con, por ejemplo, alcoholes d-C4- Tal y como será descrito a continuación, en - varias modalidades, los compuestos corresponden a productos de metabolismo de ambrisentan in vivo, o a intermedios sintéticos útiles en síntesis de; los metabolitos descritos en la presente invención.

Los metabolitos opcionalmente activos de ambrisentan tienen una configuración S alrededor del carbono asimétrico y son representados por la fórmula (II), con las mismas definiciones R -R4.

En modalidades particulares, R es -OCH3 o -OH; R2 és -H o glucuronidilo; t R3 y R4 son independientemente -CH3 o -CH2OH. En varias modalidades, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 es diferente de lo que se encuentra en ambrisentan. Consecuentemente, en varias modalidades, R es glucuronidilo, R1 es -OH, R3 es -CH2OH, o R4 es -CH OH. Es creído que los metabolitos ópticamente activos que resultan de la acción de ¡ enzimas en los materiales de inicio asimétricos de ambrisentan. Los metabolitos también incluyen sales de los compuestos de la fórmula (II). En varias modalidades, los compuestos ópticamente activos de la fórmula (II) son proporcionados de una forma aislada.

En varias modalidades, las formas de dosis farmacéuticas son proporcionadas de forma que comprendan un transportador farmacéuticamente aceptable y 0.1% a 90% del peso de* un material activo, donde el material activo comprende al meno;s' un compuesto seleccionado de aquellos.de la fórmula general (I). y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, isómeros ópticos y racematos de los mismos, donde R es -OH o -OCH3; R2 es -H, alquilo menor o glicosidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3, -C(0)H o -CH2OR6, donde R6 es -H o un grupo hidrocarbilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono; y donde el compuesto no es ambrisentan.

En un aspecto, la presente invención proporciona metaboíitos de prueba clínica humana de ambrisentan, ilustrativos en su forma pura o aislada. "Metaboíitos de prueba clínica humana" significa metaboíitos de ambrisentan formados en los cuerpos de sujetos humanos después de la ingesta o aplicación de ambrisentan de acuerdo con los protocolos clínicos con respecto a la dosis y monitoreo, incluyendo aquellos descritos en la presente invención. En varias modalidades, el término comprende especies moleculares formadas in vivo, ya sea o no las especies detectadas o inclusiva analizadas para una prueba clínica particular. También es contemplado que algunos metabolitos sin únicos a individuos particulares, que reflejan diferentes arreglos genéticos y . la presencia y actividad de varias enzimas, incluye citocromo P450 y enzimas UGT, involucradas en el metabolismo. Los metabolitos de prueba clínicos humanos cubren todos : los metabolitos formados en el cuerpo humano.

Los estudios clínicos en humanos toman un número ,de formas. Por ejemplo, seguridad, tolerancia, farmacoci néticos y farmacodinámicas sin llevadas a cabo en sujeto saludables. Los farmacocinéticos de dosis son medidos en dosis orales de 1,' 5, 10, 15, 20, 50, y 100 mg. Las cinéticas y dinámicas son llevadas a cabo en un intervalo de 48 horas. De forma adicional, el efecto de la comida en los parámetros de cinética es estudiado en sujeto que reciben una dosis de 50 mg tanto en el estado en ayunas y después de una comida estandarizada alta en calorías. Las farmacocinéticas de dosis múltiple: son estudiadas en dosis orales de 5, 7.5 y 10 mg administrados una vez al día durante 10 días. La sangre y orina son recolectadas en un intervalo de 24 horas.

Otras pruebas clínicas incluyen estudios de enlace que evalúan el potencial para la interacción farmacocinética entre ambrisentan y otros fármacos. En una modalidad, las farmacocinéticas de una sola dosis de ambrisentan solos Son comparados con las farmacocinéticas de una sola dosis, de ambrisentan administrados después de 7 días de administración de otro fármaco.

Otos estudios clínicos investigan el efecto de ambrisentan en pacientes con hipertensión arterial pulmonar. (PAH). Los sujetos recibieron unas dosis de 1 , 2.5, 5 ó 10 mg una vez| al día durante 12 semanas. Las pruebas de función de hígado son llevadas a cabo de forma periódica durante la prueba.

En otro aspecto, la presente invención proporciona metabolitos pre-clínicos ADME de ambrisentan. "Meta bolitos pre-clínicos ADME" significa aquellos metabolitos de ambrisentan formados in vivo o in vitro durante la prueba pire-clínica en sujetos no humanos. Dicha prueba es llevada a cabo para caracterizar la absorción, distribución, metabolismo - y excreción (ADME) de un producto de fármaco propuesto anterior a la prueba clínica en humanos. La descripción no limitativa, de dicha prueba es proporcionada por los ejemplos 1 a 6 a continuación.

Ha sido descubierto que varios de los compuestos representados por las fórmulas (I) y (II) son derivados i de ambrisentan en mamíferos como el resultado de metabolismo del fármaco por los llamados caminos metabólicos fase I o fase II. Dicha designación como los caminos de fase I y fase II; es convencional en la técnica del metabolismo y no debe dé ser confundida con la redacción de las pruebas clínicas humanas Fase I y Fase II para soportar la aprobación del fármaco. Los sitios ilustrativos y modos de metabolismo en la molécula de ambrisentan son mostrados en la figura 1.

En varios aspectos, el metabolismo es marcado por las reacciones de oxidación. Por ejemplo, varios grupos alquilo, o arilo son hidroxilado y/o grupo alcoxi son de alquilado. Estos son los caminos metabólicos de la fase I. El metabolismo por los caminos metabólicos de la fase I toma lugar, en su mayoría, en el hígado bajo la mediación de las enzimas de citocromo P450. Aunque todas las enzimas de citocromo P450 investigadas son básicamente capaces de metabolizar ambrisentan, las principales enzimas P450 comprendidas en el metabolismo de ambrisentan son citocromo P450, 3A4, 3A5 y 2C19. Los metabolitos de ambrisentan incluyen compuestos producidos por la acción catalítica de las enzimas de citocromo P450 u otras oxidazas en ambrisentan in vivo o in Vitro.

Los metabolitos de ambrisentan incluyen compuestos producidos por las reacciones biosintéticas de ambrisentan por la acción de los llamados caminos metabólicos de fase II. Por ejemplo, una reacción metabólica importante de ambrisentan es la biosíntesis de acilgl ucuronidas para formar dichos metabolitos, tales como A, E y F mostrados a continuación en la figura 2. Lo que deberá ser encontrado para estar involucrado en el metabolismo de ambrisentan en hepatocitos de rata, pérro y humanos.

El primer paso en la biosíntesis de acilglucuronidas es 'la formación de ß-D-glucuronida. Esta 1 -0-acil- -D-glucuronida puede entonces experimentar un re-arreglo intramolecular por la migración del grupo acilo en las posiciones C-2, C-3 y C-4 de:la porción de carbohidrato. Ha sido reportado por Hayball en; el periódico de Quiralidad, volumen 7, paginas 1 a 9 (1995).

En los hepatocitos de perro y de humano, la glucoronidación es un camino metabólico predominante. :En hepatocitos de rata, las cantidades significativas de un producto de oxidación (por ejemplo, Metabolit B) fueron también observadas. En general, las enzimas de transferasa , ;de glucuronisilo de bifosfato de uridina UGT1A9S, GUT1A3S y UGT2B7S fueron identificadas como enzimas comprendidas en el metabolismo. Los metabolitos de ambrisentan incluyen compuestos formados por la acción catalítica de las enzimas UGT en ambrisentan in vivo o in Vitro.

Los ejemplos de metabolitos incluyen aquellos designados como metabolitos A a G. Estos metabolitos son mostrados e:n la figura 2 de una forma ópticamente activa, con una configuración S cerca del carbono asimétrico en el ambrisentan padre. Las i estructuras correspondientes son mostradas a continuación ¡en las fórmulas (lll)-(IX) de una forma racémica. , El meta bol.it o A es una glucuronida de ambrisentan (R2 es glucuronidilo, R1 es -OCH3, y R3 y R4 son ambos -CH3). En ¡una forma racémica, los compuestos son representados por la fórmula (III): : '.

OH El metabolito B es un ambrisentan 4-hidroximetilo (R1 es -OCH3, R2 es H, uno de R3 y R4 es -CH2OH, y el otro de R3 y R4 es -CH3). En una forma racémica, los compuestos son representados por la fórmula (IV) y las sales de los mismos; El metabolito C es un ambrisentan O-dimetilo (R1 es -ÓH). En una forma racémica, los compuestos son representados -por la fórmula (V) y sales de los mismos: (V) El metabolito D es un ambrisentan 4,6-dihidroximetilo (R3 y R4 son ambos -CH2OH). En una forma racémica, los compuestos son representados por la fórmula (VI) y sales de los mismos: El metabolito E es una glucuronida de ambrisentan 4,6-dihidroximetilo (R3 y R4 son ambos, -CH2OH y R2 es glucuronilo). En una forma racémica, los compuestos son representados por la fórmula (VII) y sales de la misma: , El metabolito F es una glucuronida de ambrisentan; 4-hidroximetilo (uno de R3 y R4 es -CH2OH- y el otro es -CH3- y R2 es glucuronidilo). En una forma racémica, los compuestos son representados por la fórmula (VIII) y sales de la misma: El metabolito G es un ambrisentan 4-hidroximetilo O-dimetilo (R1 es -OH y R3 es -CH2OH). En una forma racérrrica, los compuestos son representados por la fórmula (IX) y sales de la misma : En varias modalidades, los metabolitos de ambrisentan-incluyen metabolitos, A, B, c, D, E, F y G- y los compuestos con las fórmulas (III) a (IX) mencionadas, anteriormente, son aislados de los tejidos corporales y fluidos corporales, y/o preparados de forma sintética. Una variedad de procesos de separación cromatográficos- tales como cromatografía de gas, cromatografía líquida y cromatografía de capa delgada (TLC)-pueden ser llevadas a cabo en las muestras de tejido y de fluido para proporcionar muestras de pruebas para un análisis adicional, tal como por la resonancia magnética nuclear o un análisis de masa espectrométrico. En dichas muestras, los metabolitos son contenidos en composiciones que esencialmente carecen en la presencia de cualquier otro metabolito. En dichos casos, la presencia de un metabolito en una muestra puede ser cuantificada por los métodos físicos, tales como la medición de la disminución nuclear de los isótopos activos, por la medición de un índice de refracción, por la. ionización de flama, por la ionización y desviación en los campos magnéticos tales como en espectrometría de masa, y sus similares.

En varias modalidades, los compuestos y metabolitos son proporcionados en una forma cristalina o en forma de solución, teniendo una grado considerable de pureza. Las rutas sintéticas orgánicas están disponibles para preparar los compuestos de una forma relativamente pura, por ejemplo en purezas de .80%' o mayores, a 90% o mayores de 95% o mayores y de 99%· o mayores. La recristalización de otros métodos de purificación puede ser llevada a cabo para proporcionar los compuestos que son esencialmente 100% puros. Dichos métodos sintéticos y técnicas de purificación son conocidos en la técnica, y son ilustrados de una forma no limitativa en los ejemplos que i siguen.

En varias modalidades, los compuestos 'son proporcionados de una forma sustancialmente pura.

Sustancialmente pura quiere decir que los compuestos son lo suficientemente puros para la aprobación de FDA y contienen, esencialmente, ningún contaminante u otros materiales, o alternativamente un nivel-de impureza que no afecta de forma adversa o de forma inaceptable los las propiedades de los compuestos, con respecto á las propiedades de seguridad, efectividad, estabilidad y otras deseables.

Los métodos de la presente invención que incluyen la administración de ambrisentan o un metabolito de ambrisentan a un mamífero y que detecta metabolitos al medir el nivel o concentración de uno de los metabolitos en los fluidos de os tejidos o corporales del mamífero. Las fluidos corporales incluyen sin limitación plasma sanguíneo, bilis, orina y heces, mientras que los tejido incluyen sin limitación microsomas, hepatocitos de hígado, e hígados prefusíonados. En varias modalidades, los metabolitos son etiquetados con varios isotipos para asistir en la detección o cuantificación de los metabolitos en los fluidos de los tejidos o corporales. De forma adicional, los metabolitos incluyen aquellos que son etiquetados con 4C tritio (3H) para el propósito de detectar o identificar especies a partir de sus productos nucleares ( 'en descomposición, así como metabolitos etiquetados con 13 C. o deuterio (2H) para facilitar la resonancia magnética nuclear y/o el análisis de espectrometría de masa de los compuestos. Tal y como fue utilizado en la presente invención, deuterado. ¡quiere . ! 9 · ' 1 !f decir sustituido con deuterio ( H) y tritiado quiere, decir sustituido con tritio (3H). .

En varias modalidades, los compuestos exhiben un enlace antagonístico a los receptores ETA y ETB, y son selectivos para el receptor ETA. En algunas modalidades, exhiben una afinidad para ETA que es al menos 50 veces más y preferentemente mayor que o igual a aproximadamente 100 más sensible quej a ETB. En varias modalidades, la selectividad para ETA , se mantiene inclusive cuando K¡. y los valores IC50 para ;los t metabolitos tienden a ser mayor, gracias por un orden de magnitud, que el ambrisentan presente. Para ilustrar, comparado con los resultado de los compuestos de ambrisentan padres en células de ovario de hámster Chino con un tiempo ¡de incubación de 30 minutos, los metabolitos B y C muestran una afinidad menor de 35 a 64 veces para el receptor ETA y una afinidad menor de 11 a 84 veces para el receptor ETB ,quéj;ia sustancia de ambrisentan padre, mientras que la afinidad de: los metabolitos B y C para el receptor ETA es de aproximadamente 100 veces que para el receptor ETB. , i' En varias modalidades, los compuestos de la presente I invención, incluyendo los metabolitos. A, B, C, D, E, F y G; así como sus sales, isómeros ópticos, racematos, tautómeros; y variantes etiquetadas de forma óptica (incluyendo 14C, 13C, tritio y variantes sustituidas con deuterio) son formuladas ;en formas de dosis adecuadas para la administración a humanos u i otros mamíferos. En algunas modalidades, por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden exhibir perfiles toxicológ icos favorables en comparación con una terapia convencional o terapia con el compuesto padre.

Como con los antagonistas del receptor de endoteli,na selectivos, en varias modalidades, los compuestos de la presente invención son utilizadas para tratar dichas condiciones tales como hipertensión pulmonar, hipertensión sistémica, enfermedad de riñon crónica y restenosis llevando a angioplastia. De forma adicional, son administradas en modalidad preferidas a sujetos que tienen un estado de enfermedad para el cual ERAs, incluyendo los antagonistas del receptor de endotelina selectivo como ambrisentan, son indicados. De forma alternativa o de forma adicional, son administrados a sujetos o animales de prueba que no tienen estados de enfermedad para el propósito de estudiar efectos no farmacológicos tales como efectos secundarios, toxicidad, metabolismo, consumo, biodisponibilidad y rutas de excreción.

En varias modalidades, los compuestos son administrados por cualquier ruta adecuada incluyendo oral, rectal, intranasal, intrapulmonar (por ejemplo, por inhalación) o parenteral (por ejemplo, intradermal, transdermal, subcutánea, intramuscular o intravenosa). La administración oral es preferida por algunas modalidades, y la dosis puede ser presentada con o sin comida, por ejemplo en el estado de ayuna o no. Los ejemplos no limitativos de las formas de dosis incluyen tabletas cubiertas o no cubiertas, cápsulas, polvos, gránulos, supositorios, soluciones ungüentos, cremas y sprays.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para la administración oral son preparadas como unidades discretas tales como cápsulas o tabletas que contienen una cantidad predeterminada del ingrediente activo, tal como un polvo o gránulo, o una solución o una suspensión en un:líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo puede también ser presentado como un; bolo, remedio o pasta.

Una tableta es hecha por la compresión o moldeo, de forma opcional con uno o más ingredientes más accesibles. Las tabletas comprimidas pueden ser preparadas al comprimir en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como un polvo o gránulos, opcionalrríe'nte. mezclados con un ünificador, lubricante, diluente inerte, preservativo, superficie activa agente de dispersión, i Las tabletas moldeadas pueden ser hechas al moldear en una máquina adecuada una mezcla del ingrediente activo en polvo humedecida con un diluente líquido inerte. Las tabletas puede opcionalmente ser cubiertas o marcadas y opcionalmente ser formuladas para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo. En una modalidad, la hidrólisis de ácido del medicamento es obviada por el uso de un recubrimiento entérico.

Un recubrimiento entérico es un medio para proteger un compuesto de la presente invención, con el objeto de evitar la exposición de una parte del tracto gastrointestinal, comúnmente el tracto gastrointestinal mayor, en particular el estómago y esófago, al compuesto de la presente invención. De esta forma, el tejido mocoso gástrico es protegido contra ritmo de exposición a un compuesto de la presente invención que produce efectos adversos tal como náusea; y, de forma alternativa, un compuesto de la presente invención es protegido de condiciones presentes en una o más partes del tracto gastrointestinal, comúnmente el tracto gastrointestinal superior.

Las formulaciones adecuadas para la administración-topical en la boca incluyen grageas que comprende el ingrediente activo en un base con sabor, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina o glicerina, o sacarosa y acacia, y los lavados bucales comprenden ; el ingrediente activo en un transportador líquido adecuado.

Las formulaciones para la administración rectal pueden ser presentadas como un supositorio con una base adecuada, que comprende, por ejemplo, mantequilla de cocoa o un salicilato.

Mientras que es posible para los ingredientes activos el ser administrados solos, puede ser preferible el presentarlos como formulaciones farmacéuticas. Las formulaciones,; tanto para uso veterinario y humano, de la presente invención comprenden al menos un ingrediente activo, tal y como fue definido anteriormente, junto con uno o más transportador adecuados y opcionalmente otros .ingredientes terapéuticos. Los transportadores deben de ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación, y fisiológicamente inocuos al recipiente del mismo.

En varias modalidades, los compuestos son formulados en un sistema de transportador. Dichos sistemas son conocidos e incluyen enlazador, llenadores, preservativos, desintegrantes, reguladores de flujo, pastificadores, agentes de humectación, emulsificadores, dispersores, lubricantes, solventes, agentes!de liberación lenta (incluyendo recubrimientos entéricos), antioxidantes y gases propulsores. Especialmente cuando son formulados para la administración a humanos, los act¡vos;son preferentemente combinados con al menos un transportador farmacéuticamente aceptable. Dichos transportadores son conocidos e incluyen derivados de celulosa sin limitación, polietilenglicol y polímeros N-vinilpirrolidona. Las formas de administración comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos, los cuales de conforman de 0.1% a aproximadamente 90% del peso de la forma de dosis. ' ; Los compuestos de la presente invención son formulados con transportadores y excipientes convencionales, que serán seleccionados de acuerdo con la práctica ordinaria. Las tabletas contendrán excipientes, llenadores, enlazadores y sus similares. Las formulaciones acuosas son preparadas de una forma estéril, y cuando son pretendidas para la entrega por otro que no sea una administración oral, generalmente serán isotónicas. Todas las formulaciones opcionalmente contendrán excipientes tales como aquellos presentados en el "Manual de Excipientes Farmacéuticos" (1986). Los excipientes incluyen ácido ascórbico y otros antioxidantes, agentes de quel ación tales como EDTa, carbohidratos tales como dextrina, hidroxialqulcelulosa, hidroxialquilmetilcelulosa, ácido esteárico y sus similares. · Las formulaciones incluyen aquellos adecuados para las rutas de administración anteriores. Las formulaciones pueden ser convenientemente presentadas en una forma de unidad de dosis y puede ser preparada por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica. Las técnicas' ¦ '· y formulaciones generalmente son encontradas en Ciencias Farmacéuticas de Remington (Remington's Pharmaceutic Sciences) (Mack Publishing Co., Easton, Pa). Dichos métodos incluyen el paso de traer en asociación el ingrediente activo con el transportador el cual constituye uno o más ingredientes de accesorio. En general, las formulaciones son preparadas de forma uniforma y llevadas íntimamente en asociación con .;el ingrediente activo con transportadores líquidos o transportadores divididos finamente o ambos, y entonces, si es necesario, moldear el producto.

Los metabolitos A, B, C, D, E, F y G han sido detectados en varios fluidos de tejidos y corporales de ratón, rata, conejo, perro y humanos. Un resumen de los descubrimientos que muestran la relación bio-sintética entre los metabolitos y q!ue indica en que especies ia presencia del metabolito es significativa, es presentada mediante la ilustración en la figura 1 · En otras modalidades, un producto de disociación de ambrisentan es formado antes del metabolismo. El producto de. disociación, observado en un ratón, rata, conejo y perro, es el compuesto conocido 4,6-dimetil-2-hidroxipirimidina.

Ejemplos Ejemplo 1 - Enlace de Receptor ETA V ETR^ In Vitro de Metabolitos de Ambrisentan I ¦ La actividad de enlace in vitro de los metabolitos 2 de ambrisentan, el Metabolito B (un derivado hidroxilado) y el Metabolito C (un derivado O-dimetilado) es evaluado contra receptores ETA y ETB humanos expresados en células CHO. Los compuestos de prueba son disueltos en 10"2 M en metaol: Cremophor EL® 100:1 y diluidos en agua dionizada a una concentración de 10"10 a 10~6 M. Las reacciones de enlace son iniciadas por la agregación de [1 5]-etiquetadas ET-1 o [,125]-etiquetadas ET-3 para los receptores ET-3 y EJB, respectivamente, después de 2 minutos la preincubación de las membranas en la presencia del Metabolito B y del Metabolito C. El enlace de radioligando específico a cada receptor es calculado como la diferencia entre el enlace total y el enlace no específico, determinado en la presencia de un exceso de ET-1 no etiquetado. Los valores K¡ son determinados por la curva no lineal que se adecúa a partir de los experimentos llevados a cabo en 3 concentraciones del compuesto de prueba.; ; La concentración requerida para un 50% de inhibición del enlace de radioligando (IC50) es determinada por la regresión no lineal basada en un porcentaje de descolocación y K¡ es calculada con base en valores IC50. Estos estudios son llevados a cabo con. tiempos de incubación de 30 minutos, en lugar de condiciones de estado calmado para ambrisentan. Los resultados > son proporcionados en la Tabla 1.

Tabla 1 Valores K¡ de Ambrisentan y sus Metabolitos B y C para los Receptores ETA ETB Substancia K¡[nM]±SE ETA ETB Ambrisentan 0.63 ±0.2 48.7 ± 1.17; Metabolito B 40.3 ± 6.1 4099 ± 322 Metabolito C 22.2 ± 4.2 556 ±43.6 Ejemplo 2 -Metabolismo In Vitro en Microsomas y Hepatocitos de Hígado El metabolismo in vitro de ambrisentan es investigado en microsomas de hígado y hepatocitos de hígado de ratas, perros y humanos.

En los estudios de microsoma de hígado humano, rata y perro que tienen como objetivo el metabolismo de fase I, un metabolito hidroxilado (Metabolito B) de ambrisentan ' es observado. Sin embargo, el cambio del compuesto ,de ambrisentan padre a este metabolito es bajo (3 a 4%) que indica que el metabolismo de fase I que contribuye de forma mínima al metabolismo de ambrisentan.

En hepatocitos de perro y humano, el metabolismo de fase II es la ruta preferida, con 25% y 21% de ambrisentan radioetiquetado siendo metabolizado por este camino durante un período de 24 horas. El metabolismo primario identificado es un acilglucuronida (Metabolito A) de un compuesto padre de ambrisentan, con únicamente rastros de cantidades (<1%) de un metabolito hidroxilado detectado. El metabolismo de fase1 II ocurre a un grado menor en hepatocitos de rata con 15% siendo metabolizado. durante un período de 24 horas, y una cantidad significativa de una fase del metabolito hidroxilado de fase I (metabolito B) también formado.

El fenotipo de reacción que utiliza microsomas que expresan una sola isoenzima CYP o transferasa de glucuronosilo de bifosfato de uridina (ÜGT) de isoenzimas son utilizadas para identificar aquellas enzimas que son suficientes para metabolizar ambrisentan in vitro. Los resultados de esos experimentos indican que el ambrisentan puede ser glucuronidado mediante varias isoenzimas UGT (UGT1A9S, UGT2B7S y UGT1A3S) y metabolizados de forma oxidasa mediante varios isoenzimas CYP (CYP3A4, CYP2C19 ' y CYP3A5).

Ejemplo 3 -Estudio de Perfusión de Hígado en Ratas Los caminos metabólicos de ambrisentan en ratas Wistar masculinos son investigados utilizando el modelo de hígado de rata prefusionado aislado. Ambrisentan [1 C]-etiquetado es utilizado como el fármaco radioetiquetado en dosis prefusionadas de 0.058 y 0.052, mg/g de hígado, 0.186 y 0.199 mg/g de hígado, y 0.616 y 0.556 mg/g de hígado (que corresponde a dosis de 3, 10 y 30: mg/kg, respectiva mente). ;Üos hígados son removidos de dos animales en donde cada grupo de dosis y prefusionado en un sistema de recirculación durante 6 horas y el patrón de metabolito del medio de perfusión y bilis es determinado. : Seis horas después de la dosis, los niveles del total de radioactividad en la disminución de perfusato por 55% para los 3 mg/kg de dosis y 10 mg/kg de dosis y 45% para 30 mg/kg de dosis. Durante el mismo período de tiempo, la excreción acumulativa del total de radioactividad en la bilis es de 25%!(3 mg/kg de dosis), 30% (10 mg/kg de dosis), y 31% (30 mg/kg ,de dosis).

En varias modalidades, los metabolitos son separados por un método HPLC y sus estructuras son determinadas por técnicas de cromatografía de líquido/espectrometría de masa. Los productos de metabólicos incluyen compuestos de C-oxidación (camino metabólico de fase I) y de conjugación con ácido glucurónico (camino metabólico de fase II). Saturación de la reacción de C-oxidación no ocurrió. El patrón metabólico es similar en el perfusato y bilis, con 4 picos que son identificados como I) compuesto padre no cambiado, 2) glucuronida padre (Metabolito A), 3) un derivado hidroxilado del compuesto padre (Metabolito B), y 4) una glucuronida del metabolito hidroxilado (Metabolito F). Compuesto padre es el pico predominante en todas las dosis probadas en el perfusato, y a 10mg/kg y 30 mg/kg en la bilis. En la dosis de 3 mg/kg, el glucuronida padre es el pico predominante en la bilis. De forma adicional, Jos rastros de 2 metabolitos son detectados en la bilis. Esos metabolitos son formados por la disociación de oxidación del grupo metilo y por la hidroxilación de uno de los grupos métilo del anillo de pirimidina y por la conjugación de ácido glucurónico.

Ejemplo 4 -Metabolismo In Vivo de Ambrisentan Los estudios de metabolismo hepático in vivo en un ratón, rata, conejo y perro indican que un compuesto padre no cambiado predomina en el plasma, orina y heces. Los metabolismo identificados en todas las especies animales incluyen un acilglucuronida de un compuesto padre de ambrisentan (Metabolito A), un derivado O-dimetiiado (Metabolito C), un derivado hidroxilado (Metabolito B), un derivado dihidroxilado (Metabolito D) y 4,6-dimetil-2-hidroxipiridina. Tres de esos 5 metabolitos son observados en los estudio in Vitro humanos (microsomas y hepatocitos), y ¡no existen metabolitos observados en los estudios in Vitro humanos que no son observados en las 4 especies animales probadas.

Ejemplo 5 - Excreción In Vivo Siguiendo el transporte activo a lo largo de la membrana de hepatocito, ambrisentan es secretado dentro del canaliculi de la bilis y es excretado mediante la bilis dentro de las heces., La excreción de ambrisentan y sus metabolitos son llevados a cabo en ratas que siguen una administración iv de una sola dosis de 10 mg/kg de ambrisentan y en perros , que siguen una administración de una sola dosis oral de 3 mg/kg;de ambrisentan. En ambos estudios, la mejor ruta de excreción, es mediante las heces. La recuperación del compuesto radioetiquetado en el estado de la rata promedio 88% en las heces y 9% en la orina. La recuperación del compuesto radioetiquetado en el estudio del perro promedio 90% en las heces y 8% en la orina. En ambos modelos animales, la mayoría del compuesto radioetiquetado es excretado dentro de las primeras 24 horas siguiendo la administración. ! En el estudio del perro, la sustancia no cambiada dominó en las heces y la orina. El compuesto padre de glucuronida (Metabolito A) es el principal metabolito en las heces. El principal metabolito en la orina es el producto de disociación¡de ambrisentan (4,6-dimetil-2hidroxipirimidina).

Ejemplo 6 -Excreción Biliar La excreción biliar y la circulación enteropático .de ambrisentan y sus metabolitos son llevados a cabo en ratas macho anestesiadas después de una administración intraduodenal de ambrisentan radioetiquetada. La bilis y orina son recolectados en un periodo dentro de 24 horas de dosis, 94.8% de la radioactividad total es recuperada de la bilis, 1.5% de orina. La alta recuperación en la bilis indica que la absorción ocurra casi completamente en el intestino. Para llevar a cabo la circulación enteropática, una segundo conjunto de ratas (aceptor de ratas) es dosificado de forma intraduodenal con una bilis estancada (un período de 0 a 12 horas) del primer conjunto de ratas (ratas donantes) y bilis y orina son de nuevo recolectadas en la bilis del aceptor de ratas, lo que indica una alta circulación enteropática de ambrisentan y sus metabolitos. Los patrones de metabolito en la bilis de las ratas donantes y aceptoras son similares.

El ambrisentan radioetiquetado (10 mg/kg) es administrado a perros de forma intraduodenal para llevar a cabo el grado:de excreción biliar y para identificar los metabolitos de ambrisentan en la bilis. Ocho horas después de la administración, 54% y 47% de la radioactividad total es excretada dentro de la bilis en machos y hembras, respectivamente. De esto, una glucuronida padre : de ambrisentan (1 -O-acilglucuronida) (Metabolito A) es .el metabolito predominante, que representa 77 a 81% del total de la radioactividad.

El compuesto padre de acilglucuronida (Metabolito A) es la especie metabólcio predominante en la bilis, pero el compuesto padre es la especie metabólica predominante en las heces. Esto sugiere que el enlace de acilglucuronida del compuesto padre de acilglucuronida es disociado en las heces, liberando el compuesto padre de ambrisentan. Esta disociación enzimática se debe a la microflora intestinal. En contraste, la excreción biliar y los estudios ADME en las ratas indican que ' el compuesto padre de ambrisentan es la especie metabólico predominante en tanto la bilis (95%) y heces (ca. 80%).

Ejemplos 7 a 19 -Síntesis de compuestos : ; A no ser que sea mencionado de otra forma, las reacciones son llevadas a cabo a temperatura ambiente y presión a ambiente, y la mezcla es mediante una agitación magnética bajo atmósfera de nitrógeno seco. Los extractos orgánicos son combinados y secados con sulfato de sodio . anhidroso, entonces filtrado y el filtrado concentrado bajo una presión reducida que utiliza un evaporador giratorio.

Los datos espectroscopios son consistentes con las estructuras y nombres. Los datos son presentados en algunos de los Ejemplos. Los Ejemplos del 7 al 19 proporcionan las síntesis de varios compuestos ópticamente activos, preparados comenzados por ambrisentan, el cual tiene una configuración S absoluta en el alfa (2-) carbono. Los compuestos racémicos y los compuestos R- son preparados de forma análoga, comenzando con el ácido (S/R)-2-[(4,6-dimetilpirimidin-2-il)ox¡]-3-netoxi-3,3-difenilpropiónico racémico y el ácido (R)-2-[(4 ,6-dimetilp¡rimidin-2-il)oxi]-3-metoxi-3,3-difenilpropiónico, respectivamente. El compuesto ambrisentan del material de inicio para los siguientes ejemplos es sintetizado de acuerdo con procedimientos conocidos, por ejemplo mediante una resolución racémica de un intermedio de ácido 3-metoxi-3 ,3-difenil-2-hidroxipropiónico (o su éster de metilo) con una esterificación subsecuente del ambrisentan ópticamente activo, o por una separación de racemato clásica de un ácido 2-[(4,6-dimetilpirimidin-2-¡l)ox¡]-3-metox¡-3,3-d¡fenilpropiónico llevado a cabo utilizando bases enantioméricamente activas adecuadas. La síntesis de ambrisentan y los compuestos relacionados lian sido reportados en la literatura, por ejemplo, en Riechers y asociados., Manual de Química Medica, vol. 39 pp. 2123 a 2 38 (1996); Fármacos del Futuro 2005, 30(8), 756 a 770; Jansén y asociados., Proceso Orgánico R&D (2001 ) 5, 16 a 22; y Riechers y asociados. WO 1996/11914 publicada el 25 de Abril de 1996, las descripciones que serán utilizadas como información de antecedente y son incorporadas como referencia.

Ejemplo 7 Triacetato de {2S,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-(4,6- Dimetilpirimidin-2-ilox¡)-3-metoxi-3,3-difenilpropanoiloxi)-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-trilo.

Una mezcla de ácido (S)-2-(4,6-dimetilpirimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-d¡fenilpropanóico (de aquí en adelante "ambrisentan", 1.9 g, 5.0 mmol) y carbonato de potasio (0.83 g, 6.0 mmol) en acetonitrilo (30 mL) es agitado durante 0.5, horas. Triacetato (2R,3R,4S,5S,6S)-2-BromO-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triilo (2.0 g, 5.0 mmol) es agregado a la mezcla de reacción y la reacción es agitada durante 12 horas. La mezcla resultante es evapora h 'asta sequedad en un evaporador giratorio bajo una presión reducida. Agua (20 ml_) es agregada al residuo resultante y la mezcla agitada durante 0.5 horas rindiendo un precipitado. El producto sin procesar es aislado por la filtración y el sólido obtenido con agua (2 X 20 ml_). El producto sin procesar es purificado por al recristalización de metanol-agua (2:1) para rendir el compuesto del título (1.7 g, 49%) como un sólido blanco. MS m/z 695.2 (M + + 1). ,; Ejemplo 8 - Metabolito A ! Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-((S)-2-(4,6-Dimetilpirimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-difenilpropanoiloxi)-3,4,5,-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico. ; ; El compuesto del Ejemplo 7 (1.0 g, 1.44 mmol) es disuelto en metanol (87 ml_) y entonces trietilamina (25 ml_) es agregada. Agua (25 ml_) es lentamente agregada a la solución de reacción y la reacción es agitada 0.5 horas más. Los volátiles son evaporador de la primera reacción terminada 'bajo una presión reducida. La mezcla resultante es ajustada a un pH de ~2 con 2N HCI a de .0 a 5°C y entonces extraída con de etilo (2 X 15 ml_). El rendimiento del producto sin p es de 600 mg. Una parte del producto sin procesar (200 purificada por un preparativo de HPLC para rendir el compuesto del título (80 mg, 30%). MS m/z 555.1 ( + + 1); 1H NMR (CDCI3, 200 MHz) d 5.32 (C-6 piran H, d, J5,6 = 7.4 Hz); [a]?0D '.4 -52.95° (c = 1 , CH3OH). :|· Ejemplo 9 f j (S)-Metil-2-(4,6-dimetílp¡rimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3--difenílpropanoato. ' ( ' Una mezcla de (S)-ambrisentan (15.0 g, 40.0 mmol), y carbonato de potasio (8.28 g, 60.0 mmol) en acetona (100 jmL) es agitada durante 0.5 horas. Yoduro de metilo (3 ml_, 47.0 mmol) es lentamente agregado en forma de gota y entonces, la mezcla de reacción es agitada durante 3 horas. La mezcla resultante es concentrada hasta la sequedad bajo . una presijón reducida. El residuo es mezclado con agua (100 mL) y extrafdo con acetato de etilo (4 X 100 m L ) .. É I rendimiento del compuesto del título es de 15.0 g (96%). MS m/z 392.9 (M+ + 1).

Ejemplo 10 ' ' [ '' (S)-Metil 2-(4-formil-6-metilpirimidin-2-iloxi)-3-metQxi-3;; 3- i ¦ ¦ v difenilpropanoato.

Dióxido de selenio (8.5 g, 76 mmol) es disuelto en una solución de dioxano (238 mL) y agua (40 mL) a 55 a 60°C. A la solución de dióxido de selenio, el compuesto del Ejemplo 9 (20 g, 51 mmol) es agregada y entonces la mezcla de reacción1 es calentada a reflujo durante 10 horas. La mezcla de reacción es enfriada a temperatura ambiente, diluida con éter (200 mL) y filtrada. El filtrado es concentrado a una presión reducida en" un evaporador giratorio y entonces extraida con acetato de etilo (2 X 100 mL) para rendir el compuesto del título sin procesar. MS m/z 406.9 (M+ + 1 ).

Ejemplo 11 (S)-Metil-2-(4-(hidroximetil)-6-metilpirimidin-2-iloxi)-3-1 metoxi-3,3-difenilpropanoato.

A una solución del compuesto sin procesar del ejemplo 10 (76 mmol) en metanol (170 mL) es agregado a borohidruro.de sodio (1.93 g, 51 mmol) en partes y la reacción es agitada durante 3 horas. La reacción es extinguida con agua helada (50 mL) y el metanol fue removido bajo una presión reducida en un evaporador giratorio. La fase acuosa residual es extraída con acetato de etilo (2 X 100 mL) para rendir el producto sin procesar (25 g). El producto sin procesar es purificado mediante una cromatografía de columna de gel de sílice e I u i d a ; e o n acetato/hexano de metilo para rendir el compuesto del título (1.8 g, 8.6%). MS m/z 409.1 (M+ + 1).

Ejemplo 12 -Metabolito B Ácido (S)-2-(4(Hidroximetil)-6-metNpirimidin-2-¡lox¡)-3-metoxi-3,3-d¡fen¡lpropanóico.

A una solución del compuesto de ejemplo 11 (0.8 g, 1.96 mmol) en metanol (10 mL) es agregado a una solución de hidróxido de sodio (0.392 g, 9.8 mmol) en agua (5 mL) y la mezcla resultante es reflujada durante 2 horas. La reacción es enfriada a temperatura, ambiente y el metanol es removido bajo una presión reducida en un evaporador giratorio. La fase acuosa residual es lavada con éter (2 X 10 mL), y entonces; el pH de la fase acuosa es ajustada a 2-3 con ácido sulfúrico 2N y extraído con acetato de etilo (2 X 20 ml_) para rendir' el compuesto del título (0.6 g, 80%). MS m/z 395.1 (M+ + 1); [a]20D = +141.09° (c = 1 , CH3OH).

Ejemplo 13 (S)-Metil-2-(4-(benziloximetil)-6-metilpirimidin-2-¡loxi)-3-metox¡-3,3-difenilpropanoato.

A una mezcla a 0°C de hidruro de litio (0.235 g, 29.4 mmol) en tetrahidrofurano y dimetilformamida (30 mL: 10 mL): es agregado al compuesto del Ejemplo 11 (3.0 g, 7.3 mmol) y, la mezcla agitada durante 0.5 horas. Bromuro de bencilo (1.25.7 , 7.3 mmol) es entonces agregado y la reacción agitada a 12 horas a temperatura ambiente. La reacción es vertida dentro de agua helada (100 mL) y la mezcla extinguida es extraída con acetato de etilo (2 X 100 mL). La concentración proporciona el compuesto sin procesar que es purificado por la cromatografía de columna en gel de sílice eluido con acetato-hexano de etilo (1:9) para rendir el compuesto del título (2.5 g, 69%). MS m/z 499.0 (M+ + 1). ; Ejemplo 14 Ácido (S)-2-(4-(Benziloximetil)-6-metilpirimidin-2-iloxi)-3-m e t o x i - 3 , 3 - d ¡ f e n ¡ I p r o p a n ó ¡ c o A una solución del compuesto del Ejemplo 13 (1.17 g, 2:34 mmol) en metanol (20 mL) es agregada a uña solución de hidróxido de potasio (0.987 , 23.4 mmol) en agua (10 mL) y; la reacción es agitada a reflujo durante 5 horas. La reacción es enfriada a temperatura ambiente y el metanol removido bajo una presión reducida en un evaporador giratorio. El residuo acuoso es lavado con acetato de etilo (2 X 25 mL) y entonces el pH es ajustado a 2.3 con 2N HCI. La fase acuosa es extraída con éter (2 X 50 mL) para rendir el compuesto del título (0.997 g, 88%). Ejemplo 15 Triacetato (2 S, 3 R,4S, 5 S,6S)-2-((S )-2-(4-(Benziloximetil)-6-metilpir¡mídin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-difenilpropanoiloxi)-6-(metox¡carbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triilo.

A una solución del compuesto del Ejemplo 14 (0.997 g, 2.05 mmol) en acetonitrilo (20 mL) es agregado a carbonato'de potasio (0.284 g, 2.05 mmol) y la mezcla de reacción agitaba durante 0.5 horas. Triacetato (2R,3R,4S,5S,6S)-2-Vromo-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triilo (0.817 , 2.05 mmol) es agregado a la mezcla de reacción y la reacción agitada durante 112 horas. La mezcla de reacción es filtrada y el filtrado concentrado bajo una presión reducida en¦ un evaporador giratorio en gel de sílice eluido con acetato/hexano de etilo (2.8) para rendir el compuesto del título (1.0 g, 60%). MS m/z 801.1 (M+ + 1); H NMR (CDCI3, 200 MHz) d 5.65 (C-6 piran H, d, J5 6 = 8 Hz).

Ejemplo 16 Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-((S)-2-(4-(Benzilo imetil)-6-met¡lpirimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-difenilpropanoili)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico.

I Iniciando con el compuesto del ejemplo 15, el compuesto del título es obtenido por un procedimiento similar al !del Ejemplo 2. MS m/z 683.5 1 (M+ + Na); H NMR (CDCI3, 200 MHz) d 5.32 (C-6 piran H, d, J5,6 = 8 Hz).

Ejemplo 17 Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5.Trihidroxi-6-((S)-2-(4-(hidroximetil)-6-metilpirimidin-2-iloxi)-3-metox¡-3,3-difenilpropanoiloxi)tetrahidro-2H-piran-2-carboxílico.

Iniciando con el compuesto del ejemplo 16, el compu 'sto del título es dibenzilado mediante hidrogenolisis con 10% , de paladio en carbono bajo una atmósfera de hidrógeno. El compuesto es purificado por un preparativo de HPLC. MS m/z 570.9 1 (M+ + 1); 1H NMR (CDCI3, 500 MHz) d 5.35 (C-6 piran H, d, J5,6 = 8.5 Hz).

Ejemplo 18 -Metabolito D Ácido (S)-2-(4,6-Bis(hidrox¡metil)pirimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3 , 3-d if e n i I pro pa nó i co El compuesto del título es' preparado iniciando ¡con' el compuesto el ejemplo 9, y que utiliza los procedimientos de los ejemplos 9, 10, 11 y 12, excepto que el exceso de dióxido de selenio es utilizado en el procedimiento del ejemplo 10 para i preparar el intermedio de dialdehído ácido (S)-2-(4,6-diformilpirimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-difenilpropanóico.

Ejemplo 19 -Metabolito E Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-((S)-2-(4',6- Bis(hidroximetil)p¡rimid¡n-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-d¡fenilpropanoiloxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico.

El compuesto del título es preparado iniciando con (S)-metil 2-(4,6-bis(hidroximetil)pirimidin-2-iloxi)-3-metoxi-3,3-difenilpropanoato, el cual es obtenido como un intermedio en la preparación del ejemplo 18, y que utiliza los procedimientos de los ejemplos 13, 14, 15, 16 y 17.

Claims (52)

REIVINDICACIONES

1. Una prueba clínica humana de metabolito de ambrisentan en una forma pura o aislada.

2. La prueba clínica humana de metabolito, tal y como fue descrita en. la reivindicación 1, el cual el producto del metabolismo el ambrisentan por un camino metabólico de fase I.

3. La prueba clínica humana de metabolito, tal y como fue descrita en la reivindicación 1, el cual es el producto del metabolismo de ambrisentan por un camino metabólico de fase II.

4. Un metabolito ADME pre-clínico de ambrisentan en la forma pura o aislada.

5. Un metabolito producido por la acción enzimática de citocromo P450 en ambrisentan in vivo

6. Un metabolito producto por la acción enzimática de la transferasa de glucüronosilo de difosfato de uridjna; ; en ambrisentan in vivo.

7. Un compuesto o compuestos en la forma aislada, seleccionados de aquellos de la fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, isómeros y racematos de los mismos, donde R1 es -OH o -OCH3; R2 es -H, alquilo menor o glicosidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3, -C(0)H o -CH2OR6, donde R6 es -H o un grupo de hidrocarbilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono; donde el compuesto no es ambrisentan

8. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde R1 es -OH o -OCH3; R2 es -H o glicosidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3 o -CH2OH.

9. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde R2 es -H o glucuronidilo.

10. Un compuesto, tal y como fue descrito en ! la reivindicación 7, donde R1 es -OH, R3 es -CH2OH, o R4 es -CH2OH.

11. Un compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde el compuesto es seleccionado de aquellos de la fórmula (lll)

12. El compuesto, tal y como fue descrito en al reivindicación 7 o una sal farmacéutica de los mismos, donde el compuesto es seleccionado de aquellos de la fórmula (IV)

13. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7 o una sal farmacéutica de los mismos, donde el compuestos es seleccionado de aquellos de la fórmula (V).

14. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, donde el compuesto es seleccionado de aquellos de la fórmula (VI)

15. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, donde el compuesto es seleccionado de aquellos de la fórmula (VII)

16. El compuesto, tal y como fue descrito en. la reivindicación 7 o una sal farmacéuticamente aceptable de Jos mismos, donde el compuesto es seleccionado de aquellos de la fórmula (VIH)

17. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, donde el compuesto es seleccionado de aquellos dé la fórmula (IX)

18. El compuesto, tal y como fue descrito en la i reivindicación 7, que comprende un compuesto ópticamente activo.

19. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 18, que tiene una configuración S alrededor de un carbono asimétrico.

20. El compuesto, tal y como fue descrito en,_ la reivindicación 7, que comprende un compuesto deuterado.. !

21. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, que comprende un compuesto tritiado. ,

22. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde el compuesto es etiquetado con 13C.

23. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde el compuesto es etiquetado con 14 C :

24. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde el compuesto es sustancialmente pura.

25. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 7, donde el compuesto es 50% puro o mayor.

26. El compuesto, tal y como fue descrito ' en' la reivindicación 7, donde el compuesto es al menos

27. Un compuesto ópticamente activo en una forma aislada de aquellos dé la fórmula (II) y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes1, de los mismos, donde , R1 es -OH o -OCH3; ' R2 es -H o glucuronidilo; R3- y R4 son independientemente -CH3 o -CH2OH; y adicionalmente donde el compuesto ópticamente activo no es ambrisentan.

28. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, donde R2 es glucuronidilo.

29. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, donde R1 es -OH.

30. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, donde al menos uno de R3 y R4 es -CH2OH.

31. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, donde R3 y R4 son -CH2OH.

32. El compuesto, tal y como fue descrito en ( la reivindicación 27, seleccionado de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes de los mismos.

33. El .compuesto, tal y como fue. descrito en ¡ la reivindicación 27, seleccionados de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes de los mismos.

34. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, seleccionado de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente, hidratos y solventes de los mismos.

35. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, seleccionados de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes de los mismos. ]

36. El compuesto, tal y como fue descrito en: la reivindicación 27, seleccionado de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes de los mismos.

37. El compuesto, tal y como fue descrito en la reivindicación 27, seleccionados de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes de los mismos.

38. El compuesto, tal y como fue descrito en ¡ la reivindicación 27, seleccionado de un compuesto de la fórmula y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solventes, de los mismos.

39. Un método in vivo, que comprende el administrar ambrisentan a un mamífero y detectar posteriormente y/o medir un nivel o concentración de un metabolito de ambrisentan · en fluidos de tejido o corporales del mamífero, donde el metabolito comprende un compuesto o compuesto, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables, racematos e isómeros ópticos! de los mismos, de la fórmula (I) donde R1 es -OH o -OCH3, R2 es -H o glucuronidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3 o -CH2OH.

40. El método, tal y como fue descrito en la reivindicación 39, donde los fluidos corporales son seleccionados del grupo que consiste de plasma, bilis, orina y heces.

41. El método, tal y como fue descrito en la reivindicación 39, donde R2 es glucuronidilo.

42. El. método, tal y como fue descrito en: la reivindicación 39, donde R1 es -OH. ¦ ·.

43. El método, tal y como fue descrito en la reivindicación 39, donde R3 o R4 es -CH2OH.

44. El método, tal y como fue descrito en , la reivindicación 39, que comprende el detectar los productos1 en descomposición nuclear de una molécula de ambriseritan tritiada o etiquetada 14C administrada al mamífero. '

45. El método, tal y como fue descrito en la reivindicación 39, que comprende administrar ambrisentan mejorado 3C al mamífero.

46. El método, tal y como fue descrito en la reivindicación 39, donde el metabolito tiene una configuración S cerca al carbono asimétrico.

47. Una forma de dosis farmacéutica, que comprende, un transportador farmacéuticamente aceptable y 0.1 a 90%: del peso de un material activo, donde el material activo comprende , I al menos un compuesto de aquellos de la fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables; hidratos, solventes, isómeros ópticos y racematos de los mismos, donde R es -OH o -OCH3; R2 es -H, alquilo menor o glicosidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3, -C(0)H o -CH2OR6, donde R6 es -H o un. grupo hidrocarbilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono; donde el compuesto no es ambrisentan.

48. La forma de dosis farmacéutica, tal y como 'fue descrita en la reivindicación 47, donde , R1 es -OH o -OCH3; R2 es -H o glucuronidilo; y R3 y R4 son independientemente -CH3 o -CH20H. '

49. La forma de dosis, tal y como fue descrita en la rei indicación 48, donde R2 es glucuronidilo.

50. La forma de dosis, tal y como fue descrita en la reivindicación 48, donde R1 es -OH, R3 es -CH20H o R4 :es - CH20H.

51. La forma de dosis, tal y como fue descrita en la reivindicación 48, donde el compuesto es un isómero ópticamente activo.

52. Un método para tratar un sujeto mamífero que exhibe una condición de enfermedad que es una indicación clínica para un antagonista del receptor de endotelina, donde el método comprende administrar al mamíféro una forma de dosis, tal y como fue descrito en las reivindicaciones de la 47 a la 51. ' ¡