CN103436479B - 一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用 - Google Patents
一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103436479B CN103436479B CN201310408255.7A CN201310408255A CN103436479B CN 103436479 B CN103436479 B CN 103436479B CN 201310408255 A CN201310408255 A CN 201310408255A CN 103436479 B CN103436479 B CN 103436479B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hydroxybutanone
- clostridium
- acetobutylicum
- high yield
- genetic engineering
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌,它是导入了乙酰乳酸脱羧反应酶的编码基因的梭菌。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法及应用。通过本发明的方法,丙酮丁醇梭菌平均乙偶姻产量达到5g/L左右。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域,具体地说,涉及一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用。
背景技术
3-羟基丁酮,又名乙偶姻(acetoin)、乙酰甲基甲醇,通常为淡黄色液体或晶体,天然存在于玉米、葡萄、草莓、干酪、肉类等食品中,是一种应用广泛的香料,我国国家标准GB2760-86规定其为允许使用的食用香料,美国食品和萃取协会(FEMA)安全号为2008。此外,3-羟基丁酮还可以作为化学合成中的重要原料,比如可用于合成手性近晶材料和向列材料。
3-羟基丁酮的传统化工制备主要是采用化学法或者酶法转化,其原料主要是双乙酰(丁二酮)和2,3-丁二醇。但是这些方法的原料昂贵,而且往往条件苛刻,设备要求高。另外,还可以采用微生物发酵法生产3-羟基丁酮。在微生物中,两分子丙酮酸在乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthase,ALS)作用下合成一分子乙酰乳酸,乙酰乳酸经乙酰乳酸脱羧酶(acetolactate decarboxylase,ALDC)作用即可生成3-羟基丁酮。在一些微生物中,3-羟基丁酮还可以被进一步还原生成2,3-丁二醇。目前人们已经发现很多可以产生3-羟基丁酮的菌种,例如:乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等奶制品或者酿酒发酵菌株,可以产生少量的3-羟基丁酮(通常低于1g/L)。肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、产气节杆菌(Enterobacter aerogenes)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等主要用来生产2,3-丁二醇的菌种也能够产生3-羟基丁酮。
丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum),是目前生产丁醇的主要菌种。其发酵产物除丁醇外,还有丙酮和乙醇,因此在生产中又被称为ABE(Acetone-Butanol-Ethanol)发酵。通常,60g/L的葡萄糖经丙酮丁醇梭菌发酵可产生12g/L的丁醇,6g/L的丙酮以及2g/L的乙醇,丁醇:丙酮:乙醇的比值为6:3:1(w/w)。除ABE外,丙酮丁醇梭菌还会产生少量的3-羟基丁酮。在丙酮丁醇梭菌C.acetobutylicum ATCC824中,3-羟基丁酮的产量通常情况下不足1g/L(Collas,F.,Kuit,W.,Clément,B.,Marchal,R.,López-Contreras,A.M.,Monot,F.,2012.Simultaneous production of isopropanol,butanol,ethanol and2,3-butanediol by Clostridium acetobutylicum ATCC824engineered strains.AMB Express2,45;Roos,J.W.,McLaughlin,J.K.,Papoutsakis,E.T.,1985.The effect of pH on nitrogensupply,cell lysis,and solvent production in fermentations of Clostridium acetobutylicum.Biotechnol.Bioeng.27,681-694)。在控制搅拌速度和压力的条件下,3-羟基丁酮最高产量达到2.2g/L(Doremus,M.G.,Linden,J.C.,Moreira,A.R.,1984.Agitation and pressureeffects on acetone-butanol fermentation.Biotechnol.Bioeng.27,852-860)。Kanouni等人将丙酮丁醇梭菌ATCC824经3-氟丙酮酸诱变后,筛选得到最高3-羟基丁酮产量达3.5g/L的突变株(A.EI Kanouni,A.M.Junelles,R.Janati-Idrissi,H.Petitdemange,R.Gay,1989.Clostridium acetobutylicum Mutants Isolated for Resistance to the Pyruvate Halogen Analogs.CURRENT MICROBIOLOGY18,139-144),据我们所知,这是丙酮丁醇梭菌中目前文献报道的最高乙偶姻产量。
提高丙酮丁醇梭菌的3-羟基丁酮产量有以下几方面的意义:
(1)提高传统ABE发酵的经济效益。目前丁醇价格约1.1万元/吨,丙酮0.8万元/吨,乙醇0.55万元/吨。按照3吨糖产1吨溶剂来算,ABE发酵的产品价值只是略高于原料(约3200元/吨糖),使得生物法生产ABE经济效益很差。然而3-羟基丁酮价格较高,化学法制备的3-羟基丁酮价格约10万元/吨,生物法生产的3-羟基丁酮约25万元/吨。因此提高ABE发酵中的3-羟基丁酮产量将显著提高ABE发酵的经济效益。
(2)有利于开发以3-羟基丁酮为代谢前体的其他重要化学品。ABE发酵中,丁醇是一个疏水性很强的化合物,对细胞有很大的毒性,限制了丁醇的发酵效率。相比丁醇,2,3-丁二醇或者2-丁醇对细胞的毒性较小。尤其是2-丁醇具有与1-丁醇相似的性质,因此可以替代1-丁醇用于第二代生物燃料。通过在丙酮丁醇梭菌中导入乙偶姻还原酶即可将3-羟基丁酮还原生成2,3-丁二醇,2,3-丁二醇同时也是2-丁醇的前体。然而研究表明丙酮丁醇梭菌中3-羟基丁酮的合成是这些途径中的限制步骤(Wardwell,S.A.,Yang,Y.T.,Chang,H.Y.,San,K.Y.,Rudolph,F.B.,Bennett,G.N.,2001.Expression of the Klebsiellapneumoniae CG21acetoin reductase gene in Clostridium acetobutylicum ATCC824.J IndMicrobiol Biotechnol.27,220-227;Siemerink,M.A,,Kuit,W.,López Contreras,A.M.,Eggink,G.,van der Oost,J.,Kengen,S.W.,2011.d-2,3-Butanediol Production Due toHeterologous Expression of an Acetoin Reductase in Clostridium acetobutylicum.Appl.Environ.Microbiol.77,2582-2588)。因此,强化丙酮丁醇梭菌3-羟基丁酮的合成,提高其产量对2,3-丁二醇以及2-丁醇等的开发都有重要意义。
(3)在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),霍乱弧菌(Vibrio Cholerae)等中,转录调控因子alsR通过感应乙酸的积累和pH的降低并以乙酸为共调节物促进ALS和ALDC基因的表达,进而促进3-羟基丁酮的生成。因此3-羟基丁酮的生成避免了微生物生存环境的酸化,具有“解毒”的作用。然而,在野生丙酮丁醇梭菌中,这种解毒作用主要是通过丙酮等溶剂的生成来完成,这或许是3-羟基丁酮产量低的原因。事实上,在丙酮丁醇梭菌中3-羟基丁酮和丙酮的生成也确实具有此消彼长的相反关系。因此,通过强化3-羟基丁酮的合成,丙酮产量就会降低。碳源由生成三碳化合物丙酮转向生成四碳化合物3-羟基丁酮,产品得率会进一步提升,并且3-羟基丁酮较丙酮不易挥发,对产品回收也有帮助。
为了提高丙酮丁醇梭菌3-羟基丁酮的产量,研究通常强化乙酰乳酸合成反应,而非强化乙酰乳酸脱羧反应。因为通常认为,乙酰乳酸合成反应对3-羟基丁酮的生成贡献更大,而即使在缺乏ALDC的情况下乙酰乳酸仍可以自发脱羧生成3-羟基丁酮。然而,无论是在丙酮丁醇梭菌中表达其自身的ALS还是枯草芽孢杆菌的ALS,3-羟基丁酮产量均没有提高(Wardwell,S.A.Metabolism of acetoin in C.acetobutylicum ATCC824.RiceUniversity.1999)。这表明丙酮丁醇梭菌中通过表达ALS来强化乙酰乳酸的合成反应对3-羟基丁酮产量的影响甚小。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌,通过强化乙酰乳酸脱羧反应提高梭菌的3-羟基丁酮产量。
本发明还要解决的技术问题是提供上述高产3-羟基丁酮的基因工程菌的构建方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述高产3-羟基丁酮的基因工程菌的应用。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:
一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌,它是导入了乙酰乳酸脱羧反应酶的编码基因的梭菌。
其中,所述乙酰乳酸脱羧反应酶的编码基因来自于梭菌属、芽孢杆菌属或克雷伯氏菌属。具体为如下1)至4)中任一所述的基因:
1)其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示;
2)其核苷酸序列如SEQ ID No:2所示;
3)严格条件下可与序列表中SEQ ID No:1或SEQ ID No:2限定的DNA序列杂交且编码乙酰乳酸脱羧反应酶的DNA分子;
4)与SEQ ID No:1或SEQ ID No:2的序列具有90%以上的同源性且编码乙酰乳酸脱羧反应酶的DNA分子。
其中,所述的梭菌为丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)、拜氏梭菌(C.beijerinckii)、糖丁醇梭菌(C.saccharobutylicum)、糖丁醇丙酮梭菌(C.saccharoperbutylacetonicum)、丁酸梭菌(C.butyricum)、产芽孢梭(C.sporogenes)、巴氏梭菌(C.pasteurianum)、酪丁酸梭菌(C.tyrobutyricum)、产气荚膜梭菌(C.perfringens)或肉毒梭菌(C.botulinum)。优选为C.acetobutylicum ATCC824和C.acetobutylicum CGMCC5234。
其中,丙酮丁醇梭菌Clostridium.acetobutylicum CGMCC5234,菌株号为B3,其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101,保藏编号CGMCC No.5234,保藏日期2011年9月9日,该菌株的信息记载在中国专利201210075094.X,申请日2012年3月20日。
上述高产3-羟基丁酮的基因工程菌的构建方法,从梭菌属、芽孢杆菌属或克雷伯氏菌属菌株中克隆乙酰乳酸脱羧反应酶的基因,并通过电转化的方法将其导入梭菌中进行表达。
上述高产3-羟基丁酮的基因工程菌的构建方法,优选的是,从丙酮丁醇梭菌C.acetobutylicum ATCC824中克隆乙酰乳酸脱羧反应酶的基因,并通过电转化的方法将其导入丙酮丁醇梭菌C.acetobutylicum CGMCC5234中进行表达。
上述高产3-羟基丁酮的基因工程菌在生产3-羟基丁酮中的应用。
本发明的通过强化乙酰乳酸脱羧反应来提高3-羟基丁酮产量的方法,可以显著提高梭菌的乙偶姻产量,使原料由生成丙酮转向生成更多的乙偶姻,而丁醇产量不受影响,即提高了梭菌发酵的产品得率也提高了梭菌发酵的产品价值。
有益效果:本发明的高产3-羟基丁酮的基因工程菌的基因转录分析表明,乙酰乳酸脱羧反应对3-羟基丁酮产量有更大的影响。通过在丙酮丁醇梭菌中强化乙酰乳酸脱羧反应,将3-羟基丁酮产量由初始1.8g/L左右大幅提高到5g/L左右;而丙酮由4.5g/L左右降低至2g/L,总溶剂(ABE和3-羟基丁酮)得率也由0.35g/g提高到0.39g/g。显著提高了丙酮丁醇梭菌发酵的经济效益。
附图说明
图1是丙酮丁醇梭菌代谢网络示意图。
图2重组丙酮丁醇梭菌B3(pIMP1-ALDC)发酵液气相色谱图谱,按出峰先后顺序依次为:3.711min,丙酮;4.126min,乙醇;5.409min,丁醇;6.734min,3-羟基丁酮;7.767min,乙酸;9.299min,丁酸。
具体实施方式
根据下述实施例,可以更好地理解本发明。然而,本领域的技术人员容易理解,实施例所描述的内容仅用于说明本发明,而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
下述实施例中如无特殊说明,所用方法均为常规方法,如《分子克隆:实验室手册》(New York:Cold Spring Habor Laboratary Press,1989)中所述的方法。所用试剂均可从商业途径获得。
下述实施例以丙酮丁醇梭菌为例阐明本发明的提高梭菌3-羟基丁酮产量的方法。
酵母粉购自英国OXIOD公司,目录号1023098;蛋白胨购自英国OXIOD公司,目录号594566。
LB培养基配方为:10g/L蛋白胨,5g/L酵母粉,10g/L NaCl,固体培养基另加15g/L琼脂粉。用于大肠杆菌的常规培养。
2xYTG培养基配方为:16g/l蛋白胨,10g/l酵母粉,4g/l NaCl,5g/l葡萄糖。用于培养制备电转化感受态的丙酮丁醇梭杆菌。
P2平板培养基:葡萄糖10g/L,酵母膏5g/L,蛋白胨3g/L,七水合硫酸镁3g/L,乙酸铵2g/L,磷酸二氢钾1g/L,磷酸氢二钾1g/L,琼脂粉15g/L。
实施例1:构建含有乙酰乳酸脱羧酶基因CAC2967表达质粒的丙酮丁醇梭菌。
采用细菌基因组试剂盒提取对数生长中后期的丙酮丁醇梭菌C.acetobutylicumATCC824基因组DNA,用以下引物进行PCR扩增其乙酰乳酸脱羧酶基因CAC2967:
ALDC-s CATATGATTGAAGAAGTGATCCCTAATCAT(划线部分为NdeI识别位点);
ALDC-as GAAATAAGTAAAGTTGAGAAATAACATATG(划线部分为NdeI识别位点)。
采用TAKARA公司的高效保真酶Primerstart进行PCR扩增,扩增程序为:95℃3min;98℃10s、55℃15s、72℃1min,30个循环;72℃10min。PCR产物经测序后确定其序列如SEQ ID No:1所示。
将所得PCR产物纯化回收后,与经Nde I酶切后的pIMPI-ptb载体(Mermelstein,L.D.,Welker,N.E.,Bennett,G.N.,Papoutsakis,E.T.,1992.Expression of cloned homologousfermentative genes in Clostridium acetobutylicum ATCC824.Biotechnology10,190–195)在T4DNA连接酶作用下连接,构建得到载体pIMP1-ALDC。
将质粒pIMP1-ALDC转化到E.coli TOP10(pAN2)中,E.coli Top10购自北京天根生化科技有限公司(目录号CB104)。pAN2为甲基化质粒(Heap,J.T.,Pennington,O.J.,Cartman,S.T.,Carter,G.P.,Minton,N.P.,2007.The ClosTron:a universal gene knock-outsystem for the genus Clostridium.J Microbiol Methods70,452-464)。并将转化后细胞涂布于含有氨苄青霉素和四环素素的LB平板上,挑取单菌落富集培养后提取质粒,pIMP1-ALDC质粒即是甲基化后的pIMP1-ALDC质粒。
厌氧条件下,取2xYTG培养基培养的生长至对数中期的C.acetobutylicum B3(保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,CGMCC No.5234;地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号)培养液60ml,4℃、4000rpm离心10min弃去上清,加入足量预冷的电转缓冲液EPB(270mM蔗糖,5mM NaH2PO4,pH7.4),洗涤两次,并用2.3ml EPB重悬。然后取570ul加入0.4cm电转杯放置在冰浴中冷却,并加入20ul甲基化的pIMP1-ALDC质粒,冰浴放置2min。2.0kV电压,25uF电容进行电转化。随后将电转液加入到1ml37℃的2xYTG培养基中复苏培养4h,离心收集细胞100ul并将细胞涂布于含有2.5ug/ml红霉素的P2平板中。厌氧培养24-36h后,获得含有pIMP1-ALDC质粒的重组丙酮丁醇梭菌,命名为C.acetobutylicum B3(pIMP1-ALDC)。
实施例2:构建含有乙酰乳酸脱羧酶基因BSU36000表达质粒的丙酮丁醇梭菌。
采用细菌基因组试剂盒提取对数生长中后期的枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)CGMCC No.3720(记载于中国专利201010171377.5中)。用以下引物进行PCR扩增其乙酰乳酸脱羧酶基因BSU36000:
BSU36000-s CATATGATGAAACGAGAAAGCAACATTC(划线部分为NdeI识别位点);
BSU36000-as TGAAGGAAGCCCTGAATAACATATG(划线部分为NdeI识别位点)。扩增产物经测序后确定其序列如SEQ ID No:2所示。将扩增产物按照实施例1的方法导入丙酮丁醇梭菌获得含有pIMP1-BSU36000质粒的重组丙酮丁醇梭菌,命名为C.acetobutylicum B3(pIMP1-BSU36000)。
实施例3:利用基因工程菌发酵生产ABE和3-羟基丁酮。
丙酮丁醇梭杆菌(C.acetobutylicum)B3(pIMP1-ALDC)和B3(pIMP1-BSU36000)在P2种子培养基(不加琼脂,其他组分同P2平板培养基)中37℃静止培养12h。分别以10%(v/v)的接种量接种至发酵培养基中。发酵培养基的配方如下:K2HPO40.5g/L;KH2PO40.5g/L;CH3COONH42.2g/L;MgSO4·7H2O0.2g/L;MnSO4·H2O0.01g/L;NaCl0.01g/L;FeSO4·7H2O0.01g/L;对氨基苯酸1mg/L;硫胺1mg/L;生物素0.01mg/L。37℃厌氧发酵60h。发酵液组分用气相色谱检测,气相色谱检测条件如下:火焰离子检测器(FID),Agilent HP-INNOWAX19091N-236毛细管色谱柱(60m×0.25mm×0.25um),N2为载气,流速2mL/min,分流比90:1,H2流速30ml/min,空气流速300ml/min,进样口温度180℃,检测器220℃,柱温(程序升温):70℃保留0.5min,然后以20℃/min的速率升温到190℃,保留4min。气相色谱出峰先后顺序见图2。发酵结果见表1,其中丙酮丁醇梭杆菌B3(pIMP1-ALDC)和B3(pIMP1-BSU36000)所对应的数据为任意挑选的10株重组菌的平均数据。
表1重组丙酮丁醇梭菌pIMP1-ALDC及对照菌株发酵结果
由表1可见,表达乙酰乳酸脱羧蛋白的重组菌株3-羟基丁酮产量明显提高,实现了底物由生成丙酮向生成3-羟基丁酮的转变。其中,丙酮丁醇梭杆菌B3(pIMP1-ALDC)的3-羟基丁酮产量与野生菌B3以及对照菌株B3(pIMP1)相比,分别提高了162%和120%,同时丁醇产量不受影响。与表达前相比,总溶剂(ABE和3-羟基丁酮)得率也提高了11.4%。
虽然以上实施例仅以C.acetobutylicum ATCC824和C.acetobutylicum B3(CGMCC5234)为例进行了说明,但本领域的技术人员通过本发明的公开,很容易看出本发明的方法同样适用于其他产梭菌,这些菌株包括但不限于:C.acetobutylicum,C.beijerinckii,C.saccharobutylicum,C.saccharoperbutylacetonicum,C.butyricum,C.sporogenes,C.thermosaccharotyticum,C.pasteurianum,C.tyrobutyricum,C.perfringens,C.botulinum。因此这些内容同样应当属于本发明的范围。
Claims (3)
1.一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌,其特征在于,它是导入了乙酰乳酸脱羧反应酶的编码基因的梭菌;
其中,所述乙酰乳酸脱羧反应酶的编码基因具体为如下1)至2)中任一所述的基因:
1)其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示;
2)其核苷酸序列如SEQ ID No:2所示;
所述梭菌为C.acetobutylicum ATCC 824和C.acetobutylicum CGMCC 5234。
2.权利要求1所述的高产3-羟基丁酮的基因工程菌的构建方法,其特征在于,从梭菌属、芽孢杆菌属或克雷伯氏菌属菌株中克隆乙酰乳酸脱羧反应酶的基因,并通过电转化的方法将其导入梭菌中进行表达。
3.权利要求1所述的高产3-羟基丁酮的基因工程菌在生产3-羟基丁酮中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310408255.7A CN103436479B (zh) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | 一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310408255.7A CN103436479B (zh) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | 一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103436479A CN103436479A (zh) | 2013-12-11 |
CN103436479B true CN103436479B (zh) | 2015-09-23 |
Family
ID=49690197
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310408255.7A Active CN103436479B (zh) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | 一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103436479B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107002028A (zh) * | 2014-12-08 | 2017-08-01 | 朗泽科技新西兰有限公司 | 呈现通过发酵路径的增大的通量的重组微生物 |
CN105505849B (zh) * | 2016-01-22 | 2019-09-20 | 南京工业大学 | 联产丁醇与2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法和应用 |
CN107058365B (zh) * | 2017-03-03 | 2020-11-06 | 南京工业大学 | 同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法与应用 |
-
2013
- 2013-09-10 CN CN201310408255.7A patent/CN103436479B/zh active Active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
"Chromosomal Integration and Expression of Two Bacterial α-Acetolactate Decarboxylase Genes in Brewer’s Yeast";K. BLOMQVIST 等;《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》;19911031;第57卷(第10期);摘要,第2797页左栏最后一段-右栏第一段 * |
"The production of D-acetoin by a transgenic Escherichia coli";S.Ui 等;《Letters in Applied Microbiology》;19981231;第26卷;第275-278页 * |
"微生物生产3-羟基丁酮研究进展";李树波 等;《生物加工过程》;20111130;第9卷(第6期);第63-68页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103436479A (zh) | 2013-12-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102329765B (zh) | 一种高产l-丙氨酸的xz-a26菌株及构建方法与应用 | |
US7659104B2 (en) | Solvent tolerant microorganisms and methods of isolation | |
US7541173B2 (en) | Solvent tolerant microorganisms and methods of isolation | |
Ma et al. | The utilization of acid-tolerant bacteria on ethanol production from kitchen garbage | |
Martínez‐Torres et al. | Inferring the role of microorganisms in water kefir fermentations | |
CN101952430B (zh) | 增强的产乙醇和丁醇微生物以及使用该微生物制备乙醇和丁醇的方法 | |
Guo et al. | 1, 3-Propanediol production by a newly isolated strain, Clostridium perfringens GYL | |
CN105505849B (zh) | 联产丁醇与2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法和应用 | |
CN103436479B (zh) | 一种高产3-羟基丁酮的基因工程菌及其构建方法和应用 | |
CN106190924A (zh) | 一株高产4‑甲基苯酚的酪丁酸梭菌 | |
CN105950493A (zh) | 一种工程菌及其构建方法与在制备藏红花酸中的应用 | |
CN103740771B (zh) | 克雷伯氏肺炎杆菌生产2r,3r-丁二醇的方法 | |
CN104278003A (zh) | 生产d-乳酸的重组大肠杆菌及其应用 | |
CN107354118A (zh) | 一种具有γ‑松油烯合成能力的基因工程菌及其构建方法与应用 | |
CN113122488A (zh) | 克雷伯氏菌工程菌及其生产甘油和二羟基丙酮的应用 | |
CN111484961A (zh) | 一种产5α-雄烷二酮的基因工程菌及其应用 | |
CN101864381A (zh) | 一株以葡萄糖为底物发酵产3-羟基-2-丁酮微生物菌株的选育 | |
CN101993850B (zh) | 一种生产d-乳酸基因工程菌及构建方法和应用 | |
CN104789487A (zh) | 分别可生产丁酸和正丁醇的菌株、及生成正丁醇的方法 | |
CN107058365B (zh) | 同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法与应用 | |
CN106978379A (zh) | 一种产异丁醇和乙醇的大肠杆菌及其制备方法 | |
CN115261292B (zh) | 改造的克雷伯氏菌属细菌及其生产1,2-丙二醇的应用和方法 | |
CN102161979B (zh) | 一种联产丁醇、异丙醇及乙醇的重组菌及其应用 | |
CN104204206A (zh) | 一种用于生产丁醇的方法 | |
CN104403956B (zh) | 木糖醇高温高产工程菌株的构建及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |