CN103417551A - 治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法，它是由紫杉醇、蟾毒灵按一定重量配比所制成的中药成分复方脂质体制剂，其制备方法是采用乙醇注入法制备脂质体，得本发明的治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂。经动物体内抗癌药理实验，该中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性明显高于化疗药5-氟脲嘧啶。中药复方攻癌毒成分脂质体制剂的抗癌作用比中药复方攻癌毒成分非脂质体制剂高。

Description

治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法

一、技术领域

本发明涉及中医药技术领域，具体地说是涉及一种治疗肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的中药攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法。

二、背景技术

癌症是危害人类健康的大敌。我国每年新发癌症病例约有160万人，每年死于癌症的约有130万人，全国因癌症而死亡的人数逐年上升，我国为肺癌、肺癌等癌症的高发区域，癌症死亡率居高不下。

目前尚无有效的药物治愈大多数癌症患者。化疗药物对癌症虽有一定疗效，但毒副作用大，中成药对癌症的疗效普遍较低，疗效均不理想。

本发明人经过几十年艰苦研究了虎眼万年青、红豆杉、干蟾皮、雷公藤等中药的抗癌有效物质，从中提取出多种抗癌活性化合物，经抗癌实验研究表明，对人乳腺癌、肺癌等癌细胞和动物移植性癌瘤均有显著的体内外抗癌治疗效果，并已申请获10项抗癌产品发明专利证书（如专利号分别为：ZL200810124590.3；ZL200810124588.6；ZL201210033666.8等）。在上述研究的基础上，本发明人又研究发明了一种治疗肺癌的中药攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法，其抗癌活性高、毒性低。

三、发明内容

1、发明目的：本发明的目的是提供一种抗癌活性高、毒性低的抗肺癌药物，具体地说是以紫杉醇、蟾毒灵为原料制备的一种治疗肺癌的攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法。

2、技术方案：

本发明的一种治疗肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于它是由紫杉醇、蟾毒灵组成的中药攻癌毒成分脂质体制剂，各中药成分简介如下：

紫杉醇（Paclitaxe,Taxol，TAX），（又称：泰素，紫素，特素），分子式：C₄₇H₅₁NO₁₄，分子量：853.89，化学结构式：

蟾毒灵（Bufalin），分子式：C₂₄H₃₄O₄，分子量：386.52，化学结构式：

一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于该制剂由下列重量百分比的中药复方攻癌毒成分和脂质体所制成：中药复方攻癌毒成分：脂质体为1:30，其中中药复方攻癌毒成分为紫杉醇1～2份、蟾毒灵1～2份；其中脂质体成分由卵膦脂：两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺：胆固醇为10:1:1。

所述的一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于所述的肺癌为非小细胞肺癌和小细胞肺癌。

所述的治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于该制剂的制备步骤如下：

（1）制备脂质体的原料配比为：卵膦脂与两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺的重量比为10:1，卵膦脂与胆固醇的重量比为10:1；

（2）脂质体与中药复方攻癌毒成分的重量比为30:1；

（3）中药复方攻癌毒成分脂质体制剂的制备方法采用乙醇注入法制备：取pH7.4的PBS缓冲液于茄型瓶中,于恒温水浴50～55℃预热30～35min；

（4）取步骤1和2的重质量配比的脂质体原料与中药复方攻癌毒成分于烧杯中，加入适量无水乙醇使其溶解；

（5）待中药复方攻癌毒成分全部溶解后迅速注入到步骤3恒温预热的装有缓冲溶液的茄型瓶中，得到乳白色脂质体混悬液，继续搅拌水化1～1.2h，抽真空除乙醇，800P过高压乳匀机10～12个循环，得到中药复方攻癌毒成分脂质体制剂。

所述的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

所述的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂在制备治疗小细胞肺癌药物中的应用。

所述的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂在体内对肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性明显高于化疗药5-氟脲嘧啶。

所述的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂在体内对肺癌生长的抑制作用比攻癌毒成分的非脂质体制剂高。

3、有益效果：

本发明的一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，是以紫杉醇、蟾毒灵为原料制备的抗癌药，经过在动物体内的抗癌药理实验，对肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的生长有非常显著的抑制作用。9mg/kg剂量的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂能显著抑制裸鼠移植性肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的生长（P<0.01），其抑瘤率分别为68.75%、67.96%；其对肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）的抗癌活性高于化疗药5-氟脲嘧啶（P<0.01），亦高于组方的单味成分（紫杉醇单味、蟾毒灵单味）。中药复方攻癌毒成分脂质体制剂在体内对肺癌生长的抑制作用比攻癌毒成分的非脂质体制剂高。可用于治疗肺癌（非小细胞肺癌和小细胞肺癌）。这为提高抗癌临床疗效提供了非常有前景的高效预选药物，亦为研究中药成分配伍的机理提供了很好的成分配方。

四、具体实施方式

实施例1：一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法，及制备方法步骤如下：

（1）中药复方攻癌毒成分的重量为：紫杉醇18mg、蟾毒灵18mg。

（2）脂质体制备原料配比为卵膦脂900mg，两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺90mg，胆固醇90mg；

（3）脂质体制备方法采用乙醇注入法制备，精密量取pH7.4的PBS缓冲液90mL于茄型瓶中,于恒温水浴50℃预热35min；

（4）取步骤2配比的脂质体原料于烧杯中，加入步骤1的中药复方攻癌毒成分36mg，再加入适量无水乙醇使其溶解；

（5）待中药复方攻癌毒成分全部溶解后迅速注入到步骤3恒温预热的装有缓冲溶液的茄型瓶中，得到乳白色脂质体混悬液，继续搅拌水化1h，抽真空除乙醇，800P过高压乳匀机10个循环，得到中药复方攻癌毒成分脂质体制剂。

实施例2：一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法，及制备方法步骤如下：

（1）中药复方攻癌毒成分的重量为：紫杉醇8mg、蟾毒灵16mg。

（2）脂质体制备原料配比为卵膦脂600mg，两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺60mg，胆固醇60mg；

（3）脂质体制备方法采用乙醇注入法制备，精密量取pH7.4的PBS缓冲液90mL于茄型瓶中,于恒温水浴55℃预热30min；

（4）取步骤2配比的脂质体原料于烧杯中，加入步骤1的中药复方攻癌毒成分24mg，再加入适量无水乙醇使其溶解；

（5）待中药复方攻癌毒成分全部溶解后迅速注入到步骤3恒温预热的装有缓冲溶液的茄型瓶中，得到乳白色脂质体混悬液，继续搅拌水化1.2h，抽真空除乙醇，800P过高压乳匀机12个循环，得到中药复方攻癌毒成分脂质体制剂。

实施例3：一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂及其制备方法，及制备方法步骤如下：

（1）中药复方攻癌毒成分的重量为：紫杉醇24mg、蟾毒灵12mg。

（2）脂质体制备原料配比为卵膦脂900mg，两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺90mg，胆固醇90mg；

（3）脂质体制备方法采用乙醇注入法制备，精密量取pH7.4的PBS缓冲液90mL于茄型瓶中,于恒温水浴50℃预热35min；

（4）取步骤2配比的脂质体原料于烧杯中，加入步骤1的中药复方攻癌毒成分36mg，再加入适量无水乙醇使其溶解；

（5）待中药复方攻癌毒成分全部溶解后迅速注入到步骤3恒温预热的装有缓冲溶液的茄型瓶中，得到乳白色脂质体混悬液，继续搅拌水化1h，抽真空除乙醇，800P过高压乳匀机10个循环，得到中药复方攻癌毒成分脂质体制剂。

实施例4：一种中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对裸鼠移植性非小细胞肺癌生长的抑制作用

1、实验动物和瘤株

BALB/C-nu裸鼠，70只，雌雄各半，4～6周龄，体重18-20g，购自本校动物实验中心。人肺癌A549细胞，购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。

2、造模与实验方法

BALB/C-nu裸鼠70只，按比例随机留10只为阴性对照组，其余60只进行造模。取体外培养的对数生长期人肺癌A549细胞，细胞浓度调整为1×10⁷/ml。无菌条件下，将人肺癌A549细胞接种于BALB/C-nu裸鼠背部，接种量为0.2ml/只（细胞数为2×10⁶/只）。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，1h内完成接种。

接种后随机分为6组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组，抗癌毒成分脂质体、抗癌毒成分非脂质体及其成分单味4个试验组，5-氟脲嘧啶（5-FU）阳性对照组，另加阴性对照组，共7组。

接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射抗癌毒成分脂质体、抗癌毒成分非脂质体、紫杉醇单味、蟾毒灵单味，剂量均为9mg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组腹腔注射等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为9mg/kg，各组动物均按0.2ml在腹腔注射，连续给药3周。末次给药后次日，进行如下观察：

完整剥离瘤块，并称重计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率＝（模型对照组肿瘤重量－试验治疗组肿瘤重量）/模型对照组肿瘤重量×100%。

3、实验结果：

一种中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对裸鼠移植性非小细胞肺癌的抑制作用：9mg/kg中药复方攻癌毒成分脂质体制剂能显著抑制裸鼠移植性非小细胞肺癌的生长(P<0.01)，其抗肺癌活性高于非脂质体攻癌毒成分(P<0.01)，非脂质体攻癌毒成分抗肺癌活性又高于化疗药5-氟脲嘧啶(P<0.01)，亦高于组方的单味成分（紫杉醇单味、蟾毒灵单味）。见表1。

表1  中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对裸鼠移植性非小细胞肺癌的抑制作用

实施例5：一种中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对裸鼠移植性小细胞肺癌生长的抑制作用

2、实验动物和瘤株

BALB/C-nu裸鼠，70只，雌雄各半，4～6周龄，体重18-20g，购自本校动物实验中心。人肺癌(SCLC)细胞株NCI-H446，购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。

2、造模与实验方法

BALB/C-nu裸鼠70只，按比例随机留10只为阴性对照组，其余60只进行造模。取体外培养的对数生长期人肺癌NCI-H446细胞，细胞浓度调整为1×10⁷/ml。无菌条件下，将人肺癌NCI-H446细胞接种于BALB/C-nu裸鼠背部，接种量为0.2ml/只（细胞数为2×10⁶/只）。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，1h内完成接种。

接种后随机分为6组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组，抗癌毒成分脂质体、抗癌毒成分非脂质体及其成分单味4个试验组，5-氟脲嘧啶（5-FU）阳性对照组，另加阴性对照组，共7组。

接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射抗癌毒成分脂质体、抗癌毒成分非脂质体、紫杉醇单味、蟾毒灵单味，剂量均为9mg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组腹腔注射等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为9mg/kg，各组动物均按0.2ml在腹腔注射，连续给药3周。末次给药后次日，进行如下观察：

完整剥离瘤块，并称重计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率＝（模型对照组肿瘤重量－试验治疗组肿瘤重量）/模型对照组肿瘤重量×100%。

3、实验结果：

一种中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对裸鼠移植性小细胞肺癌的抑制作用：9mg/kg中药复方攻癌毒成分脂质体制剂能显著抑制裸鼠移植性肺癌的生长(P<0.01)，其抗肺癌活性高于非脂质体攻癌毒成分(P<0.01)，非脂质体攻癌毒成分抗肺癌活性又高于化疗药5-氟脲嘧啶(P<0.01)，亦高于组方的单味成分（紫杉醇单味、蟾毒灵单味）。见表2。

表2中药复方攻癌毒成分脂质体制剂对裸鼠移植性小细胞肺癌的抑制作用

Claims (7)

1.一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于该制剂由下列重量百分比的中药复方攻癌毒成分和脂质体所制成：中药复方攻癌毒成分：脂质体为1:30，其中中药复方攻癌毒成分为紫杉醇1～2份、蟾毒灵1～2份；其中脂质体成分由卵膦脂：两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺：胆固醇为10: 1:1。

2.根据权利要求1所述的一种治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于所述的肺癌为非小细胞肺癌和小细胞肺癌。

3.根据权利要求1所述的治疗肺癌的中药复方攻癌毒成分脂质体制剂，其特征在于该制剂的制备步骤如下：

（1）制备脂质体的原料配比为：卵膦脂与两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺的重量比为10: 1，卵膦脂与胆固醇的重量比为10:1；

（2）脂质体与中药复方攻癌毒成分的重量比为30: 1；

（3）中药复方攻癌毒成分脂质体制剂的制备方法采用乙醇注入法制备：取pH7.4的PBS缓冲液于茄型瓶中, 于恒温水浴50～55℃预热30～35 min；

（4）取步骤1和2的重质量配比的脂质体原料与中药复方攻癌毒成分于烧杯中，加入适量无水乙醇使其溶解；

（5）待中药复方攻癌毒成分全部溶解后迅速注入到步骤3恒温预热的装有缓冲溶液的茄型瓶中，得到乳白色脂质体混悬液，继续搅拌水化1～1.2 h，抽真空除乙醇，800 P过高压乳匀机10～12个循环，得到中药复方攻癌毒成分脂质体制剂。

4.如权利要求1所述的复方攻癌毒成分脂质体制剂在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

5.如权利要求1所述的复方攻癌毒成分脂质体制剂在制备治疗小细胞肺癌药物中的应用。

6.如权利要求1或2所述的复方攻癌毒成分脂质体制剂在体内对非小细胞肺癌和小细胞肺癌的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性明显高于化疗药5-氟脲嘧啶。

7.如权利要求1所述的复方攻癌毒成分脂质体制剂在体内对肺癌生长的抑制作用比复方攻癌毒成分的非脂质体制剂高。