CN103417528B - 一种异巴西红厚壳素的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种异巴西红厚壳素的新用途。所述新用途是指异巴西红厚壳素作为活性成分用于制备抗肿瘤药物制剂。药理试验证明，异巴西红厚壳素对U87人脑胶质瘤细胞株、BXPC-3人胰腺癌细胞株、NCI-2126人肺癌细胞株、PANC-1人胰腺癌细胞株、A549人非小细胞肺癌细胞株、AGs人胃癌细胞株、A375人黑色素瘤细胞株、MCF-7人乳腺癌细胞株、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株、SMMC-7721人肝癌细胞株的生长均具有明显抑制作用，抗肿瘤活性显著，可望作为活性成分用于制备抗肿瘤药物制剂，具有药用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种异巴西红厚壳素的新用途，属于天然化合物应用技术领域。
背景技术
恶性肿瘤是当前威胁人类健康和生命的主要疾病。在大多数发达国家，肿瘤是仅次于心血管病的第二大死亡原因。肿瘤也是严重危害我国人民健康的重大疾病，我国的肿瘤研究也受到政府的重视，控制癌症已成为我国卫生战略重点之一。
肿瘤的治疗方法包括外科手术和放化疗。当前临床应用的抗肿瘤药物的突出问题是有效率低、选择性差（毒性大）和对耐药性肿瘤的不敏感。另外，复发和转移也是肿瘤治疗的难点。因此，研究选择性好，疗效高，靶点明确，对非靶器官无副作用的抗肿瘤药物是药学工作者的重大研究课题。
天然化合物异巴西红厚壳素，其化学结构式如下所示：
可由地耳草地上部分中提取分离得到（见中国专利申请CN201010534837.6的实施例1中所述），也可由田基黄中提取分离得到（见《中国实用医药》2008年第3卷第19期“高效液相色谱法测定田基黄中异巴西红厚壳素的含量”中所述）。中国专利申请CN201010534837.6中报道了异巴西红厚壳素(Isojacareubin)在制备抗耐药菌（含非耐药菌）药物中的应用，以及作为抗生素中增敏活性成分和抗生素的增敏剂中的应用。目前，未见异巴西红厚壳素的抗肿瘤活性的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种异巴西红厚壳素的新用途。
本发明所述的异巴西红厚壳素的新用途，是指异巴西红厚壳素作为活性成分用于制备抗肿瘤药物制剂。
作为一种优选方案，所述的异巴西红厚壳素作为活性成分用于制备治疗脑胶质瘤、胰腺癌、肺癌、胃癌、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌中的任意一种或二种以上肿瘤的药物制剂。
作为进一步优选方案，所述的药物制剂形式是任何可药用的口服剂型或注射剂，包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、注射液、粉针剂等。
作为一种优选方案，所述的异巴西红厚壳素从怒江藤黄（G.nujiangensis）中提取获得。
作为进一步优选方案，由怒江藤黄提取获得异巴西红厚壳素的工艺包括如下步骤：
a)首先将怒江藤黄用丙酮浸泡提取，然后减压浓缩丙酮提取液至无丙酮味，再用二氯甲烷萃取浓缩液，减压浓缩二氯甲烷萃取液得浸膏；
b)对所得浸膏进行硅胶柱层析分离：以二氯甲烷与甲醇按1:0-0:1的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有异巴西红厚壳素的流份；再经反相硅胶柱层析分离：以甲醇与水按65:35-90:10的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有异巴西红厚壳素的流份；
c)采用HPLC纯化：洗脱液是以甲醇与水按82:18的体积比形成的混合溶液，且混合溶液中还含有0.1vol%三氟乙酸（TFA）；流速为2mL/min；保留时间为12分钟。
药理试验证明，异巴西红厚壳素对U87人脑胶质瘤细胞株、BXPC-3人胰腺癌细胞株、NCI-2126人肺癌细胞株、PANC-1人胰腺癌细胞株、A549人非小细胞肺癌细胞株、AGs人胃癌细胞株、A375人黑色素瘤细胞株、MCF-7人乳腺癌细胞株、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株、SMMC-7721人肝癌细胞株的生长均具有明显抑制作用，抗肿瘤活性显著，可望作为活性成分用于制备抗肿瘤药物制剂，具有药用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细、完整地说明。
实施例
一、制备异巴西红厚壳素纯品
a)将怒江藤黄（2010年8月采自云南省怒江州，植物样本由云南中医学院周元川教授鉴定，并留样于上海中医药大学中药创新实验室，标号为G.N.0001）用丙酮浸泡提取，每次浸泡使用的丙酮体积为怒江藤黄待提取的怒江藤黄药材质量的5倍，每次浸泡一星期，共浸泡提取3次；合并丙酮浸泡提取液，减压浓缩至无丙酮味；采用二氯甲烷萃取浓缩液4次，减压浓缩二氯甲烷萃取液得浸膏；
b)对所得浸膏采用硅胶柱层析分离：以二氯甲烷与甲醇按1:0-0:1的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有异巴西红厚壳素的流份；再经反相硅胶柱层析分离：以甲醇与水按65:35-90:10的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有异巴西红厚壳素的流份；
c)采用HPLC纯化：采用Agilent 1200Series，色谱柱Zorbax SB-C18columns(9.4×250mm×5μm)；洗脱液是以甲醇与水按82:18的体积比形成的混合溶液，且混合溶液中还含有0.1vol%三氟乙酸（TFA）；流速为2mL/min；保留时间为12分钟。
对得到的异巴西红厚壳素纯品进行质谱和核磁分析的数据如下：
黄色粉末（甲醇），C18H14O6，ESI-MS：m/z[M+1]+=327；
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):7.58(1H,d,J=8.8Hz,H-8),7.05(1H,d,J=10.0Hz,H-4’),6.92(1H,d,J=8.8Hz,H-7),6.15(1H,s,H-2),5.72(1H,d,J=10.0Hz,H-3’),1.44(6H,s,2’-Me,2-Me)；
13C-NMR(100MHz,DMSO-d6):162.8(C-1),98.8(C-2),160.18(C-3),102.7(C-4),51.7(C-4a),146.5(C-4b),132.9(C-5),152.9(C-6),115.4(C-7),116.6(C-8),113.3(C-8a),180.4(C-9),101.4(C-9a),78.6(C-2’),127.8(C-3’),113.8(C-4’),28.3(C-2’Me)。
二、采用MTT还原法验证异巴西红厚壳素的抗肿瘤活性
取对数生长期人癌细胞株（U87人脑胶质瘤细胞株，BXPC-3人胰腺癌细胞株，NCI-2126人肺癌细胞株，PANC-1人胰腺癌细胞株，A549人非小细胞肺癌细胞株，AGs人胃癌细胞株，A375人黑色素瘤细胞株，MCF-7人乳腺癌细胞株，MDA-MB-231人乳腺癌细胞株，SMMC-7721人肝癌细胞株），采用含10%小牛血清的DMEM培养液培养，以1×106/mL接种于96孔板中，接种体积为100μL，置37℃、5%CO2孵箱中培养24h；分别设细胞对照组和8个浓度的实验组（100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.6和0.8μg/mL），每组3个复孔；培养24h后吸取培养液，实验组加入含不同浓度异巴西红厚壳素的培养液100μL，细胞对照组加等体积培养液；置37℃、5%CO2孵箱中培养72h，加入MTT的磷酸缓冲液（5mg/mL）10μL/孔，继续培养4h，吸弃上清液，加DMSO 100μL/孔，轻微震荡10min，用酶标仪于检测波长540nm测定吸光度（OD）值，计算细胞IC50。检测结果见表1所示。
表1IC50(μM)
| 人癌细胞株 | 异巴西红厚壳素 | 姜黄素 | 紫杉醇 |
| U87 | 9.50 | 20.81 | 285.4 |
| BXPC-3 | 20.65 | - | 217.3 |
| NCI-2126 | 11.95 | 56.88 | 80.56 |
| PANC-1 | 37.17 | - | 139.26 |
| A549 | 22.32 | 42.79 | 1.33 |
| AGs | 2.53 | 4.38 | 23.11 |
| A375 | 12.87 | 47.24 | 61.4 |
| MCF-7 | 3.82 | 43.79 | 155.31 |
| MDA-MB-231 | 5.89 | 3.76 | - |
| SMMC-7721 | 16.42 | 15.44 | 44.92 |
由表1可见：异巴西红厚壳素对U87人脑胶质瘤细胞株、BXPC-3人胰腺癌细胞株、NCI-2126人肺癌细胞株、PANC-1人胰腺癌细胞株、A549人非小细胞肺癌细胞株、AGs人胃癌细胞株、A375人黑色素瘤细胞株、MCF-7人乳腺癌细胞株、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株、SMMC-7721人肝癌细胞株的生长均具有明显抑制作用，强于阳性对照药紫杉醇和姜黄素，抗肿瘤活性显著，可望作为活性成分用于制备抗肿瘤药物制剂，具有药用前景。
最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种由怒江藤黄提取获得异巴西红厚壳素的工艺，其特征在于，包括如下步骤：
a)首先将怒江藤黄用丙酮浸泡提取，然后减压浓缩丙酮提取液至无丙酮味，再用二氯甲烷萃取浓缩液，减压浓缩二氯甲烷萃取液得浸膏；
b)对所得浸膏进行硅胶柱层析分离：以二氯甲烷与甲醇按1:0-0:1的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有异巴西红厚壳素的流份；再经反相硅胶柱层析分离：以甲醇与水按65:35-90:10的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有异巴西红厚壳素的流份；
c)采用HPLC纯化：洗脱液是以甲醇与水按82:18的体积比形成的混合溶液，且混合溶液中还含有0.1vol％三氟乙酸；流速为2mL/min；保留时间为12分钟。
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| 熊丽.田基黄抗肿瘤活性成分与含量测定方法研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库(医药卫生科技辑)》.2012,第2012年卷(第02期),20、21、23-25. * |
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