CN103416395A - 骨骼肌组织块冻存液及冻存、融解方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种骨骼肌组织块冻存液，1000mL冻存液由以下原料制成：（1）1-2gDMEM/F12粉剂溶于蒸馏水中，制成1000mLDMEM/F12基础培养液；（2）将900mLDMEM/F12基础培养液与100mL胎牛血清混合，制成DMEM/F12培养液；（3）将900mLDMEM/F12培养液与100mL二甲基亚砜混合，制成冻存液。本发明采用胎牛血清、DMEM/F12培养液作为基础液为组织块提供养分，保证细胞内外的渗透平衡，保证组织块内的细胞的环境与体内环境相近，冻存效果好；采用低浓度的二甲基亚砜作为渗透性冷冻保护剂，使冻存保护液对细胞的毒性减小。本冻存保护液直接对猪骨骼肌组织块冻存液，冻存效果好，细胞损伤少，能够为科研提供较高质量的猪骨骼肌组织块以用于培养。

Description

骨骼肌组织块冻存液及冻存、融解方法
技术领域
本发明涉及一种骨骼肌组织块冻存液及冻存、融解方法。
背景技术
肌肉品质研究，尤其是通过骨骼肌细胞培养研究和调控肌内脂肪的增殖和分化，提高肉的食用品质具有十分重要的意义。直接在深低温中冻存骨骼肌组织，通过骨骼肌组织块的冻存和融解，将冻存的骨骼肌组织块进行培养，不需要每次培养均屠宰实验动物，极大地降低了研究成本。
发明内容
本发明的目的在于建立一种骨骼肌组织块冻存和融解的方法，以将保存的骨骼肌组织块用于培养之用。
本发明的技术方案是：骨骼肌组织块冻存液，1000 mL冻存液由以下原料制成：（1）1-2 g DMEM/F12粉剂溶于蒸馏水中，制成1000 mL DMEM/F12基础培养液；（2）将900 mL DMEM/F12基础培养液与100mL胎牛血清混合，制成DMEM/F12 培养液；（3）将900 mL DMEM/F12培养液与100mL二甲基亚砜混合，制成冻存液。
骨骼肌组织块冻存方法，它的步骤如下：
（1）将骨骼肌组织块装在装有冻存液的冻存管中；
（2）将冻存管于0~4 ℃放置2 ~3h
（3）将冻存管于-20 ℃放置2~3 h；
（4）将冻存管于液氮容器颈气态部分放置2~3 h；
（5）将冻存管浸入液氮中冻存。
骨骼肌组织块融解方法，从液氮中取出装有骨骼肌组织块的冻存管，放入36-38 ℃的水浴中，摇动，1分钟后装入离心管中，在1000rpm速度下离心5 min，弃去上层液，然后补加8-10 mL含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM/F12培养液，吹打使骨骼肌组织块悬浮，骨骼肌组织块融解。
本发明采用胎牛血清、DMEM/F12培养液作为基础液为组织块提供养分，保证细胞内外的渗透平衡，保证组织块内的细胞的环境与体内环境相近，冻存效果好；采用低浓度的二甲基亚砜作为渗透性冷冻保护剂，使冻存保护液对细胞的毒性减小。本冻存保护液直接对猪骨骼肌组织块冻存液，冻存效果好，细胞损伤少，能够为科研提供较高质量的猪骨骼肌组织块以用于培养。
可成功冻存猪骨骼肌组织块，以用于后续培养。融解冻存的猪骨骼肌组织块，可成功用于后续培养。
具体实施方式
骨骼肌组织块冻存液， 1000 mL冻存液由以下原料制成：（1）1-2 g DMEM/F12粉剂溶于蒸馏水中，制成1000 mL DMEM/F12基础培养液；（2）将900 mL DMEM/F12基础培养液与100mL胎牛血清混合，制成DMEM/F12 培养液；（3）将900 mL DMEM/F12培养液与100mL二甲基亚砜混合，制成冻存液。
骨骼肌组织块冻存方法，它的步骤如下：
（1）将骨骼肌组织块装在装有冻存液的冻存管中；
（2）将冻存管于0~4 ℃放置2 ~3h
（3）将冻存管于-20 ℃放置2~3 h；
（4）将冻存管于液氮容器颈气态部分放置2~3 h；
（5）将冻存管浸入液氮中冻存。
骨骼肌组织块融解方法，从液氮中取出装有骨骼肌组织块的冻存管，迅速放入36-38 ℃的水浴中，摇动，1分钟后完全融化，用70％酒精擦拭消毒冻存管后，生物安全柜中打开盖，装入离心管中，在1000rpm速度下离心5 min，弃去上层液，然后补加8-10 mL含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM/F12培养液，吹打使骨骼肌组织块悬浮，骨骼肌组织块融解。

Claims (3)

1.骨骼肌组织块冻存液，其特征在于：所述1000 mL冻存液由以下原料制成：（1）1-2 g DMEM/F12粉剂溶于蒸馏水中，制成1000 mL DMEM/F12基础培养液；（2）将900 mL DMEM/F12基础培养液与100mL胎牛血清混合，制成DMEM/F12 培养液；（3）将900 mL DMEM/F12培养液与100mL二甲基亚砜混合，制成冻存液。
2.骨骼肌组织块冻存方法，其特征在于：它的步骤如下：
（1）将骨骼肌组织块装在装有冻存液的冻存管中；
（2）将冻存管于0~4 ℃放置2 ~3h
（3）将冻存管于-20 ℃放置2~3 h；
（4）将冻存管于液氮容器颈气态部分放置2~3 h；
（5）将冻存管浸入液氮中冻存。
3.骨骼肌组织块融解方法，其特征在于：从液氮中取出装有骨骼肌组织块的冻存管，放入36-38 ℃的水浴中，摇动，1分钟后装入离心管中，在1000rpm速度下离心5 min，弃去上层液，然后补加8-10 mL含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM/F12培养液，吹打使骨骼肌组织块悬浮，骨骼肌组织块融解。
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