CN103349776B

CN103349776B - 一种依达拉奉注射液及其制备方法

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Publication number: CN103349776B
Application number: CN201310299714.2A
Authority: CN
Inventors: 何龙其; 缪也夫
Original assignee: BEIJING PURUIBOSI INVESTMENT Co Ltd
Current assignee: Beijing preplus Biotechnology Co.,Ltd.
Priority date: 2013-07-17
Filing date: 2013-07-17
Publication date: 2015-07-01
Anticipated expiration: 2033-07-17
Also published as: CN103349776A

Abstract

本发明涉及一种依达拉奉注射液及其制备方法，所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽，所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.1%-0.2%（W/V），维生素C的浓度为0.1%-0.5%（W/V），谷胱甘肽的浓度为1.0%-10.0%（W/V）。本发明相比现有技术具有以下有益效果是：本发明将依达拉奉、维生素C、谷胱甘肽的合理配比，使三者协同作用，发挥其良好抗氧化特性，对脑损伤及其并发症具有良好的治疗作用，且稳定性高。

Description

一种依达拉奉注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于药剂制备领域，具体涉及一种依达拉奉注射液及其制备方法。

背景技术

脑卒中是由于脑血循环障碍所导致的急性局部脑功能障碍，临床表现为失语、肢体瘫痪和感觉障碍等症状和体征。急性缺血性脑卒中是最常见的脑卒中类型，占全部脑卒中的60%～80%。在一些文献中，脑卒中特指脑梗塞，急性期的时间划分尚不统一，一般指发病后两周内。急性缺血性脑卒中的处理应强调早期诊断、早期治疗、早期康复和早期预防复发。

中国脑卒中的发病率仅次于俄罗斯西伯利亚地区，居于世界第二位。流行病学研究表明，中国每年有150万～200万新发脑卒中的病例，校正年龄后的年脑卒中发病率为116～219/10万人口，年脑卒中死亡率为58～142/10万人口。目前我国现存脑血管病患者700余万人，其中约70％为缺血性脑卒中，有相当的比例伴有多种危险因素，是复发性脑卒中的高危个体。随着人口老龄化和经济水平的快速发展及生活方式的变化，缺血性脑卒中发病率明显上升。急性脑梗塞的发病机制是由于支配脑的动脉内膜内发生病变，病变血管所供应的脑组织出现梗死，局部水肿，周围组织充血，经一段时间后发生肿胀，缺血性坏死和软化，坏死组织逐渐液化而形成囊腔，最后遗有胶质瘢痕，此病症多见于50岁以上人口，多数患者伴有动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等。

目前对于这类病人的治疗药物包括增加脑血管流量、改善微循环的低分子右旋糖酐及复方丹参，血管扩张剂如尼莫地平、阿加曲班，抗凝剂如肝素、华法林等，此外还有溶血栓剂、脑水肿抑制剂等。

脑卒中幸存的患者多数会出现后遗症，如痴呆、记忆力减退，身体活动功能障碍等，不仅给患者精神上带来极大的痛苦，同时亦给家庭和社会带来巨大的经济负担，故对于这类病人的治疗目标不只限于挽救生命，更重要的是减轻患者的神经功能损害，减少后遗症的发生率及严重程度，促进患者的康复。

对于心脏病后因脑损害、局部缺血及出血的中风等引起的神经症状的恢复已经提出了几种治疗途径。自上世纪八十年代初以来，有关自由基引起脑组织损伤已成为研究的焦点，现已报道数种自由基清除剂及抗氧剂可有效减轻再灌注后的脑损伤。其中，依达拉奉是一种强效自由基清除剂及抗氧化剂，本品属亲脂类化合物，易透过组织被吸收。

研究结果显示，在动物试验中，局部缺血30分钟再循环静脉注射给予依达拉奉1.0～3.0mg/kg，可在给药后60分钟时显著抑制脑皮层水肿的恶化。沙鼠局部缺血30分钟再循环静脉注射给予依达拉奉0.3～3.0mg/kg可抑制脑中白三烯含量的升高（这种升高一般在缺血后15分钟出现），其他研究显示依达拉奉可有效防止由15-HPETE（花生四烯酸中间体脂质过氧化物）引起过氧化导致的细胞损害。采用全身性缺血大鼠为模型，研究依达拉奉的抗缺血作用及作用机制，结果显示缺血前给予本品3mg/kg可促进ECG活动的恢复，延长生存时间，在缺血后给予相同剂量的依达拉奉可减轻大鼠因局部血栓产生的脑皮质层梗塞。依达拉奉对脂质过氧化物显示强烈的抑制作用，揭示了依达拉奉强效抗缺血作用与其抗氧化效果有关。

临床研究结果表明，依达拉奉有明显的脑保护作用，能明显改善脑缺血所导致的神经系统症状，如智力减退、痴呆等，在相同治疗基础上与安慰剂进行对照，在发病72小时和24小时内使用本品的总有效率分别为64.8%和73.8%，而安慰剂组仅为32.0%和25.6%，两者之间有显著差异。入院3个月后复查，依达拉奉组患者的康复情况明显优于安慰剂组，且24小时内用药的康复效果更好。由于本品作用机理的新颖性以及对患者临床护理上的巨大益处，获得了日本中央社会保险理事会颁布的“革新奖”，迄今在日本仅有本品获得此项殊荣。

由于依达拉奉主环是五元环的酮，羰基与N 相邻，2 号位的N 连着不饱和键，很容易氧化，因此这个分子结构很不稳定，遇到氧就会氧化成没有活性的物质，且易产生高分子杂质，对人体造成伤害。此外，因为结构中没有羟基、羧基等亲水基团，而甲基与苯基难溶于水，长时间的溶解过程会加剧其氧化造成不稳定性。目前国内外对依达拉奉注射液的抗氧化方面的研究不是很多，有研究采用亚硫酸氢钠作抗氧剂的，目前国内外依达拉奉注射液的处方，其处方中均含有抗氧剂，具体如下：

从上表中看出，处方中均加了抗氧剂防止依达拉奉的氧化，但市场反应，这些制剂抗氧化效果并不理想，且上市后发现仅用亚硫酸氢钠较难解决本品的易氧化、不稳定的难题，制备的样品有效期仅为1.5 年。其制剂在运输和存储过程中会有微粒产生，威胁患者的生命安全。中国专利CN1241565C，CN100358520C，CN1440749A和CN101288650A等也分别研究报道不同依达拉奉制剂的处方及制备工艺，我们有必要寻找一种更稳定依达拉奉注射液的处方及制备工艺。

依达拉奉是一种脑保护剂（自由基清除剂）。临床研究提示N-乙酰门冬氨酸（NAA）是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初期含量急剧减少。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。临床前研究提示，大鼠在缺血/缺血再灌注后静脉给予依达拉奉，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟发性神经元死亡。机理研究提示，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。临床上只是用于改善急性脑梗塞所致的神经症状、日常生活活动能力和功能障碍。因此，在脑损伤的治疗领域中，有必要研发出一种增强其治疗作用的依达拉奉注射液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种依达拉奉注射液及其制备方法，该依达拉奉注射液可以增强对于脑损伤的治疗作用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种依达拉奉注射液，所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽。

进一步地，所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.1%-0.2%（W/V），维生素C的浓度为0.1%-0.5%（W/V），谷胱甘肽的浓度为1.0%-10.0%（W/V）。

本发明的目的是通过以下另一技术方案实现的：

一种依达拉奉注射液的制备方法，所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽；所述的依达拉奉的浓度为0.1%-0.2%（W/V），维生素C的浓度为0.1%-0.5%（W/V），谷胱甘肽的浓度为1.0%-10.0%（W/V）；

该制备方法包括如下步骤：

A、配制：

a.取处方量的依达拉奉，加入1/2～1/3处方量的90～100℃的注射用水，将所述的依达拉奉完全溶解，得到依达拉奉溶液；

b.向所述的依达拉奉溶液中加入所述的维生素C、谷胱甘肽，搅拌均匀，加注射用水至处方量的80%，再冷却至70-80℃，得到混合溶液；

c.向所述的混合溶液中加入医用活性炭，进行过滤处理，得到滤液；

d.向所述的滤液中加注射用水至全量，再用稀盐酸或氢氧化钠试液调节PH值为4.0～4.5，再进行过滤处理，得到注射液半成品；

B、将所述的注射液半成品进行过滤处理，得到所述的依达拉奉注射液；

C、将所述的依达拉奉注射液进行后续处理，即得成品。

本发明中选用的依达拉奉、维生素C、谷胱甘肽的作用如下：

维生素C参与人体多种氧化-还原反应，并且有解毒作用；维生素C在人体内参与糖的代谢和氧化过程，并有阻止致癌物质(亚硝胺)生成的作用；维生素C帮助人体内铁的吸收；在紧张状态时，会加速维生素C的消耗；维生素C也常被推荐为预防婴儿猝死症(SIDS)的物质；美国研究人员发现,维生素C能驱除细胞内有害的自由基，而这些有害自由基是高度活跃的分子，能直接损伤DNA；维生素C作为剂抗氧的常用浓度为0.2%，《药剂学》第三版，主编奚念朱，1994。在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，因为它能够保护身体免于氧化剂的威胁，维生素C同时也是一种辅酶。

维生素C在依达拉奉注射液中发挥了良好的抗氧化剂作用，而且对依达拉奉注射液抗脑细胞自由基具有协同作用。

谷胱甘肽(glutathiose,r-glutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故常简写为G-SH），易与某些药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属）等结合，而具有整合解毒作用。谷胱甘肽具有广谱解毒作用，不仅可用于药物，更可作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。

谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g，在人体血液中含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g，在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高（12～33mg/100g），而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较低（0.06～0.7mg/100g）。

机体新陈代代谢产生的过多自由基会损伤生物膜，侵袭生命大分子，加快机体衰老，并诱发肿瘤或动脉粥样硬化的产生。谷胱甘肽在人体内的生化防御体系起重要作用，具有多方面的生理功能。它的主要生理作用是能够清除掉人体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧化剂，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基。GSH的结构中含有一个活泼的巯基-SH，易被氧化脱氢，这一特异结构使其成为体内主要的自由基清除剂。例如当细胞内生成少量H₂O₂时，GSH在谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把H₂O₂还原成H₂O，其自身被氧化为GSSG，GSSG由存在于肝脏和红细胞中的谷胱甘肽还原酶作用下，接受H还原成GSH，使体内自由基的清除反应能够持续进行。

谷胱甘肽不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。谷胱甘肽维护健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大。

谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢氧化、自由基等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。红细胞中部分血红蛋白在过氧化氢等氧化剂的作用下，其中二价铁氧化为三价铁，使血红蛋白转变为高铁血红蛋白，从而失去了带氧能力。还原型谷胱甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多，这对保护红细胞膜上蛋白质的巯基处于还原状态，防止溶血具有重要意义。

谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性。谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。

谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减少等症状，有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进其排出体外，起到中和解毒作用。

本发明相比现有技术具有以下有益效果：

本发明将依达拉奉、维生素C、谷胱甘肽的合理配比，使三者协同作用，发挥其良好抗氧化特性，对脑损伤及其并发症具有良好的治疗作用，且稳定性高。

具体实施方式

实施例1：

一种依达拉奉注射液，所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽。所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.1%-0.2%（W/V），维生素C的浓度为0.1%-0.5%（W/V），谷胱甘肽的浓度为1.0%-10.0%（W/V）。

该依达拉奉注射液的制备方法包括如下步骤：

a.取处方量的依达拉奉，加入1/2～1/3处方量的90～100℃的注射用水，搅拌将所述的依达拉奉完全溶解，得到依达拉奉溶液；

c.向所述的混合溶液中加入医用活性炭，所述医用活性炭的加入量为0.3%（W/V）搅拌15分钟，趁热进行过滤处理使上述混合溶液脱炭，得到滤液；

d.向所述的滤液中加注射用水至全量，再用1M稀盐酸或1M氢氧化钠试液调节PH值为4.0～4.5，再进行过滤处理，得到注射液半成品；所述的过滤处理采用0.45μm微孔滤膜过滤；

B、待所述的注射液半成品检验合格后，将所述的注射液半成品进行过滤处理，得到所述的依达拉奉注射液；所述的过滤处理采用用0.22μm微孔滤膜；

C、将所述的依达拉奉注射液进行后续处理，即得成品。

所述的后续处理依次包括灌封处理、灭菌检漏处理、灯检处理、印字包装处理、成品检验处理；

a.灌封处理：将依达拉奉注射液灌封于曲颈玻璃安瓿中；

b.灭菌检漏处理：将灌封的依达拉奉注射液置灭菌柜内，用饱和蒸汽115℃灭菌30分钟；再用胭脂红使用色素配制的红色色水，真空度-80kpa以上条件下检漏，纯化水清洗，50℃以下烘干后检出漏支；

c.灯检处理：接收灭菌检漏后的依达拉奉注射液，检出瓶身有裂纹、漏气、破损、装量不合格药等废品；

d.印字包装处理：将灯检后的依达拉奉注射液进行印字包装；

e.成品检验处理：将印字包装后的依达拉奉注射液由质检部们对药品质量进行质检，并由质检部门对本批药品生产过程按规定进行评估，合格后即得成品，入库。

本实施例所用重量单位为千克，也可以为克；体积单位为升，也可以为立方米。

本实施例中所述的各原料均为市场上出售的常规产品；本实施例中所用依达拉奉为陕西健民制药生产、维生素C为上海新亚药业有限公司生产、谷胱甘肽为浙江海正药业股份有限公司生产，均为有国家批准文号的药品。

在本实施例中，所述的中的各原料可以在给出的配比范围内灵活组合，在此不一一枚举。

实施例2：

本实施例是在实施例1基础上的优选方案，所用原料的品质与实施例1相同。

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.15%（W/V），维生素C的浓度为0.25%（W/V），谷胱甘肽的浓度为5.0%（W/V）。

各个原料的具体用量为：

依达拉奉：750g，维生素C：1.25kg，谷胱甘肽：25kg，稀盐酸：适量，氢氧化钠：适量，加注射用水至500L。

本实施例的制备方法参见实施例1。

本实施例的维生素C用量最佳浓度确定如表1所示：

从表1可以看出，维生素C浓度越大，依达拉奉注射液的影响因素结果越好，但增至维生素C浓度为0.25%，依达拉奉注射液总杂的增加数量与0.5%差不多，说明维生素C加入的最优剂量为0.25%（W/V）。另外，维生素C加入量为0.25%（W/V）时，同时加入亚硫酸氢钠0.1g，最后结果也差不多，说明本处方加入维生素C时，无需再加入亚硫酸氢钠。

本实施例的检测结果如下：

一、本实施例的依达拉奉注射液与市售品（“必存”）的稳定性比较，如表2所示。

二、本实施例的依达拉奉注射液对大脑中动脉阻断（MCAO）大鼠的保护作用

取SD雄性大鼠40只，体重250～350g，随机分为4组，即假手术组、模型组、必存组和本实施例依达拉奉注射液组，各组动物静脉注射给药1次，给药30分钟后，各鼠以10％水合氯醛麻醉（300mg /kg，ip），按文献方法进行手术，术后24小时断头取脑，经染色后，分别取出呈玫瑰红色的正常脑组织及呈灰白色的梗塞组织，称重，然后根据重量求面积法，求出梗塞区面积占半球总面积的百分比，即梗塞率，并采用组间t检验法与模型组进行显著性测定比较。结果参见表3。

与假手术组比较：⊿⊿⊿P＜0.001；与模型组比较：**P＜0.01，***P＜0.001。

实验结果表明，模型组与假手术组相比，梗塞面积为21.81％，经统计学处理，呈显著性差异，表明大鼠MCAO模型造模成功。

提示本实施例依达拉奉注射液组对大脑中动脉阻断（MCAO）大鼠的保护作用比必存组更为显著，提示本实施例的依达拉奉注射液能显著增强对MCAO大鼠的保护作用，这说明了本实施例依达拉奉注射液配伍应用的合理性。

三、本实施例的依达拉奉注射液小鼠断头后喘息持续时间的比较

取 Bal/BC小鼠90只，随机分为空白对照组、“必存”组和本实施例依达拉奉注射液组，每组30只动物。小鼠尾静脉注射给药。给药后15min、30min、60min自小鼠耳根下快速断头，记录从断头开始至其最后一次喘息停止的时间作为断头喘息持续时间。结果参见表4。

与空白对照组比较， *P＜0.05， **P＜0.01；

实验结果表明本实施例依达拉奉注射液相比必存对于延长小鼠断头后喘息持续时间的作用稍微更加迅速，提示本实施例依达拉奉注射液对于脑缺血疾病的治疗起效更为迅速，对于心脑血管疾病中较为常见的急性病症能迅速产生疗效。

实施例3：

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.1%（W/V），维生素C的浓度为0.1%（W/V），谷胱甘肽的浓度为1.0%（W/V）。

各个原料的具体用量为：

依达拉奉：2g，维生素C：2g，谷胱甘肽：20g，稀盐酸：适量，氢氧化钠：适量，加注射用水至2L。

本实施例的制备方法参见实施例1。

对本实施例的样品进行高温60摄氏度影响因素试验，检测方法参见实施例2，检测数据如下，参见表5：

实施例4：

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.2%（W/V），维生素C的浓度为0.5%（W/V），谷胱甘肽的浓度为10.0%（W/V）。

各个原料的具体用量为：

依达拉奉：4g，维生素C：10g，谷胱甘肽：0.2kg，稀盐酸：适量，氢氧化钠：适量，加注射用水至2L。

本实施例的制备方法参见实施例1。

对本实施例的样品进行高温60摄氏度影响因素试验，检测方法参见实施例2，检测数据如下，参见表6：

实施例5：

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的浓度为0.15%（W/V），维生素C的浓度为0.25%（W/V），谷胱甘肽的浓度为2.0%（W/V）。

各个原料的具体用量为：

依达拉奉：3g，维生素C：10g，谷胱甘肽：40g，稀盐酸：适量，氢氧化钠：适量，加注射用水至2L。

本实施例的制备方法参见实施例1。

对本实施例的样品进行高温60摄氏度影响因素试验，检测方法参见实施例2，检测数据如下，参见表7：

Claims

1.一种依达拉奉注射液，其特征在于：所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽；

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的重量体积百分浓度为0.15%，维生素C的重量体积百分浓度为0.25%，谷胱甘肽的重量体积百分浓度为5.0%。

2.一种依达拉奉注射液，其特征在于：所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽；

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的重量体积百分浓度为0.1%，维生素C的重量体积百分浓度为0.1%，谷胱甘肽的重量体积百分浓度为1.0%。

3.一种依达拉奉注射液，其特征在于：所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽；

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的重量体积百分浓度为0.2%，维生素C的重量体积百分浓度为0. 5%，谷胱甘肽的重量体积百分浓度为10.0%。

4.一种依达拉奉注射液，其特征在于：所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽；

所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的重量体积百分浓度为0.15%，维生素C的重量体积百分浓度为0.25%，谷胱甘肽的重量体积百分浓度为2.0%。

5.一种依达拉奉注射液的制备方法，其特征在于：所述的依达拉奉注射液中含有维生素C和谷胱甘肽；所述的依达拉奉注射液中，依达拉奉的重量体积百分浓度为0.1%-0.2%，维生素C的重量体积百分浓度为0.1%-0.5%，谷胱甘肽的重量体积百分浓度为1.0%-10.0%；

该制备方法包括如下步骤：

A、配制：

C、将所述的依达拉奉注射液进行后续处理，即得成品。