CN108904714B - 一种治疗心血管疾病的中药的制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开的治疗心血管疾病的中药的制备方法包括以下步骤：取如下重量配比的原料药材：黄芪3份，天麻2份，小红参2份，地龙1.5份；在原料药材中分别加入8倍、6倍、4倍质量的纯净水，浸泡煎煮35min、30min、25min，滤渣，将三次煎煮药液混匀，静置8h后，取上清液浓缩成不同药物浓度的的治疗心血管疾病的中药。本申请制备的治疗心血管疾病的中药可以解决现有技术中治疗心肌缺血再灌注损伤疾病的药物副作用大、疗效差、价格昂贵且不便携带的问题。另外，本申请制备的治疗心血管疾病的中药还具有“气血同调、攻补兼施”的配伍特点，可全方位地对患者的身体机能进行调理和治疗。

Description

一种治疗心血管疾病的中药的制备方法

技术领域

本申请属于中药技术领域，具体地说，涉及一种治疗心血管疾病的中药的制备方法。

背景技术

随着社会经济的发展，国民生活方式发生了深刻的变化。伴随着人口老龄化及城镇化进程的加速，心血管疾病的发病人数持续增加。2016年6月发布的《中国心血管病报告2015》概要显示：心血管疾病死亡目前已占我国城乡居民总死亡原因的首位，其中农村所占比例为44.6％，城市所占比例为42.51％，相当于每5例死亡者中就有超过2例死于心血管疾病。其中，冠心病作为最常见的心血管疾病，其死亡率在近年也呈现出逐年上升的趋势。根据《中国卫生和计划生育统计年鉴》显示：2002年～2014年冠心病死亡率呈上升态势。其中，2014年中国冠心病死亡率城市为107.5/10万，农村为105.37/10万。总体上城市地区冠心病死亡率略高于农村地区，男性高于女性。到2020年，冠心病将成为世界疾病死亡范围内主要的死亡原因之一。《Lancet》发表全球疾病负担研究结果指出，在全球人群235种疾病的死亡原因中，缺血性心脏病居于首位，心血管疾病的负担日渐加重，已成为重大的公共卫生问题。

在临床中，一旦出现冠状动脉阻塞，其主要抢救治疗措施包括药物溶栓、心脏移植、动脉搭桥术、心肺脑复苏术及体外循环心脏外科手术等。但随之引起的缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury，IRI)，极易导致心肌顿抑、恶性心律失常甚至猝死，严重影响患者的预后。如何做到既能最大程度地恢复缺血心肌组织的血液供应，同时又能避免或减轻再灌注损伤，已成为冠心病防治中亟待解决的重要课题。因此，深入了解MIRI(Myocardial Ischemic Reperfusion Injury,MIRI)的发病机制，并寻找到行之有效的药物和治疗方法具有迫切性和艰巨性。而目前现有的一些治疗心肌缺血再灌注损伤的中药制备方法存在着不便携带，药效不佳，价格昂贵等诸多问题。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷，本申请提供一种治疗心血管疾病的中药的制备方法。

本申请公开的治疗心血管疾病的中药的制备方法，包括以下步骤：

取如下重量配比的原料药材：黄芪3份，天麻2份，小红参2份，地龙1.5份；

取原料药材8倍重量份数的水加入原料药材中，浸泡煎煮35min，经过滤分离，得到二次煎煮药材和第一煎煮药液；

取原料药材6倍重量份数的水加入二次煎煮药材中，浸泡煎煮30min，经过滤分离，得到三次煎煮药材和第二煎煮药液；

取原料药材4倍重量份数的水加入三次煎煮药材中，浸泡煎煮25min，经过滤分离，得到药渣和第三煎煮药液；

将第一煎煮药液、第二煎煮药液、第三煎煮药液混合，静置8h后，取上清液浓缩成不同药物浓度的治疗心血管疾病的中药。

如上所述的治疗心血管疾病的中药的制备方法，其中，浓缩成的治疗心血管疾病的中药中生药的含量为3.06g/mL。

如上所述的治疗心血管疾病的中药的制备方法，其中，浓缩成的治疗心血管疾病的中药中生药的含量为1.53g/mL。

如上所述的治疗心血管疾病的中药的制备方法，其中，浓缩成的治疗心血管疾病的中药中生药的含量为0.76g/mL。

本申请制备的治疗心血管疾病的中药具有以下优点：

1、可以解决现有技术中治疗心肌缺血再灌注损伤疾病的药物副作用大、疗效差和价格昂贵的问题。

2、具有“气血同调、攻补兼施”的配伍特点，可全方位地对患者的身体机能进行调理和治疗。

具体实施方式

以下将配合实施例来详细说明本申请的实施方式，藉此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

MIRI发生在恢复灌注的最初几分钟内，可导致内皮细胞功能障碍、心肌收缩失调以及心肌细胞的坏死、凋亡，在临床会引发室性心律失常(又称再灌注心律失常)、持久性左心室功能低下(心肌顿抑)、再灌注心肌损伤(使原来尚存活的心肌和血管内皮细胞向致死性损伤的方向发展)或者猝死。国内外研究表明自由基、钙超载、能量代谢障碍、血管内皮细胞、炎症因子与细胞凋亡等均可能参与缺血再灌注损伤，其中，氧化应激是MIRI发生的重要原因之一，氧自由基大量爆发是引起MIRI的主要机制，在MIRI早期，大量氧自由基的释放导致心肌细胞严重受损，正常生理条件下，细胞内存在抗氧化物可以清除氧自由基，使自由基的生成与清除处于动态平衡，对机体无害，但当心肌缺血发生再灌注损伤时，由于氧自由基生成过多或机体抗氧化能力不足，引发氧化应激反应，介导心肌损伤，导致再灌注性心律失常，心肌顿抑，细胞凋亡与坏死，微血管与大血管损伤等。因此，如何增强心肌对氧自由基的清除能力是防治心肌缺血再灌注损伤的关键。

本申请提供的治疗心血管疾病的中药的制备方法的制备方法，包括以下步骤：

取如下重量配比的原料药材：黄芪3份，天麻2份，小红参2份，地龙1.5份；

取原料药材8倍重量份数的水加入原料药材中，浸泡煎煮35min，经过滤分离，得到二次煎煮药材和第一煎煮药液；

取原料药材6倍重量份数的水加入二次煎煮药材中，浸泡煎煮30min，经过滤分离，得到三次煎煮药材和第二煎煮药液；

取原料药材4倍重量份数的水加入三次煎煮药材中，浸泡煎煮25min，经过滤分离，得到药渣和第三煎煮药液；

将第一煎煮药液、第二煎煮药液、第三煎煮药液混合，静置8h后，取上清液浓缩成不同药物浓度的治疗心血管疾病的中药。

黄芪：味甘、微温；归脾、肺经；具有益卫固表，补气升阳，托毒生肌，利水消肿的功效；主治气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，自汗盗汗，血虚萎黄，阴疽漫肿，气虚水肿，内热消渴。

天麻：味甘、性辛、平；归肝、脾、肾、胆、心、膀胱经；具有息风止痉、平肝阳、祛风通络等功效；主治急慢惊风、抽搐拘挛、眩晕、头痛、半身不遂、肢麻等。

小红参：具有活血止血、活血祛瘀的功能。主治衄血、吐血、便血、尿血、崩漏、月经不调、经闭腹痛、风湿关节痛、肝炎等症；外治跌打损伤、疖肿、神经性皮炎等症；

地龙：味咸、寒；归肝、脾、膀胱经；具有清热定惊，通络，平喘，利尿的功效；主治高热惊痫，癫狂，气虚血滞，半身不遂，痹证，肺热哮喘，小便不利，尿闭不通等。

下面将结合对大鼠抗心肌缺血再灌注损伤作用的实验给出本申请制备的治疗心血管疾病的中药的作用效果。

药材购自云南绿生药业有限公司，由云南省傣医药与彝医药重点实验室制备。取配置好的原料药材4kg，分别加入8倍、6倍、4倍纯净水浸泡煎煮35min、30min、25min，滤渣，将三次煎煮药液混匀，静置8h后，取上清液浓缩成不同药物浓度的供试品：高中低剂量组分别含生药量3.06g/mL、1.53g/mL、0.76g/mL。

1、分组及给药

所有大鼠于云南中医学院动物实验中心适应性喂养7天后，筛选正常心电图大鼠，按随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、复方丹参片组、依达拉奉组、治疗心血管疾病的中药低、中、高剂量组，共计7组，每组8只。大鼠给药剂量按人体表面积的0.018计算。

(1)假手术组：提前连续给予等体积蒸馏水灌胃14天；

(2)模型组：提前连续给予等体积蒸馏水灌胃14天；

(3)复方丹参片组：按生药量给予300mg/kg提前连续灌胃14天；

(4)依达拉奉组：按3mg/kg在再灌注前1min股静脉注射；

(5)治疗心血管疾病的中药组：按治疗心血管疾病的中药低剂量组(7.65g生药/kg)，治疗心血管疾病的中药中剂量组(15.3g生药/kg)，治疗心血管疾病的中药高剂量组(30.6g生药/kg)提前连续灌胃14天。

上述复方丹参片和依达拉奉的剂量均根据临床成人剂量按体表面积折算成大鼠的给药量，治疗心血管疾病的中药的低剂量为临床成人剂量的折算量(等效量)，中剂量和高剂量分别为临床等效量的2倍和4倍。

2、造模方法

参照《药理实验方法学》的方法，结合实践建立经典大鼠MIRI模型。

(1)麻醉：腹腔注射10％水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠(麻醉前禁食12h)，使其处于仰卧位并固定于鼠板，将一寸针灸针按肢导联插入大鼠四肢，连续监测标准Ⅱ导联心电图。

(2)插管：逐层分离气管后，剪一T型开口，插管连接呼吸机，行正压人工呼吸，呼吸频率为60次/min，呼吸比为2:1，潮气量2ml/100g，监测生理信号采集系统，记录结扎前10min大鼠心电图。

(3)结扎：待大鼠稳定10min后，从大鼠左侧第3、4肋间隙逐层打开胸腔，暴露心脏，用剪刀剪破心包膜，用棉签轻轻抬起左心耳，在肺动脉圆锥左缘平左心耳根下缘2mm处进针，进针深度约为1～2mm，进针当快速准确，用5/0无损伤缝合线单针穿过心肌层，与0.8mm硅胶管一起结扎LAD，造成心肌缺血，同时肉眼观察心尖部颜色变白或紫绀，心电图ST段抬高大于0.2mv。记录结扎时及结扎后30minⅡ导心电图。(注：假手术组只在结扎点穿线不结扎)

(4)复灌：剪开结扎线，取出硅胶管，恢复血液供应，肉眼所见心肌颜色逐渐恢复，ST段逐渐回落。

(5)关胸：逐层关闭胸腔，缝合肋骨，留置一软管，排出胸腔内多余空气。在颈部及胸部盖上湿纱布，以防大鼠体液丢失，同时，注意大鼠体温保持。记录剪开丝线后(再灌注)120minⅡ导心电图。

(6)结扎成功标志：结扎点以下心肌颜色变白，心电图ST段进行性抬高弓背向上0.2mv以上，QRS宽大畸形。

(7)再灌注成功标志：心肌颜色逐渐由白变红，心电图ST段逐渐回落50％以上，T波逐渐恢复。

3、硝酸根还原酶法检测血清中NO活力

(1)取材：每组选取8只,再灌注末腹主动脉取血5ml→静置30min3500r/min离心10min，取上清→置入-80℃待测。

(2)配置：按试剂盒说明书步骤，配置显色剂→试剂三：试剂四：试剂五＝2.5：1：1→配置20μmol/L亚硝酸钠标准液，取2mmol/L亚硝酸钠标准液0.1ml加双蒸水定容至10ml即为20μmol/L

(3)加样：设定空白、标准、对照管、测定管，并依次加样。

(4)检测：混匀，静置15分钟，波长550nm，酶标仪测定各孔吸光度OD值，按如下的公式计算血清样本中的NO含量。

活性氮(reactive nitrogen species，RNS)是一类在分子组成上含有氮的活性化学物质的总称，包括一氧化氮(NO)、二氧化氮(NO₂)、过氧亚硝基(ONOO^-)等。其中，以NO与ONOO^-为典型代表，在生物体的生理与病理条件下均发挥重要作用；并且NO₂与ONOO^-等活性氮物质是以NO为底物，经过氧化反应生成的。有研究显示MIRI后NO水平及NOS活性是增高的与I/R的程度成正比，用NOS抑制剂可改善缺血性损伤。

NO对心肌缺血再灌注损伤的作用具有两面性，既可减轻病理损伤，发挥保护作用，又能加重损伤，引起毒性作用。这主要是由于NOS和NO在心肌缺血再灌注的不同时期的动态变化所致，NOS分为3种亚型，包括内皮型NOS(eNOS)、神经元型NOS(nNOS)和诱导型NOS(iNOS)，前两者统称为结构型NOS(cNOS)。cNOS主要存在于血管内皮细胞和神经细胞中，可催化产生少量NO，对心血管系统的主要作用为清除自由基、调节血压、舒张血管、抑制血小板聚集等保护性作用。而iNOS主要是在炎性因子刺激下，由巨噬细胞、淋巴细胞及心肌细胞等产生，其可诱导产生大量NO，对心血管系统起毒性作用。缺血再灌注时心肌及内皮细胞受损，NOS活性被抑制，NO释放减少，同时NO清除再灌注产生的大量氧自由基，进一步降低NO水平，加剧心肌缺血再灌注损伤。

NO是重要的血管舒张因子，也是活性氧的清除剂，再灌注过程中产生的氧自由基可直接灭活NO，使血管舒张功能受损，且再灌注中，氧的再供应是心肌缺血后血管内皮功能障碍的必要条件，仅心肌缺血并不能引起血管内皮功能障碍，这表明血管内皮功能障碍是再灌注损伤的表现并且与氧自由基的产生有重要联系。NO可通过抗氧化作用发挥保护作用，首先通过对氧自由基的清除和通过阻止内皮收缩和裂口形成来抑制血管渗透性增加；其次通过抑制血管平滑肌增殖，来抑制因血管受损导致的结构重建。整理实验数据，并依据NO的计算公式，整理成表，如表1所示(表1NO检测原始数据表)，并进一步的整理出本申请提供的治疗心血管疾病的中药对大鼠血清NO的影响表，如表2所示(表2治疗心血管疾病的中药对大鼠血清NO的影响表)。

表1 NO检测原始数据表

表2治疗心血管疾病的中药对大鼠血清NO的影响表

备注：n＝8，

**——与模型组相比，P<0.01，表现为极显著差异；*——与模型组相比，P<0.05，表现为显著差异。

另外，腹主动脉取血，分别运用黄嘌呤氧化酶法检测心肌SOD的活力、硫代巴比妥酸法检测大鼠心肌组织中MDA的含量、DTNB比色法检测血清中GSH-Px酶活力，其结果见下表3(表3治疗心血管疾病的中药对大鼠心肌组织SOD、MDA及血清GSH-Px的影响表)。

表3治疗心血管疾病的中药对大鼠心肌组织SOD、MDA及血清GSH-Px的影响表

备注：n＝8，

**——与模型组相比，P<0.01，表现为极显著差异；*——与模型组相比，P<0.05，表现为显著差异。

因此，基于本申请的制备方法制备的治疗心血管疾病的中药具有明显的抗心肌缺血再灌注损伤的作用，可以显著地治疗心肌缺血再灌注损伤，疗效好，价格优。

上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改，并能够在本申请构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。

Claims (1)

1.一种治疗心血管疾病的中药的制备方法，其特征在于，所述心血管疾病为心肌缺血再灌注损伤，包括以下步骤：

取如下重量配比的原料药材：黄芪3份，天麻2份，小红参2份，地龙1.5份；

取原料药材8倍重量份数的水加入原料药材中，浸泡煎煮35min，经过滤分离，得到二次煎煮药材和第一煎煮药液；

取原料药材6倍重量份数的水加入二次煎煮药材中，浸泡煎煮30min，经过滤分离，得到三次煎煮药材和第二煎煮药液；

取原料药材4倍重量份数的水加入三次煎煮药材中，浸泡煎煮25min，经过滤分离，得到药渣和第三煎煮药液；

将第一煎煮药液、第二煎煮药液、第三煎煮药液混合，静置8h后，取上清液浓缩成不同药物浓度的治疗心血管疾病的中药；

浓缩成的治疗心血管疾病的中药中生药的含量包括：

高剂量：中药中生药的含量为3.06g /mL；

中剂量：中药中生药的含量为1.53g /mL；

低剂量：中药中生药的含量为0.76g /mL。