一种特拉匹韦的合成方法
技术领域
本发明涉及一种特拉匹韦的合成方法,属于药物合成技术领域。
背景技术
丙型肝炎,是一种由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染引起的病毒性肝炎,主要经输血,针刺,吸毒等传播,据世界卫生组织统计,全球HCV的感染率约为3%,估计约1.8亿人感染了HCV,每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。丙型肝炎呈全球性流行,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)。一些数据显示,未来20年内与HCV感染相关的死亡率(肝衰竭及肝细胞癌导致的死亡)将继续增加,对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题。
标准抗HCV治疗为聚乙二醇干扰素+利巴韦林(PeglFN+Ribavirin,简称PR)的联合方案,该治疗方案只能使42%-54%基因1型感染者获持续病毒学应答(SVR)。近年来,对具有直接作用的抗病毒药物(DAAS)研究取得了重大进展,包括HCV RNA非结构蛋白3/4A(NS3/4A)蛋白酶抑制剂、NS5B聚合酶抑制剂及亲环素(Cyclophilin)抑制剂,其中已确定两种口服药物:即由美国Vertex/Johnson·Johnson公司共同开发的特拉匹韦和德国Merck公司开发的博赛匹韦,于2011年先后在美国与欧洲批准上市,开创了抗HCV治疗的新纪元。
特拉匹韦(TVR)化学名:(1S,3aR,6aS)-(2S)-2-环己基-N-(羰基吡嗪)-甘氨酰-3-甲基-L-缬氨酰-N-(1S)-1-[(环丙氨基)-氧代乙酰基]丁基-八氢环戊[c]吡咯-1-甲酰胺,CAS登记号:402957-28-2,是一种对HCV基因1型NS3/4A丝氨酸蛋白酶有抑制作用,能终止HCV复制的药物。特拉匹韦结构式如下:
该药安全性高,且用药时间短,能减少长期用药给患者带来的不良反应。
现有技术中有关特拉匹韦的合成方法,已有文献报道。如Anass Znabet,Marloes M.Polak,Elwin Janssen等在(A highlyefficient synthesis of telaprevir by strategic use of biocatalysis andmulticomponent reactions,Chemical Communications46(2010)7918-7920)中涉及一种特拉匹韦的合成方法,合成路线如下:
该方法虽然只有两步反应,但是相应的原料1、原料3和Dess-Martin试剂成本高,且第一步反应时间长达72小时,能耗和设备的占用率太高,不利于长期生产操作。
又如Lilly Research Laboratory,Victor FLamar J,Johnson R等在(P4and P1'optimization of bicycloproline P2bearingtetrapeptidyl alpha-ketoamides as HCV protease inhibitors,Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters14(2004)5007-5012)中涉及一种特拉匹韦的合成方法,该方法共有四步反应,合成路线如下:
该方法在第一步和第三步使用了1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑/N,N’-二环己基碳二亚胺(HOAt/DCC)和1-羟基苯并三唑/碳化二亚胺(HOBt/EDCI)缩合体系,成本高,且第一步反应产生的副产物二环己基脲(DCU)难以从反应体系中彻底除去,这两步反应完毕后反应液需经过水洗、酸洗、碱洗,盐水洗涤,然后柱层析分离才能得到纯品,收率低,成本高,后处理步骤繁琐且产生大量三废;而且,在第四步使用的四甲基哌啶/次氯化钠(TEMPO/NaClO)试剂成本和后处理成本都较高。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的上述问题,提供一种成本低、工艺简单、收率高、纯度高的特拉匹韦合成方法。本发明特拉匹韦的合成方法包括以下步骤:
S1、在温度为-15~-5℃下,将式(Ⅰ)化合物溶于溶剂,在缩合剂的作用下,使式(Ⅰ)化合物上的羧基和式(Ⅱ)化合物上的氨基缩合反应得到式(Ⅲ)化合物;
S2、将步骤S1中制得的式(Ⅲ)化合物溶于溶剂,在酸的作用下,使式(Ⅲ)化合物经过酸解反应后得到式(Ⅳ)化合物;
S3、将步骤S2中制得的式(Ⅳ)化合物与式(Ⅴ)化合物溶于溶剂,在缩合剂、缚酸剂的作用下,使式(Ⅳ)化合物上的羧基与式(Ⅴ)化合物上的氨基进行缩合反应后制得最终产品特拉匹韦(Ⅵ);其中式(Ⅰ)、式(Ⅱ)、式(Ⅲ)、式(Ⅳ)、式(Ⅴ)化合物与特拉匹韦(Ⅵ)的结构式如下:
所述式(Ⅴ)化合物中HX为盐酸、硫酸、氢溴酸、醋酸、酒石酸、马来酸、富马酸、草酸、三氟乙酸、柠檬酸、磷酸、甲酸、琥珀酸、扁桃酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、对硝基苯甲酸、对羟基苯甲酸。
相较于现有技术,本发明共三步反应,反应条件温和,反应时间短,后处理简单易行,外观好,收率高且抽滤烘干后即得纯品。首先采用式(Ⅰ)化合物(2S)-2-环己基-N-(2-吡嗪基羰基)甘氨酰-3-甲基-L-缬氨酸和式(Ⅱ)化合物(1S,3aR,6aS)-八氢环戊烯并[c]吡咯-1-羧酸叔丁酯为原料缩合得到的式(Ⅲ)化合物中间产物(1),不需要进行纯化,直接酸解,重结晶,得到式(Ⅳ)化合物中间产物(2),然后用式(Ⅳ)化合物中间产物(2)与式(Ⅴ)化合物(S)-3-氨基-N-环丙基-2-氧代己酰胺盐在缩合剂、缚酸剂的作用下进行缩合反应,后用打浆溶剂打浆一步即可制得最终产品特拉匹韦(Ⅵ),且产品纯度高、过程中不需要使用昂贵的氧化剂、减少后处理中产品的收率和纯度(手性纯度)的损失、降低了成本、减少了工艺步骤。
其中步骤S1具体包括如下过程:在温度为-15~-5℃下,将式(Ⅰ)化合物,式(Ⅱ)化合物和缩合剂加入溶剂中形成反应液,在温度为-15~-5℃下搅拌5-15分钟后将反应液缓慢升至室温,搅拌过夜,TLC及HPLC检测反应结束后,将反应液降温至-5~10℃,搅拌5-15分钟后抽滤,滤液经洗涤、干燥、浓缩后得到式(Ⅲ)化合物。
在温度为-15~-5℃下将原料和缩合剂加入到溶剂中形成反应液,并维持温度搅拌5-15分钟,使原料全部溶解,且在溶解过程中减少了副反应的发生。将缩合反应温度控制在室温的条件下搅拌过夜,可使缩合反应更彻底,缩合反应速度随反应温度的增高而加快,若反应温度过高,反应杂质会变多,收率将降低,而反应温度过低,缩合反应很难进行。反应时间过长则副反应增多,过短则反应不完全。该反应通过洗涤、干燥、浓缩后得到的式(Ⅲ)化合物中间产物(1)不需要进行纯化,可直接用于下一步。
作为优选,所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙腈、N,N-甲基乙酰胺、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、二甲亚砜、四氢呋喃、水、乙醇、环已烷、乙醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、二甲苯、氯苯、二氯苯中的一种或多种;所述的缩合剂为N,N-二羰基咪唑、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑、3,4-二氢-3-羟基-4-oxo-1,2,3-苯并三嗪、6-氯-1-羟基苯并三唑、(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、卡特缩合剂、双(2-氧代-3-恶唑烷基)次磷酰氯、1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐、氯甲酸乙酯、氯甲酸甲酯、氯乙酸甲酯、氯乙酸乙酯、氯甲酸异丁酯、丙烷磷酸酐、伍德沃德试剂K、二乙基磷酰氯、特戊酰氯、氯化亚砜中的一种或多种;所述的式(Ⅰ)化合物与式(Ⅱ)化合物的摩尔比为1∶(0.5~1);所述的式(Ⅰ)化合物与缩合剂的摩尔比为1∶(1~3)。这些溶剂都廉价易得,对原料溶解效果极佳。缩合剂絮凝体成型快,活性好,过滤性好,不需加碱性助剂,如遇潮解,其效果不变,适应pH值宽,适应性强,用途广泛,处理过的水中盐份少,能除去重金属及放射性物质对水的污染,有效成份高,便于储存,运输,缩合效果优越,化学活泼性强,使反应具有条件温和、操作简便和收率高的特点。在此摩尔比范围内,原料转化率、利用率高,发生的副反应较少。
步骤S2具体包括如下过程:在温度为-5-5℃下,将式(Ⅲ)化合物溶于溶剂形成反应液,搅拌下向反应液中滴加浓酸进行酸解,在温度为-5-5℃的条件下搅拌1~5小时至TLC及HPLC检测反应完全,将反应完全的反应液经萃取、洗涤、干燥后浓缩,得粗品后加入不良溶剂于75-95℃加热分散,搅拌下滴加良溶剂进行重结晶得到式(Ⅳ)化合物。
酸解过程通常是不可逆放热反应,分解率较高,放出的热量可使物料温度升高,因而使反应速度加快。本发明控制在0℃下,防止在溶解过程中放出的热量使溶液温度过高,发生副反应,而且滴加浓酸的时候要控制滴加速度并不断搅拌防止温度过高。滴加完毕后搅拌一段时间使酸解完全,但时间不宜过长,否则会伴随发生较多的副反应。经大量实验得出,搅拌1-3h最为合适。
作为优选,所述的溶剂为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和其它烷基酸或芳香酸中的一种;所述的浓酸为盐酸、硫酸、氢溴酸、醋酸、酒石酸、马来酸、富马酸、草酸、三氟乙酸、柠檬酸、磷酸、甲酸、琥珀酸、扁桃酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、对硝基苯甲酸、对羟基苯甲酸中的一种或多种。
作为优选,所述的不良溶剂为正庚烷、石油醚、正戊烷、正己烷、环己烷、乙醚、甲基叔丁基醚、异丙醚中的一种或多种;所述的良溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、醋酸异丙酯、乙腈、丙酮、甲酸、乙酸中的一种或多种。利用式(Ⅳ)化合物中间产物(2)在良溶剂中溶解度的不同,充分析出式(Ⅳ)化合物中间产物(2)。
步骤S3具体包括如下过程:在温度为-5-5℃下,将式(Ⅳ)化合物、式(Ⅴ)化合物、缩合剂以及缚酸剂依次溶于溶剂中形成反应液,将反应液缓慢升至室温,搅拌10~13小时至TLC检测反应完全,向反应完全的反应液中加水搅拌20~40分钟,分离得有机相,有机相经洗涤、干燥、浓缩后得粗品,粗品在0~10℃下用打浆溶剂打浆25~35分钟制得特拉匹韦(Ⅵ)。
在缚酸剂、缩合剂的存在下,式(Ⅳ)化合物中间产物(2)和式(Ⅴ)化合物(S)-3-氨基-N-环丙基-2-氧代己酰胺盐能有效快速的缩合,缩合后以打浆溶剂打浆即一步制得最终产品特拉匹韦(Ⅵ)。不需要使用氧化剂,降低了成本,同时减少了后处理中产品的收率和纯度的损失。在打浆过程中,选择0~10℃打浆25-35分钟,既能保证产率,也起到了节省能耗的效果。
作为优选,所述的缩合剂为N,N-二羰基咪唑、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑、3,4-二氢-3-羟基-4-oxo-1,2,3-苯并三嗪、6-氯-1-羟基苯并三唑、(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、卡特缩合剂、双(2-氧代-3-恶唑烷基)次磷酰氯、1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐、氯甲酸乙酯、氯甲酸甲酯、氯乙酸甲酯、氯乙酸乙酯、氯甲酸异丁酯、丙烷磷酸酐、伍德沃德试剂K、二乙基磷酰氯、特戊酰氯、氯化亚砜中的一种或多种;所述的式(Ⅳ)化合物与式(Ⅴ)化合物的摩尔比为1∶(1~1.5),所述的式(Ⅳ)化合物与缩合剂的摩尔比为1∶(1~1.5)。
作为优选,所述的缚酸剂为N-甲基吗啉、N,N-二异丙基乙胺、甲胺、二乙胺、正丁胺、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铯、三乙胺、吡啶、咪唑中的一种或多种;所述的式(Ⅳ)化合物与缚酸剂的摩尔比为1∶(1~1.5)。缚酸剂能吸收反应中产生的酸,弱碱性物质与酸成盐,避免酸影响反应或反应平衡。
作为优选,所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙腈、N,N-甲基乙酰胺、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、二甲亚砜、四氢呋喃、水、乙醇、环已烷、乙醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、二甲苯、氯苯、二氯苯中的一种或多种,所述的打浆溶剂为乙酸乙酯、乙醚、石油醚、正庚烷、正戊烷、正己烷、环己烷、甲基叔丁基醚、异丙醚、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、醋酸异丙酯、乙腈、丙酮、甲酸、乙酸中的一种或多种。
本发明合成路线如下:
其中,式(Ⅴ)化合物中HX取自盐酸、硫酸、氢溴酸、醋酸、酒石酸、马来酸、富马酸、三氟乙酸、草酸、柠檬酸、磷酸、甲酸、琥珀酸、扁桃酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、对硝基苯甲酸、对羟基苯甲酸中的一种。
本发明具有以下优点:
1.本发明不需使用昂贵的氧化剂,减少后处理中产品的收率和纯度(手性纯度)的损失,降低了成本,减少了工艺步骤。
2.本发明反应条件温和,反应时间短,收率高。
3.本发明得到的中间产物(1)不需要纯化,直接用于下一步反应。
4.本发明反应后处理简单易行,外观好,纯度高。
附图说明
图1为本发明制得的特拉匹韦的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白,以下结合具体实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1:
-10℃下,将25g(2S)-2-环己基-N-(2-吡嗪基羰基)甘氨酰-3-甲基-L-缬氨酸,10g(1S,3aR,6aS)-八氢环戊烯并[c]吡咯-1-羧酸叔丁酯,13gN,N'-二异丙基碳二亚胺加入40mL二氯甲烷的反应瓶中,维持-10℃搅拌10分钟后,混合物缓慢升至室温,并在室温下搅拌过夜。TLC及HPLC检测反应结束后,将反应液降温3℃,搅拌10分钟后抽滤,得白色滤饼和黄绿色滤液。滤饼以20mL的二氯甲烷洗涤二次。抽干,合并滤液,分别以100mL的水洗三次,100mL1N盐酸洗涤一次,100mL的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次,再以100mL饱和食盐水洗涤一次,10g无水硫酸钠干燥后浓缩得中间产物(1)。
检查反应瓶已清洁干净后,0℃下,将上述中间产物(1)粗品溶于56g甲酸中,搅拌下向反应液中滴加84g浓盐酸。滴毕,0℃下搅拌2小时至TLC及HPLC检测无原料。加入100mL水到反应液中,搅拌下加入100mL二氯甲烷萃取二次,合并二氯甲烷层,以100mL水洗二次后分出有机相;水层再以100mL二氯甲烷萃取一次。有机相合并后以100mL的饱和食盐水洗涤一次,以10g无水硫酸钠干燥后浓缩至干,并以100mL的正庚烷带出残留的二氯甲烷,旋去1/2体积的正庚烷后,于85℃加热分散,搅拌下滴加150mL的乙酸乙酯,重结晶一次后抽滤,烘干得17.40g中间产物(2),纯度99.38%。第一步和第二步总收率69.13%,手性纯度>99.5%。
0℃下,将8.0g中间产物(2),2.16g的N,N'-二异丙基碳二亚胺,3.44g(S)-3-氨基-N-环丙基-2-氧代己酰胺盐酸盐以及1.89gN-甲基吗啉加入到100mL二氯甲烷中。加完后,体系缓慢升至室温,搅拌12小时至TLC监控反应结束后,加入100mL水后搅拌混合物30分钟。分出上层水相,下层有机相依次以120mL1N的盐酸,120mL的5%碳酸钠水溶液以及150mL的饱和食盐水洗涤一次,10g无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品在0℃下以乙酸乙酯打浆30分钟得特拉匹韦9.5g,纯度99.0%,手性纯度99.5%,收率89.9%。
实施例2:
-15℃下,将50g(2S)-2-环己基-N-(2-吡嗪基羰基)甘氨酰-3-甲基-L-缬氨酸,20g(1S,3aR,6aS)-八氢环戊烯并[c]吡咯-1-羧酸叔丁酯,32gN,N-二羰基咪唑加入80mL N,N-二甲基甲酰胺的反应瓶中,维持-15℃搅拌15分钟后,混合物缓慢升至室温,并在室温下搅拌过夜。TLC及HPLC检测反应结束后,将反应液降温5℃,搅拌15分钟后抽滤,得白色滤饼和黄绿色滤液。滤饼以40mL的二氯甲烷洗涤二次。抽干,合并滤液,分别以200mL的水洗三次,200mL1N盐酸洗涤一次,200mL的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次,再以200mL饱和食盐水洗涤一次,20g无水硫酸钠干燥后浓缩得到中间产物(1)。
检查反应瓶已清洁干净后,5℃下,将上述中间产物(1)粗品溶于112g乙酸中,搅拌下向反应液中滴加168g浓硫酸。滴毕,0℃下搅拌3小时至TLC及HPLC检测无原料。加入200mL水到反应液中,搅拌下加入200mL二氯甲烷萃取二次,合并二氯甲烷层,以200mL水洗二次后分出有机相;水层再以200mL二氯甲烷萃取一次。有机相合并后以200mL饱和食盐水洗涤一次,以20g无水硫酸钠干燥后浓缩至干,并以200mL正戊烷带出残留的二氯甲烷,旋去1/2体积的正戊烷后,于85℃加热分散,搅拌下滴加300mL的异丙醇,重结晶一次后抽滤,烘干得35.10g中间产物(2),纯度99.46%。第一步和第二步总收率69.73%,手性纯度>99.5%。
5℃下,将16.0g中间产物(2),5.5gN,N-二羰基咪唑,6.88g(S)-3-氨基-N-环丙基-2-氧代己酰胺硫酸盐以及4.82gN,N-二异丙基乙胺加入到200mL四氢呋喃中。加完后,体系缓慢升至室温,搅拌12小时至TLC监控反应结束后,加入200mL水后搅拌混合物30分钟。分出上层水相,下层有机相依次以240mL1N的盐酸,240mL的5%碳酸钠水溶液以及300mL的饱和食盐水洗涤一次,20g无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品在5℃下以石油醚打浆35分钟得特拉匹韦19.3g,纯度99.2%,手性纯度99.5%,收率91.3%。
实施例3:
-5℃下,将12.5g(2S)-2-环己基-N-(2-吡嗪基羰基)甘氨酰-3-甲基-L-缬氨酸,5g(1S,3aR,6aS)-八氢环戊烯并[c]吡咯-1-羧酸叔丁酯,8.0g的3,4-二氢-3-羟基-4-oxo-1,2,3-苯并三嗪加入20mL二甲亚砜的反应瓶中,维持-5℃搅拌5分钟后,混合物缓慢升至室温,并在室温下搅拌过夜。TLC及HPLC检测反应结束后,将反应液降温-2℃,搅拌6分钟后抽滤,得白色滤饼和黄绿色滤液。滤饼以10mL的二氯甲烷洗涤二次。抽干,合并滤液,分别以50mL的水洗三次,50mL1N盐酸洗涤一次,50mL的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次,再以50mL饱和食盐水洗涤一次,5g无水硫酸钠干燥后浓缩得到中间产物(1)。
检查反应瓶已清洁干净后,-5℃下,将上述中间产物(1)粗品溶于28g丙酸中,搅拌下向反应液中滴加42g浓磷酸。滴毕,-5℃下搅拌1小时至TLC及HPLC检测无原料。加入50mL水到反应液中,搅拌下加入50mL二氯甲烷萃取二次,合并二氯甲烷层,以50mL水洗二次后分出有机相;水层再以50mL二氯甲烷萃取一次。有机相合并后以50mL的饱和食盐水洗涤一次,以5g无水硫酸钠干燥后浓缩至干,并以50mL的乙醚带出残留的二氯甲烷,旋去1/2体积的乙醚后,于85℃加热分散,搅拌下滴加75mL的乙醇,重结晶一次后抽滤,烘干得8.55g的中间产物(2),纯度99.38%。第一步和第二步总收率67.97%,手性纯度>99.5%。
0℃下,将4.0g中间产物(2),1.36g的3,4-二氢-3-羟基-4-oxo-1,2,3-苯并三嗪,1.72g(S)-3-氨基-N-环丙基-2-氧代己酰胺甲酸盐以及0.95g三乙胺加入到50mL氯仿中。加完后,体系缓慢升至室温,搅拌11小时至TLC监控反应结束后,加入50mL水后搅拌混合物25分钟。分出上层水相,下层有机相依次以60mL1N的盐酸,60mL的5%碳酸钠水溶液以及75mL的饱和食盐水洗涤一次,5g无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品在5℃下以乙醚打浆25分钟得特拉匹韦4.8g,纯度99.0%,手性纯度99.5%,收率90.9%。
随即抽取采用本发明合成的特拉匹韦样品通过液相色谱进行检测。
检测条件:仪器:安捷伦1100高效液相色谱仪;
色谱柱:Luna C18,4.6mm×250mm,5μm;
柱温:25℃;
流速:1.0mL/min;
检测波长:222nm;
进样体积:5.0μL;
流动相:乙腈:0.1%磷酸水溶液=60:40(v/v);
运行时间:30min。
检测后样品的液相色谱图如图1所示;分析结果如表1所示。
表1:采用本发明制备得到的特拉匹韦样品色谱分析结果
从图1和表1可以看出:采用本发明制备的特拉匹韦纯度较高,达到99.50%
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。