KR20030022270A - 아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제 - Google Patents

아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제 Download PDF

Info

Publication number
KR20030022270A
KR20030022270A KR10-2003-7000363A KR20037000363A KR20030022270A KR 20030022270 A KR20030022270 A KR 20030022270A KR 20037000363 A KR20037000363 A KR 20037000363A KR 20030022270 A KR20030022270 A KR 20030022270A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cyclohexyl
compound
amino
compounds
formula
Prior art date
Application number
KR10-2003-7000363A
Other languages
English (en)
Inventor
르윙클요하네스베르나두스마리아
타이머스코넬리스마리우스
콘티파올로지오반니마르티노
Original Assignee
악조 노벨 엔.브이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 악조 노벨 엔.브이. filed Critical 악조 노벨 엔.브이.
Publication of KR20030022270A publication Critical patent/KR20030022270A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 항응고 활성을 지니므로 트롬빈이 매개하는 질환 및 트롬빈 관련 질환을 치료 또는 예방하는데 사용가능하다.
화학식 I
상기식에서 R1은 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 측쇄(3-4C) 알킬; R2는 시클로헥실 또는 페닐; R3는 H 또는 메틸; A는 비치환된 포화 4, 5 또는 6원 고리이다.

Description

아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제{THROMBIN INHIBITORS COMPRISING AN AMINOISOQUINOLINE GROUP}
다수의 펩티드 유사 트롬빈 저해제가 문헌에 개시되어 있다. 대부분의 트롬빈 저해제는 소위 P1 위치에 예컨대 염기성 아미노산인 아르기닌, 리신뿐 아니라 벤즈아미딘등과 같은 염기성 기를 함유한다. 이러한 염기성 부분은 항트롬빈(항혈전) 활성에 필수적인 것으로 간주되고 있다. 그러나, 이들 화합물의 염기도는 경구 경로로 전달시 장에서 화합물의 흡수율에 손상을 줄 수 있다. WO 98/47876에는, 염기성 기로서 아미노이소퀴놀린 부분을 지닌 트롬빈 저해제 부류가 개선된 경상피(Transepithelial) 운송 특성을 보이는 것으로 기재되어 있다. 이러한 후자의 화합물중에서 한층 더 개선된 약리학적 특성을 지닌 화합물이 새롭게 선택 동정되었다.
본 발명은 아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제, 이 저해제를 함유하는 약학적 조성물뿐 아니라, 이러한 저해제를 트롬빈-관련 질환의 치료 및 예방용 의약의 제조에 사용하는 것에 관한 것이다.
하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염은 크게 향상된 플라즈마반감기를 지닌 강력한 트롬빈 저해제이다.
상기식에서, R1은 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 측쇄 (3-4C)알킬;
R2는 시클로헥실 또는 페닐;
R3는 H 또는 메틸; 및
A는 비치환된 포화 4,5, 또는 6원 고리이다.
항트롬빈 약물을 요구하는 대부분의 임상적 상황은 일반적으로 연장된 반감기를 필요로 한다(Sixma, J.J.등, Thromb. Res. 67;305-311(esp. 307), 1992 참조). 그러므로, 본 발명의 화합물은 종래기술에 대해 중요한 개선을 가져온 것이 된다.
본 발명의 화합물은 트롬빈 매개 질환 및 트롬빈 관련 질환을 치료 및 예방하는데 유용하게 사용된다. 이러한 질환에는 응고 반응 캐스캐이드가 활성화되는 다수의 혈전증 및 프로혈전증 증상을 포함하는 것으로서, 이것의 비제한적인 예로는 심정맥 혈전증, 폐색전증, 혈전 정맥염, 혈전증 또는 색전증으로 인한 동맥폐색증, 혈관 성형술 시술시 또는 시술후 또는 혈전용해시 또는 용해후의 동맥 재폐색증, 동맥 손상 또는 침습성 심장 수술후 재발 협착증, 수술후 정맥성 혈전증 또는색전증, 급성 또는 만성 아테롬성 경화증, 졸중, 심근 경색증, 암 및 전이, 및 신경 퇴행성 질환등을 들 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 투석 및 외과수술시 필요에 따라 혈관 삽입시에 항응고제로서 사용가능하다. 본 발명의 화합물은 또한 시험관내에서 항응고제로도 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 바람직한 트롬빈 저해제는 A가 5원 고리인 화합물이다. R2는 바람직하게는 시클로헥실이며, R3가 H인 다른 화합물도 바람직하다. R1이 시클로헥실인 화합물이 더욱 바람직하다. 본 발명에 따른 가장 바람직한 트롬빈 저해제는 R1이 시클로헥실, R2는 시클로헥실, R3는 H, 및 A는 5원 고리인 화합물이다.
측쇄 (3-4C)알킬은 3 또는 4의 탄소수를 지닌 측쇄 알킬기, 예를 들면 이소프로필이다.
추가로, 본 발명은 적당히 보호된 아미노산을 아미노이소퀴놀린 유도체에 커플 반응시킨 후 그 보호기를 제거하는 단계를 포함하는 트롬빈 저해제를 제조하는 방법을 포함한다.
화학식 I의 화합물은 이러한 화합물을 제조하는 통상의 방식에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어 N,N-디시클로헥실카르보디이미드(DCCI) 및 1-히드록시벤조트리아졸(HOBT) 또는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3,-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)등의 커플링제를 사용하여 화학식 II의 화합물을 화학식 III의 화합물에 펩티드 커플링 반응시켜서 제조할 수 있다. 이들 식에서 R1,R2,R3및 A는상기와 같이 정의된 의미를 지닌다. 화학식 II의 화합물의 N-말단은 임의적으로 t-부틸옥시카르보닐기(Boc)와 같은 보호기를 지닐 수 있다. 화학식 III의 화합물의 아릴 아민기는 커플링 반응후에 제거될 수 있는 벤조일과 같은 보호기를 임의적으로 지닐 수 있다.
화학식 II의 화합물은 화학식 IV의 화합물(여기서 Pg'l은 벤질 에스테르와 같은 카르복실레이트 보호기임)을 적당한 케톤(예, 시클로헥사논 또는 아세톤) 및 환원제(예, 트리아세톡시보로하이드라이드 나트륨)로 산성조건하에서 처리한 후 카르복실레이트 보호기를 제거하므로써 화학식 IV의 화합물로부터 제조될 수 있다.
R3가 H인 화학식 III의 화합물, 즉, (1-아미노-6-(아미노메틸)이소퀴놀린)은 WO 98/47876에 기재되어 있다. R3가 Me인 화학식 III 화합물, 즉, (1-아미노-6-(아미노메틸)-3-메틸이소퀴놀린)은, 1-아미노-6-메톡시이소퀴놀린을 1-아미노-7-(아미노메틸)이소퀴놀린으로 전환 반응시키는데 이용되는 WO 98/47876에 개시된 방법을 사용하여 1-아미노-6-메톡시-3-메틸이소퀴놀린으로부터 제조될 수 있다. 1-아미노-6-메톡시-3-메틸이소퀴놀린은 W.Zielinski & M.Mazik에 의해 Heterocycles38, 375(1994)에 기재된 방법을 사용하여 3-메톡시페닐아세톤으로부터 제조가능하다.
또는, 화학식 I의 화합물은 화학식 V의 화합물을 시클로헥사논 또는 아세톤류의 적당한 케톤 및 수화붕소산트리아세톡시 나트륨과 같은 환원제로 산성 조건하에서 처리하므로써 식(V)의 화합물로부터 제조될수 있다. 이 반응에서, 화학식 V의 화합물의 아릴 아민기는 환원 아민화 반응후에 제거될 수 있는 벤조일과 같은 기에 의해 임의적으로 보호될 수 있다.
화학식 V의 화합물은 Boc기와 같은 보호기로 N-말단에서 보호된 디펩티드와 화학식 III의 화합물을 전술한 커플링제를 사용하여 펩티드 커플링 반응시키므로써 제조될 수 있다.
일반적으로, 산에 불안정한 t-부틸옥시카르보닐(Boc) 기, 벤질옥시카르보닐(Cbz) 기 및 치환된 유사체, 그리고 염기에 불안정한 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐(Fmoc) 기 또는 프탈로일(Phth)기와 같은 우레탄 작용기에 의해알파-아미노 작용기의 보호 반응이 일어난다. 기타 적합한 치환 아미노 보호기로는 Nps, Bpoc, Msc등을 포함한다. 보호기의 제거는 그 보호기의 특성에 따라 다양한 방식으로 수행될 수 있다. 일반적으로 탈보호 반응은 산성 조건 및 스캐빈저의 존재하에 일어난다. 또한 Cbz 기는 촉매적 H화반응에 의해 제거가능하다. 아미노 보호기와 이를 제거하는 방법에 대한 개략적 설명은 The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3 E. Gross & J. Meienhofer, Eds.,(Academic Press, New York, 1981)에 개시되어 있다.
카르복실기의 보호는 에스테르의 형성에 의해 수행되는데, 예를 들면 염기에 불안정한 에스테르(예, 메틸에스테르 또는 에틸에스테르), 산에 불안정한 에스테르(예, t-부틸에스테르), 또는 가H 분해에 불안정한 에스테르(예, 벤질에스테르)의 형성에 의해 일어난다.
유리 염기의 형태로 존재할 수도 있는 본 발명의 화합물은 약학적 허용 염의 형태로 반응 혼합물로 부터 분리할 수 있다. 약학적 허용 염은 또한 식(I)의 유리 염기를 유기산 또는 무기산(예, 염화수소, 브롬화수소, 요오드화수소, 황산, 인산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 말레산, 말론산, 메탄설폰산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 구연산, 벤조산, 및 아스코르빈산)으로 처리하여 얻을 수 있다.
본 발명의 화합물은 1개 이상의 키랄 탄소 원자를 지니므로 순수한 거울 이성체로서, 순수한 디아스테레오머로서, 거울 이성체의 혼합물로서, 또는 디아스테레오머 함유의 혼합물로서 얻어질 수 있다. 순수한 거울 이성체를 얻는 방법은 당업계에 잘 알려져 있는데, 예를 들면 광학적으로 활성인 산 및 라세미 혼합물로부터 얻은 염을 결정화시키거나 또는 키랄 칼럼을 사용하는 크로마토그래피에 의해 얻을 수 있다. 디아스테레오머의 경우, 직상 칼럼 또는 역상 칼럼이 사용될 수도 있다.
본 발명의 화합물은 장내로 또는 비경구적으로 투여될 수 있으며, 인간에게 적합한 일일 투여량은 체중 1kg당 0.001 내지 100mg, 바람직하게는 체중 1kg당 0.01 내지 10mg이다. 약학적 허용 보조제, 예를 들어 참고 문헌인 Gennaro등에 의한 Remington's Pharmaceutical Science(18판, Mack Publishing Company, 1990, 제8장: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture)에 기술된 약학적 허용 보조제와 혼합한 후, 그 화합물을 환제, 정제와 같은 고형 복용 단위로 압축하거나 또는 캡슐 또는 좌제와 같이 가공처리할 수 있다. 약학적으로 적합한 액체를 사용하여, 예컨대 주사제용 용제, 현탁제, 에멀젼, 또는 비내 스프레이용 스프레이로 투여가능하다. 복용 단위, 예컨대 정제를 제조하는 경우, 통상의 첨가제로서 충전제, 착색제, 중합 결합제등과 같은 것을 사용할 수 있다. 일반적으로, 활성 화합물의 기능을 방해하지 않는 임의의 약학적 허용 첨가제를 사용할 수 있다. 조성물을 투여 가능케하는 적당한 담체로는 적당량의 락토즈, 전분, 셀룰로즈 유도체등, 또는 이들의 혼합물을 들 수 있다.
본 발명의 화합물의 제거 반감기와 생체 유용율을 개를 대상으로 다음의 테스트를 따라 적당하게 시험할 수 있다.
암컷 비글 개에서 직접 트롬빈 저해제의 생체 유용율과 체류시간은 정맥 투여 또는 경구 투여후에 플라즈마중에서 항-IIa 활성을 측정하므로써 결정될 수 있다. 본 발명의 프로테아제 저해제의 선택의 관점에서, 트롬빈의 저해는 측정된 프로테아제 저해제의 농도와 직선으로 비례한다. 세린 프로테아제 저해제의 정맥 투여 또는 경구 투여후에, 하루중에서 다양한 시간대에 혈액을 경정맥으로 부터 채혈한다. 혈액을 원심분리한 후에 테스트된 화합물 그 자체의 보정 곡선을 사용하여 플라즈마 항-IIa 활성을 미량 역가 플레이트 색소 분석을 통해 플라즈마 시료를 대상으로 측정한다. 얻은 데이터를 플라즈마 대 시간 곡선으로 분석하되, Simplex 방법을 기본으로 하는 컴퓨터로 반복 절차를 수행한다. 이후에, 농도와는 별도로 상대적 에러 모델을 사용하여 제거 반감기를 계산하고, 곡선 아래 면적(AUC)를 트라페쥼 규칙에 따라서 측정한다. 직선의 운동 속도를 가정하여, 비경구 투여하여 얻은 AUC를 그 동일 용량을 정맥내 투여하여 얻은 추정 정상 AUC 값으로 나누어 생체 유용율을 계산한다(x100).
본 발명을 이하의 실시예로 구체적으로 설명한다.
1H NMR 측정은 400MHz의1H 프리퀀시에서 작동하는 BRUKER DRX 400 분광 광도계상에서 수행되었다. 질량 스펙트럼(MS)은 PE-sciex API-165를 사용하여 기록하였다.
실시예 1
N-시클로헥실-3-시클로헥실-D-알라닐-N-[(1-아미노-6-이소퀴놀리닐)메틸]-L-프로린아미드 히드로겐클로라이드(N-시클로헥실-D-Cha-Pro-6Aiq, HCl)
2.5ml의 디클로로메탄 및 2.5ml의 트리플루오로아세트산중에서 3-시클로헥실-N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-D-알라닐-L-프롤린 페닐메틸 에스테르(Boc-D-Cha-Pro-OBzl) 0.91g을 실온에서 2시간동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 진공중에서 농축하여 0.94g의 오일을 얻었다. 이 오일을 1%(v/v)의 아세트산을 함유하는 10ml의 N,N-디메틸포름아미드중에 용해하고, 0.26ml의 시클로헥사논 및 0.64g의 트리아세톡시보로하이드라이드 나트륨을 첨가하였다. 이후 16시간동안 실온에서 교반한 후, 5ml의 물을 반응 혼합물에 가하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 추출물을 황산 마그네슘상에서 건조시킨 후 농축하여 0.90g의 오일(TLC; 실리카겔, 디클로로메탄/메탄올=95/5(v/v) Rf=0.8)을 산출하였다. 이 오일을 50ml의 에틸 아세테이트중에 용해하고, 용액의 pH를 아세트산을 사용하여 5로 조정하였다. 이후 탄소(10%)상의 팔라듐 0.10g을 첨가하고 이 현탁액을 실온에서 1시간 동안 대기압하에서 수소화시켰다. 팔라듐 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압하에서 증발제거하였다. 잔사를 톨루엔 중에 용해시키고, 그 톨루엔을 감압하에서 증발시키면 0.56g의 N-시클로헥실-D-Cha-Pro-OH가 산출되었다. 이 산(0.35g)을 10ml의 N,N-디메틸포름아미드중에 용해시키고, 0.19mg의 1-아미노-6-아미노메틸이소퀴놀린(WO 9847876)과 0.4g의 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 유로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)를 첨가하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA)을 사용하여 반응 혼합물의 pH를 8로 조정하였다. 실온에서 24시간동안 교반한 후, 추가의 0.1g의 TBTU를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 18 시간동안 더 교반하였다.이후 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔사를 50ml의 디클로로메탄중에 용해시키고 수성 탄산 H화 나트륨으로 2회 세척하였다. 이후 황산 마그네슘상에서 건조시키고 농축하였다. 잔사를 물에 용해시키고 20% A/80% B 내지 20 % A/30% B/ 50 % C의 구배식 용출 계를 사용하여 40 ml/분의 유속하에서 60분간 예비 HPLC DeltaPak RP-C18상에 직접 놓았다(A: 0.5M 인산염 버퍼 pH 2.1, B: 물, C: 아세토니트릴/물=6/4(v/v)). 수득량: 0.25g의 표제 화합물.
1H-NMR 400 MHz (CD3OD) δ: 0.84-2.41 (27H,m), 2.91-3.01(1H,m), 3.57-3.65(1H,m), 3.81-3.88(1H,m), 4.30(1H,t,J=7Hz), 4.49-4.77(3H,m), 7.26(1H,d,J=7Hz), 7.57(1H,d,J=7Hz), 7.73(1H,dd,J=2Hz 및 J=9Hz), 7.92(1H,d,J=2Hz), 8.38(1H,d,J=9Hz).
실시예 2
N-시클로헥실-3-시클로헥실-D-알라닐-N-[(1-아미노-3-메틸-6-이소퀴놀리닐)메틸]-L-프롤린아미드 히드로겐클로라이드(N-시클로헥실-D-Cha-Pro-6(3Me)Aiq. HCl)
2a. 1-아미노-6-메톡시-3-메틸-이소퀴놀린
45ml의 무수 톨루엔중의 2.12g의 3-메톡시페닐아세톤 및 1.26ml의 염화포스포릴 용액을 환류하에 가열하였다. 30분 후에, 이 혼합물을 0℃로 냉각하고 23ml의 무수 에테르중의 시안아미드 0.57g 용액을 소적으로 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온한 후 1시간동안 이 온도에서 교반하였다. 이후 교반된 혼합물을 0℃로 냉각하고 1.5ml의 테트라염화 티타늄을 소적으로 적가하였다. 반응 혼합물을 2.5시간동안 환류 가열하고, 냉각한 후, 34ml의 물을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고 침전물을 에틸 아세테이트로 세척하였다. 2N 수성 수산화 나트륨을 사용하여 여과물을 염기성으로 만들어 이를 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산 마그네슘상에서 건조시킨 후 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=95/5)로 정제하여 0.42g의 표제 화합물을 생성하였다:
1H-NMR 400 MHz (CDCl3) δ: 2.45(3H,s), 3.91(3H,s), 5.0(2H,br.s), 6.81(1H,s), 6.90(1H,d,J=3Hz), 7.02(1H,dd,J=3Hz 및 J=9Hz), 7.65(1H,d,J=9Hz).
2b. 1-아미노-6-히드록시-3-메틸이소퀴놀린
6ml의 디클로로메탄중의 트리브롬화 붕소(4 ml)를 소적으로 10ml의 디클로로메탄중의 1-아미노-6-메톡시-3-메틸이소퀴놀린(2g)의 교반용액에 0℃에서 첨가하였다. 16시간동안 상온에서 교반한 후 반응 혼합물을 얼음에 붓고, 유기층을 제거하고, 수성층의 pH를 진한 수성 암모니아를 첨가하여 9로 조정하였다. 침전 물질은 여과 수거한 후 진공 건조하면 표제 화합물 1.6g이 얻어졌다. ESI-MS: 175(MH+).
2c. 트리플루오로-메탄설폰산 1-아미노-3-메틸이소퀴놀린-6-일 에스테르
19.5ml의 디클로로메탄 및 19.5ml의 디옥산중의 1.4g의 1-아미노-6-히드록시-3-메틸이소퀴놀린과 4.3g의 N-페닐비스(트리플루오로메탄설폰이미드) 혼합물을 냉욕에서 냉각시키고 2.8ml의 N,N-디이소프로필에틸아민을 소적으로 가하였다. 산출된 혼합물을 70℃에서 24시간동안 가열하고, 이후에 휘발물을 진공제거하였다. 남은 잔사를 에틸 아세테이트중에 용해하고 2N 수성 수산화나트륨, 물 및 염수로 연속적으로 세척한후 황산 나트륨상에서 건조시켰다. 여과와 농축을 행하면 무색의 오일이 산출되었는데, 이를 톨루엔중에서 분쇄하면 1.3g의 고체가 생성되었다. 톨루엔 용액을 실리카 크로마토그래피(톨루엔/에탄올=95/5)로 정제한 결과 0.6g의 표제 화합물이 추가로 생성되었다. 총 수득량 1.9g. ESI-MS: 307(MH+)
2d. 1-아미노-6-시아노-3-메틸이소퀴놀린
24ml의 N-메틸피롤리돈중의 트리플루오로-메탄설폰산-1-아미노-3-메틸이소퀴놀린-6-일 에스테르(1.9g), 시안화아연(0.74g) 및 트리페닐포스핀(0.33g)의 가열된 혼합물에 팔라듐 아세테이트(0.28g)를 190℃(발열반응)에서 가하였다. 190℃에서 2시간동안 교반을 수행하였다. 실온에서 냉각한 후, 에틸 아세테이트를 첨가하고 유기 혼합물을 2N 수성 암모니아, 물 및 염수로 세척하고 황산 마그네슘상에서 건조시켰다. 여과 및 농축을 수행한 결과 갈색의 오일이 얻어졌는데, 이것을 실리카 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=98/2) 처리하면 표제 화합물 0.68g이 얻어졌다. ESI-MS: 184(MH+).
2e. 1-아미노-6-(아미노메틸)-3-메틸이소퀴놀린
질소 분위기하의 실온에서 15ml의 테트라히드로푸란중의 1-아미노-6-시아노-3-메틸이소퀴놀린(0.68g)의 교반용액에 테트라히드로푸란중의 2M 보란-메틸설파이드 복합체 8.4ml를 가하고 60℃에서 50분간 가열하였다. 반응 혼합물을 냉욕중에서 냉각하고 메탄올 7.5ml를 서서히 가하였다. 15분후에 에테르중의 1M 염화H 18.8ml를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간동안 추가로 교반하였다. 고형물을 분리하면 0.34g의 1-아미노-6-(아미노메틸)-3-메틸이소퀴놀린 히드로겐클로라이드가 생성되었다. 여과물을 칼럼 크로마토그래피(실리카겔; 메탄올/암모니아=98/2)를 사용하여 정제하면 0.15g의 1-아미노-6-(아미노메틸)-3-메틸이소퀴놀린이 추가로 산출되었다. ESI-MS: 188(MH+).
2f. N-시클로헥실-3-시클로헥실-D-알라닐-N-[(1-아미노-3-메틸-6-이소퀴놀리닐)메틸]-L-프롤린아미드 히드로겐클로라이드(N-시클로헥실-D-Cha-Pro-6(3Me)Aiq. HCl)
3ml의 N,N-디메틸포름아미드 중의 0.37ml의 N,N-디이소프로필에틸아민, 0.5ml의 아세토니트릴, 0.30g의 N-시클로헥실-D-Cha-Pro-OH 0.30g, 1-아미노-6-(아미노메틸)-3-메틸이소퀴놀린 히드로겐클로라이드 0.17g의 교반 혼합물에 1.3ml의 N,N-디메틸포름아미드중의 브로모트리피롤리도노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBroP) 0.35g의 용액을 1시간정도 첨가하였다. 24시간동안 실온에서 교반한후에, 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 중에 용해하고 수성 탄산 H 나트륨 및 염수로 세척한 후 황산 마그네슘 상에서 건조시켜 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=9/1)로 정제하고 t-부탄올/염산으로부터 동결건조하면 0.13g의 표제 화합물이 생성되었다.
1H-NMR 400 MHz (CD3OD) δ: 0.85-2.40(27H,m), 2.50(0.3H,s), 2.51(2.7H,s), 2.92-3.00(1H,m), 3.54-3.68(1H,m), 3.81-3.88(1H,m), 4.30(1H,t,J=7Hz), 4.46-4.74(3H,m), 7.02(1H,s), 7.64(1H,dd,J=2Hz 및 J=9Hz), 7.80(1H,d,J=2Hz), 8.32(1H,d,J=9Hz).
실시예 3
N-시클로헥실-D-페닐알라닐-N-[(1-아미노-6-이소퀴노리닐)메틸]-L-프롤린아미드 히드로겐클로라이드(N-시클로헥실-D-Phe-Pro-6Aiq.HCl)
N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-D-페닐알라닐-L-프롤린 페닐메틸 에스테르(Boc-D-Phe-Pro-OBzl) 0.85g을 출발물질로 사용하되, N-시클로헥실-D-Cha-Pro-OH를 제조하는 데 사용되었던 실시예 1에 기재된 방법을 수행하면 N-시클로헥실-D-페닐알라닐-L-프롤린(N-시클로헥실-D-Phe-Pro-OH)이 생성되었다. N-시클로헥실-D-Phe-Pro-OH(0.82g)를 10ml의 N,N-디메틸포름아미드중에 용해시키고, 0.33mg의 1-아미노-6-아미노메틸이소퀴놀린 및 1.1g의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N'N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU)를 첨가한 후, N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA)를 사용하여 pH를 8로 조정하였다. 실온에서 16시간동안 교반한 후 반응 혼합물을 진공농축시켰다. 잔사를 50ml의 디클로로메탄중에 용해하고 물과 염수로 2회 세척한 후 황산 마그네슘상에서 건조 및 농축시켰다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올(2% 암모니아 함유)=9/1)로부터 정제한 후 t-부탄올/염산으로부터 동결건조하면 0.19g의 표제화합물이 생성되었다.
1H-NMR 400 MHz (CD3OD) δ: 0.87-2.13(14H,m), 2.38-2.45(1H,m), 2.94-3.03(1H,m), 3.06-3.13(1H,m), 3.25-3.38(2H,m), 4.33-4.73(4H,m), 7.25-7.40(6H,m), 7.58(1H,d,J=7Hz), 7.71(1H,dd,J=2Hz 및 J=9Hz), 7.92(1H,d,J=2Hz), 8.35(1H,d,J=9Hz).
실시예 4
N-시클로펜틸-3-시클로헥실-D-알라닐-N-[(1-아미노-6-이소퀴놀리닐)메틸]-L-프롤린아미드 히드로겐클로라이드(N-시클로펜틸-D-Cha-Pro-6Aiq.HCl)
시클로헥사논 대신에 시클로펜타논을 사용하고 0.30g의 Boc-D-Cha-Pro-OBzl 을 출발물질로 사용하여 실시예 1의 절차를 수행하면 N-시클로펜틸-D-Cha-Pro-6Aiq가 생성되었는데, 이를 칼럼 크로마토그래피(실리카겔;디클로로메탄/메탄올=10/1 →5/1)를 사용하여 정제하였다. t-부탄올/염산으로 부터 동결건조하면 0.16g의 표제 화합물이 생성되었다.
1H-NMR 400 MHz (CD3OD) δ: 0.85-2.41(25H,m), 3.43-3.52(1H,m), 3.59-3.65(1H,m), 3.80-3.86(1H,m), 4.20(1H,t,J=7Hz), 4.51-4.73(3H,m), 7.25(1H,d,J=7Hz), 7.57(1H,d,J=7Hz), 7.73(1H,dd,J=2Hz 및 J=9Hz), 7.90(1H,d,J=2Hz), 8.38(1H,d,J=9Hz).
실시예 5
N-(1-메틸에틸)-3-시클로헥실-D-알라닐-N-[(1-아미노-6-이소퀴놀리닐)메틸]-L-프롤린아미드 히드로겐클로라이드(N-(1-메틸에틸)-D-Cha-Pro-6Aiq.HCl)
시클로헥사논 대신에 아세톤을 사용하고 0.92g의 Boc-D-Cha-Pro-OBzl을 출발 물질로 하여 실시예 1에 기술된 절차를 수행하면 0.04g의 N-(1-메틸에틸)-D-Cha-Pro-6Aia.HCl)이 생성되었다.
1H-NMR 400 MHz (CD3OD) δ: 0.85-2.41(23H,m), 3.27-3.35(1H,m), 3.59-3.65(1H,m), 3.82-3.89(1H,m), 4.27(1H,t,J=7Hz), 4.51-4.74(3H,m), 7.26(1H,d,J=7Hz), 7.57(1H,d,J=7Hz), 7.72(1H,dd,J=2Hz 및 J=9Hz), 7.91(1H,d,J=2Hz), 8.38(1H,d,J=9Hz).
항 트롬빈 분석
본 발명의 항 트롬빈 활성은 트롬빈이 배출하는 색소 기질 s-2238의 가수분해 속도를 분광 광도계로 측정하여 평가하였다. 버퍼계중에서의 항 트롬빈 활성 분석법을 사용하여 테스트 화합물의 IC50값을 평가하였다.
테스트 매질:트로메타민-NaCl-폴리에틸렌 글리콜 6000(TNP) 버퍼
참고 화합물:I2581(Kabi)
매질:TNP 버퍼. 디메틸설폭시드, 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴, 또는 3차 부틸 알콜로 용해화하되, 이들은 역효과를 일으키지 않는 범주에서 최종 반응물 중에서 2.5%까지의 양으로 존재한다.
기법
시약* 1.트로메타민-NaCl(TN) 버퍼[버퍼의 조성:트로메타민(Tris)6.057g(50mmol), NaCl 5.844g(100mmol), 물까지 가해서 1ℓ. 용액의 pH는 37℃에서 HCl(10mmol.ℓ-1)로 7.4로 조정한다];2.TNP 버퍼(폴리에틸렌 글리콜 6000을 TN 버퍼중에서 용해하여 3g.ℓ-1의 농도를 얻는다);3.S-2238 용액[한개의 바이알 S-2238(25mg; Kabi Diagnostica, 스웨덴)을 20ml의 TN 버퍼중에서 용해하여 1.25mg.ml-1(2mmol.ℓ-1)의 농도를 얻는다];4.트롬빈 용액[인간 트롬빈(16000 nKat.바이알-1; Centraal Laboratorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam, The Netherlands)을 TNP 버퍼중에서 용해하여 835nKat.ml-1의 원용액을 생성한다. 이 용액을 사용하기 직전에 TNP 버퍼로 희석하여 농도 3.34nKat.ml-1로 만든다]
*- 모든 성분들은 분석용 등급임을 의미.
- 수성 용액의 경우 초정수(Milli-Q 품질)이 사용됨.
테스트 화합물 및 참고 화합물 용액의 제조
테스트 화합물과 참고 화합물을 Milli-Q 수에 용해하여 10-2mol.ℓ-1의 원농도를 생성하였다. 각 농도를 매질로 단계적으로 희석하여 10-3, 10-4, 10-5mol.ℓ-1의 농도를 생성하도록 하였다. 원용액을 비롯한 희석물을 분석에 사용하였다(반응 혼합물중에서의 최종 농도: 각기 3.10-3;10-3;3.10-4;10-4;3.10-5;10-5;3.10-6및 10-6mol.ℓ-1).
절차
실온에서 0.075ml 및 0.025 ml의 시험 화합물 또는 참고 화합물 용액 또는 매질을 미량 역가 플레이트의 웰내로 웰을 하나 건너씩 피펫팅한 후, 이들 용액을 0.115ml 및 0.0165ml의 TNP 버퍼로 각기 희석하였다. 0.030ml의 S-2238 용액의 분취량을 각 웰에 가하여 플레이트를 예열시키고 진탕하면서 항온 처리기(Amersham)에서 10분간 37℃의 온도로 사전 항온 처리하였다. 사전 항온 처리한 후에 S-2238의 가수분해는 0.030ml의 트롬빈 용액을 각 웰에 첨가하므로써 개시되었다. 플레이트를 37℃에서 항온 처리하였다(30초간 진탕하면서). 항온 처리한지 1분 지나서, 반응 속도 미량 역가 플레이트 판독기(Twinreader plus, Flow Laboratories)를 사용하여 405 nm에서 각 시료의 흡광도를 90분동안 매 2분 마다 측정하였다.
LOTUS-MEASURE를 사용하여 IBM 퍼스널 컴퓨터로 모든 데이터를 수집하였다. 각 화합물의 농도(mol.ℓ-1반응 혼합물로 표현) 및 블랭크에서의 흡광도를 반응시간(분)에 대해 플럿트화되었다.
반응의 평가
각각의 최종 농도에서, 최대 흡광도를 분석 플럿트로부터 계산하였다. IC50-값(최종 농도 μmol.ℓ-1는 블랭크의 최대 흡광도의 50%를 억제함)은 Hafner등에 따른 로짓 트랜스포메이션 분석을 사용하여 계산되었다(Arzneim-Forsch/Drug Res.1977;27(II); 1871-3)
항혈전 작용
실시예 IC50(mol.ℓ-1)
1 0.03
2 0.14
3 0.13
4 0.12
5 0.29

Claims (9)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적 허용염.
    화학식 I
    상기식에서, R1은 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 측쇄 (3-4C)알킬;
    R2는 시클로헥실 또는 페닐;
    R3는 H 또는 메틸; 및
    A는 비치환된 포화 4,5, 또는 6원 고리이다.
  2. 제1항에 있어서, A는 5원 고리인 것인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R2는 시클로헥실인 것인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R3는 H인 것인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R1은 시클로헥실인 것인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, R1은 시클로헥실, R2는 시클로헥실, R3는 H 및 A는 5원 고리인 것인 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항중 어느 하나의 항에 의한 화합물 및 약학적 허용 보조제를 포함하는 것인 약학 조성물.
  8. 치료에 사용되는 제1항 내지 제6항중 어느 하나의 항에 의한 화합물.
  9. 트롬빈 관련 질환을 치료 또는 예방하는 의약의 제조에 사용되는 제1항 내지 제6항중 어느 하나의 항에 의한 화합물의 용도.
KR10-2003-7000363A 2000-07-12 2001-07-09 아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제 KR20030022270A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP00202491.7 2000-07-12
EP00202491 2000-07-12
PCT/EP2001/007887 WO2002004423A1 (en) 2000-07-12 2001-07-09 Thrombin inhibitors comprising an aminoisoquinoline group

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20030022270A true KR20030022270A (ko) 2003-03-15

Family

ID=8171793

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2003-7000363A KR20030022270A (ko) 2000-07-12 2001-07-09 아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제

Country Status (23)

Country Link
US (1) US6642253B2 (ko)
EP (1) EP1303491A1 (ko)
JP (1) JP2004502759A (ko)
KR (1) KR20030022270A (ko)
CN (1) CN1441784A (ko)
AR (1) AR029596A1 (ko)
AU (1) AU2001278476A1 (ko)
BR (1) BR0112338A (ko)
CA (1) CA2413035A1 (ko)
CZ (1) CZ200392A3 (ko)
EC (1) ECSP034422A (ko)
HR (1) HRP20030017A2 (ko)
HU (1) HUP0301258A2 (ko)
IL (1) IL153611A0 (ko)
MX (1) MXPA03000337A (ko)
NO (1) NO20030145L (ko)
NZ (1) NZ523553A (ko)
PE (1) PE20020209A1 (ko)
PL (1) PL359787A1 (ko)
RU (1) RU2003104017A (ko)
SK (1) SK322003A3 (ko)
WO (1) WO2002004423A1 (ko)
ZA (1) ZA200300080B (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6906192B2 (en) 2000-11-07 2005-06-14 Bristol Myers Squibb Company Processes for the preparation of acid derivatives useful as serine protease inhibitors
JP2004514669A (ja) 2000-11-07 2004-05-20 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー セリンプロテアーゼ阻害剤として有用な酸誘導体
TWI389899B (zh) * 2006-08-08 2013-03-21 Msd Oss Bv 具口服活性之凝血酶抑制劑
WO2008077556A1 (en) * 2006-12-27 2008-07-03 Sanofi-Aventis Cycloalkylamine substituted isoquinoline and isoquinolinone derivatives
US7927378B2 (en) * 2007-03-05 2011-04-19 Scussel Sbj Systems, Llc Vacuum assisted prosthetic sleeve and socket
CN109810173B (zh) * 2017-11-21 2020-11-27 首都医科大学 二氢异喹啉-3-甲酰-TARGD(aa)aa,其制备,抗静脉血栓活性和应用
CN109810174B (zh) * 2017-11-21 2021-01-01 首都医科大学 异喹啉-3-甲酰-TARGD(aa)aa,其制备,抗静脉血栓活性和应用
CN109810172B (zh) * 2017-11-21 2021-01-01 首都医科大学 异喹啉-3-甲酰-PARGD(aa)aa,其制备,抗静脉血栓活性和应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL123986A (en) 1997-04-24 2011-10-31 Organon Nv Medicinal compounds

Also Published As

Publication number Publication date
CN1441784A (zh) 2003-09-10
SK322003A3 (en) 2003-06-03
RU2003104017A (ru) 2004-08-20
CZ200392A3 (cs) 2003-05-14
PL359787A1 (en) 2004-09-06
IL153611A0 (en) 2003-07-06
JP2004502759A (ja) 2004-01-29
AR029596A1 (es) 2003-07-02
HRP20030017A2 (en) 2003-04-30
WO2002004423A8 (en) 2003-03-06
NZ523553A (en) 2004-04-30
EP1303491A1 (en) 2003-04-23
US6642253B2 (en) 2003-11-04
PE20020209A1 (es) 2002-03-19
HUP0301258A2 (hu) 2003-08-28
AU2001278476A1 (en) 2002-01-21
ZA200300080B (en) 2004-04-05
NO20030145D0 (no) 2003-01-10
MXPA03000337A (es) 2004-04-05
US20030166579A1 (en) 2003-09-04
CA2413035A1 (en) 2002-01-17
WO2002004423A9 (en) 2003-05-15
ECSP034422A (es) 2003-03-10
NO20030145L (no) 2003-01-10
BR0112338A (pt) 2003-07-22
WO2002004423A1 (en) 2002-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0772590B1 (en) Thrombin inhibitors
EP0820287B1 (en) Thrombin inhibitors
EP1012166B1 (en) 1-amino-7-isoquinoline derivatives as serine protease inhibitors
RU2232760C2 (ru) Ингибитор сериновых протеаз и фармацевтическая композиция на его основе
EP3466961B1 (en) Prolinamide derivative as thrombin inhibitor
DE10322191B4 (de) N-sulfonylierte Aminosäurederivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
CN115960088A (zh) 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
CN114057702A (zh) 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
JP2515558B2 (ja) 新規なペプチドおよびそれを有効成分とする抗健忘症剤
KR20030022270A (ko) 아미노이소퀴놀린기를 함유하는 트롬빈 저해제
EP0858262B1 (en) Thrombin inhibitors
US5798377A (en) Thrombin inhibitors
NZ517603A (en) Azacycloalkanone serine protease inhibitors
EP1073449A1 (en) Amino acid amidinohydrazones, alkoxyguanidines and aminoguanidines as protease inhibitors
CN113372368A (zh) 一种弹性蛋白酶抑制剂前药及其用途
CN102924567B (zh) 一类肽化合物、其制备方法及用途
CN101724016B (zh) 一类肽化合物、其制备方法及用途
JPH029863A (ja) トリ置換−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン
FR2761065A1 (fr) Derives de n-(arginyle)benzenesulfonamide, leur preparation et leur application en therapeutique

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid