CN103333852A - 一种米根霉菌剂的生产方法及其用途及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及控制以加工番茄等重要经济作物为寄主的寄生性杂草列当的生防菌株的生产方法、用途以及使用方法，一种米根霉菌剂的生产方法，包括如下步骤：从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；配制种子培养基以及发酵培养基；将保存好的菌种接种至种子培养基中振荡培养后，按接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，所述合格的发酵液即为米根霉菌剂。所述米根霉菌剂的用途，将该菌剂用于控制或防治农作物寄生性杂草列当的发生。所述的米根霉菌剂的使用方法，将制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理。所述生产方法适于工业化规模生产、经济实用、成本低，该菌剂的用途及使用方法操作简单、防治效果好。

Description

一种米根霉菌剂的生产方法及其用途及其使用方法

技术领域

本发明涉及一种控制以加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草、马铃薯等重要经济作物为寄主的寄生性杂草列当的生防菌株的生产方法以及用途，以及使用方法，特别是一种米根霉（Rhizopus oryzae）菌剂的生产方法及其用途及其使用方法。

背景技术

全世界大约有4000种寄生性植物，其中列当科（Orobanchaceae）引起的危害最为严重。列当属是列当科一个重要的组成部分，目前报道有170个种，主要分布于干旱、半干旱地区，能够寄生马铃薯、哈密瓜、大豆、烟草、加工番茄及向日葵等17科近百种寄主作物。其在我国有23种，3变种，1变型，大部分集中在我国西北部，是我国进境植物检疫及内检对象。因自身缺少光合作用所需叶绿素，生长所需全部营养物质和水分依靠吸盘从其寄主植物上截取，环境条件适宜的条件下，在寄主整个生育期内均与寄主建立寄生关系，寄主于苗期被寄生后，幼苗会迅速死亡；花期被寄生，植株自身生长缓慢，果实的品质及产量严重下降，发生严重的情况下，作物可能绝收。据报道显示全世界大约有1.2%的耕地已受到列当的危害，每年可造成几十亿美元经济损失。

列当目前在巴音郭楞蒙古自治州、伊犁哈萨克自治州、哈密、吐鲁番、和田、喀什等共 30 多个县市; 新疆生产建设兵团农二师、农三师、农四师、农五师、农六师、农七师、农八师、农九师、农十师、农十二师和农十三师共 20 多个农业团场均有分布。寄生在甜瓜、西瓜、向日葵、籽瓜、加工番茄、辣椒、豆角、葫芦瓜、南瓜、马铃薯和苍耳等寄主植物上。对新疆经济作物危害最严重的有4种:埃及列当、向日葵列当、弯管列当、分枝列当。

埃及列当和分枝列当寄主范围较广，寄主通常是农业生产中一些重要的经济作物，其中分枝列当的寄主主要为茄科、马铃薯和烟草，并且在世界许多国家均有分布。在古巴，曾有大约20000ha²的马铃薯受到分枝列当的侵染，造成10-50%的产量损失，在智利，西红柿因受到分枝列当侵染造成80%的产量损失。埃及列当主要发生在地中海至阿富汗、巴基斯坦、印度及尼泊尔等地，寄主主要为茄科和葫芦科作物，新疆地区甜瓜和西瓜曾因受到埃及列当的侵染造成20%-70%的产量损失。

向日葵列当和弯管列当寄主范围相比前两者较小，很多国家均有发生史，向日葵列当寄主主要为向日葵，其对向日葵的危害有超过100多年历史,希腊曾有10000ha²向日葵因受到向日葵列当的侵染造成60%的产量损失；中国曾有20000ha²向日葵被其侵染，造成20-50%的产量损失。关长江曾报道向日葵上单株寄生5株列当，产量减低63.76%，单株上寄生10～20株列当，产量降低67.72%～74.26%，单株上寄生超过51株，向日葵将绝收。与向日葵列当相比，弯管列当可寄生西红柿、烟草、茄子等作物，在印度地区，因作物种植单一，弯管列当对当地烟草造成严重危害且连年增加。

近些年来，列当在每年在新疆的发生面积约为60～80万亩，给新疆农业生产造成的损失巨大经济损失，因缺少切实可行有效的防治措施，发生面积逐年增加。寄主被寄生后，自身营养及水分等供给受阻，植株不能正常生长，造成农作物产量和品质严重下降。

因此成功地控制以加工番茄、甜瓜、向日葵等一些新疆重要经济作物为寄主的寄生性杂草列当，是其长期稳健快速发展的迫切需要。

化学除草剂因具有施用简单、见效快等优点使其成为田间杂草防治中必不可少的防治措施，极大的推动了农业发展。近些年来，国内外也涌现出一批防治列当的化学药剂，并获得一定的防效，如咪唑啉酮类和磺酰脲类、绿黄隆、烯丙基乙醇、精-异丙甲草胺、氟乐灵、2,4-D丁酯、仲丁灵等，但并未得到大规模的应用，而且列当的寄主农作物一般对化学药剂较为敏感，使用不当易产生药害，造成严重的经济损失。

生物防治具有对环境友好、对作物、人及牲畜安全或危害小、持效时间长等优点，在列当防治更为重要，因列当适应能力强，繁殖速度快，其本身会对环境和寄主的改变而突变。近些年来，豌豆象甲、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、葡萄状单隔霉（Ulocladium botrytis）及真菌毒素等被国内外学者用于防治列当的研究并获得较为理想的效果。但以上措施存在明显的地域限制性，不同地区间地域气候等条件不同，引种难度较大，针对本土的实际情况筛选开发相关列当生防制剂显的尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种适宜于新疆独特地理气候条件的、特别是可以很好地用于防治以加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草、马铃薯等重要经济作物为寄主的寄生性杂草列当的米根霉菌剂的适于工业化规模生产的、经济实用、低成本的生产方法。另外提供该菌剂的用途及其一种操作简单、防治效果好的使用方法。

本发明公开了一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

（2）配制种子培养基以及发酵培养基；

（3）配置完成上述培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于30～32℃温度下160～200r/min振荡培养20～28h后，按发酵液的4～6%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在28～34℃温度下160～200r/min振荡培养48～72h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

更进一步得到合格的发酵液后，采用五层纱布对发酵液进行过滤，过滤获得的米根霉孢子在18～25℃阴干即为米根霉菌剂。

上述的种子培养基最好为PD培养基，如：去皮马铃薯（200g）煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

上述的发酵培养基最好为：用葡萄糖：50～80g、(NH4)₂SO₄：2～4g、KH₂PO₄：0.3～0.5g、MgSO₄·7H₂O：0.3～0.5g、ZnSO₄·7H₂O：0.03～0.06g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

上述发酵培养基中的碳源葡萄糖可以用玉米粉、淀粉或蔗糖替代，氮源(NH4)₂SO₄可以用尿素、NH4Cl或NH₄NO₃替代。

一种米根霉菌剂的用途，其特征在于将该菌剂用于控制或防治农作物寄生性杂草列当的发生。

所述的农作物为加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草或马铃薯。

所述的米根霉菌剂的使用方法，可以将制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理。所述发酵液稀释浓度最好为：30%、50%或70%。

作为进一步的优选，则是将发酵收获的米根霉孢子采用播前喷洒至土壤中或者将孢子液直接喷洒至列当上，用于加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草、马铃薯等重要经济作物上的寄生性杂草列当的控制或防治。

经试验证明，采用本发明的米根霉孢子对正常生长的列当直接喷洒处理1次后，能有效的抑制列当的生长，可很好的控制列当的发生。

将上述发酵液稀释成不同浓度后在试验室内接种至正常列当上，每丛接种100ml，30%、50%及70%稀释液接种24h后，列当茎基部变褐， 72h后30%的处理发病较轻，50%和70%处理茎部大面积褐变，植株萎蔫，发病部位有菌丝生成，湿度大时，菌丝生成明显，120h后列当发病率为97.30%和100%，其防效为91.50%和93%，死亡列当表面出现大量灰褐色孢子囊，其寄主作物加工番茄表现正常。

将上述发酵液稀释至50%后在受列当重度侵染的大田中喷洒至田间土壤，列当萌发后会迅速感染米根霉发生死亡，而其寄主作物甜瓜表现正常。进一步表明该生防菌株对列当具有较高的致病力。

在实验中，将列当病性进行分级， 如下表1为列当病情分级标准表。

表1列当病情分级标准

统计计算结果见表2，接种米根霉菌剂120h后，列当发病率97.30%，明显高于对照发病率（16.70%），其相对防效为91.50%，表明米根霉菌剂对列当具有较强的致病力。

表2 菌株SHZGM对列当的防效

试验证明，本发明提供了一种适宜于新疆特殊地理气候条件的、特别是可以很好地控制以加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草、马铃薯等重要经济作物为寄主的寄生性杂草列当的生防菌株的用途以及该菌株的简要生产方法，为开发适宜于新疆特殊地理气候条件下使用的新的生物农药，特别是控制以加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草、马铃薯等新疆重要经济作物上寄生性杂草列当的发生的生物农药提供了基础条件。

通过研究发现，列当在湿度条件好的情况下致病力更强，据此初步判断本发明所获得的菌株主要通过截留列当的营养物质导致列当发病。

国内应用病原微生物防治列当已有报道，本发明通过对自然发病的列当大量分离筛选鉴定获得一些较好防效的生防菌。根霉是一种常见的腐生真菌，大量分布于土壤、粪便、腐烂的蔬菜等处，而米根霉作为根霉中一个重要的种，是中国药和酒曲中重要的一种霉菌，近年来被大量用于生产糖化酶的研究中，其对列当的危害性国内外研究较少，本研究第一次证实米根霉对列当具有较强的致病力，可以作为一个列当的潜在生防菌。

与现有技术相比，本发明所提供的米根霉菌剂，是一种适宜于新疆独特地理气候条件的、特别是可以很好地用于防治以加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草、马铃薯等重要经济作物为寄主的寄生性杂草列当，其生产方法是一种适于工业化规模生产、经济实用、低成本的生产方法。另外该菌剂的的使用方法操作简单、防治效果好。

具体实施方式

实施例1：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯200g煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：50g、(NH₄)₂SO₄：2g、KH₂PO₄：0.5g、MgSO₄·7H₂O：0.4g、ZnSO₄·7H₂O：0.03g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于32℃温度下180r/min振荡培养24h后，按发酵液的4%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在28℃温度下180r/min振荡培养72h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治加工番茄寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可，其稀释浓度为30%。

实施例2：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯200g煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：60g、(NH₄)₂SO₄：3g、KH₂PO₄：0.4g、MgSO₄·7H₂O：0.3g、ZnSO₄·7H₂O：0.03g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于31℃温度下160r/min振荡培养20h后，按发酵液的5%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在29℃温度下160r/min振荡培养50h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治甜瓜寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为 50%。

实施例3：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯200g煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：70g、(NH₄)₂SO₄：2.5g、KH₂PO₄：0.5g、MgSO₄·7H₂O：0.5g、ZnSO₄·7H₂O：0.05g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于30℃温度下170r/min振荡培养22h后，按发酵液的6%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在30℃温度下170r/min振荡培养55h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治西瓜寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为：70%。

实施例4：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯200g煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：75g、(NH₄)₂SO₄：3.5g、KH₂PO₄：0.3g、MgSO4·7H₂O：0.4g、ZnSO₄·7H₂O：0.04g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于31℃温度下190r/min振荡培养25h后，按发酵液的5%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在34℃温度下190r/min振荡培养60h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治向日葵寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为50%。

实施例5：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯（200g）煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：80g、(NH₄)₂SO₄：4g、KH₂PO₄：0.3g、MgSO₄·7H₂O：0.3g、ZnSO₄·7H₂O：0.05g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于31℃温度下200r/min振荡培养26h后，按发酵液的5%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在28℃温度下200r/min振荡培养52h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治辣椒寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为30%。

实施例6：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯（200g）煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：55g、(NH₄)₂SO₄：4g、KH₂PO₄：0.4g、MgSO₄·7H₂O：0.3g、ZnSO₄·7H₂O：0.05g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于32℃温度下180r/min振荡培养28h后，按发酵液的6%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在31℃温度下180r/min振荡培养65h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治烟草寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为 50%。

实施例7：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯（200g）煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：65g、(NH₄)₂SO₄：3g、KH₂PO₄：0.4g、MgSO₄·7H₂O： 0.5g、ZnSO₄·7H₂O：0.05g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于30℃温度下170r/min振荡培养22h后，按发酵液的4%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在30℃温度下170r/min振荡培养72h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治马铃薯寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为： 50%。

实施例8：

一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

采用常规组织分离法进行米根霉病原物分离，将病样置于流水冲洗，24h后取下晾干，用灭菌刀切取病健交接界组织，置于升汞（0.1%）中消毒1min、再经无菌水冲洗3次、最后用灭菌滤纸吸去多余水分后，置于PDA培养基上室温培养。其纯化采用单菌丝分离法，将纯化的米根霉病原物进行斜面保存。

（2）配制种子培养基、及发酵培养基；

上述的种子培养基为PD培养基即：去皮马铃薯（200g）煮沸滤液，葡萄糖20g，以蒸馏水定容至1000mL；

所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：72g、(NH₄)₂SO₄：3g、KH₂PO₄：0.3g、MgSO₄·7H₂O： 0.5g、ZnSO₄·7H₂O： 0.04g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

（3）配置完成培养基后，灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于30℃温度下195r/min振荡培养27h后，按发酵液的5%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在33℃温度下195r/min振荡培养70h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

将所述菌剂用于控制或防治西瓜寄生性杂草列当的发生。

所述米根霉菌剂的使用方法，将上述制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理即可。其稀释浓度为70%。

实施例9：

与实施例1相比，本实施例不同地方在于：所述米根霉菌剂的生产方法当中所用到的发酵培养基中的碳源葡萄糖用玉米粉替代；所述氮源(NH₄)₂SO₄用尿素替代。

实施例10：

与实施例1相比，本实施例不同地方在于：所述米根霉菌剂的生产方法当中所用到的发酵培养基中的碳源葡萄糖用淀粉替代；所述氮源(NH₄)₂SO₄用NH₄CL替代。

实施例11：

与实施例1相比，本实施例不同地方在于：所述米根霉菌剂的生产方法当中所用到的发酵培养基中的碳源葡萄糖用蔗糖替代；所述氮源(NH₄)₂SO₄用NH₄NO₃替代。

实施例12：

与实施例1相比，本实施例不同地方在于：所述的米根霉菌剂的生产方法，更进一步的，得到合格的发酵液后，采用五层纱布对发酵液进行过滤，过滤获得的米根霉孢子在18℃阴干即为米根霉菌剂。用过滤获得的米根霉孢子，对正常生长的寄生性杂草列当直接喷洒处理。

实施例13：

与实施例12相比，本实施例不同地方在于：所述的米根霉菌剂的生产方法，更进一步的，得到合格的发酵液后，采用五层纱布对发酵液进行过滤，过滤获得的米根霉孢子在20℃阴干即为米根霉菌剂。用过滤获得的米根霉孢子，于播前喷洒到土壤中。

实施例14：

与实施例12相比，本实施例不同地方在于：所述的米根霉菌剂的生产方法，更进一步的，得到合格的发酵液后，采用五层纱布对发酵液进行过滤，过滤获得的米根霉孢子在22℃阴干即为米根霉菌剂。用过滤获得的米根霉孢子，对正常生长的寄生性杂草列当直接喷洒处理。

实施例15：

与实施例12相比，本实施例不同地方在于：所述的米根霉菌剂的生产方法，更进一步的，得到合格的发酵液后，采用五层纱布对发酵液进行过滤，过滤获得的米根霉孢子在25℃阴干即为米根霉菌剂。用过滤获得的米根霉孢子，于播前喷洒到土壤中。

Claims (9)

1.一种米根霉菌剂的生产方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）从新疆自然死亡列当的植株上分离获得米根霉菌株；

（2）配制种子培养基以及发酵培养基；

（3）配置完成上述培养基并灭菌后，将保存好的菌种接种至种子培养基中置于30～32℃温度下160～200r/min振荡培养20～28h后，按发酵液的4～6%的接种量接入灭菌后的发酵培养基，将其置于发酵罐中发酵，在28～34℃温度下160～200r/min振荡培养48～72h，发酵液中含有＞ 10⁹孢子/ml为合格，所述合格的发酵液即为所要得到的米根霉菌剂。

2.如权利要求1所述的米根霉菌剂的生产方法，其特征在于得到合格的发酵液后，采用五层纱布对发酵液进行过滤，过滤获得的米根霉孢子在18～25℃阴干即为米根霉菌剂。

3.如权利要求1或2所述的米根霉菌剂的生产方法，其特征在于上述的种子培养基为PD培养基；所述发酵培养基的制作：用葡萄糖：50～80g、(NH₄)₂SO₄：2～4g、KH₂PO₄：0.3～0.5g、MgSO₄·7H₂O：0.3～0.5g、ZnSO₄·7H₂O：0.03～0.06g与1000mL蒸馏水配成发酵液。

4.如权利要求3所述的米根霉菌剂的生产方法，其特征在于上述发酵培养基中的碳源葡萄糖可以用玉米粉、淀粉或蔗糖替代，氮源(NH₄)₂SO₄可以用尿素、NH₄Cl或NH₄NO₃替代。

5.一种米根霉菌剂的用途，其特征在于将该菌剂用于控制或防治农作物寄生性杂草列当的发生。

6.如权利要求5所述的米根霉菌剂的用途，其特征在于所述的农作物为加工番茄、甜瓜、西瓜、向日葵、辣椒、烟草或马铃薯。

7.如权利要求1所述的米根霉菌剂的使用方法，其特征在于将制得的合格发酵液稀释后进行寄生性杂草列当灌根处理。

8.如权利要求7所述的米根霉的使用方法，其特征在于其稀释浓度为：30%、50%或70%。

9.如权利要求2所述的米根霉菌剂的使用方法，其特征在于用过滤获得的米根霉孢子，对正常生长的寄生性杂草列当直接喷洒处理或者播前喷洒到土壤中。