CN103333054A

CN103333054A - 一种利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法

Info

Publication number: CN103333054A
Application number: CN 201310314468
Authority: CN
Inventors: 林建民
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-07-24
Filing date: 2013-07-24
Publication date: 2013-10-02

Abstract

本发明的目的在于提供一种方法简单、提取率高、生产成本低的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法。一种利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其包括以下工艺步骤：（1）葡萄皮渣干燥：将回收酒液后的葡萄皮渣，经过自然风干除去剩余水分至含水率小于4％；（2）粉碎：将风干后的葡萄皮渣粉碎至60-80目；（3）称取粉碎至60-80目的葡萄皮渣，加入重蒸水和纤维素酶进行酶解，酶解后加乙酸乙酯浸提，重复浸提1-5次；（4）将重复浸提的浓缩液进行混合后，置于40-60℃的真空干燥箱中，干燥后得白藜芦醇粗粉；（5）对白藜芦醇进行纯化，最终得到纯度达到95％以上的白藜芦醇。

Description

一种利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法

技术领域

本发明属于天然产物有效成分的分离提取技术领域，具体涉及一种利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法。

背景技术

白藜芦醇(resveratrol ：trans-3，5，4’-trihydroxystilbene) 是一种芪类化合物(stilbenes)，简写为Res，存在于一些药用植物和食用植物中，如决明、藜芦、虎杖、葡萄、花生。

白藜芦醇（Res）既是肿瘤疾病的化学预防剂，也是对降低血小板聚集，预防、治疗动脉粥样硬化，心脑血管疾病的化学预防剂，抑制血小板非正常凝聚，预防心肌硬塞、脑栓塞，对缺氧心脏有保护作用，对烧伤或失血性休克引起的心输出量下降有效恢复，并能够扩张动脉血管及改善微循环。除此之外，白藜芦醇（Res）也是一种抗自由基、抗氧化剂，与之相关的功能如下：1、延缓衰老；2、阻止低密度脂蛋白的氧化，具有潜在的防治心血管疾病( 动脉粥样硬化和冠心病、缺血性心脏病、高血脂症等) 的作用；3、影响脂类及花生四烯酸代谢；4、抗血栓、抗血小板聚集5、抗炎、抗过敏作用。

近年来，白藜芦醇（Res）提取物的原料来源是虎杖等植物，这些植物随着白藜芦醇（Res）市场紧俏，虎杖原料的消耗量越来越大，其植物资源日渐匮乏，原料价格逐步攀升，最终使得白藜芦醇（Res）的生产成本也大大提高。为此，从葡萄有关成分中制备白藜芦醇（Res）提取物成为了材料稳定、性价比高的有效途径。

目前由于葡萄酒产量的增长，葡萄酒的生产随之产生大量葡萄皮渣，葡萄皮渣中就含有很高抗癌、防癌活性的以白藜芦醇（Res）为代表的芪类物质。因此，如果能以葡萄皮渣等为原材料提取白藜芦醇（Res）等活性物质，不仅原料来源丰富，而且成本低廉。

现阶段从葡萄皮渣中提取白藜芦醇（Res）的方法主要有有机溶剂提取法、酶法提取、微波萃取、超临界CO：萃取和超声波提取法等，上述方法中主要存在的问题如下：1、溶剂提取法主要存在有机溶剂消耗多，提取工艺耗时长，生产成本高，得到的产品中残留有溶剂，同时在提取的过程中溶剂外泄，造成提取环境差、对环境污染等问题，如果控制溶剂外泄，势必造成生产设备复杂、投资和操作费用高，成本增加等一系列问题；2、超临界CO2 提取法主要是生产成本太高、对操作条件的要求比较高；3、微波提取法存在的不足之处在于，萃取介质的选择对产物组分影响较大，导致部分有效成分的损失。4、超声波提取法提取的白藜芦醇（Res）活性物质含量虽然比有机溶剂提取法提取的多，但整体来说仍然偏少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方法简单、提取率高、生产成本低的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下:

一种利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其包括以下工艺步骤：

（1）葡萄皮渣干燥：将回收酒液后的葡萄皮渣，经过自然风干除去剩余水分至含水率小于4％；

（2）粉碎：将风干后的葡萄皮渣粉碎至60-80目；

（3）称取粉碎至60-80目的葡萄皮渣50g，加1000ml重蒸水和50mg纤维素酶，在酶解温度27-61℃下恒温酶解1-6h，酶解后加1000ml的固液比为1：20的乙酸乙酯于20-90℃的水浴中浸提0.5-24h，滤渣中加入乙酸乙酯重复浸提1-5次，浸提的浓缩液采用高效液相色谱仪测试得到白藜芦醇含量为160．3799ppm；

（4）将重复浸提的浓缩液进行混合后，置于40-60℃的真空干燥箱中，干燥后得白藜芦醇粗粉；

（5）白藜芦醇纯化：称取预处理好的NKA-9 型大孔树脂1g于50ml 的具塞锥形瓶中，称取干燥所得的白藜芦醇粗粉0.5g 溶于10ml 体积分数为70％的乙醇溶液中，加入到具塞锥形瓶中置于摇床上振荡，振荡温度为30℃、吸附时间15min ；吸附完毕后，将饱和的吸附树脂先用水进行洗脱，直到洗脱液为无色透明为止，再用100ml 体积分数为80％的乙醇溶液再次进行洗脱，洗脱时间为15min、洗脱温度40℃；将洗脱液收集、回收溶剂、浓缩得到含有白藜芦醇的少量液体；进一步通过硅胶柱层析进行分离提纯，洗脱液的体积配比为1 ∶ 1 的石油醚∶丙酮混合溶液进行梯度洗脱，对洗脱液分段收集、浓缩，并回收溶剂，真空干燥得到白藜芦醇粉末，纯度达到95％以上。

上述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其所述的步骤（1）中，将回收酒液后的葡萄皮渣，经过自然风干除去剩余水分至含水率为3％。

上述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其所述的步骤（2）中，葡萄皮渣粉碎至60目。

上述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其所述的步骤（3）中酶解温度为60℃；酶解时间为1.5h；水浴中浸提温度为30℃；浸提时间为0.5h；浸提次数为2次。

上述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其所述的步骤（4）中，真空干燥温度为40℃。

本发明的有益效果：本发明用葡萄皮渣为原料，采用酶化法来提取白藜芦醇具有提取率高、提取速率快、操作成本低等因素。

附图说明

图1是酶解温度对白藜芦醇得率的影响；图2是酶解时间对白藜芦醇得率的影响；图3是浸提温度对白藜芦醇得率的影响；图4是浸提时间对白藜芦醇得率的影响；图5是浸提次数对白藜芦醇得率的影响。

具体实施方式

下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。

实施例：

将回收酒液后的葡萄皮渣，经过自然风干除去剩余水分至含水率在3％左右。将风干后的葡萄皮渣用粉碎机粉碎至60 目后，取粉碎至60目的葡萄皮渣50g，加1000ml重蒸水和50mg纤维素酶，在酶解温度60℃下恒温酶解1.5h，酶解后加1000ml的固液比为1：20的乙酸乙酯于30℃的水浴中浸提0.5h，滤渣中加入乙酸乙酯再次浸提，重复浸提2次，滤除浸提液，将2次的浸提液混合，采用高效液相色谱仪测试得到白藜芦醇含量为160．3799ppm。将浸提液放置温度调至为40℃真空干燥箱干燥至粗粉。

称取预处理好的NKA-9 型大孔树脂1g于50ml 的具塞锥形瓶中，并称取干燥所得的白藜芦醇粗粉0.5g 溶于10ml 体积分数为70％的乙醇溶液中，加入到具塞锥形瓶中置于摇床上振荡，振荡温度为30℃、吸附时间15min ；吸附完毕后，将饱和的吸附树脂先用水进行洗脱，直到洗脱液为无色透明为止，目的是除去无机盐、多糖、蛋白质等杂质，再用100ml 体积分数为80％的乙醇溶液再次进行洗脱，洗脱时间为15min、洗脱温度40℃。将洗脱液收集、回收溶剂、浓缩得到含有白藜芦醇的少量液体。进一步通过硅胶柱层析进行分离提纯，洗脱液的体积配比为1 ∶ 1 的石油醚∶丙酮混合溶液进行梯度洗脱，对洗脱液分段收集、浓缩，并回收溶剂，真空干燥得到较纯白藜芦醇粉末，纯度达到95％以上。

Claims

1.一种利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（2）粉碎：将风干后的葡萄皮渣粉碎至60-80目；

2.根据权利要求1所述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其特征在于：所述的步骤（1）中，将回收酒液后的葡萄皮渣，经过自然风干除去剩余水分至含水率为3％。

3.根据权利要求1所述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其特征在于：所述的步骤（2）中，葡萄皮渣粉碎至60目。

4.根据权利要求1所述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其特征在于：所述的步骤（3）中酶解温度为60℃；酶解时间为1.5h；水浴中浸提温度为30℃；浸提时间为0.5h；浸提次数为2次。

5.根据权利要求1所述的利用酶化法从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的方法，其特征在于：所述的步骤（4）中，真空干燥温度为40℃。