CN1033329C - 二元吲哚生物碱的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从如脱水长春花碱制备象长春花碱，异长春碱作为有效抗癌药物的二元吲哚生物碱的方法，其中在氧存在下加入三价铁离子和氢化物，以增加目标物的产率。经反应体系中再加入草酸离子，丙二酸离子，无机阴离子，氨基酸等能使产率进一步提高。

Description

二元吲哚生物碱的制备方法

本发明涉及二元吲哚生物碱的制备方法，如长春花碱或异长春碱，这是一类有效的抗癌药物。

象通过脱水长春花碱(AVLB)的化学转化制备具有抗肿瘤活性的二元吲哚生物碱，如长春花碱(VLB)和异长春碱(LEU)的普通方法已在J.C.S.Chem.Commun.583，1979上公开。然而，目标物长春花碱(VLB)和异长春碱(LEU)等的产率很低，只有1～2％。同时，方法中所用的酶也在J.C.S.Chem.Commun.257，1979和phytochemistry 26(12)，3233(1987)上公开。这些方法有许多不利因素，如产率很低，反应时间长等等。因此这些方法的工业化存在许多问题，不能令人满意。

本发明的任务属于解决上述普通技术的问题。本发明的目的是提供一个工业上可行的制备工艺，用这套工艺，作为有效抗癌药物的，象长春花碱，异长春碱或其类似物这样的二元吲哚生物碱可以得到较高产率。

为了达到上述目标，本发明采用如脱水长春花碱作原料，试验了几种类型的水解反应，氧化还原反应等。结果发现，有效的抗癌药物长春花碱(VLB)，异长春碱(LEU)等可以从脱水长春花碱(AVLB)开始，在三价铁和氧存在下，通过往含AVLB的溶液中加入氢化物，以高的产率一步合成。就完成了本发明。

也就是说，本发明涉及由通式(II)表示的化

(其中R₁代表氢原子，低级烷基，或甲酰基；R₂代表低

级烷氧羰基、或酰氨基；R₃代表乙酰氧基，或羟基；R₄

代表羟基，R₅代表乙基或者R₄表示乙基，R₅代表羟基)合物的制备方法，该方法使用通式(I)表示的化合物或

(其中R₁至R₃的定义与通式(II)相同)其盐作原料，其特征在于在氧的存在下加入三价铁离子和氢化物。

根据本发明，一个典型的制备工艺可用下例来说明，其中以下述式(V)代表的长春花碱(缩写为VLB，下同)〔式(V)中，R₁代表羟基，R₂代表乙基〕和异长春碱(缩写为LEU，下同)〔式(V)中R₁代表乙基，R₂代表羟基〕能用式(IV)表示的脱水长春花碱(缩写为AVLB，下同)作起始原料来合成。作为本发明的其它目标物，上述通式(II)中R₁是氢原子的化合物可包括如N-脱甲基长春花碱等，通式(II)中R₁是甲酰基的化合物可包括如长春花碱等。它们可用通式(I)中相应的化合物作起始物来合成。

本发明可以用非常简单的工艺实施，即在氧存在下，往用适当溶剂溶有三价铁离子和通式(I)表示的化合物或其盐的体系中加入氢化物。

所用的三价铁可以是任何能溶于反应混合物中并参与反应的盐；尤其是氯化物，硫酸盐和硝酸盐最为合适。加入的量为比原料0.01-10,000倍摩尔过量，最好是1～2,000倍摩尔过量。

本法所用的溶剂可举如下例子：H₂O，醇、如甲醇、乙醇等；THF，乙腈，DMF，DMSO，等等。其中的两种或两种以上混合的溶剂也可应用；最好是单一的H₂O，或是混合溶剂H₂O-甲醇。

加入的氢化物可包括硼氢化钠、硼氢化钾、氰代硼氢化钠以及硼烷的氨合物。氢化物加入的量是相对于三价铁0.05～10倍摩尔过量，最好是0.1～5倍摩尔过量。

氧源可以是氧气或用惰气冲稀的氧气，但通常宁愿用空气。对于一个最好的工艺，在加入氢化物之前，将含氧的气体通入反应溶液一定时间使反应溶剂中溶有适量的氧。

反应的温度，从反应溶剂的熔点到将近50℃这样一个宽范围都可以，最好是-20～10℃。

根据本发明，在制备过程中，进一步加入(i)草酸离子和/或丙二酸离子，(ii)无机阴离子或(iii)一种氨基酸，可进一步提高目标物的产率。至于上述的(i)；(a)更愿意加入用通式(III)表示的二羧酸或其盐，再加入氨基酸又更好，或者(b)宁愿加吡啶或其衍生物，并再加入氨基酸又更好，或(C)

(其中R₇和R₉代表氢原子或低级烷基；R₆和R₈代表氢

原子或低级烷基，或者一起形成双键)宁愿加无机阴离子，再加氨基酸会更好，或(d)加入氨基酸更好。对于上述(ii)再加入氨基酸更好。

草酸离子和丙二酸离子可以是任何能溶于反应溶剂，并与三价铁形成络合物的草酸离子和丙二酸离子。但是，如果加入游离的草酸和丙二酸，则需要再加等当量的合适碱到游离酸中。加入草酸离子的较好例子可包括，象盐类的碱金属盐，如Li盐，Na盐，K盐等等；铵盐，烷基铵盐，加入量为比三价铁盐的0.1-10倍摩尔过量，最好是1至4倍摩尔过量。而且如同加入草酸离子和/或丙二酸离子和三价铁离子，加入预先制好的三价铁—草酸络盐和/或三价铁—丙二酸络盐是更好的工艺之一。三价铁—草酸络盐可举例子如下：如(NH₄)₃Fe(C₂O₄)₃，K₃Fe(C₂O₄)₃，等等；丙二酸盐的络盐包括象(NH₄)₃Fe(C₃O₄)₃，K₃Fe(C₃H₂O₄)₃，等等。

无机阴离子没有特殊限制，但是象CO₃ ^2-和PO₄ ^3-这类形成不溶性铁盐者除外。在本发明中，最好是Cl^-，Br^-，I^-、SO₄ ^2-等等。提供无机阴离子的盐的类型可以是任何能溶于反应溶剂中的盐，尤其以铵盐、烷基铵盐及碱金属盐为好。加入的量是以三价铁为基准，0.1-100倍摩尔过量，最好是1-10倍摩尔过量。

氨基酸可以是任何氨基酸，但以低分子量的为好，如甘氨酸等，最好是甘氨酸和N-甲基—甘氨酸。加入的量以三价铁为基准是0.01至1,000倍摩尔过量，最好是1-10倍摩尔过量。

式(III)表示的化合物包括马来酸，甲基顺丁烯二酸，琥珀酸，衣康酸，但并不局限于列举的化合物。特别是马来酸和琥珀酸可作为最佳例子。

这些化合物最好是以盐的形式加入，盐的种类是任意的，当然最好是铵盐，烷基铵盐。如果加入一种游离盐，则还需加入一种与游离酸等当量的合适的盐等。加入的羧酸离子量为三价铁的0.1～3倍摩尔过量，最好是0.3-2倍摩尔过量。

吡啶或其衍生物包括吡啶衍生物，如吡啶，烷基吡啶等；α，α′-双吡啶衍生物，如α，α′-双吡啶，烷基-α，α′-双吡啶衍生物等。尤其以α，α′-双吡啶衍生物为好。加入量为三价铁0.01-10倍摩尔过量，最好是0.1-3倍摩尔过量。

根据本发明，这一制备工艺可以连续化；方法是使各种(I)类化合物，氢化物，氧，和三价铁包含在两种或多种溶液中，然后让所说的两种或多种溶液互相连续接触，或者最好是让含有氧—三价铁-(I)类化合物的溶液与含有氢化物的溶液连续接触。

这一连续的制备工艺可以通过极简单的操作来实施，例如将上述的两种或多种溶液同时连续地喂入反应柱一端的入口，使其互相接触混合，溶液通过反应柱后，反应结束，这样在反应柱另一端的出口处连续获得反应混合物。

通过往连续工艺中接触和混合的任一溶液中加入选自吡啶衍生物，无机阴离子，由式(III)表示的二羧酸或其盐，氨基酸，并同时加入草酸和/或丙二酸中的一种或多种成分可使目标物的产率显著增加。

通常，这些加入的成分最好是加到含有三价铁离子的溶液中。然而，加入的方法是不受限制的。把这些成分加到接触的两种或多种溶液的任意一种里，产率的增加与上述的相近。

然而，通过结合使氢化物急速减少的加入方式应避免。

吡啶衍生物可以是任意的，最好是吡啶，烷基吡啶，α，α′-双吡啶，烷基α，α′-双吡啶类；它加入的量是三价铁的0.01-10倍摩尔过量。

事先通入含氧气体，使氧适当溶于要接触的任何溶液中较好。

反应溶液接触的时间是0.1秒至60分钟，最好是1秒至10分分钟。

反应容器可以是任何形状；柱形反应器特别适合。

与普通方法相比，例如从脱水长春花碱(AVLB)得到作为有效抗癌药物的长春花碱(VLB)、异长春碱(LEU)等本发明的方法具有产率高，操作简便等优点。

考虑到长春花碱(VLB)是一种价格非常昂贵的抗癌药，由本发明带来的效益是十分巨大的。

本发明更详尽地阐明如下，但本发明并不限于下述实施例。

实施例1

在一个50ml反应瓶中加入10ml H₂O，1.9mg AVLB1ml FeCl₃·6H₂O(1.2M)水溶液及0.024ml 2NHCl水溶液，将混合物于冰冷却下搅拌30分钟，同时通入空气，随后加1ml NaBH₄(0.227M)水溶液，混合物再搅拌30min然后，加2ml 25％氨水碱化溶液。产物用10ml乙酸乙酯萃取，共3次，合并萃取液，在40℃或低于40℃下减压蒸发至干，产品用高效液相色谱(HPLC)分析，分析条件如下所述，此时，AVLB转化率是95％，VLB产率是10％，LEU产率是6％

(分析条件)

柱子：    YNC-填充柱A-512(CN)6×150mm

流动相： H₂O∶MeOH∶Et₃N∶AcOH＝1500∶

          1500∶4∶1.6(V/V/V/V)

流速：    1ml/min

柱温：    45℃

检测：    UV(254nm)

保留时间：VLB 19.5min

          LEU 17min

          AVLB 46min

实施例2-4

方法同实施例1，只是进一步加预定量的甘氨酸，结果见表1。

                              表1

实施例        甘氨酸/Fe³⁺    AVLB转     VLB产率     LEU产率

          (摩尔比)       化率(％)      (％)        (％)2               2               90          15          103               4               87          21          124               5               85          14          9

实施例5

方法与实施例3相同，只是用N-甲基甘氨酸代替甘氨酸，此时，AVLB的转化率为66％，VLB产率为24％，LEU产率为14％。

实施例6-8

方法与实施例3相同，只是Fe³⁺及NaBH₄的量与实施例3的不同，结果见表2

                           表2

实施例      Fe³⁺       NaBH₄      AVLB        VLB        LEU

        水溶液      水溶液      转化率      产率       产率

        加入量      增加量      (％)        (％)       (％)

        (cc)        (cc)6           0.4          0.4         32          7           37           0.5          0.5         35          9           48           2            2           69          16.5        9

实施例9-11

方法与实施例3相同，只是NaBH₄的量与实施例3不同，结果见表3

                         表3

实施例      NaBH₄水溶      AVLB转       VLB产率       LEU产率

        液加入量(cc)    化率(％)       (％)          (％)9             0.5             29           10.5           610            2               69           11.5           711            5               91           16             9

实施例12-14

方法与实施例3相同，只是用其它的铁盐溶液代替实施例3中的FeCl₃·6H₂O溶液，结果见表4

                           表4

实施例          铁盐          AVLB转        VLB产        LEU产

                         化率(％)       率(％)       率(％)12          Fe(NO₃)₃·9H₂O  20            4            213          Fe₂(SO₄)₃       75            18           1114          FeBr₃              26.5          4            1

实施例15-16

方法与实施例3相同，只是用其它的氢化物代替实施例3中NaBH₄，结果见表5

                         表5

实施例      氢化物       AVLB转     VLB产率        LEU产率

                    化率(％)      (％)          (％)15          NaBH₄CN       80          14            1016          KBH₄          89          19            11

实施例17

在一个50ml反应瓶中加10ml H₂O，1.9mg脱水长春花碱，摩尔数500倍于脱水长春花碱的过量(NH₄)₃Fe(C₂O₄)₃·3H₂O，0.024ml 2N HCl水溶液，将混合物在冰冷却下搅拌约30分钟，同时通入空气。随后，加1ml NaBH₄(0.227M)水溶液，再将混合物搅拌30分钟。加入2ml25％氨水使混合物呈碱性用10ml乙酸乙酯萃取，共3次。合并萃取液，在40℃或低于40℃下减压蒸发至于，产物用HPLC分析，分析条件如下所述，此时，脱水长春花碱(AVLB)的转化率是97％，长春花碱(VLB)产率是23％，异长春碱(LEU)的产率为12％。

(分析条件)

柱子：    YMC-填充柱AM-312

流动相：  0.01M碳酸铵水溶液∶乙腈＝1800∶1200

          (V/V)

流速：    1ml/min

温度：    45℃

检测波长：UV(245nm)

保留时间：VLB12.3min

          LEU9.0min

          AVLB39.1min

实施例18

方法与实施例17相同，只是加入实施例17中铁原子的4倍摩尔过量的甘氨酸，此时，AVLB的转化率是86％，VLB产率为27％，LEU产率为14％

实施例19

方法与实施例18相同，只是加入1ml FeCl₃·6H₂O(1.2M)水溶液以代替实施例18中的(NH₄)₃Fe(C₂O₄)₃·3H₂O，同时进一步加入摩尔效3倍于三价铁离子的过量(NH₄)₃C₂O₄此时，AVLB转化率为86.5％，VLB产率为34％，LEU产率为22.5％

实施例20-21

方法与实施例19相同，只是加入的(NH₄)₂C₂O₄的量与实施例19有不同，结果见表6

                            表6

实施例      C₂O₄ ^2-/Fe³⁺     AVLB转       VLB产率     LEU产率

        (摩尔比)           化率(％)       (％)        (％)20            1                   43          22.5         1521            2                   63          31.5         21.5

实施例22-24

方法与实施例19相同，只是铁的加入量减少一半，(NH₄)₂C₂O₄的加入量也有改变，结果见表7

                    表7

实施例    C₂O₄ ^2-/Fe³⁺  AVLB转       VLB产率        LEU产率

      (摩尔比)         化率(％)      (％)           (％)22           1             43.5           19.5          17.523           2             56             30.5          23.524           3             87.5           27.5          16.5

实施例25

方法与实施例19相同，只是用Fe(NO₃)₃·9H₂O水溶液代替实施例19中的FeCl₃·6H₂O水溶液。此时，AVLB的转化率是89.5％，VLB的产率是26％，LEU的产率是15％

实施例26-28

方法与实施例19相同，只是溶剂由水变为其它混合溶剂，反应温度有所改变，结果见表8

                            表8

实施例      溶剂^*       反应温      AVLB转      VLB      LEU

                     度(℃)      化率(％)    产率     产率

                                             (％)     (％)26         H₂O-MeOH      -15℃        74.5       36      23.527         H₂O-DMSO      -8℃         74         21      1428         H₂O-CH₃CN    -6℃         71         29.5    16

^*H₂O∶有机溶剂＝8∶2(V/V)

实施例29-33

方法与实施例19相同，只是用其它盐代替实施例19中(NH₄)₂C₂O₄，结果见表9

                          表9

实施例    加入的草酸盐            AVLB转      VLB产      LEU产

                             化率(％)     率(％)     率(％)29        H₂C₂O₄                78         30         25.530        K₂C₂O₄                78         30.5       2231        (Me₄N⁺)₂C₂O₄       89.5       32         2132        (ε_t4N⁺)₂C₂O₄       55         21.5       7.533        (CH₃N⁺H₃)₂C₂O₄    82         36         26

实施例34-35

方法与实施例19相同，只是用丙二酸铵代替实施例19中(NH₄)₂C₂O₄。结果见表10

                   表10

实施例    AVLB转化率      VLB产率(％)      LEU产率

       (％)                             (％)34          65              22               1135^*        80              30               12

^*pH调至6.6到6.7以后，再加NaBH₄水溶液。

实施例36

在一个装有转动叶片的100ml反应瓶中，加22.3mg脱水长春花碱硫酸盐，100ml H₂O，0.2029gFeCl₃·6H₂O，0.2134g(NH₄)₂C₂O₄，0.0874g马来酸，和马来酸等当量的25％氨水(0.1025ml)，混合物在0℃下用高速转动叶片搅拌30min以上，搅拌同时通空气(50ml/min)，之后在1分钟内泵入1ml 0.5M的NaBH₄水溶液，继续搅拌30分钟，加入5ml 25％氨水碱化该溶液，产物用100ml乙酸乙酯萃取，共3次。

合并萃取液，用Na₂SO₄干燥，在40℃或低于40℃下减压蒸发至干，残余物用甲醇溶出并用高效液相色谱分析。此时，脱水长春花碱(AVLB)的转化率是94.5％，长春花碱(VLB)的产率是50％，异长春碱(LEU)产率是16％，长春花碱的选择性是52.9％。

(分析条件)：

柱子：    YMC-填充柱AM-312 6×150mm

流动相：  0.01M碳酸铵水溶液∶乙腈＝12∶1800

          (V/V)

流速：    1ml/min

温度：    45℃

检测：    UV(254nm)

保留时间：VLB 13.0min

          LEU 10.5min

          AVLB 42.5min

比较实施例1

方法与实施例36相同，只是不加马来酸及氨水。此时，AVLB转化率为93.5％，VLB产率为40％，LEU产率为15.5％，VLB选择性为42.8％。

比较实施例37-40

方法与实施例36相同，只是马来酸及氨水的加入量有改变，结果见表11。

                             表11

实施例         马来酸      AVLB      VLB      LEU    VLB

           /Fe³⁺      转化率    产率     产率   选择性

           (mol/mol)   (％)      (％)     (％)   (％)37             0.5          90       42.5      13    47.238             0.75         88.5     47.5      14    53.739             1.5          87.5     49        10.5  5640             2            81       40.5      10    50比较实施例1    0            93.5     40        15.5  42.8

加相当于马来酸当量的氨水。

比较实施例41-43

方法与实施例36相同，只是用琥珀酸代替马来酸，且加入量有所改变，结果见表12

                       表12

实施例    琥珀酸      AVLB      VLB     LEU     VLB

      /Fe³⁺      转化率    产率    产率    选择性

      (mol/mol)   (％)      (％)    (％)    (％)41        0.75         97        43.5   13.5    44.842        1            93.5      47     12      50.343        1.5          87        44     11      50.6

氨水的加入量与琥珀酸等当量。

实施例44-46

方法与实施例36相同，只是用其它二羧酸代替实施例36中马来酸，结果见表13

                       表13

实施例     二羧酸     AVLB     VLB      LEU    VLB

                  转化率   产率     产率   选择性

                  (％)     (％)     (％)   (％)44         衣康酸     77.5     34       94      7.745         柠康酸     88.5     40       13      45.246        草酰乙酸    76.5     34       12      45.8

实施例47

在一个50ml反应瓶中加10ml H₂O，1.9mg脱水长春花碱，1ml FeCl₃·6H₂O(1.5M)水溶液，0.024ml 2N HCl，摩尔数4倍于Fe³⁺的过量甘氨酸，6倍于Fe³⁺的过量NH₄Cl，随后于冰冷却下搅拌30分钟以上，同时通空气。再加入1ml NaBH₄(0.227M)水溶液并继续搅拌30分钟，加2ml 25％氨水碱化该溶液。产物用10ml乙酸乙酯萃取，共3次。合并萃取液，不超过40℃下减压蒸发至干，所得样品用高效液相色谱分析，此时，脱水长春花碱(AVLB)的转化率是66.5％长春花碱(VLB)的产率是30.5％，异长春碱(LEU)产率是14.5％

(分析条件)

柱子：    YMC-填充柱A-512(CN)6×150mm

流动相： H₂O∶MeOH∶Et₃N∶AcOH＝1500∶

          1500∶4∶1.6(V/V/V/V)

流速：    1ml/min

温度：    45℃

检测波长：UV(254nm)

保留时间：VLB 19.5min

          LEU  17min

          AVLB 46min

实施例48

方法与实施例47相同，只是用NH₄Br代替实施例47中NH₄Cl，此时，AVLB的转化率是59.5％，VLB产率为22％，LEU产率为12.5％

实施例49

方法同实施例47，只是用摩尔数3倍于Fe³⁺的过量(NH₄)₂SO₄代替实施例47中NH₄Cl，此时，AVLB的转化率为75％，VLB产率为28％，LEU产率为15.5％

实施例50-52

方法同实施例47，只是NH₄Cl的加入量与实施例47比有改变，结果见表14

                    表14

实施例     NH₄Cl/Fe³⁺  AVLB转      VLB产率       LEU产率

       (mol比)       化率(％)     (％)         (％)50           2             63          26           17.551           4             71          31.5         1952           8             81.5        29           22.5

实施例53-55

方法同实施例47，只是用其它盐代替实施例47中NH₄Cl，结果见表15.

                    表15

实施例       增加的盐       AVLB转      VLB产      LEU产

                       化率(％)     率(％)     率(％)53          (CH₃)₄NCl      69.5        30         1954          (CH₃)₂NH₂Cl   70          30.5       2255          NaCl              67          23         12.5

实施例56.

在一个50ml反应瓶中加10ml H₂O，1.9mg脱水长春花碱，1ml FeCl₃·6H₂O(1.2M)水溶液，0.024ml2N HCl，摩尔数2倍于Fe³⁺的过量(NH₄)₂C₂O₄。将混合物在冰冷却下搅拌30min以上，同时通入空气。随后加入1mlNaBH₄(0.227M)水溶液，继续搅拌30min以上，加2ml25％氨水碱化混合液，用10ml乙酸乙酯萃取，共3次。合并萃取液，在40℃或低于40℃下减压蒸发至干，最终产物进行高效液相色谱分析，此时，脱水长春花碱(AVLB)的转化率是66.0％，长春花碱(VLB)的产率是35.5％，异长春碱(LEU)的产率是18％。

(分析条件)

柱子：  YMC-填充柱A-512(CN)6×150mm

流动相： H₂O∶MeOH∶Et₃N∶AcOH＝1500∶1500

          ∶4∶1.6

流速：    1ml/min

温度：    45℃

检测：    UV(254nm)

保留时间：VLB 19.5min

          LEU 17min

          AVLB 46min

实施例57-59

方法同实施例56，只是NH₄Cl的加入量有变化，结果见表16

                       表16

实施例      NH₄Cl/Fe³⁺    AVLB转      VLB       LEU

        (mol比)         化率(％)    产率      产率

                                    (％)      (％)57            2              63.5       32.5       1758            6              69         33.5       2159            8              77.5       35         21

实施例60-61

方法同实施例56，只是用(NH₄)₂SO₄代替实施例56中NH₄Cl，结果见表17

                      表17

实施例         (NH₄)₂SO₄/  AVLB转      VLB产率    LEU

           Fe³⁺(mol比)   化率(％)     (％)      产率

                                                 (％)60               2             70.5         31.5     1861               3             66           30       16

实施例62

在一个装有转动叶片的100cc反应瓶中加入19mgAVLB，100ml H₂O，0.2025g FeCl₃·6H₂O，0.2162g(NH₄)₂C₂O₄，0.1604g NH₄Cl，0.225g甘氨酸和0.12ml 2N HCl，混合物在0℃下由涡轮叶片高速搅拌30min以上，同时通空气，然后，在约1分钟内滴加2mlNaBH₄(0.227M)水溶液，加10ml 25％氨水碱化该溶液，再用100ml乙酸乙酯萃取，共3次。后面的步骤同实施例56，此时，AVLB的转化率是80％，VLB产率是41％，LEU产率是18％

实施例63-64

方法同实施例62，只是FeCl₃·6H₂O的量与实施例62比有所改变((NH₄)₂C₂O₄/Fe³⁺，NH₄Cl/Fe³⁺和甘氨酸/Fe³⁺的比率与实施例62中相同)，结果见表18

                       表18

实施例      Fe³⁺/AVLB    AVLB转      VLB产      LEU产

        (mol比)       化率(％)    率(％)     率(％)63           42            77          39        19.564           16            86          37        14.5

实施例65.

方法同实施例56，只是不加实施例56中甘氨酸，此时，AVLB的转化率是64％，VLB的产率是20％，LEU的产率是16％

实施例66.

将19mg脱水长春花碱(AVLB)，摩尔数32倍于AVLB的过量FeCl₃·6H₂O，5倍于AVLB的过量2N HCl，2倍于Fe³⁺的过量(NH₄)₂C₂O₄，4倍于Fe³⁺的NH₄Cl，4倍于Fe³⁺的过量甘氨酸溶于100cc水中，在0℃下通空气30min。将此溶液及另一种溶液，即将12.9mg NaBH₄溶于2cc水中并冷却至0℃制得的溶液加到反应柱中使二溶液接触，此两种溶液通过柱子1分钟并进行反应后，再加到氨水(2ml 25％氨水用5ml水稀释)中。

混合液用100ml Acoεt萃取，共3次。洗脱液在不超过40℃下减压蒸发至于，产物的高效液相色谱表明：AVLB的转化率是67.5％，VLB产率是32％，LEU的产率是12％。

高效液相色谱分析条件如下：

柱子：    YMC-填充柱AM-312(S-5120A ODS)

流动相： CH₃CN∶0.01M(NH₄)₂CO₃水溶液＝

          1800∶1200

流速：    1ml/min

温度：    45℃

检测：    UV(254nm)

保留时间：VLB 12min

          AVLB 42.1min

实施例67

方法同66，只是用21.2mg AVLB硫酸盐代替AVLB，不加2N HCl，此时，AVLB转化率是67％，VLB产率是33.5％，LEU产率是13％

实施例68-71

方法同66，只是NaBH₄的量有改变，结果见表19

                     表19

实施例      NaBH₄      AVLB转      VLB产率     LEU产率

      (mg/2mlH₂O)  化率(％)     (％)       (％)68          17.2         83.5        36         1369          25.8         78.5        34         1470          34.4         86          36.5       1971          43.0         84          36.5       15.5

实施例72-73

方法同实施例67，只是用2倍量的AVLB硫酸盐，NaBH₄量有改变，结果见表20

                     表20

实施例       NaBH₄        AVLB转      VLB产率      LEU产率

      (mg/2mlH₂O)     化率(％)     (％)         (％)72          17.2            56.5         27           1073          34.4            69           34.5         15

实施例74-75

方法同实施例66，只是接触时间约6秒，使用38mg AVLB，并且NaBH₄用量有所改变，结果见表21

                         表21

实施例       NaBH₄     AVLB转      VLB产率      LEU产率

     (mg/2ccH₂O)   化率(％)     (％)         (％)74          25.8        70.5         28.5         1175          34.4        76.5         33           14

实施例76

方法同实施例66，只是用38mg AVLB，NaBH₄用量是34.4mg，通入AVLB溶液中的气体变为纯氧气，此反应中，AVLB的转化率是72.5％，VLB产率是27.5％，LEU产率是11％。

实施例77

方法同实施例67，只是NaBH₄的用量是34.4mg，加入等当量于三价铁的α，α′-双吡啶代替NH₄Cl。此时，AVLB转化率是65％，VLB产率是36％，LEU产率是9％。

实施例78

方法同实施例70，只是实施例5提到的AVLB硫酸盐溶液中的FeCl₃·6H₂O，(NH₄)₂C₂O₄，NH₄Cl及甘氨酸分别制成2毫升水溶液。随后将三类溶液，即上述水溶液，AVLB硫酸盐溶液及NaBH₄溶液同时并连续地引入柱中，此时，AVLB转化率是80％，VLB的产率是31％，LEU的产率是12％。

实施例79

在一个300ml反应瓶中加100ml H₂O，19mg  脱水长春花碱，摩尔数30倍于AVLB的过量FeCl₃·6H₂O，5摩尔过量H⁺(2NHCl)与AVLB等摩尔的α，α′-双吡啶及摩尔数2倍于Fe³⁺的过量(NH₄)₂C₂O₄。混合物在冰冷却下搅拌30min以上，同时通入空气，再加2ml NaBH₄(0.227M)水溶液，搅拌30min。加10ml 25％氨水碱化混合物，用100ml乙酸乙酯萃取产物，共3次，萃取液合并，在40℃或低于40℃下减压蒸发至于，产物用高效液相色谱分析，此时，脱水长春花碱(AVLB)转化率是80％，长春花碱(VLB)的产率是50％(选择性63％)，异长春碱(LEU)产率是13％。

(分析条件)

柱子：    YMC-填充柱AM-312(S-5 120A

          ODS)

流动相： CH₃CN∶0.01M(NH₄)₂CO₃＝1800∶1200

          (V/V)

流速：    1mi/min

柱温：    45℃

检测：    UV(254nm)

保留时间：VLB 12.8min

          LEU 10.8min

          AVLB 42min

实施例80

方法同实施例79，只是不加实施例79中的α，α′-双吡啶。此时，AVLB转化率是92％，VLB产率是44％(选择性48％)LEU产率是19％

实施例81

方法同实施例79，只是用4，4′-二甲基-2，2′-双吡啶代替实施例79中的α，α′-双吡啶。此时，AVLB转化率是81％，VLB产率是45％(选择性56％)，LEU产率是17％

实施例82

方法同实施例79，只是用吡啶代替α，α′-双吡啶，其用量为Fe³⁺的2.16摩尔，此时，AVLB的转化率是48％，VLB的产率是28％(选择性58％)LEU产率是4％

实施例83

方法同实施例79，只是加入摩尔数为Fe³⁺的4倍的过量甘氨酸，此时，AVLB的转化率是75％，VLB的产率是50％(选择性是67％)，LEU的产率是14％。

Claims (15)

1.制备式(II)表示的化合物的方法，式(II)为：

其中R₁代表氢原子，低级烷基或甲酰基；

R₂代表低级烷氧羰基或CONH₂；

R₃代表乙酰氧基或羟基；

R₄代表羟基，R₅代表乙基；或

R₄代表乙基，R₅代表羟基；

该方法包括下述步骤：

(1)将式(I)化合物或其盐溶解于含80％(体积)或100％(体积)水的含水反应介质中，式(I)为：

其中，R₁、R₂和R₃的定义同上；并在生成的溶液中加入草酸离子、丙二酸离子和选自氯化铁、硫酸铁和硝酸铁的可溶于反应介质的活性三价铁；

(2)将氧溶于反应介质中；

(3)在含氧反应介质中加入选自硼氢化钠、硼氢化钾或氰代硼氢化钠的氢化物；

(4)由反应介质中回收式(II)化合物。

2.制备式(II)表示的化合物的方法，式(II)为：

其中R₁代表氢原子，低级烷基或甲酰基；

R₂代表低级烷氧羰基或CONH₂；

R₃代表乙酰氧基或羟基；

R₄代表羟基，R₅代表乙基；或

R₄代表乙基，R₅代表羟基；

该方法包括下述步骤：

(1)将式(I)化合物或其盐溶解于含100％水的含水反应介质中，式(I)为：其中R₁、R₂和R₃的定义同上；并在生成的溶液中加入选自氯化铁、硫酸铁和硝酸铁的可溶于反应介质的活性三价铁；

(2)将氧溶于反应介质中；

(3)在含氧反应介质中加入选自硼氢化钠、硼氢化钾或氰代硼氢化钠的氢化物；

(4)由反应介质中回收式(II)化合物。

3.根据权利要求1的方法，其中，在反应介质中再加入一种氨基酸。

4.根据权利要求1的方法，其中，在进行步骤(3)之前，在反应介质中再加入选自氯化铵、溴化铵、硫酸铵、氯化四甲铵或氯化二甲铵的无机阴离子。

5.根据权利要求4的方法，其中，在反应介质中再加入一种氨基酸。

6.根据权利要求1的方法，其中，在反应介质中再加入吡啶、α，α′-双吡啶衍生物或4，4-二甲基-α，α′-双吡啶衍生物。

7.根据权利要求6的方法，其中，在反应介质中再加入一种氨基酸。

8.根据权利要求1的方法，其中，在反应介质中再加入马来酸、琥珀酸、衣康酸、甲基顺丁烯二酸或草酰乙酸。

9.根据权利要求8的方法，其中，在反应介质中再加入一种氨基酸。

10.根据权利要求2的方法，其中，在进行步骤(3)之前，在反应介质中再加入一种氨基酸。

11.根据权利要求2的方法，其中，在进行步骤(3)之前，在反应介质中再加入一种选自氯化铵、溴化铵、硫酸铵、氯化四甲铵或氯化二甲铵的阴离子。

12.根据权利要求11，其中，在反应介质中再加入一种氨基酸。

13.根据权利要求1或2的方法，其中制得的式(II)化合物是长春花碱。

14.根据权利要求1或2的方法，其中制得的式(II)化合物是异长春碱。

15.根据权利要求1或2的方法，其中，式(I)化合物、氢化物、氧、和三价铁各成分是包含在两种或多种溶液中，然后所说两种或多种溶液再互相接触的。