CN103308413A - 一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，通过在一定条件下，将实验组和对照组分别进行试验，比较了不同的饲用非淀粉多糖酶的酶解效果。本发明操作简单，测定结果准确，而且能够直观地反应不同酶制剂的酶解效果，很好地克服了现有的酶活性检测方法过程复杂，检测成本高，仅能检测单个酶的酶活性等缺点。本发明能够在体外准确地测定饲用非淀粉多糖酶的酶解效果，而且由于操作简单，饲料企业和养殖企业均可以独立完成，通过直观的效果和计算得到的数据来比较不同饲用非淀粉多糖酶酶制剂的酶解效果，从而可以放心地选择所要使用的酶制剂。
Description
技术领域
本发明涉及酶解效果测定技术领域，具体涉及一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法。
背景技术
现在酶制剂产品在饲料中的使用越来越广泛，而饲用非淀粉多糖酶是指作用于饲料原料中所有抗营养因子的各种单酶的总称，包括：木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、β-甘露聚糖酶、果胶酶等。研究发现在动物饲料中添加饲用非淀粉多糖酶，可降解饲料中的非淀粉多糖，提高能量、蛋白质、氨基酸等养分的消化利用率、改善饲料的营养价值。
不同的酶制剂其酶活性及其酶解效果不尽相同，目前通常用酶活性来表征酶解效果的好坏。酶活性的通用定义为：在一定的PH、温度下，一定时间内分解一定底物的量或生成一定产物的量所需的酶量；因此，酶活的真实含义即是“酶作用的结果”，即底物的减少量或产物的增加量，而不是含酶的多少。但是，现在“酶活性”这个指标并不适合用来表示饲用非淀粉多糖酶的酶解效果，而且用现有的酶活性测定方法来比较不同饲用非淀粉多糖酶酶制剂的酶解效果也并不准确。
首先，所有酶制剂均具有专一性，即一种酶只与一种相对应的底物发生作用。酶活性检测的底物与饲用酶制剂在饲料中发挥作用的底物差异非常大。检测酶活所用的底物均溶于水，是这一大类底物中的极少种类；而饲料中的非淀粉多糖绝大部份为非水溶的。因此酶活检测的结果不能代表饲用非淀粉多糖酶在饲料中的作用大小。如木聚糖酶：检测木聚糖酶酶活的底物叫燕麦木聚糖和桦木木聚糖。这两种木聚糖都是溶于水的，而饲料原料中的木聚糖绝大部分是不溶于水的，且木聚糖的种类多而复杂。
其次，非淀粉多糖酶在对饲料中的非淀粉多糖降解过程中彼此之间具有极强的协同性，现有的酶活性检测方法不能体现出非淀粉多糖酶的协同性。
最后，因为不同生产厂家的酶活定义不同，不同生产厂家的酶活值不能简单比较其大小，更不能体现效果差异；而且现有的酶活性检测方法不方便，检测成本高，除了饲用酶制剂生产厂家能够检测酶活外，全国的饲用酶制剂第三方检测机构仅有三家，而绝大部分使用厂家自身不具备检测饲用非淀粉多糖酶酶活的条件，因此使用厂家要进行不同生产企业的饲用非淀粉多糖酶之间的比较选择非常困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，本方法操作简单，成本较低，测定结果准确，而且能够直观地反应出不同饲用非淀粉多糖酶的酶解效果。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，包括以下步骤：
（1）称取等质量的饲料样品分别加入两个锥形瓶中，然后向两个锥形瓶中分别加入pH为5.0，浓度为0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液，其中饲料样品与乙酸-乙酸钠缓冲液的质量比为1:5；
（2）向其中一个锥形瓶中加入饲用非淀粉多糖酶，此锥形瓶即为实验组，未加入饲用非淀粉多糖酶的锥形瓶即为对照组；将实验组和对照组中溶液搅拌均匀后，封住瓶口并放到水浴摇床里，35～45℃下反应4-6h；
（3）向步骤（2）酶解结束的实验组和对照组中分别加入质量分数为10%的三氯乙酸溶液5ml，摇匀，静置10min，过滤后，用蒸馏水重复清洗滤渣，直到滤液澄清；
（4）将步骤（3）所制得的滤渣，烘干，直到滤渣重量恒定后，称取滤渣重量；
（5）根据步骤（4）所得到的实验组和对照组的滤渣重量，计算酶解率，酶解率的计算公式为：酶解率=[（饲料样品重量-实验组滤渣重量）-（饲料样品重量-对照组滤渣重量）]/饲料样品重量×100％。
所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（2）中的酶解温度为40℃，酶解时间为5h。
所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（2）中的搅拌时间为30min。
所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（2）中酶解过程中每隔30min振荡一次，速度为100r/min。
所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（4）中烘干是将滤渣放置于烘箱中105℃烘干。
本发明所提供的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法适用于对非淀粉多糖酶的单酶和相同酶种的复合非淀粉多糖酶的效果比较，本发明所使用的条件与饲用非淀粉多糖酶在畜禽体内发挥作用的条件基本相同，最重要的是饲用非淀粉多糖酶在本方法中作用的底物与在畜禽体内作用的底物是完全相同。
本发明所提供的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，操作简单，测定结果准确，而且能够直观地反应不同酶制剂的酶解效果，很好地克服了现有的酶活性检测方法过程复杂，检测成本高，仅能检测单个酶的酶活性等缺点。本发明能够在体外准确地测定饲用非淀粉多糖酶的酶解效果，而且由于操作简单，饲料企业和养殖企业均可以独立完成，通过直观的效果和计算得到的数据来比较不同饲用非淀粉多糖酶酶制剂的酶解效果，从而可以放心地选择所要使用的酶制剂。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
本实施例所提供的一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，包括以下步骤：
（1）分别称取4份50g的小麦型饲料样品分别加入四个锥形瓶中，然后向四个锥形瓶中分别加入pH为5.0，浓度为0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液250g，即其中饲料样品与乙酸-乙酸钠缓冲液的质量比为1:5；
（2）向其中三个锥形瓶中分别加入不同的饲用非淀粉多糖酶0.253g，这三个锥形瓶分别为实验A组、B组和C组，未加入饲用非淀粉多糖酶的锥形瓶即为对照组D组；将实验组和对照组中溶液搅拌均匀后，封住瓶口并放到水浴摇床里，35～45℃下反应4-6h。
（3）向步骤（2）酶解结束的实验组和对照组中分别加入质量分数为10%的三氯乙酸溶液5ml，摇匀，静置10min，过滤后，用蒸馏水重复清洗滤渣，直到滤液澄清；
（4）将步骤（3）所制得的滤渣，烘干，直到滤渣重量恒定后，称取滤渣重量；
（5）根据步骤（4）所得到的实验组和对照组的滤渣重量，计算实验组各组的酶解率，酶解率的计算公式为：酶解率=[（饲料样品重量-各实验组滤渣重量）-（饲料样品重量-对照组滤渣重量）]/饲料样品重量×100％。
本实施例中所使用的饲料样品还可以是玉米豆粕型饲料、玉米杂粕型饲料、小麦豆粕型饲料等，并使用与玉米豆粕型饲料、玉米杂粕型饲料、小麦豆粕型饲料等饲料类型相对应的饲用非淀粉多糖酶，其都适用于本发明所提供的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法。
表格1实施例1具体试验数据
根据表格1所给出试验数据以及步骤（5）中所给出的公式，分别计算各实验组饲用非淀粉多糖酶的酶解率，例如A组酶解率=[（50.02g-46.31g）-(50.02g-46.73g)]/50.02g×100％，计算得到A组酶解率为0.84％；从表1可以看到，C组和B组的酶解率大于A组，而C组酶解率又大于B组，因此可以得到C组比B组和A组的饲用非淀粉多糖酶酶解效率高，酶解效果好，更适用于添加到小麦型饲料样品中来提高饲料的消化利用率以及改善饲料的营养价值。
本发明所提供的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法操作简单，只需要简单的称量、配比、反应等几个步骤，不仅能够达到测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的目的，同时还可以比较不同饲用非淀粉多糖酶酶解效果，而且本发明所采用的都是小型的常规设备，使得本发明成本较低，一般的饲料企业和养殖企业均可以独立完成，使本发明容易推广和使用。另外，本发明由于设定了对照组实验，大大降低了本方法中的误差，使得本方法测定结果准确，可以定量地对比不同饲用非淀粉多糖酶的酶解效果。本发明还很好地克服了现有的酶活性检测方法仅能检测单个酶的酶活性等缺点，能够准确地测定复合酶的酶解效果，很好地解决了现有饲用复合酶制剂酶活性无法测定的技术问题。
Claims (5)
1.一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）称取等质量的饲料样品分别加入两个锥形瓶中，然后向两个锥形瓶中分别加入pH为5.0，浓度为0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液，其中饲料样品与乙酸-乙酸钠缓冲液的质量比为1:5；
（2）向其中一个锥形瓶中加入饲用非淀粉多糖酶，此锥形瓶即为实验组，未加入饲用非淀粉多糖酶的锥形瓶即为对照组；将实验组和对照组中溶液搅拌均匀后，封住瓶口并放到水浴摇床里，35～45℃下反应4-6h；
（3）向步骤（2）酶解结束的实验组和对照组中分别加入质量分数为10%的三氯乙酸溶液5ml，摇匀，静置10min，过滤后，用蒸馏水重复清洗滤渣，直到滤液澄清；
（4）将步骤（3）所制得的滤渣，烘干，直到滤渣重量恒定后，称取滤渣重量；
（5）根据步骤（4）所得到的实验组和对照组的滤渣重量，计算酶解率，酶解率的计算公式为：酶解率=[（饲料样品重量-实验组滤渣重量）-（饲料样品重量-对照组滤渣重量）]/饲料样品重量×100％。
2.根据权利要求1所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，其特征在于，步骤（2）中的酶解温度为40℃，酶解时间为5h。
3.根据权利要求1或2所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，其特征在于，步骤（2）中的搅拌时间为30min。
4.根据权利要求3所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，其特征在于，步骤（2）中酶解过程中每隔30min振荡一次，速度为100r/min。
5.根据权利要求1或2所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，其特征在于，步骤（4）中烘干是将滤渣放置于烘箱中105℃烘干。
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| CN108559769A (zh) * | 2018-04-12 | 2018-09-21 | 上海欧耐施生物技术有限公司 | 一种饲料用酶的评估方法 |
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|---|---|---|---|---|
| CN102229974A (zh) * | 2011-05-20 | 2011-11-02 | 湖南农业大学 | 饲料复合酶质量检测与评价方法 |
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