CN103529024B - 果胶酶在饲料原料中的最适添加量配方 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种果胶酶在饲料原料中的最适添加量配方。本发明公开的一种饲料，由饲料原料和果胶酶组成。本发明的选择果胶酶在饲料原料中最适添加量的方法和得到的最适添加量配方在饲料酶制剂的添加中具有指导意义。

Description

果胶酶在饲料原料中的最适添加量配方

技术领域

本发明涉及一种果胶酶在饲料原料中的最适添加量配方。

背景技术

新陈代谢是生命活动的基础，而构成新陈代谢的许多复杂而有规律的物质变化和能量变化，都是在酶的催化下进行的，可以说，没有酶的参与，生命活动一刻也不能进行。

20世纪20年代开始有报道，在饲粮中添加酶制剂可提高动物生长速度和饲料转化效率，但是直到20世纪80年代人们才开始懂得如何在饲料工业中发挥酶的力量。饲用酶制剂一般来源于微生物，由木霉、曲霉、酵母和真菌等微生物发酵生产，它是集动物营养学、饲料学、动物生理生化、微生物发酵与酶工程、基因工程等诸学科于一体的应用于现代饲料工业中的一种绿色饲料添加剂，对提高饲料的转化率、拓宽饲料原料的应用范围和比例、节约饲料资源、降低饲料成本和养殖成本，改善饲养环境等起着重要作用。从1984年欧洲在全球首次将酶制剂商品化应用于大麦日粮上开始，到20世纪90年代中期，酶制剂在饲料工业中的应用得到了普遍认可。90年代初，我国开始自行生产销售饲用酶制剂，2000年我国饲用酶制剂的销售量已达到6000t。1998～2008年，动物饲料酶制剂在全球市场每年都以平均13%的速度增长。尤其是2008年后，由于无机磷源的成本高涨，促进了植酸酶在饲料中的普及应用，大大提高了人们对酶制剂的认识和接收程度，也推动了其它酶制剂在饲料工业和养殖领域的应用。

在动物生产上复合酶制剂的作用显然要大于单体酶，但单体酶作用效果的研究毫无疑问将直接对复合酶的研究起指导作用，复合酶制剂在生产上的应用效果基本上已经得到肯定，但为进一步提高其性价比，更清楚地了解单体酶的作用机理和作用效果是很有必要的。不同的单酶都有其相对应的降解底物，酶的降解作用具有高度的选择性和专一性，目前用在饲料工业上的单酶制剂约有20多种。

饲用单酶制剂可以根据是否在动物体内大量分泌而分为外源酶和内源酶两种，外源酶主要包括植酸酶和非淀粉多糖酶，其中非淀粉多糖酶又包括木聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、果胶酶、纤维素酶等，而内源酶则主要包括蛋白酶、淀粉酶、糖化酶和脂肪酶等。

果胶酶(Pectinase)是一个多酶复合体系，是所有能够分解果胶质的酶的总称。按照作用底物的不同果胶酶可被分为3类，即果胶脂酶、果胶酶和原果胶酶。按照作用方式的不同果胶酶还可以被分为两大类，即酯酶和解聚酶，解聚酶又包括水解酶和裂解酶。要想通过酶制剂使植物细胞壁裂解，需要纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶等酶制剂的协同作用。果胶酶制剂对饲料原料作用时，首先会破坏植物细胞壁的胞间层，然后再破坏植物细胞壁其它结构，使细胞内容物彻底暴露出来，最后再由降解纤维素、半纤维素、蛋白质和淀粉等酶类将这些大分子物质降解成为小分子和单糖、氨基酸等，使饲料中养分更好的释放，促进动物的消化吸收。另外，果胶酶还可以消除抗营养因素，因为果胶部分溶解在水中产生黏性，增加了动物胃肠道内容物的黏度，导致吸收率降低，而果胶酶可降低黏稠度，促进内源酶的扩散，增加了养分的消化吸收。

要在饲料中发挥酶制剂的最佳效果，必须有精确的应用体系。在一定日粮中如何精确的使用酶制剂，一是要考虑原料中酶的底物的种类，针对性地添加；二是要考虑其含量，确保有足够的底物与酶作用才能发挥效果；三是要根据动物的特异性来设计。目前，对于饲用酶制剂在饲料中的添加量研究，多以动物养殖试验为主，市场上对于饲用酶制剂的添加量，主要通过在动物试验的基础上再结合实际生产成本确定，很少有人从酶制剂作用关系入手，进行系统的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种果胶酶在饲料原料中的最适添加量配方。

本发明提供的一种确定果胶酶在饲料原料中最适添加量的方法，包括如下步骤：

（1）得出每千克饲料原料中果胶的量；

（2）测量果胶酶的酶活，所述果胶酶的酶活定义为在37℃pH为5.5的条件下，每分钟内从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单位，1U；

所述底物为步骤（1）所述的饲料原料；

（3）根据步骤（2）所得的酶活，及下述公式，计算出每克步骤（1）中所述饲料原料所需果胶酶的量，即为理论添加量；

Q＝(C×1U×1min)/(1μmol×M×120min)

式中：

Q——酶的理论添加量，U/g；

C——每千克所述饲料原料中果胶的量，g/kg；

M——半乳糖醛酸的摩尔质量，212g/mol；

120min——酶的作用时间；

1U,1min,1μmol——酶活定义参数；

（4）以步骤（3）所得酶的理论添加量为基数，记作Q；n为Q的倍数，以n×Q组成该酶的梯度添加量，其中n为1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、8、10、20；

所述梯度添加量是针对饲料原料来说的，即每克饲料原料中应添加多少U的酶；

（5）进行体外酶解实验，体外酶解实验的体系如下：

1）将2g饲料原料加入15.0mLpH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，再加入0.5mL浓度为70mg/mL的胃蛋白酶溶液，混匀，得食糜液；胃蛋白酶溶液中溶剂为0.01mol/L盐酸水溶液；

2）用1.0mol/L盐酸水溶液调节食糜液的pH值至3.0；

3）将食糜液混合均匀后置于40℃振荡消化，消化75分钟；

4）用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调整步骤3）所得消化液的pH值至6.3，然后加入50mg胰酶；

5）实验分两组，第一组称作加酶组，即向步骤4）所得体系中加入果胶酶，所述酶的添加量为步骤（4）所设的梯度添加量；第二组称作不加酶组，即向步骤4）所得体系中加入2.0mL0.2mol/LpH6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液；然后，第一组和第二组均置于40℃振荡消化，消化时间为120min；

（6）还原糖测定，分别检测加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y₀，单位为mg/mL；

（7）按照如下公式计算果胶酶酶解产生的还原糖占饲料原料的质量百分含量：

ΔM=(((Ye-Y₀)×D×V)/m)×100

ΔM——酶解产生的还原糖占所加饲料原料的质量百分含量，%；

D——测定液稀释倍数，等于1mL除以还原糖测定时离心上清液吸取量；

V——消化反应体系总体积，27mL；

m——消化反应称取饲料原料样品的质量，2000mg；

100——百分比换算系数；

（8）以n为横坐标，以对应的ΔM为纵坐标作图，得到曲线的拐点，并取拐点前两组和拐点后两组的n值；

（9）将步骤（8）得到的n对应的组之间进行ΔM差异分析，按照步骤（8）的n由小到大的顺序，得到与步骤（8）的n最小的一组有显著差异的第一组，果胶酶在该组饲料中的添加量就是果胶酶在所述饲料原料中的最适添加量；

所述酶为果胶酶；

所述还原糖为半乳糖醛酸。

上述方法中，所述还原糖测定步骤如下：

（1）取出透析管，将消化液离心5min（5000r/min），取一定量上清液，用水定容至2.0mL，加3.0mLDNS煮沸显色，以水为空白调零，540nm测量加酶组和不加酶组的吸光值，分别记作Xe和X₀；

（2）用DNS法绘制半乳糖醛酸标准曲线，以半乳糖醛酸的量（μmol）为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线，得到公式Y=aX+b；

（3）分别将Xe和X₀代入（2）的公式，计算加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y₀，单位换算为mg/mL；

所述还原糖为半乳糖醛酸。

上述任一所述的方法中，所述饲料原料为玉米、豆粕、小麦、麸皮、棉粕、菜粕和米糠粕中任意一种。

一种饲料也属于本发明的保护范围，该饲料由饲料原料和果胶酶组成。

上述饲料中，所述饲料原料为玉米、豆粕、小麦、麸皮、米糠粕、菜粕和棉粕中任意一种。

上述任一所述的饲料中，所述玉米与所述果胶酶的比例为1g：0.234U；所述豆粕与所述果胶酶的比例为1g：37.3U；所述小麦与所述果胶酶的比例为1g：0.474U；所述麸皮与所述果胶酶的比例为1g：4.26U；所述米糠粕与所述果胶酶的比例为1g：0.64U；所述菜粕与所述果胶酶的比例为1g：10.68U；所述棉粕与所述果胶酶的比例为1g：7.56U；

所述U的定义为：果胶酶在37℃、pH为5.5的条件下，每分钟从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1U；

所述底物为所述饲料原料；

所述还原糖为半乳糖醛酸。

与理论添加量对比表明，各饲料原料对果胶酶的需要量都高于理论添加量，要想完全发挥酶制剂在饲料中的酶解效果，必须添加足量的酶。本发明的选择果胶酶在饲料原料中最适添加量的方法和得到的最适添加量配方在饲料酶制剂的添加中具有指导意义。

附图说明

图1为不同浓度的果胶酶酶解不同饲料原料生成产物量的曲线图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

果胶酶购自北京挑战生物技术有限公司，产品目录号为YL-042。

DDGS（酒糟蛋白饲料）购自吉林省新天龙实业股份有限公司。

胃蛋白酶购自Sigma，货号为P7000。

胰蛋白酶购自Sigma，货号为P7545。

20%的氢氧化钠溶液（200g/L）按照如下方法配制：称取氢氧化鈉20.0g。加水溶解，定容至100ml。

果胶购自Sigma。

0.1mol/L的乙酸溶液按照如下方法配制：

吸取冰乙酸0.60mL，加水溶解，定容至100mL。

0.1mol/L的乙酸钠溶液按照如下方法配制：

称取三水乙酸钠1.36g，加水溶解，定容至100mL。

0.1mol/L，pH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液按照如下方法配制：

称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.70mL。再加水溶解，定容至2000mL，测定溶液pH。如果pH偏离5.5，再用0.1mol/L的乙酸溶液或0.1mol/L的乙酸钠溶液调节至5.5。

1.0%的果胶溶液按照如下方法配制：

称取果胶1.0g，加入70mL0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液。磁力搅拌，同时缓慢加热，直至果胶完全溶解。（注：在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液，但是溶液的总体积不能超过90mL。）然后停止加热，继续搅拌30min，用0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液定容至100mL。果胶溶液能立即使用，使用前适当摇匀。4℃避光保存，有效期为3天。

终止显色剂（DNS）：3,5-二硝基水杨酸（化学纯）购自国药集团化学试剂有限公司。

DNS试剂按照如下方法制备：

称取3,5-二硝基水杨酸3.15g（化学纯），加水500ml，搅拌，水浴至45℃。逐步加入浓度为20%的氢氧化钠溶液100ml，并不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g，继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000ml。用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7天后可以使用，有效期为6个月。

下述实施例中果胶酶活力的测定方法如下：

（一）标准曲线的绘制

半乳糖醛酸储备液：称取预先在80℃下干燥3h至恒重的半乳糖醛酸0.5305g（精确至0.0002g），加0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液溶解，定容至100ml，终浓度为25.0μmol/ml。

用0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液按表1的体积比例将半乳糖醛酸储备液稀释成不同浓度，以半乳糖醛酸的量（μmol）为纵坐标，吸光度OD值为横坐标，列出直线回归方程(y=ax+b)。

表1不同浓度的半乳糖醛酸溶液的配制

（二）取15ml刻度试管按表2所示的反应顺序进行操作，在反应过程中，从加入底物(1.0％的果胶溶液)开始，向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致，37℃水解10min。反应步骤及试剂、用量见表2。

表2反应步骤

根据各试样的吸光度值以及步骤（一）得到的标准曲线回归方程，计算各试样中的还原糖的量。

按照公式1计算试样在对应温度及pH条件下的酶活力。

$X_D=\frac{A\×D_f}{M\×10\×0.2}$ （公式1）

X_D—试样果胶酶活力，U/g或U/mL；

A—从标准曲线回归方程中算出还原糖的量（即y值），μmol；

D_f—试样的总稀释倍数；

M—样品质量或毫升数，g或mL；

10—酶解反应时间，min；

0.2—参与反应酶液量，mL；

同一试样两个平行测定值的相对误差不超过8.0%，二者的平均值为最终的酶活力测定值（保留三位有效数字）。

实施例1、果胶酶酶活的测定

一、待测酶溶液的制备

固体酶样：准确称量酶样品1.0g（精确至0.0001g），加入80ml0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液。磁力搅拌30min，再用0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液定容至100ml。4000rpm离心10min，移取上清液再用0.1mol/LpH为5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液做适当稀释（稀释后吸光度OD值在0.2-0.5之间，如果不在这个范围内，应重新选择酶液的稀释度，再进行分析测定）。

二、酶活力单位定义

果胶酶活力单位定义：在37℃、pH5.5的条件下，1min从浓度为1.0%的果胶溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位，1U。

三、酶活测定

将步骤一的待测果胶酶样进行果胶酶活力的测定，测得果胶酶的酶活为11,652U/g。

实施例2、果胶酶对不同饲料原料的理论添加量

一、果胶酶活力单位定义：在37℃、pH为5.5的条件下，每分钟内从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单位，1U。

二、不同饲料原料中抗营养物质果胶的含量如表3所示。

表3不同饲料原料中果胶含量（g/kg）

饲料原料中酶理论添加量的推导以酶活定义为基础，设定酶制剂酶解作用得到发挥的鸡小肠段作用时间为120分钟，则根据酶活定义（1U=1μmol/1min），某种饲料原料中果胶酶的理论添加量计算如公式2所示。

Q＝(C×1U×1min)/(1μmol×M×120min)（公式2）

式中：

Q——酶的理论添加量，U/g；

C——表1中每千克该饲料原料中底物果胶的量，g/kg；

M——半乳糖醛酸的摩尔质量，212g/mol；

120min——酶制剂在动物体内理论作用时间；

1U,1min,1μmol——酶活定义参数。

不同饲料原料果胶酶制剂的理论添加量计算结果如表4所示。

表4不同饲料原料使用果胶酶制剂的理论添加量计算结果

实施例3、果胶酶酶解单原料添加量优化

一、浓度梯度的设定

以实施例2中表4得出的不同饲料原料中果胶酶理论添加量为基数，以2递增倍数扩大或以除以2的递增倍数缩小添加量，组成该酶的梯度添加量，且设定一个极大（20倍）或极小（1/20倍）添加量来评估超常添加量下酶解情况，其中酶添加量梯度最大值不超过理论添加量的10倍（极大值除外），最小值不超过理论添加量的1/10倍（极小值除外）。

二、添加量优化实验

在步骤一设定的不同梯度添加量的条件下，将果胶酶分别与实施例2中表4中的7种不同的饲料原料进行体外酶解反应处理。

体外酶解反应处理的步骤如下：

（一）准确称取2.00g过60目筛的饲料样品，放入50mL具塞三角瓶中。

（二）向三角瓶中加入pH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液15.0mL，再加入0.5mL浓度为70mg/mL的0.01mol/L盐酸胃蛋白酶溶液，小心混合均匀后静止10min，得食糜液。

（三）用1.0mol/L盐酸调食糜液的pH值至3.0，用2.0mL0.2mol/LpH3.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液冲洗酸度计上的残渣至具塞三角瓶中。

（四）将食糜液混合均匀后放入40℃恒温水浴锅或摇床内消化，不断振荡（150r/min）。放入5min后开始计时，消化75min后取出具塞三角瓶。

（五）用1.0mol/L氢氧化钠调整食糜液的pH值至6.3，用2.0mL0.2mol/LpH6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液冲洗酸度计上的残渣至具塞三角瓶中，然后加入50mg的胰酶。

（六）一组加入2.0mL已经稀释好的特定浓度的果胶酶（使果胶酶的添加量与步骤一中的梯度添加量一致），另外一组加2.0mL0.2mol/LpH6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液。放入40℃恒温摇床上消化，不断振荡（150次/min）。放入10min后开始计时，消化120min后取出三角瓶。

(七)取出透析管，将消化液离心5min（5000r/min），取一定量上清液，用水定容至2.0mL，加3.0mLDNS煮沸显色，以水为空白调零，540nm测量吸光值。加酶组和不加酶组的吸光值，分别记作Xe和X₀；

绘制果胶酶活力标准曲线，具体操作方法同果胶酶活力测定方法的步骤（一）。以半乳糖醛酸的量（μmol）为纵坐标，吸光度OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到公式Y=aX+b。

三、酶解产物含量计算

酶解产物含量是指酶解产生的还原糖半乳糖醛酸占所加饲料原料的质量百分含量。

根据步骤二得到的标准曲线以及各实验组和对照组的吸光度计算果胶酶对不同饲料原料的酶解产物含量，计算公式为：

ΔM=Me–M₀（公式3）

M=((Y×D×V)/m)×100（公式4）

Y=aX+b（公式5）

公式3中：

ΔM——酶解产生还原糖半乳糖醛酸占所加饲料原料的质量百分含量，%；

Me——加酶后反应体系中还原糖半乳糖醛酸占所加饲料原料的质量百分含量，%；

M₀——未加酶时反应体系中还原糖半乳糖醛酸占所加饲料原料的质量百分含量，%；

其中M的计算方法如公式4。

公式4中：

M——还原糖半乳糖醛酸占所加饲料原料的质量百分含量，%；

Y——根据标准曲线方程计算出的测定液中的还原糖半乳糖醛酸的浓度，mg/mL；

D——测定液稀释倍数，等于1mL除以测定时离心上清液吸取量；

V——消化反应体系总体积，27mL；

m——消化反应称取的饲料原料样品质量，2000mg；

100——百分比换算系数。

公式5中：

X——测定的吸光值；

a,b——标准曲线方程系数。

结合公式3和公式4可计算得到公式6：

ΔM=(((Ye-Y₀)×D×V)/m)×100（公式6）

结合公式5和公式6可计算得到公式7：

ΔM=((a×(Xe-X₀)×D×V)/m)×100（公式7）

果胶酶对不同饲料原料进行酶解生成的还原糖半乳糖醛酸占饲料原料的质量百分含量如表5所示。

表5不同浓度果胶酶酶解不同饲料生成的还原糖半乳糖醛酸占饲料原料的质量百分含量

同行肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

四、根据表5的结果，结合实施例2中的表3，计算果胶酶酶解不同饲料原料生成的还原糖半乳糖醛酸占原料中总果胶的质量百分含量，结果如表6所示。

表6不同浓度果胶酶酶解不同饲料生成的还原糖半乳糖醛酸占饲料原料中总果胶的质量百分含量

五、对表5中的结果进行作图，以优化梯度倍数为横坐标，产物含量为纵坐标作图，并添加对数趋势线、公式和R平方值，结果如图1所示。

六、根据图1的拐点，确定位于拐点附近的组（拐点前两组和拐点后两组）。对拐点附近的组进行产物含量（即反应生成的还原糖半乳糖醛酸占饲料原料的质量百分含量）差异性分析，按照附近组中酶添加量从低到高的顺序，得到与其中酶最低添加量的组有显著差异的第一组，果胶酶在饲料原料中的最佳添加量就是这一组的添加量。

果胶酶在不同饲料原料中的最佳添加量，同时结合果胶酶酶解产物半乳糖醛酸占原料总果胶的质量百分含量得到表7。

表7不同饲料原料中果胶酶最佳添加量及其酶解产物半乳糖醛酸占饲料原料中总果胶的质量百分含量

根据试验结果综合分析，果胶酶对豆粕有较好的酶解效果，酶解产物生成量随酶解浓度梯度的变化而有较大的变化，且在低浓度下也有酶解产物生成；对菜粕和棉粕也有较好的酶解效果，对其它几种虽然有较高的酶解产物生成比例，但是酶解效果一般。

Claims (3)

1.一种确定果胶酶在饲料原料中最适添加量的方法，包括如下步骤：

(1)得出每千克饲料原料中果胶的量；

(2)测量果胶酶的酶活，所述果胶酶的酶活定义为在37℃pH为5.5的条件下，每分钟内从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单位，1U；

所述底物为步骤(1)所述的饲料原料；

(3)根据步骤(2)所得的酶活，及下述公式，计算出每克步骤(1)中所述饲料原料所需果胶酶的量，即为理论添加量；

Q＝(C×1U×1min)/(1μmol×M×120min)

式中：

Q——酶的理论添加量，U/g；

C——每千克步骤(1)所述饲料原料中果胶的量，g/kg；

M——半乳糖醛酸的摩尔质量，212g/mol；

120min——酶的作用时间；

1U,1min,1μmol——酶活定义参数；

(4)以步骤(3)所得酶的理论添加量为基数，记作Q；n为Q的倍数，以n×Q组成该酶的梯度添加量，其中n为1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、8、10、20；

(5)进行体外酶解实验，体外酶解实验的体系如下：

1)将2g饲料原料加入15.0mLpH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，再加入0.5mL浓度为70mg/mL的胃蛋白酶溶液，混匀，得食糜液；胃蛋白酶溶液中溶剂为0.01mol/L盐酸水溶液；

2)用1.0mol/L盐酸水溶液调节食糜液的pH值至3.0；

3)将食糜液混合均匀后置于40℃振荡消化，消化75分钟；

4)用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调整步骤3)所得消化液的pH值至6.3，然后加入50mg胰酶；

5)实验分两组，第一组称作加酶组，即向步骤4)所得体系中加入果胶酶，所述酶的添加量为步骤(4)所设的梯度添加量；第二组称作不加酶组，即向步骤4)所得体系中加入2.0mL0.2mol/LpH6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液；然后，第一组和第二组均置于40℃振荡消化，消化时间为120min；

(6)还原糖测定，分别检测加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y₀，单位为mg/mL；

(7)按照如下公式计算果胶酶酶解产生的还原糖占饲料原料的质量百分含量：

ΔM＝(((Ye-Y₀)×D×V)/m)×100

ΔM——酶解产生的还原糖占所加饲料原料的质量百分含量，％；

D——测定液稀释倍数，等于1mL除以还原糖测定时离心上清液吸取量；

V——消化反应体系总体积，27mL；

m——消化反应称取饲料样品的质量，2000mg；

100——百分比换算系数；

(8)以n为横坐标，以对应的ΔM为纵坐标作图，得到曲线的拐点，并取拐点前两组和拐点后两组的n值；

(9)将步骤(8)得到的n对应的组之间进行ΔM差异分析，按照步骤(8)的n由小到大的顺序，得到与步骤(8)的n最小的一组有显著差异的第一组，果胶酶在该组饲料中的添加量就是果胶酶在所述饲料原料中的最适添加量；

所述酶为果胶酶；

所述还原糖为半乳糖醛酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述还原糖测定步骤如下：

(1)取出透析管，将步骤5)所得的消化液离心5min，转速为5000r/min，取一定量上清液，用水定容至2.0mL，加3.0mLDNS煮沸显色，以水为空白调零，540nm测量加酶组和不加酶组的吸光值，分别记作Xe和X₀；

(2)用DNS法绘制半乳糖醛酸标准曲线，以半乳糖醛酸的量为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线，所述半乳糖醛酸的量的单位以μmol计，得到公式Y＝aX+b；

(3)分别将Xe和X₀代入(2)的公式，计算加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y₀，单位换算为mg/mL；

所述还原糖为半乳糖醛酸。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述饲料原料为玉米、豆粕、小麦、麸皮、棉粕、菜粕和米糠粕中任意一种。