CN103289005A - 磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法及应用，其步骤：1）先将模板分子、功能单体以及交联剂混合；2）印迹聚合物颗粒进行表征；3）将印迹聚合物颗粒装填固相萃取小柱，用甲醇和丙酮润洗，真空密封；磺胺类药物分子印迹聚合物，其步骤：a）将模板分子磺胺二甲嘧啶与功能单体溶解在致孔剂乙腈中，得混合溶液；b）将混合溶液用超声清洗仪超声，得到预聚合体系；c）将预聚合体系转入石英反应试管中，加入交联剂和引发剂；d）在紫外光下预聚合体系；e）将印迹聚合物直接研磨，得到印迹聚合物颗粒。回收率高、制备简便、成本低廉，可直接用于动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺二甲嘧啶的选择性吸附和高效富集。

Description

磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法及应用

技术领域

本发明涉及分析化学领域，更具体涉及一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，还涉及磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的用途，尤其是在动物性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺二甲嘧啶残留分析时样品的分离和富集中的应用。

背景技术

磺胺类药物是一类用于防治细菌和原虫感染的化学抗菌药物。该类药属于慢速抑菌剂，可产生明显的肾毒性、骨髓抑制和皮疹等不良反应。由于其价格低廉、抗菌谱较广，目前在畜牧业中应用非常广泛，但随之而来的是其滥用和误用现象也逐渐增多，由此导致的动物性食品中磺胺类药物的残留也越来越严重。为了监控该类药物所引起的残留，保障人类健康，美国食品与药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)、欧盟(European Union，EU)、联合国食品法典委员会(Codex Alimentarius Commission，CAC)以及我国农业部等均规定了该类药物的最大残留限量(Maximum Residue Limit，MRL)。欧盟规定所有磺胺类药物的总残留量不能超过100μg/kg；FDA规定不同种类磺胺类药物的MRL为0μg/kg-100μg/kg；CAC规定磺胺二甲嘧啶在牛奶中的MRL为25μg/kg，在其他动物性食品中的MRL为100μg/kg；我国农业部规定牛奶中磺胺二甲嘧啶的MRL为25μg/kg，而在其他动物性食品中所有磺胺类药物的总残留量不超过100μg/kg。

磺胺类药物在动物组织中的残留对人体和自然环境的都有很多不利影响。在所有的磺胺类药物中磺胺二甲嘧啶的使用最广泛，残留最严重，危害最大，已经确认由该类药物残留引起的人体组织损伤大约95％是由磺胺二甲嘧啶引起的。美国农业部食品安全监督署发布的年度残留计划检测报告显示，在连续多年的监控中所检测出来的超标样品中有90％以上是磺胺二甲嘧啶。在我国虽未见到具体数据，但根据生产中的实际情况，磺胺二甲嘧啶的残留状况也非常严重，且为该类药物残留超标的主要原因。另外，磺胺类药物的多种检测方法也存在很多不足。传统意义上的仪器分析方法通常不能独立进行，而且检测过程和样品的前处理大多繁琐、费时、费力、影响因素众多。免疫分析技术则需要制备结合抗原和有特异性识别作用的抗体，对目标分子的结构和大小也有一定的限制，同时分析过程的稳定性较差，难以解决非特异性吸附的难题。微生物检测方法的特异性和准确度不高，需要有对分析对象具有专一性敏感的菌种，且只能定性检测。总之，以上几种方法对操作的条件要求均较高，所需物品的保存条件苛刻，而分析的效果还不能令人们满意。

固相萃取技术(Solid Phase Extraction，SPE)是一种新型的分离和纯化手段，磺胺类药物的样品前处理方法中以SPE的应用最广泛，但普通的SPE柱对待测组分缺乏选择性，再生性较差，多为一次性的。传统的固相萃取吸附剂与待测组分之间的作用力是非特异性的，不同的基质需要使用不同的填料，限制了SPE的进一步发展。分子印迹技术作为一种能够获得在空间和结合位点上与某种分子完全匹配的聚合物制备技术，具有构效的预定性、识别的特异性和广泛的实用性。与生物性的抗体相比，具有稳定性和重复性好、耐极端环境能力强、制备过程简便及成本低廉等特点。因此，将印迹聚合物用于待测物质的检测、分离和纯化具有很大的优势。目前已在生物传感和痕量物质的富集等领域展示出诱人的前景。

参考相关文献的报道，采用本体聚合的方法制备磺胺类药物的分子印迹聚合物(MolecularImprinted Polymers，MIPs)，所制备的块状MIPs经研磨、过筛、洗脱、漂洗和干燥等一系列处理后，得到粒径为50μm-70μm的MIPs，经紫外分光光度法对其进行分析评价后将其填充固相萃取小柱空柱管制成分子印迹固相萃取小柱，用于磺胺类药物的残留分析。

发明内容

本发明的目的在于克服现有固相萃取方法的不足，是在于提供了一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，该固相萃取柱较已有的固相萃取柱具有特异性强、回收率高、制备简便、成本低廉、所需仪器和反应条件容易实现等特点。

本发明的另一个目的是在于提供了一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱在动物源性食品中磺胺类药物检测中的应用，该固相萃取小住可直接用于动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺二甲嘧啶的选择性吸附和高效富集。

本发明通过以下技术方案实现：

一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其步骤如下：

1)先将模板分子、功能单体以及交联剂，按照模板分子∶功能单体∶交联剂摩尔比为1∶3-6∶15-30混合通过本体聚合法合成磺胺类药物分子印迹聚合物颗粒；

所述的模板分子为磺胺二甲嘧啶

所述的功能单体是甲基丙烯酸、丙稀酰胺、4-乙烯基吡啶或/和甲基丙烯酸酯中的一种或两种的任意混合；

所述的交联剂是为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或乙二醇二甲基丙烯酸酯

2)对步骤1)所得的印迹聚合物颗粒进行表征，以确证其特异性吸附位点的存在；

3)将步骤1)的印迹聚合物颗粒用湿法(Chapuis F. Pichon V，Lanza F，Sellergren B，HennionM C. Retention mechanism of analytes in the solid-phase extraction process using molecularlyimprinted polymers：Application to the extraction of triazines from complex matrices.Journal ofChromatography B，2004，804(1)：93-101)装填固相萃取小柱，依次用甲醇和丙酮润洗，真空密封于锡箔袋中备用。

所述的磺胺类药物分子印迹聚合物，其制备步骤如下：

a)先将摩尔比为1∶3-6的模板分子磺胺二甲嘧啶与功能单体甲基丙烯酸(Methacrylic Acid，MAA)、丙稀酰胺(Acrylamide，AM)、4-乙烯基吡啶(4-Vinyl Pyridine，4-VP)或/和甲基丙烯酸酯中的一种或两种(优选的为MAA)溶解在致孔剂乙腈中，得到模板分子与功能单体的混合溶液，所述的致孔剂乙腈的用量为7mL-30mL(优选的为10mL-20mL)；

b)将步骤a)的混合溶液用超声清洗仪超声5min，混合均匀，放入4℃冰箱孵育24h，得到预聚合体系；

c)将步骤b)的预聚合体系转入石英反应试管中，向反应体系中加入交联剂和引发剂，所述的交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或乙二醇二甲基丙烯酸酯(Ethylene Glycol Dimetha-crylate，EGDMA)，加入量为功能单体摩尔量的5倍，所述的引发剂是过氧化苯甲酰(BenzoylPeroxide，BPO)或偶氮二异丁腈(Azobisisbutyronitrile，AIBN)，加入量为功能单体摩尔量的0.2倍，然后用超声清洗仪超声5min，通入氮气除氧5min，并在氮气氛或真空状态下密封；

d)在光强为0.5W/m²的紫外光下引发所述的预聚合体系，引发温度0℃-10℃，聚合时间12h-60h(优选的引发温度为1℃-4℃，聚合时间为24h-48h)，得到磺胺二甲嘧啶的块状MIPs；

e)将步骤d)中的印迹聚合物直接研磨，过分级筛，选取直径为50μm-70μm的颗粒，用定量滤纸包裹后，用索氏萃取溶剂索氏萃取24h-150h(优选的索氏萃取溶剂为甲醇-盐酸混合溶剂，体积比为7∶3)，然后用丙酮漂洗3～5次，60℃烘干至恒重，得到印迹聚合物颗粒。

本发明上述方法制备的磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱应用于动物性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的选择性吸附和富集，一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱在动物源性食品中磺胺类药物检测中的应用，其步骤如下：

1)分子印迹固相萃取小柱柱首先用甲醇和体积比为5％的甲醇水依次润洗；

2)然后加入样品提取液，经体积比为10％的甲醇水淋洗；

3)用甲醇乙酸混合液(V/V，9∶1)洗脱；

4)经甲醇乙酸混合液(V/V，9∶1)和甲醇依次润洗再生后，可连续使用5～10次。

对不同批次样品中不同添加浓度的磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶采用该分子印迹固相萃取小柱净化后，通过高效液相色谱法测定其回收率，以考核柱效。

更详细的技术方案见具体实施方案所述。

本发明制备的分子印迹SPE柱对磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺二甲嘧啶具有动态的“记忆”功能，可用于这三种磺胺类药物在动物源性食品中的残留分析。与普通的氧化铝、C18和Waters Oasis HLB SPE柱相比，分子印迹SPE柱具有特异性和重复性好、分离效率和回收率高、吸附容量大及生产成本低等特点。较液-液萃取法它还具有操作简便、溶剂用量和基质干扰少、回收率和样品处理效率高等优势。

附图说明

图1、图4和图6为一种紫外引发磺胺二甲嘧啶块状聚合物的微观结构示意图，其中图1a、图4a和图6a的放大倍数分别为2000、1800和13000，图1b、图4b和图6b的放大倍数分别为9000、45000和40000。

图2、图3和图5为一种紫外引发非模板块状聚合物的微观结构示意图，其中图2a、图3a和图5a的放大倍数分别为25000、1100和4000，图2b、图3b和图5b的放大倍数分别为100000、16000和27000。

图7、图9和图11为一种磺胺二甲嘧啶在模板分子印迹聚合物和非模板分子印迹聚合物上的等温吸附曲线示意图。

图8、图10和图12为一种磺胺二甲嘧啶块状模板分子印迹聚合物和非模板分子印迹聚合物等温吸附曲线的Scatchard分析结果示意图。

其中图8a、图10a和图12a为模板分子印迹聚合物Scatchard分析结果，图8b、图10b和图12b为非模板分子印迹聚合物的Scatchard分析结果。

具体实施方式

实施例1：磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的制备

1.1.磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的制备-方法一

首先进行预聚合，称取模板分子(磺胺二甲嘧啶)0.5mmol，加入功能单体MAA 2mmol溶解于乙睛中，超声处理5min放4℃冰箱24h生成稳定的复合物即完成预聚合。随后加入交联剂EGDMA 10mmol，引发剂AIBN 0.37mmol，超声处理5min后置于18mm×180mm的石英试管中并通氮气5min(除去氧气)，于氮气氛下密封，置0℃冰水浴中，在365nm、6w的紫外灯下引发聚合，紫外灯管与石英试管间距3cm，反应时间48h，反应结束后得到白色块状聚合物。将其研磨后用丙酮沉降3～5次，过分级筛，选择240目-260目之间的颗粒，最后得到微细多孔的粉末产物(其微观形貌见图1和图2)。

将上述粉末产物用定量滤纸包裹，配制150mL甲醇-盐酸混合液(V/V，7∶3)做萃取溶剂，采用通用的索氏萃取法(Baggiani C，Giraudi G，Trotta F，Giovannoli C，Vanni A.Chromatographic characteri-zation of a molecular imprinted polymer binding cortisol.Talanta，2000，51(1)：71-75.)除去聚合物中的模板分子，定时对提取液进行紫外扫描，直到无模板分子特征吸收时再换用乙腈萃取24h以除去聚合物中残存的甲醇和盐酸(转速4800r/min，每次离心5min)。产物继续用丙酮离心洗脱3次(转速4800r/min，每次离心5min)以去除乙腈并改善聚合物粉末的分散性。然后将沉淀物于50～100ml丙酮中漂洗，除去过小的颗粒，60℃恒温真空干燥24h，最后收集模板分子印迹聚合物粉末。非模板分子印迹聚合物的制备，即不加模板分子，不进行预聚合，其它操作步骤同上，与模板分子印迹聚合物同时进行索氏萃取。

所述的EGDMA又称二甲基丙烯酸乙二醇酯，商品代码：HCM402。二甲基丙烯酸乙二醇酯主要用作塑料、橡胶工业，用作乙烯-丙烯酸共聚物，ABS，丙烯酸片材、管材，玻璃纤维增强聚酯，PVC，离子交换树脂，无烟粉末包裹聚合，上釉等的交联剂，有其参与共聚的聚合物，硬度增加，耐热、耐候、耐溶剂和摩擦性提高，另外还用在人造大理石、牙科材料、乳液共聚物、造纸、橡胶过氧硬化改性剂、粘合剂、油墨、光学聚合物的交联剂。

所述的AIBN又称偶氮二异丁腈，偶氮二异丁腈(AIBN)是最常用的一种偶氮类引发剂。其特点是分解反应比较平稳，只产生1种自由基，基本上不发生诱导分解，因而常用于自由基聚合反应的动力学研究。另外它比较稳定，储存和使用都比较安全。与所有偶氮类化合物一样，AIBN也有一定毒性，不能用于与医用、食品包装等有关的聚合物的合成，由于它的分解反应产生化学计量的氮气，往往可以很方便地借助测定其分解放出氮气的体积来测定其分解活化能和频率因子等动力学数据。有时也可以利用放出的氮气对聚合物进行发泡。其分解温度在50～70℃，分解活化能为129kJ/mol，属于低活性引发剂。

1.2.磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的制备-方法二

制备的基本过程同实施例1.1，预聚合时间为48h，所用的功能单体为AM 3mmol，交联剂EGDMA 15mmol(聚合物微观形貌见附图3和4)。索氏萃取溶剂为200mL甲醇-盐酸混合液(V/V，8∶2)。

1.3.磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的制备-方法三

制备的基本过程同实施例1.1，预聚合时间为48h，所用的功能单体为4-VP 1.5mmol，交联剂EGDMA 7.5mmol(聚合物微观形貌见附图5和6)。索氏萃取溶剂为120mL甲醇-盐酸混合液(V/V，8∶2)。

实施例2.磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的表征

2.1方法一制备磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的表征

将模板分子的乙腈溶液作为吸附液，准确称取10份50mg的模板分子印迹聚合物，于25℃下测定它们对不同浓度的模板分子的吸附量，以吸附量对模板分子浓度作图，绘制等温吸附曲线。为了比较模板分子印迹聚合物的吸附性能，同时也要测定非模板分子印迹聚合物的等温吸附曲线，将获得的数据用于式(1)的Scatchard分析(见图7和图8)。由Scatchard曲线的斜率和截距可求得MIPs的Q_max和K_D。表征结果表明模板分子印迹聚合物存在两类吸附位点，一类是具有高结合能和高选择性的结合位点，另一类是具有低结合能和低选择性的结合位点(其K_D1＝162.2430×10^-2μmol/L，Q_max1＝9840.8537μmol/g；K_D2＝5.8284×10^-2μmol/L；Q_max2＝493.8487μmol/g)。而非模板分子印迹聚合物仅有低结合能和低选择性的结合位点(K_D＝3.1014×10^-3μmol/L，Q_max＝232.0502μmol/g)。

Scatchard方程： $\frac{Q}{C}=\frac{Q_{\max }-Q}{K_d}---\left(1\right)$

式中K_D：结合位点的平衡离解常数，C：模板分子的平衡浓度，Q_max：最大表观结合位点数。

2.2方法二制备磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的表征

表征方法同实施例2.1，结果见附图9和图10。图中显示模板分子印迹聚合物存在两类吸附位点，一类是高选择性的结合位点，另一类是低选择性的结合位点(其K_D1＝3.6428×10^-2μmol/L  ，Q_max1＝170.5078μmol/g  ；K_D2＝0.6221×10^-2μmol/L  ，Q_max2＝91.8635μmol/g)。而非模板分子印迹聚合物仅有低结合能和低选择性的结合位点(K_D＝6.4583×10^-3μmol/L，Q_max＝88.2174μmol/g)。

2.3方法三制备磺胺二甲嘧啶印迹聚合物的表征

表征方法同实施例2.1，结果见附图9和图10。图中显示模板分子印迹聚合物存在两类吸附位点，一类是具有高结合能和高选择性的结合位点，另一类是具有低结合能和低选择性的结合位点(其K_D1＝2.9404×10^-2μmol/L，Q_max1＝125.7860μmol/g；K_D2＝0.6221×10^-2μmol/L，Q_max2＝91.8635μmol/g)。而非模板分子印迹聚合物仅有低结合能和低选择性的结合位点(K_D＝0.2075×10^-3μmol/L，Q_max＝55.9481μmol/g)。

实施例3.分子印迹固相萃取柱的制备

3.1用方法一制备的磺胺二甲嘧啶印迹聚合物制备分子印迹固相萃取柱

装柱匀浆液为5mL的甲醇-异丙醇混合液(V/V，3∶1)，将120mg的模板分子印迹聚合物或非模板分子印迹聚合物分别放入匀浆液中超声5min制成混悬液。在装柱之前，首先把下层的筛板放入，用3mL-5mL甲醇对3mL的SPE空柱管润洗，然后将其放到固相萃取真空装置上，封堵空余的接口，打开真空泵，使真空度达到-25Pa，加入匀浆好的印迹聚合物混悬液，边加边轻轻敲打柱体，待匀浆液快抽干前放入上层的筛板并压紧。依次用10mL丙酮和10mL甲醇冲洗，最后对柱子标记后，放入锡箔袋中真空密封备用。

3.2用方法二制备的磺胺二甲嘧啶印迹聚合物制备分子印迹固相萃取柱

制备方法同实施例3.1，称取150mg的模板分子印迹聚合物或非模板分子印迹聚合物装入3mL的SPE空柱管中，装填好后依次用5mL丙酮和5mL甲醇冲洗。最后对柱子标记后，放入锡箔袋中真空密封备用。

3.3用方法三制备的磺胺二甲嘧啶印迹聚合物制备分子印迹固相萃取柱

制备方法同实施例3.1，称取200mg的模板分子印迹聚合物或非模板分子印迹聚合物装入3mL的SPE空柱管中，装好后依次用8mL丙酮和8mL甲醇冲洗。最后对柱子标记后放入锡箔袋中真空密封备用。

实施例4.分子印迹固相萃取柱在实际样品检测中的应用

4.1实施例3.1制备分子印迹固相萃取柱的应用

4.1.1猪肌肉和肝脏中磺胺类药物的提取

称取5.0g匀浆样品于50mL离心管中，添加磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺二甲嘧啶标准品，使其浓度分别达到50μg/kg、100μg/kg和200μg/kg，超声混匀5min后加2.0g无水硫酸钠，再加入20mL二氯甲烷，涡旋提取10min，然后3000r/min离心5min，上清液经定量滤纸过滤到100mL浓缩瓶中，残渣用15mL二氯甲烷水浴超声提取一次(时间为15min)，合并二氯甲烷提取液，35℃水浴氮气吹干。

上述残渣用1mL体积比为25％的甲醇水溶解，涡旋混匀，转移至5mL离心管中，加3mL正己烷，混匀，静置分层，弃上层正己烷层。再加入3mL正己烷，涡旋混匀，3000r/min离心2min，弃去正己烷层，下层液体加水稀释至5mL准备过柱。

4.1.2样品的净化

分子印迹SPE柱首先用10mL甲醇和10mL体积比为5％的甲醇水依次润洗，然后加入样品提取液5mL，经体积比为10％的甲醇水5mL淋洗后，用甲醇乙酸混合液(V/V，9∶1)8mL洗脱。洗脱液过0.22μm的有机膜后35℃减压蒸干，残渣用1.0mL体积比为1％的的乙酸水溶液定容，供高效液相色谱法测定。

4.1.3高效液相色谱法测定回收率

标准溶液的配制：分别配成浓度为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的标准工作液。每个浓度点做5个重复，共重复5天，做校正曲线。

色谱条件：色谱柱Angilent Zarbax SB C18，250mm×4.6mm(i.d.)，流动相甲醇-1％(体积比)乙酸水溶液(V/V，15∶85)，检测波长270nm。经测定，其在不同基质中的回收率见表1(每个样品平行测定3次)。

表1分子印迹固相萃取柱在不同基质中的回收率

本发明的效果为，该固相萃取小柱对具有专一性选择性，其经10mL甲醇乙酸混合液(V/V，9∶1)和10mL甲醇依次再生后，可在猪肌肉和猪肝脏中可连续使用5次和10次，且回收率均大于80％，对其他类似物无特异性吸附作用。

4.2实施例3.2制备分子印迹固相萃取柱的应用

样品提取方法与实施例4.1.1相同，采用实施例3.2制备分子印迹固相萃取柱进行净化，采用高效液相色谱法对其回收率进行测定(每个样品平行测定3次)，色谱条件同实施例4.1.3(结果见表2)。

表2分子印迹固相萃取柱在不同基质中的回收率

本发明的效果为，该固相萃取小柱对具有专一性选择性，其经8mL甲醇乙酸混合液(V/V，9∶1)和8mL甲醇依次再生后，可在猪肌肉和猪肝脏中可连续使用5次和10次，且回收率均大于80％，对其他类似物无特异性吸附作用。

4.2实施例3.2制备分子印迹固相萃取柱的应用

样品提取方法与实施例4.1.1相同，采用实施例3.3制备分子印迹固相萃取柱进行净化，采用高效液相色谱法对其在不同基质中的回收率进行测定(每个样品平行测定3次)，色谱条件同实施例子4.1.3(结果见表3)。

表3分子印迹固相萃取柱在不同基质中的回收率

本发明的效果为，该固相萃取小柱对具有专一性选择性，其经11mL甲醇乙酸混合液(V/V，9∶1)和11mL甲醇依次再生后，可在猪肌肉和猪肝脏中可连续使用5次和10次，且回收率均大于80％，对其他类似物无特异性吸附作用。

Claims (7)

1.一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其步骤是：

1)先将模板分子、功能单体以及交联剂，按照模板分子∶功能单体∶交联剂摩尔比为1∶3-6∶15-30混合通过本体聚合法合成磺胺类药物分子印迹聚合物颗粒；

所述的模板分子为磺胺二甲嘧啶；

所述的功能单体是甲基丙烯酸、丙稀酰胺、4-乙烯基吡啶或/和甲基丙烯酸酯其中的一种或两种的任意组合；

所述的交联剂是为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或乙二醇二甲基丙烯酸酯；

2)对步骤1)所得的印迹聚合物颗粒进行表征，以确证其特异性吸附位点的存在；

3)将步骤1)的印迹聚合物颗粒用湿法装填固相萃取小柱，依次用甲醇和丙酮润洗，真空密封于锡箔袋中备用；

所述的磺胺类药物分子印迹聚合物，其制备步骤如下：

a)先将摩尔比为1∶3-6的模板分子磺胺二甲嘧啶与功能单体甲基丙烯酸、丙稀酰胺、4-乙烯基吡啶或/和甲基丙烯酸酯中的一种或两种溶解在致孔剂乙腈中，得到模板分子与功能单体的混合溶液，所述的致孔剂用量为7mL-30mL；

b)将步骤a)的混合溶液用超声清洗仪超声5min，混合均匀，放入4℃冰箱孵育24h，得到预聚合体系；

c)将步骤b)的预聚合体系转入石英反应试管中，向反应体系中加入交联剂和引发剂，所述的交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或乙二醇二甲基丙烯酸酯，加入量为功能单体摩尔量的5倍；

所述的引发剂是过氧化苯甲酰或偶氮二异丁腈，加入量为功能单体摩尔量的0.2倍，然后用超声清洗仪超声5min，通入氮气除氧5min，并在氮气氛或真空状态下密封；

d)在光强为0.5W/m2的紫外光下引发所述的预聚合体系，引发温度0℃-10℃，聚合时间12h-60h，得到磺胺二甲嘧啶的块状MIPs；

e)将步骤d)中的印迹聚合物直接研磨，过分级筛，选取直径为50μm-70μm的颗粒，用定量滤纸包裹后，用索氏萃取溶剂索氏萃取24h-150h，然后用丙酮漂洗数次，60℃烘干至恒重，得到印迹聚合物颗粒。

2.根据权利要求1所述的一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征是，所述的步骤2)中称量的印迹聚合物的质量为50mg-300mg，填充于1mL-6mL聚丙烯固相萃取空柱管中。

3.根据权利要求1所述的一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征是，所述步骤1)的功能单体为甲基丙烯酸、丙稀酰胺、4-乙烯基吡啶或/和甲基丙烯酸酯其中的一种或两种的任意组合。

4.根据权利要求1所述的一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征是，所述步骤1)所述的致孔剂用量为10mL-20mL。

5.根据权利要求1所述的一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征是，所述步骤d)的引发温度为1℃-4℃，所述的聚合时间为24h-48h。

6.根据权利要求1所述的一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征是，所述步骤e)中的索氏萃取溶剂为甲醇-盐酸混合溶剂，所述的甲醇与盐酸按体积比为7∶3配制。

7.权利要求1所述的一种磺胺类药物分子印迹固相萃取小柱在动物源性食品中磺胺类药物检测中的应用。

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