CN103288823B

CN103288823B - N,n’-芳基取代脲类化合物及其用途

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Publication number: CN103288823B
Application number: CN201210042530.3A
Authority: CN
Inventors: 李剑; 丁鹏; 陈玉龙; 朱进; 黄皇; 吴德燕; 刘璐琳; 刘云霞
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2012-02-23
Filing date: 2012-02-23
Publication date: 2015-02-18
Anticipated expiration: 2032-02-23
Also published as: CN103288823A

Abstract

本发明主要涉及N，N’-芳基取代脲类化合物及其用途。所述N，N’-芳基取代脲类化合物为式I所示化合物，或其与可药用酸或碱所成的盐。本发明所提供的化合物对三种肿瘤组织血管新生相关的受体蛋白激酶(包括VEGFR2，FGFR1和PDGFRα)都表现出较强的抑制活性。这表明本发明化合物可以作为多靶点激酶抑制剂，针对实体瘤，开发成靶向抗肿瘤药物。

Description

N,N’-芳基取代脲类化合物及其用途

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，更具体涉及N，N’-芳基取代脲类化合物及其制备方法，该类化合物可作为多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药。

背景技术

根据卫生部肿瘤防治办公室提供的相关数据，恶性肿瘤已成为我国第二大致死疾病(城镇居民第一大致死疾病)。数据称，我国男、女性恶性肿瘤新发病率分别为130.3～305.4/10万人和39.5～248.7/10万人，发病率逐年上升，肺癌、乳腺癌分别位居男、女性恶性肿瘤发病率的首位。据预测，到2020年，中国将有550万新发癌症病例，其中死亡人数将达到400万。

目前，肿瘤外科学、肿瘤放射治疗学、肿瘤化学治疗学构成了现代肿瘤治疗学的三大支柱，3种手段互有特点，互为补充。相对于手术和放疗，近年来，化疗的进展最为迅速，在临床需求和新品上市的共同推动下，医院抗肿瘤药物市场成为国内医院药物市场增速最快的类别。全国抗肿瘤药物销售额近60个亿，年均复合增长率超过40％，抗肿瘤药物成为国内医院用药增速最快的类别。

根据作用机理和药物来源等的不同，临床上一般将传统抗肿瘤药物分为烷化剂、抗代谢、植物碱、激素和抗生素5个主要类别。近年来，单抗类和小分子酪氨酸激酶抑制剂药物推动了抗肿瘤药物市场的发展，而且新型药物的增速远高于传统药物。但目前我国市场上新型药物占抗肿瘤药物的份额依旧较低，临床上广泛应用的依然是传统药物。主要的原因之一是因为国产新药品种太少，国外专利品种药物治疗价格昂贵。

新血管的生成对于体积超过2-3mm³的实体瘤生长是必需的，不仅为肿瘤提供营养和氧气，同时也是肿瘤细胞进入系统循环和转移的通路。肿瘤细胞分泌多种血管生成因子调控其组织内血管的新生，目前已知活性最强、专属性最高的血管生成因子为血管内皮生长因子(VEGF)。因此，干预VEGF及其受体(VEGFR)信号系统以调节肿瘤血管生成，已成为靶向抗肿瘤药物的热点。VEGF与受体结合后，致其同源或异源二聚化，从而引起受体胞内激酶区域自身磷酸化，激活信号系统的级联反应，引起细胞增殖和分化，促进肿瘤进展。有两种策略可以针对这条信号转到通路来达到抗肿瘤的效果：1)应用VEGF单克隆抗体，干扰VEGF与其膜受体VEGFR结合，切断膜受体接受膜外的肿瘤生长信号；2)应用小分子激酶抑制剂与ATP竞争结合VEGFR的胞内激酶域，干扰VEGFR的磷酸化催化作用，切断肿瘤生长信号向下游传导。近年来，作为很有希望的抗血管生成药物，靶向VEGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂的研发取得了长足进展，已有30多个用于治疗癌症的VEGFR抑制剂正处于各种开发阶段，目前已有三个靶向VEGFR的抗肿瘤药物上市，分别是Sorafenib，Sunitinib和Pazopanib。尽管这些药物疗效非常好。但有3个明显的缺点：(1)价格昂贵，一个月的治疗费用约5万元；(2)治疗疗程较长；(3)目前已发现耐性性。在如此形势下，开发新型的抗肿瘤药物刻不容缓。

除了VEGF/VEGFR信号通路外，血小板衍生生长因子(PDGF)及其受体PDGFR组成的信号通路通过调控血管组织细胞(如平滑肌细胞和周皮细胞)的增殖和存活来间接影响血管的形成和稳定化，因此PDGFR抑制剂被认为可以和VEGFR抑制剂起到协同抗肿瘤血管新生的作用。进一步的研究表明，成纤维细胞生长因子(FGF)及其受体FGFR组成的信号通路是VEGF/VEGFR信号通路的补偿旁路，当VEGF/VEGFR信号通路被过度抑制后，肿瘤细胞会逃逸性的转向依赖FGF/FGFR信号通路，得以继续存活和增殖。从这些研究结果可以看出，单一性抑制VEGF/VEGFR信号通路可能并不能获得理想的抗肿瘤血管新生的效果。

多靶点抑制肿瘤特异信号转导通路是肿瘤治疗和药物开发的新方向，相对于单靶点药物和多种单靶点药物联用来说，多靶点药物具有更多优越性，可避免产生药物相互作用，作用全面，不良反应减少，且患者的依从性更佳。综上所述，开发多靶点(VEGFR&PDGFR&FGFR)、靶向肿瘤血管新生相关信号通路的治疗药物预期可以产生优良的抗肿瘤效果。

发明内容

本发明所涉及的化合物具有全新的N，N’-芳基取代脲类结构，并选取3种肿瘤组织血管生成密切相关的受体蛋白激酶(包括VEGFR-2，FGFR-1和PDGFR-α)，进行的激酶抑制活性测试，活性结果显示，本发明部分化合物对三种激酶都具有较强的抑制活性，为今后进一步设计开发新型多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物奠定了基础。

本发明的一个目的是，提供一种N，N’-芳基取代脲类化合物，其为式I所示化合物，或其(与可药用酸或碱所成的)盐：

式I中：R₁为式II或式III所示基团，R₂为六元芳环基或取代六元芳环基，

其中，R₃为H或C₁～C₆烷基，所述取代六元芳环基的取代基选自：C₁～C₆烷基、C₁～C₆全氟烷基、卤素(F、Cl、Br或I)、C₁～C₆烷氧基、C₁～C₆全氟烷氧基、羟基、氰基、硝基、羟甲基或C₁～C₄酰基中一种或二种以上(含二种)，取代基的个数为1～4的整数。

本发明还揭示了上述化合物(式I所示化合物)的一种用途，即其在制备治疗实体瘤(体积＞2-3mm³)的药物中应用。

具体实施方式

在本发明一个优选的技术方案中，R₁为式II所示取代基，其中R₃为H或C₁～C₃烷基；

更优选的技术方案是：R₁为式II所示取代基，其中R₃为H或甲基。

在本发明另一个优选的技术方案中，R₁为式III所示取代基，其中R₃为H或C₁～C₃烷基；

更优选的技术方案是：R₁为式III所示取代基，其中R₃为H或甲基。

在本发明又一个优选的技术方案中，R₂为苯基或取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：C₁～C₃烷基、C₁～C₃全氟烷基或卤素(F、Cl、Br或I)中一种或二种以上(含二种)，取代基的个数为1～3的整数；

更优选的技术方案是：R₂为取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：甲基、乙基、三氟甲基、F、Cl或Br中一种或二种以上(含二种)，取代基的个数为1或2；

最佳的R₂是：邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、间乙基苯基、邻氟苯基、间氟苯基、间溴苯基、间三氟甲基苯基、间氯苯基或2-氟-5-甲基苯基。

本发明还提供通式I结构的N，N’-芳基取代脲类化合物I_A～I_B及其中间体IV～VII的制备方法，具体合成策略分别如下。

I_A的合成：

式中，R₄选自：H、C₁～C₃烷基、C₁～C₃全氟烷基或卤素(F、Cl、Br或I)中一种或二种以上(含二种)，取代基的个数(n)为1～3的整数，R₃的含义与前文所述相同。

1)将3-R₃-5-氨基-1H-吡唑，对硝基苯甲醛和2，2-二甲基-1，3-二氧六环-4，6-二酮加入圆底烧瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶解后在其沸点温度下加热直到没有CO₂放出为止。溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入适量的异丙醇稀释。过滤，固体用N，N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶液(N，N-二甲基甲酰胺∶异丙醇＝1∶2)洗后得中间体3-R₃-4-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体IV)。

2)将中间体IV溶于甲醇中，在Pd/C催化下，室温下进行氢化还原反应5小时。反应结束后用稀盐酸将反应液调至pH＝4，然后抽滤除去Pd/C。再用饱和NaHCO₃调节pH＞7后，析出固体，抽滤水洗烘干得中间体3-R₃-4-(4-氨基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V)。

3)将中间体V溶于适量的二甲亚砜中，加入R₄取代的苯异氰酸酯，再加入三乙胺后室温反应8小时。实验结束后，加水析出固体，抽滤，用甲苯洗滤饼，最后滤饼用乙酸乙酯重结晶得化合物N-(R₄-苯基)-N’-[4-(3-R₃-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(I_A)。

I_B的合成：

1)将中间体IV、2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌和N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺溶于二氧六环中，回流过夜。反应结束后将反应液用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，固体从溶液中析出。抽滤，依次用乙酸乙酯和水洗滤饼，滤饼烘干得中间体3-R₃-4-(4-硝基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VI)。

2)将中间体VI和氯化亚锡溶于乙醇中，回流过夜。反应结束后，用饱和Na₂CO₃溶液调反应液至pH＝10。抽滤，用大量乙醇洗滤饼，滤液蒸干后得中间体3-R₃-4-(4-氨基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VII)。

3)将中间体VII溶于适量的二甲亚砜中，加入R₄取代的苯异氰酸酯，再加入三乙胺后室温反应8小时。实验结束后，加水析出固体，抽滤，用甲苯洗滤饼，最后滤饼用甲醇重结晶得化合物N-(R₂-苯基)-N’-[4-(3-R₃-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(I_B)。

根据上述制备方法的教导，本领域普通技术人员无需创造性劳动，即可获得式I所包含的所有化合物。

在以下的实施例中将进一步举例说明本发明。这些实施例仅用于说明本发明，但不以任何方式限制本发明的保护范围。实施例中的所有参数以及其余的说明，除另有说明外，都是以质量(克)为单位。

实施例1

3-甲基-4-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体IV-1)的制备

将0.97克3-甲基-5-氨基-1H-吡唑，1.51克对硝基苯甲醛和1.44克2，2-二甲基-1，3-二氧六环-4，6-二酮投入50毫升圆底烧瓶中，用5毫升的N，N-二甲基甲酰胺溶解后，加热回流反应至没有CO₂放出为止。溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入20毫升的异丙醇稀释。抽滤，固体用N，N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶液(N，N-二甲基甲酰胺∶异丙醇＝1∶2)洗涤，干燥后得标题化合物，1.72克白色固体，收率63％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.86(s，3H)，2.58(dd，J₁＝16Hz，J₂＝5.6Hz)，2.88(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，4.36(t，J＝6.4Hz，1H)，7.51(d，J＝8.8Hz，2H)，8.19(d，J＝8.8Hz，2H)，10.39(s，1H)，11.90(s，1H)。

实施例2

4-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体IV-2)的制备

将0.83克5-氨基-1H-吡唑1.51克对硝基苯甲醛和1.44克2，2-二甲基-1，3-二氧六环-4，6-二酮投入50毫升圆底烧瓶中，用5毫升的N，N-二甲基甲酰胺溶解后，加热回流反应至没有CO₂放出为止。溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入20毫升的异丙醇稀释。抽滤，固体用N，N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶液(N，N-二甲基甲酰胺∶异丙醇＝1∶2)洗涤，干燥后得标题化合物，1.53克白色固体，收率59％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.63(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，2.83(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.43(t，J＝7.2Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.51(d，J＝8.4Hz，2H)，8.20(d，J＝8.4Hz，2H)，10.49(s，1H)，12.20(s，1H)。

实施例3

3-甲基-4-(4-氨基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V-1)的制备

将1.36克中间体IV-1溶于20毫升甲醇中，加入136毫克10％的Pd/C，进行催化氢化反应。在室温下反应5小时。反应结束后，用稀盐酸调节反应液至pH＝4，然后抽滤除去Pd/C。再用饱和NaHCO₃调滤液至pH＞7后，析出固体，抽滤，水洗，烘干得0.91克白色固体(中间体V-1)，收率是66％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.82(s，3H)，2.48(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，2.68(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，3.93(t，J＝6.4Hz，1H)，4.93(s，2H)，6.48(d，J＝8.4Hz，2H)，6.81(d，J＝8.4Hz，2H)，10.21(s，1H)，11.73(s，1H)。

实施例4

4-(4-氨基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V-2)的制备

将1.29克中间体IV-2溶于20毫升甲醇中，加入129毫克10％的Pd/C，进行催化氢化反应。在室温下反应5小时。反应结束后，用稀盐酸调节反应液至pH＝4，然后抽滤除去Pd/C。再用饱和NaHCO₃调滤液至pH＞7后，析出固体，抽滤，水洗，烘干得0.85克白色固体(中间体V-2)，收率是74％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.49(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.6Hz，1H)，2.64(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.00(t，J＝7.2Hz，1H)，4.93(s，2H)，6.49(d，J＝8.0Hz，2H)，6.86(d，J＝8.4Hz，2H)，7.22(s，1H)，10.32(s，1H)，12.03(s，1H)。

实施例5

3-甲基-4-(4-硝基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VI-1)的制备

将400毫克中间体IV-1溶于20毫升二氧六环中，然后加入1.76毫升N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，再加入403毫克2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，回流过夜。反应结束后将反应液用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，固体从溶液中析出。抽滤，依次用乙酸乙酯和水洗滤饼，滤饼烘干得205毫克淡黄色固体(中间体VI-1)，收率是51％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.01(s，3H)，6.01(s，1H)，7.79(d，J＝8.4Hz，2H)，8.34(d，J＝8.8Hz，2H)。

实施例6

4-(4-硝基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VI-2)的制备

将380毫克中间体IV-2溶于20毫升二氧六环中，然后加入1.76毫升N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，再加入403毫克2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，回流过夜。反应结束后将反应液用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，固体从溶液中析出。抽滤，依次用乙酸乙酯和水洗滤饼，滤饼烘干得183毫克淡黄色固体(中间体VI-2)，收率是48％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：6.37(s，1H)，8.03(d，J＝8.8Hz，2H)，8.07(s，1H)，8.35(d，J＝8.8Hz，2H)。

实施例7

3-甲基-4-(4-氨基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VII-1)的制备。

将1克中间体VI-1加入圆底烧瓶中，用25毫升乙醇溶解，再加入4.97克二水合氯化亚锡，回流过夜。反应结束后，将反应液倒入烧杯中，用饱和Na₂CO₃溶液调至pH＝10后析出固体。抽滤，滤饼用大量乙醇洗，最后把滤液蒸干后得220毫克白色固体(中间体VII-1)，收率是23％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.13(s，3H)，5.38(s，2H)，5.78(s，1H)，6.65(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)。

实施例8

4-(4-氨基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VII-2)的制备。

将0.95克中间体VI-2加入圆底烧瓶中，用25毫升乙醇溶解，再加入4.97克二水合氯化亚锡，回流过夜。反应结束后，将反应液倒入烧杯中，用饱和Na₂CO₃溶液调至pH＝10后析出固体。抽滤，滤饼用大量乙醇洗，最后把滤液蒸干后得146毫克白色固体(中间体VII-2)，收率是17％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：5.54(s，2H)，6.11(s，1H)，6.68(d，J＝8.4Hz，2H)，7.46(d，J＝8.4Hz，2H)，8.13(s，1H)。

实施例9

N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-1)的制备

将50毫克3-甲基-4-(4-氨基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑并[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V-1)溶于1毫升二甲基亚砜中，加入30μL邻甲基苯异氰酸酯，最后加入15μL三乙胺，室温反应10小时。实验结束后，加水析出固体，抽滤，用甲苯洗滤饼，滤饼乙酸乙酯重结晶，得39毫克白色固体，收率51％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.84(s，3H)，2.23(s，3H)，2.43(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.OHz，1H)，2.60(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.08(t，J＝6.4Hz 1H)，6.93(t，J＝7.2Hz，1H)，7.07(d，J＝8.4，2H)，7.11-7.18(m，2H)，7.39(d，J＝8.4，2H)，7.83(d，J＝8.4，1H)，7.93(s，1H)，9.06(s，1H)，10.28(s，1H)，11.80(s，1H)；MS(ESI)m/z 376.1[M+1]⁺。

实施例10

N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-2)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成间甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体34毫克，收率43％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.28(s，3H)，2.55(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，2.77(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，4.09(t，J＝6.0Hz，1H)，6.78(d，J＝7.6Hz，1H)，7.08(d，J＝8.4Hz，2H)，7.15(t，J＝8.0Hz，1H)，7.21(d，J＝8.4Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，8.54(s，1H)，8.60(s，1H)，10.27(s，1H)，11.80(s，1H)；MS(ESI)m/z 376.1[M+1]⁺。

实施例11

N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-3)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成对甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体38毫克，收率49％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.24(s，3H)，2.54(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，2.76(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，4.08(t，J＝6.4Hz，1H)，7.06(d，J＝2.0Hz，2H)，7.09(d，J＝2.4Hz，2H)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.8Hz，2H)，8.51(s，1H)，8.57(s，1H)，10.27(s，1H)，11.79(s，1H)；MS(ESI)m/z 376.1[M+1]⁺。

实施例12

N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-4)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-乙基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体36毫克，收率45％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.18(t，J＝7.6Hz，3H)，1.85(s，3H)，2.53-2.60(m，3H)，2.77(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.09(t，J＝6.4Hz，1H)，6.82(d，J＝7.6Hz，1H)，7.08(d，J＝8.4Hz，2H)，7.17(t，J＝8Hz，1H)，7.23(d，J＝8.4Hz，1H)，7.31(s，1H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，8.56(s，1H)，8.59(s，1H)，10.28(s，1H)，11.79(s，1H)；MS(ESI)m/z 390.1[M+1]⁺。

实施例13

N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-5)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体43毫克，收率55％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.55(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，2.77(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，4.09(t，J＝6.4Hz，1H)，6.77(t，J＝8.8Hz，1H)，7.09(d，J＝8.8Hz，2H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29(dd，J₁＝15.2Hz，J₂＝8.0Hz，1H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，7.49(d，J＝12Hz，1H)，8.88(s，1H)，9.06(s，1H)，10.28(s，1H)；MS(ESI)m/z 380.1[M+1]⁺。

实施例14

N-(2-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-6)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体41毫克，收率52％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.55(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，2.77(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.10(t，J＝6.4Hz，1H)，6.90-7.03(m，1H)，7.10(d，J＝8.8Hz，2H)，7.13(t，J＝7.6Hz，1H)，7.20-7.26(m，1H)，7.39(d，J＝8.8Hz，2H)，8.15(t，J＝8.0Hz，1H)，8.53(s，1H)，9.06(s，1H)，10.28(s，1H)，11.79(s，1H)；MS(ESI)m/z 380.2[M+1]⁺。

实施例15

N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-7)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-溴苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体53毫克，收率58％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.55(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4HZ，1H)，2.77(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，4.10(t，J＝6.4Hz，1H)，7.08(d，J＝8.4Hz，2H)，7.14(d，J＝7.6Hz，1H)，7.23(t，J＝8Hz，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.85(s，1H)，8.71(s，1H)，8.84(s，1H)，10.27(s，1H)，11.79(s，1H)；MS(ESI)m/z 440.0[M+1}⁺。

实施例16

N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-8)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体31毫克，收率35％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.55(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，2.77(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.10(t，J＝6.4Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，2H)，7.31(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39(d，J＝8.8Hz，2H)，7.51(t，J＝8Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.75(s，1H)，9.01(s，1H)，10.28(s，1H)，11.80(s，1H)；MS(ESI)m/z 430.1[M+1]⁺。

实施例17

N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-9)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氯苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体38毫克，收率47％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.55(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，2.77(dd，J₁＝16Hz，J₂＝7.2Hz，1H)，4.09(t，J＝6.4Hz，1H)，7.01(d，J＝7.6Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，2H)，7.24-7.32(m，2H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.70(s，1H)，8.73(s，1H)，8.88(s，1H)，10.28(s，1H)，11.80(s，1H)；MS(ESI)m/z 396.0[M+1]⁺。

实施例18

N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-10)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟-5-甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例9，得标题化合物，白色固体17毫克，收率21％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.85(s，3H)，2.27(s，3H)，2.55(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，2.77(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.10(t，J＝6.4Hz，1H)，6.77-6.81(m，1H)，7.07-7.12(m，3H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.99(dd，J₁＝8.0Hz，J₂＝2.0Hz，1H)，8.44(s，1H)，9.03(s，1H)，10.28(s，1H)，11.80(s，1H)；MS(ESI)m/z 393.1[M+1]⁺。

实施例19

N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-11)的制备

将50毫克4-(4-氨基苯基)-4，5-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V-2)溶于1毫升二甲基亚砜中，加入30μL邻甲基苯异氰酸酯，最后加入15μL三乙胺，室温反应10小时。实验结束后，加水析出固体，抽滤，用甲苯洗滤饼，最后滤饼用乙酸乙酯重结晶，得淡黄色固体28毫克，收率35％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.24(s，3H)，2.57(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝7.6Hz，1H)，2.73(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.17(t，J＝7.2Hz，1H)，6.94(t，J＝7.2Hz，1H)，7.13-7.18(m，4H)，7.28(s，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.84(d，J＝7.6Hz，1H)，7.89(s，1H)，8.99(s，1H)，10.37(s，1H)；MS(ESI)m/z 362.1[M+1]⁺。

实施例20

N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-12)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成间甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，白色固体30毫克，收率38％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.28(s，3H)，2.57(dd，J₁＝16Hz，J₂＝8Hz，1H)，2.72(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.16(t，J＝6.8Hz，1H)，6.78(d，J＝7.2Hz，1H)，7.11-7.17(m，3H)，7.22(d，J＝8.4Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.29(s，1H)，7.38(d，J＝8.8Hz，2H)，8.56(s，1H)，8.62(s，1H)，10.38(s，1H)，12.08(s，1H)；MS(ESI)m/z 384.1[M+23]⁺。

实施例21

N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-13)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成对甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，白色固体27毫克，收率34％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.24(s，3H)，2.57(dd，J₁＝16Hz，J₂＝8Hz，1H)，2.72(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.16(t，J＝6.8Hz，1H)，7.08(d，J＝8Hz，2H)，7.12(d，J＝8.4Hz，2H)，7.27(s，1H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，7.38(d，J＝8.8Hz，2H)，8.60(s，1H)，8.67(s，1H)，10.37(s，1H)；MS(ESI)m/z 384.1[M+23]⁺。

实施例22

N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-14)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-乙基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，淡黄色固体27毫克，收率33％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.18(t，J＝7.6Hz，3H)，2.54-2.6(m，3H)，2.73(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.16(t，J＝7.2Hz，1H)，6.82(d，J＝7.6Hz，1H)，7.13(d，J＝8.4Hz，2H)，7.18(d，J＝7.6Hz，1H)，7.24(d，J＝8Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.31(s，1H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，8.56(s，1H)，8.60(s，1H)，10.39(s，1H)，12.09(s，1H)；MS(ESI)m/z 376.1[M+1]⁺。

实施例23

N-(3-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-15)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，淡黄色固体33毫克，收率41％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.57(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝7.6Hz，1H)，2.73(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.17(t，J＝7.2Hz，1H)，6.75-6.81(m，1H)，7.11(d，J＝7.6Hz，1H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，7.26-7.33(m，2H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，7.49(d，J＝12Hz，1H)，8.70(s，1H)，8.87(s，1H)，10.39(s，1H)，12.09(s，1H)；MS(ESI)m/z 366.0[M+1]⁺。

实施例24

N-(2-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-16)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，白色固体18毫克，收率23％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.57(dd，J₁＝16Hz，J₂＝8Hz，1H)，2.72(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz，1H)，4.17(t，J＝7.2Hz，1H)，6.96-7.03(m，1H)，7.11-7.14(m，3H)，7.20-7.26(m，1H)，7.28(s，1H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，8.15(t，J＝8.4Hz，1H)，8.53(s，1H)，9.05(s，1H)，10.40(s，1H)，12.10(s，1H)；MS(ESI)m/z 366.0[M+1]⁺。

实施例25

N-(3-溴苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-17)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-溴苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，白色固体19毫克，收率21％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.57(dd，J₁＝16Hz，J₂＝8Hz，1H)，2.72(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.17(t，J＝7.2Hz，1H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，7.23(t，J＝8Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.29(d，J＝8.8Hz，1H)，7.39(d，J＝8.8Hz，2H)，7.85(s，1H)，8.73(s，1H)，8.86(s，1H)，10.40(s，1H)，12.10(s，1H)；MS(ESI)m/z 426.0[M+1]⁺。

实施例26

N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-18)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，白色固体15毫克，收率17％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.57(dd，J₁＝16Hz，J₂＝8Hz，1H)，2.73(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.8Hz，1H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.51(t，J＝8.0Hz，1H)，7.57(d，J＝8.8Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.78(s，1H)，9.03(s，1H)，10.39(s，1H)，12.09(s，1H)；MS(ESI)m/z 416.1[M+1]⁺。

实施例27

N-(3-氯苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-19)的制备

除了将邻甲基异氰酸酯替换成3-氯苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，淡黄色固体16毫克，收率19％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.57(dd，J₁＝16Hz，J₂＝8Hz，1H)，2.73(dd，J₁＝16Hz，J₂＝6.8Hz)，4.17(t，J＝7.2Hz，1H)，6.99-7.03(m，1H)，7.14(d，J＝8.8Hz，2H)，7.24-7.30(m，3H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，7.71(s，1H)，8.72(s，1H)，8.86(s，1H)，10.38(s，1H)，12.08(s，1H)；MS(ESI)m/z 404.0[M+23]⁺。

实施例28

N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_A-20)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟-5-甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例19，得标题化合物，白色固体11毫克，收率13％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.27(s，3H)，2.57(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝7.6Hz，1H)，2.73(dd，J₁＝15.6Hz，J₂＝6.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.8Hz，1H)，6.77-6.81(m，1H)，7.10(dd，J₁＝11.6Hz，J₂＝8.4Hz，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，7.99(d，J＝8Hz，1H)，8.44(s，1H)，9.03(s，1H)，10.38(s，1H)，12.08(s，1H)；MS(ESI)m/z 380.0[M+1]⁺。

实施例29

N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-1)的制备

将50毫克3-甲基-4-(4-氨基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VII-1)溶于1毫升二甲基亚砜中，加入30μL邻甲基异氰酸酯，最后加入15μL三乙胺，室温反应10小时。实验结束后，加水析出固体，抽滤，用甲苯洗滤饼，最后滤饼用甲醇重结晶，得白色固体13毫克，收率17％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，2.27(s，3H)，5.85(s，1H)，6.97(t，J＝7.2Hz，1H)，7.15-7.21(m，2H)，7.42(d，J＝8.8Hz，2H)，7.59(d，J＝8.4Hz，2H)，7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，8.00(s，1H)，9.22(s，1H)；MS(ESI)m/z 374.1[M+1]⁺。

实施例30

N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-2)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成间甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体14毫克，收率18％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，2.29(s，3H)，5.86(s，1H)，6.81(d，J＝7.2Hz，1H)，7.17(t，J＝7.6Hz，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.42(d，J＝8.4Hz，2H)，7.58(d，J＝8.4Hz，2H)，8.68(s，1H)，8.87(s，1H)；MS(ESI)m/z 374.1[M+1]⁺。

实施例31

N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-3)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成对甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体19毫克，收率25％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，2.26(s，3H)，5.85(s，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，2H)，7.36(d，J＝8.4Hz，2H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.57(d，J＝8.4Hz，2H)，8.62(s，1H)，8.82(s，1H)，11.54(s，1H)，12.87(s，1H)；MS(ESI)m/z 374.1[M+1]⁺。

实施例32

N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-4)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-乙基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体14毫克，收率17％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.18(t，J＝7.6Hz，3H)，2.10(s，3H)，2.58(q，J＝7.6Hz，2H)，5.86(s，1H)，6.84(d，J＝7.6Hz，1H)，7.19(t，J＝7.6Hz，1H)，7.27(d，J＝8.8Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.58(d，J＝8.4Hz，2H)，8.69(s，1H)，8.86(s，1H)；MS(ESI)m/z388.1[M+1]⁺。

实施例33

N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-5)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，白色固体16毫克，收率21％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，5.87(s，1H)，6.77-6.83(m，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，7.32(dd，J₁＝15.2Hz，J₂＝8.4Hz，1H)，7.43(d，J＝8.8Hz，2H)，7.49-7.54(m，1H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，8.96(s，1H)，8.99(s，1H)；MS(ESI)m/z 378.0[M+1]⁺。

实施例34

N-(2-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-6)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体14毫克，收率18％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，5.88(s，1H)，7.00-7.06(m，1H)，7.14(t，J＝7.6Hz，1H)，7.22-7.29(m，1H)，7.44(d，J＝8.8Hz，2H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，8.14-8.20(m，1H)，8.63(s，1H)，9.28(s，1H)；MS(ESI)m/z 378.0[M+1]⁺。

实施例35

N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-7)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-溴苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体21毫克，收率23％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，5.88(s，1H)，7.16(d，J＝7.6Hz，1H)，7.25(t，J＝8.0Hz，1H)，7.34(t，J＝8.0Hz，1H)，7.43(d，J＝8.4Hz 2H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，7.88(s，1H)，9.14(s，1H)；MS(ESI)m/z 438.0[M+1]⁺。

实施例36

N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-8)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体20毫克，收率23％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，5.87(s，1H)，7.33(d，J＝7.6Hz，1H)，7.44(d，J＝8.4Hz，2H)，7.53(t，J＝7.6Hz，1H)，7.61(d，J＝8.4Hz，3H)，8.05(s，1H)，9.03(s，1H)，9.15(s，1H)；MS(ESI)m/z 428.1[M+1]⁺。

实施例37

N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-9)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氯苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，白色固体12毫克，收率15％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.08(s，3H)，5.88(s，1H)，7.00-7.03(m，1H)，7.28-7.34(m，1H)，7.41(d，J＝8.8Hz，2H)，7.61(d，J＝8.4Hz，2H)，7.75(s，1H)；MS(ESI)m/z 394.0[M+1]⁺。

实施例38

N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-10)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟-5-甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得标题化合物，淡黄色固体9毫克，收率11％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.10(s，3H)，2.28(s，3H)，5.88(s，1H)，6.80-6.84(m，1H)，7.12(dd，J₁＝11.2Hz，J₂＝8.0Hz，1H)，7.43(d，J＝8.4Hz，2H)，7.58(d，J＝8.8Hz，2H)，7.98-8.02(m，1H)，8.55(s，1H)，9.25(s，1H)；MS(ESI)m/z 414.1[M+23]⁺。

实施例39

N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-11)的制备

将50毫克4-(4-氨基苯基)-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VII-2)溶于1毫升二甲基亚砜中，加入30μL邻甲基异氰酸酯，最后加入15μL三乙胺，室温反应10小时。实验结束后，加水析出固体，抽滤，用甲苯洗滤饼，最后滤饼用甲醇重结晶，得淡黄色固体10毫克，收率13％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.27(s，3H)，6.23(s，1H)，6.97(t，J＝7.2Hz，1H)，7.15-7.21(m，2H)，7.63(d，J＝8.8Hz，2H)，7.71(d，J＝8.8Hz，2H)，7.85(d，J＝8.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，8.20(s，1H)，9.29(s，1H)；MS(ESI)m/z 360.1[M+1]⁺。

实施例40

N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-12)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成间甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，白色固体12毫克，收率16％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.30(s，3H)，6.24(s，1H)，6.81(d，J＝7.6Hz，1H)，7.15(t，J＝8.0Hz，1H)，7.18(t，J＝8.0Hz，1H)，7.22(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，8.19(s，1H)，8.64(s，1H)；MS(ESI)m/z 360.0[M+1]⁺。

实施例41

N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-13)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成对甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，白色固体18毫克，收率23％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.26(s，3H)，6.24(s，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.70(d，J＝8.8Hz，2H)，8.20(s，1H)，8.86(s，1H)，9.14(s，1H)；MS(ESI)m/z 360.1[M+1]⁺。

实施例42

N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-14)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-乙基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，白色固体12毫克，收率15％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.19(t，J＝7.6Hz，3H)，2.59(q，J＝7.6Hz，2H)，6.22(s，1H)，6.85(d，J＝7.2Hz，1H)，7.20(t，J＝7.6Hz，1H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.71(d，J＝8.4Hz，2H)，8.20(s，1H)，8.69(s，1H)，8.92(s，1H)；MS(ESI)m/z374.1[M+1]⁺。

实施例43

N-(3-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-15)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，淡黄色固体14毫克，收率18％

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：6.23(s，1H)，6.75-6.81(m，1H)，7.20(d，J＝8.4Hz，1H)，7.31(dd，J₁＝15.2Hz，J₂＝8.4Hz，1H)，7.52-7.57(m，1H)，7.66(d，J＝8.8Hz，2H)，7.71(d，J＝8.8Hz，2H)，8.10(s，1H)，9.75(br，2H)；MS(ESI)m/z 364.1[M+1]⁺。

实施例44

N-(2-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-16)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，淡黄色固体16毫克，收率21％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：6.24(s，1H)，7.01-7.07(m，1H)，7.17(t，J＝8.0Hz，1H)，7.23-7.29(m，1H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，8.15-8.20(m，2H)，8.63(s，1H)，9.34(s，1H)；MS(ESI)m/z 364.0[M+1]⁺。

实施例45

N-(3-溴苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-17)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-溴苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，淡黄色固体18毫克，收率20％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：6.23(s，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(t，J＝8.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，2H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.88(s，1H)，8.20(s，1H)，8.96(s，1H)，9.03(s，1H)；MS(ESI)m/z 424.0[M+1]⁺。

实施例46

N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-18)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，黄色固体11毫克，收率13％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：6.27(s，1H)，7.33(d，J＝7.6Hz，1H)，7.53(t，J＝8Hz，1H)，7.63(d，J＝8.8Hz，1H)，7.65(d，J＝8.8Hz，2H)，7.73(d，J＝8.4Hz，2H)，8.03(s，1H)，8.21(s，1H)，9.31(s，1H)，9.39(s，1H)；MS(ESI)m/z 414.0[M+1]⁺。

实施例47

N-(3-氯苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-19)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成3-氯苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，黄色固体19毫克，收率23％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：6.22(s，1H)，7.03-7.06(m，1H)，7.31-7.33(m，2H)，7.62(d，J＝8.4Hz，2H)，7.72(d，J＝8.8Hz，2H)，7.73(s，1H)，8.19(s，1H)，8.99(s，1H)，9.05(s，1H)；MS(ESI)m/z 380.0[M+1}⁺。

实施例48

N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物I_B-20)的制备

除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成2-氟-5-甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例39，得标题化合物，淡黄色固体11毫克，收率13％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.29(s，3H)，6.23(s，1H)，6.76(d，J＝8.0Hz，1H)，6.81-6.85(m，1H)，7.10-7.15(m，1H)，7.51(d，J＝8.4Hz，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，2H)，7.72(d，J＝8.8Hz，2H)，8.01(d，J＝8Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.56(s，1H)，9.34(s，1H)；MS(ESI)m/z 378.0[M+1]⁺。

实施例49

本发明的化合物抑制三种受体酪氨酸激酶的实验及活性结果

对合成的N，N’-芳基取代脲类化合物，选取3种酪氨酸受体激酶(包括PDGFRα，FGFR1和VEGFR2)，进行的抑制活性测试，活性数据如表1所示，共发现了15个本发明化合物对其PDGFRα有较强的抑制活性，半数有效抑制浓度IC₅₀＜1μM；12个本发明化合物对FGFR1有一定的抑制活性，半数有效抑制浓度1μM＜IC₅₀＜10μM；18个本发明化合物对VEGFR2有一定的抑制活性，半数有效抑制浓度IC₅₀＜10μM，其中3个本发明化合物对VEGFR2有较强的抑制活性，半数有效抑制浓度IC₅₀＜1μM。

表1.N，N’-芳基取代脲类化合物对三种激酶的抑制活性数据(IC₅₀，nM)

表1中PDGFRa代表血小板衍生生长因子受体α，FGFR1代表成纤维细胞生长因子受体1，VEGFR2代表血管内皮生长因子受体2。Linifanib为阳性对照药，是美国雅培公司推出的抗肿瘤候选药物，当前处于临床三期研究阶段。Staurosporine为阳性对照药，是一种天然产物类抗生素，通常作为工具化合物。

由表1可以看出，本发明的具有结构通式I的N，N’-芳基取代脲类化合物大部分具有较强的PDGFRα和VEGFR2抑制活性和一定的FGFR1抑制活性，说明本发明的化合物为多靶点受体酪氨酸激酶的抑制剂类抗肿瘤药。

产业上利用的可能性

本发明的N，N’-芳基取代脲类化合物分子结构较为简单，制备工艺简洁，生产成本低，在三种和肿瘤组织血管新生密切相关的受体酪氨酸激酶抑制实验中均显示出较强的抑制活性，因此有望开发成针对实体瘤的多靶点、靶向抗肿瘤药物。

Claims

1.一种N，N’-芳基取代脲类化合物，其为式I所示化合物，或其盐：

其中，R₃为H或C₁～C₆烷基，所述取代六元芳环基的取代基选自：C₁～C₆烷基、C₁～C₆全氟烷基或卤素中一种或二种以上，取代基的个数为1～4的整数。

2.如权利要求1所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₁为式II所示取代基，其中R₃为H或C₁～C₃烷基。

3.如权利要求2所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，其中R₃为H或甲基。

4.如权利要求1、2或3所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₂为苯基或取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：C₁～C₃烷基、C₁～C₃全氟烷基或卤素中一种或二种以上，取代基的个数为1～3的整数。

5.如权利要求4所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₂为取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：甲基、乙基、三氟甲基、F、Cl或Br中一种或二种以上，取代基的个数为1或2。

6.如权利要求5所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₂为邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、间乙基苯基、邻氟苯基、间氟苯基、间溴苯基、间三氟甲基苯基、间氯苯基或2-氟-5-甲基苯基。

7.如权利要求6所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，所述的N，N’-芳基取代脲类化合物是：N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-溴苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；或N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲。

8.如权利要求1所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₁为式III所示取代基，其中R₃为H或C₁～C₃烷基。

9.如权利要求8所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，其中R₃为H或甲基。

10.如权利要求1、8或9所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₂为苯基或取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：C₁～C₃烷基、C₁～C₃全氟烷基或卤素中一种或二种以上，取代基的个数为1～3的整数。

11.如权利要求10所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₂为取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：甲基、乙基、三氟甲基、F、Cl或Br一种或二种以上，取代基的个数为1或2。

12.如权利要求11所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，R₂是：邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、间乙基苯基、邻氟苯基、间氟苯基、间溴苯基、间三氟甲基苯基、间氯苯基或2-氟-5-甲基苯基。

13.如权利要求12所述的N，N’-芳基取代脲类化合物，其特征在于，所述的N，N’-芳基取代脲类化合物是：N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(4-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-溴苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(6-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑[3，4-b]吡啶-4-基)苯基]脲。

14.如权利要求1～13中任意一项所述的N，N’-芳基取代脲类化合物在制备多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物中的应用；

其中所述多靶点受体酪氨酸激酶选自：VEGFR2，FGFR1和PDGFRα。