CN103278596A - 一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法，包括如下步骤：第一步，先建立玄归滴丸气相标准指纹图谱；第二步，以上述相同的方法测定玄归滴丸样品指纹图谱；第三步，将待测玄归滴丸样品指纹图谱与对照的玄归滴丸指纹图谱对比，控制玄归滴丸的质量。本发明的方法具有整体性、宏观性和模糊性，本发明克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷。本发明为完整、准确评价玄归滴丸的质量提供了新的方法和手段。采用气相指纹图谱对玄归滴丸中具有代表性的活性成分进行监控与跟踪，更加准确全面。用视觉直观辨识图谱的异同；用半定量指标量化样品的真伪、优劣；用相似度计算方法评价质量及稳定性。

Description

一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法

技术领域

本发明涉及一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法。

背景技术

痛经是一种妇女在经期或其前后出现周期性下腹疼痛为主症的常见病。原发性痛经指妇科检查，生殖器官无明显器质性病变者，多发于月经初期后2—3年的青春期少女或未生育的年轻妇女。玄归滴丸由当归、元胡、干姜组成。这三味药能活血化瘀、温中散寒、燥湿理气，从本质上达到了调经的作用，而元胡又是一种很好的止痛中药，故玄归滴丸是很好的标本兼治的妇女痛经良药。经过长时间的开发研究，对新药研制的各个环节进行了详细、科学的考察，结果表明：该药品生产工艺可靠，产品质量稳定，药理作用明显，剂型新，并具有起效快、服用方便、便于携带等特点，是治疗原发性痛经的理想药品。

根据文献报道的三味中药的有效成分的理化性质，开展了相应的提取工艺研究，确立了最佳生产工艺，但是，如何用一种简便、快捷、准确的方法对玄归滴丸进行质量控制，是亟需解决的一个难题。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法，包括如下步骤：

第一步，先建立玄归滴丸气相标准指纹图谱，方法如下：

（a）参照物溶液的制备：精密称取正十八烷，加乙酸乙酯、丙酮或无水乙醇制成浓度10mg/ml的溶液，为参照物溶液；

（b）供试品溶液的制备：取玄归滴丸适量，置于研钵中研成粉末状，精密称取，精密加入1-3倍量的硅藻土，研匀；精密称取适量，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯、丙酮或无水乙醇10ml，并精密加入2ml参照物溶液，超声处理10-50min，静置至室温，摇匀，滤过，取续滤液，得为供试品溶液；

（c）气相色谱条件：色谱柱为以100％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；程序升温：初始温度为100℃，保持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至280℃，保持27分钟；进样口温度为280℃；检测器温度为300℃；分流进样，分流比10：1；

（d）测定：

吸取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定，记录1小时色谱图；供试品指纹图谱中除参照物外，有20个共有指纹峰，以10号峰正十八烷参照物峰的相对保留时间作为1，计算相对保留时间，以相对保留时间为0.941的8号峰相对峰面积作为1，计算峰面积相对比值；

1号峰相对保留时间RRT为0.762，相对峰面积为0.076，2号峰相对保留时间RRT为0.776，相对峰面积为0.108，3号峰相对保留时间RRT为0.781，相对峰面积为0.04，4号峰相对保留时间RRT为0.787，相对峰面积为0.062，5号峰相对保留时间RRT为0.799，相对峰面积为0.078，6号峰相对保留时间RRT为0.877，相对峰面积为0.047，7号峰相对保留时间RRT为0.896，相对峰面积为0.117，8号峰相对保留时间RRT为0.941，相对峰面积为1，9号峰相对保留时间RRT为0.982，相对峰面积为0.114±15%，10号峰相对保留时间RRT为1，相对峰面积为2.197，11号峰相对保留时间RRT为1.008，相对峰面积为0.122，12号峰相对保留时间RRT为1.115，相对峰面积为0.054，13号峰相对保留时间RRT为1.185，相对峰面积为0.269，14号峰相对保留时间RRT为1.208，相对峰面积为0.057，15号峰相对保留时间RRT为1.263，相对峰面积为0.353±90%，16号峰相对保留时间RRT为1.375，相对峰面积为0.084，1,7号峰相对保留时间RRT为1.51，相对峰面积为0.131，18号峰相对保留时间RRT为1.705，相对峰面积为0.055，19号峰相对保留时间RRT为1.736，相对峰面积为0.068，20号峰相对保留时间RRT为1.798，相对峰面积为0.041，21号峰相对保留时间RRT为1.838，相对峰面积为0.054；

第二步，以上述相同的方法测定玄归滴丸样品指纹图谱；

第三步，将待测玄归滴丸样品指纹图谱与对照的玄归滴丸指纹图谱对比，控制玄归滴丸的质量。

本发明的优点：

1.整体性、宏观性和模糊性，本发明克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷。本发明为完整、准确评价玄归滴丸的质量提供了新的方法和手段。

2．采用气相指纹图谱对玄归滴丸中具有代表性的活性成分进行监控与跟踪，更加准确全面。

3.用视觉直观辨识图谱的异同；用半定量指标量化样品的真伪、优劣；用相似度计算方法评价质量及稳定性。

附图说明

图1为玄归滴丸气相标准指纹图谱。

实施例1：玄归滴丸气相标准指纹图谱的建立

仪器与试药

仪器

    岛津气相色谱仪（GC2010），GCsolutions工作站

试药

试剂：正已烷（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）

       乙酸乙酯（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）

       丙酮（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）

       无水乙醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）

       正十八烷（天津市光复精细化工研究所，批号080224，含量≥99.5％）

玄归滴丸由天津中新药业集团股份有限公司第六中药厂提供，批号为20120201、080502、091101、091102、091103、120425、602001、602002、602003、602004、602005。

方法与结果

色谱条件

以100％二甲基聚硅氧烷（DB-1）为固定相的毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm），柱温为程序升温：初始温度为100℃，保持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至280℃，保持27分钟；进样口温度为280℃；检测器温度为300℃；分流进样，分流比10：1。理论塔板数按参照物峰（内标）计算，=5.54（t_R/W_1/2）²=787080。理论塔板数按参照物峰（内标）计算应不低于600000。

指纹图谱确定

玄归滴丸气相标准指纹图谱建立，方法如下：

（a）参照物溶液的制备：称取正十八烷适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作为参照物溶液（内标）。

（b）供试品溶液的制备：玄归滴丸适量，置于研钵中研成粉末状，精密称取2.0g，并精密加入硅藻土2.0g，研匀，精密称取2.0g，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯10ml，并精密加入参照物溶液（内标）2ml，超声处理（功率260W，频率40kHZ）30min，静置至室温，摇匀，滤过，取续滤液，得为供试品溶液；

（c）测定：吸取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定，记录1小时色谱图；供试品指纹图谱中正十八烷参照物峰为S峰，计算相对保留时间；8号峰（相对保留时间为0.941）峰面积作为1，计算峰面积相对比值。

共有峰确定

根据10批供试品气相色谱图谱，选择了代表性的批号为602003（表1中的S3）的样品作为标准指纹图谱，

根据10批供试品气相色谱图所给出的相关参数，确定共有峰有21个（含内标参照物峰），各共有峰依次标号为1，2，…，N，其中参照物峰（内标正十八烷）标号为10（S），以10号峰（内标正十八烷）作为参照，计算10批供试品各共有峰相对保留时间，结果见表1。

表1共有峰相对保留时间

根据10批供试品气相色谱图谱所给出的相关参数，选择了具有特征性的20个共有指纹峰，根据药品监督管理局关于《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》（暂行）中规定的关于共有指纹峰面积的比值的要求，以内标物作为参照物的指纹图谱，应以共有指纹峰中峰面积相对较大、较稳定的一个峰的峰面积面积作为1。本品指纹图谱中选择8号峰的峰面积作为1，计算其它各共有指纹峰峰面积的比值，见表2。

表2共有峰面积的比值

指纹图谱相似度

以共有模式（平均失量）为参照，通过夹角余弦与相关系数两种算法进行计算，10批供试品相似度计算结果见表3、表4。结果表明，各批供试品与共有模板间的相似度均≥0.97。因此，规定各批供试品与共有模板间的相似度应不小于0.9。

表3相似矩阵（相关系数）

表4相似矩阵（夹角余弦）

注：样品号与批号对应表

表5样品号与批号对应表

指纹图谱精密度试验

按照指纹图谱精密度规定方法操作，以批号为20120201的玄归滴丸为供试品，依法制备，连续进样5次，分别对各共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，玄归滴丸供试品溶液各色谱峰的相对保留时间基本一致（RSD＜3％）；各峰的相对峰面积基本一致（RSD＜3％），显示精密度试验符合要求。

指纹图谱稳定性试验

按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以批号为20120201的玄归滴丸为供试品，分别于0、2、4、6、8、24小时测定，分别对各共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，玄归滴丸供试品溶液各峰的相对保留时间基本一致（RSD＜3％）；各峰的相对峰面积基本一致（RSD＜3％），表明供试品溶液在24小时内稳定，符合玄归滴丸指纹图谱测定要求。

指纹图谱重现性试验

按照指纹图谱重现性测定方法操作，以批号20120201的玄归滴丸为供试品，依法制备5份，分别对各共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，各份玄归滴丸供试品溶液色谱峰的相对保留时间基本一致（RSD＜3％）；各峰的相对峰面积基本一致，（RSD＜3％），显示重现性试验符合要求。

以上测定结果表明，用本气相色谱法测定玄归滴丸指纹图谱的稳定性、精密度、重现性试验均符合要求，因此可选用该气相色谱法作为玄归滴丸指纹图谱的测定方法。

在本实施例的玄归滴丸指纹图谱建立的步骤（a）中，用丙酮或无水乙醇替代乙酸乙酯其它同本实施例，实验证明，也可以对玄归滴丸进行质量控制。

在本实施例的玄归滴丸指纹图谱建立的步骤（b）中，用2或3倍量的硅藻土替代本实施例1倍量的硅藻土，实验证明，也可以对玄归滴丸进行质量控制。

在本实施例的玄归滴丸指纹图谱建立的步骤（b）中，用功率260W，频率40kHz超声处理50min；功率260W，频率40kHz超声处理40min；功率260W，频率40kHz超声处理35min；功率260W，频率40kHz超声处理20min；加热回流处理10min，加热回流处理30min，加热回流处理20min，加热回流处理10min，加热回流处理5min替代本实施例的功率260W，频率40kHz超声处理30min，实验证明，也可以对玄归滴丸进行质量控制。

Claims (1)

1.一种利用指纹图谱对玄归滴丸进行质量控制的方法，包括如下步骤：

第一步，先建立玄归滴丸气相标准指纹图谱，方法如下：

（a）参照物溶液的制备：精密称取正十八烷，加乙酸乙酯、丙酮或无水乙醇制成浓度10mg/ml的溶液，为参照物溶液；

（b）供试品溶液的制备：取玄归滴丸适量，置于研钵中研成粉末状，精密称取，精密加入1-3倍量的硅藻土，研匀；精密称取适量，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯、丙酮或无水乙醇10ml，并精密加入2ml参照物溶液，超声处理10-50min，静置至室温，摇匀，滤过，取续滤液，得为供试品溶液；

（c）气相色谱条件：色谱柱为以100％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；程序升温：初始温度为100℃，保持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至280℃，保持27分钟；进样口温度为280℃；检测器温度为300℃；分流进样，分流比10：1；

（d）测定：

吸取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定，记录1小时色谱图；供试品指纹图谱中除参照物外，有20个共有指纹峰，以10号峰正十八烷参照物峰的相对保留时间作为1，计算相对保留时间，以相对保留时间为0.941的8号峰相对峰面积作为1，计算峰面积相对比值；

1号峰相对保留时间RRT为0.762，相对峰面积为0.076，2号峰相对保留时间RRT为0.776，相对峰面积为0.108，3号峰相对保留时间RRT为0.781，相对峰面积为0.04，4号峰相对保留时间RRT为0.787，相对峰面积为0.062，5号峰相对保留时间RRT为0.799，相对峰面积为0.078，6号峰相对保留时间RRT为0.877，相对峰面积为0.047，7号峰相对保留时间RRT为0.896，相对峰面积为0.117，8号峰相对保留时间RRT为0.941，相对峰面积为1，9号峰相对保留时间RRT为0.982，相对峰面积为0.114±15%，10号峰相对保留时间RRT为1，相对峰面积为2.197，11号峰相对保留时间RRT为1.008，相对峰面积为0.122，12号峰相对保留时间RRT为1.115，相对峰面积为0.054，13号峰相对保留时间RRT为1.185，相对峰面积为0.269，14号峰相对保留时间RRT为1.208，相对峰面积为0.057，15号峰相对保留时间RRT为1.263，相对峰面积为0.353±90%，16号峰相对保留时间RRT为1.375，相对峰面积为0.084，1,7号峰相对保留时间RRT为1.51，相对峰面积为0.131，18号峰相对保留时间RRT为1.705，相对峰面积为0.055，19号峰相对保留时间RRT为1.736，相对峰面积为0.068，20号峰相对保留时间RRT为1.798，相对峰面积为0.041，21号峰相对保留时间RRT为1.838，相对峰面积为0.054；

第二步，以上述相同的方法测定玄归滴丸样品指纹图谱；

第三步，将待测玄归滴丸样品指纹图谱与对照的玄归滴丸指纹图谱对比，控制玄归滴丸的质量。

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