CN103263442A - 喙尾琵琶甲提取物及其制备方法和药物用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及喙尾琵琶甲提取物及其制备方法和药物用途。本发明的喙尾琵琶甲提取物由鞘翅目拟步甲科琵琶甲属昆虫喙尾琵琶甲Blaps rynchopetera Fairmaire的任一部位或全虫经醇水提取而成。喙尾琵琶甲提取物能有效延长雌性小鼠的热板刺激痛阈值,还能明显抑制醋酸致小鼠疼痛的扭体反应,显示该提取物具有明显的镇痛功效,可以用于制备镇痛药物或保健品。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体而言,本发明涉及一种喙尾琵琶甲提取物及其制备方法和药物用途。该提取物由云南民间药用昆虫喙尾琵琶甲经现代提取工艺制备而成,具有明显的镇痛功效,可以用于制备镇痛药物或保健品。
背景技术
疼痛是一种因组织损伤或潜在的组织损伤而产生的痛苦感觉,常伴有不愉快的情绪或心血管、呼吸系统等方面的变化。它既是机体的一种保护性机制,提醒机体避开或处理伤害,也是临床许多疾病的常见症状。临床上常将疼痛分为以下几种:
(1)按疼痛的神经生理机制可分为:①伤害感受性疼痛,包括由各种伤害性刺激所导致的躯体痛和内脏痛。②非伤害感受性疼痛,包括神经病理性疼痛(neuropathic pain)和精神性或心理性疼痛(psychogenic pain);神经病理性疼痛指神经系统本身病变所导致的疼痛。其中,疼痛发源于脊髓或脑时,称之为中枢性疼痛(central pain);发源于末梢神经时,则称之为外周性疼痛(peripheral pain)。精神性疼痛指无明确的伤害性刺激及神经性原因的疼痛。
(2)按疼痛持续时间可分为:①急性疼痛(acute pain):如发生于创伤、胃肠道穿孔、手术后的疼痛等;②慢性疼痛(chronic pain):如慢性腰腿痛、晚期癌症痛等。
(3)按疼痛在躯体的解剖部位可分为:头痛,颌面痛,颈项痛,肩、上肢痛,胸痛,腹痛,腰背痛,盆腔痛,下肢痛,肛门、会阴痛。
(4)按疼痛发生的深浅部位可分为:①浅表痛,位于体表皮肤或粘膜;②深部痛,内脏、关节、胸膜、腹膜等部位的疼痛。
(5)按疼痛的表现形式可分为:①局部痛;②放射痛;③牵涉痛等。
(6)按疼痛的性质可分为:①刺痛;②灼痛;③酸痛;④胀痛;⑤绞痛等。
疼痛,尤其是剧烈疼痛,不仅给患者带来痛苦、紧张不安等情绪反应,还可引起机体生理功能紊乱,甚至诱发休克、死亡,因此及时地缓解疼痛是极为重要的。目前在国际上,疼痛被认为继呼吸、脉搏、血压、体温之后的第五个生命体征。因此,疼痛治疗(pain management)是现代医学的一个重要组成部分,并已逐渐发展成为疼痛治疗学。疼痛治疗的含义是对各种原因所致的疼痛以及某些神经血管功能障碍疾病或体征,采用药物和(或)神经阻滞等各种综合方法进行治疗,以达到缓解或消除症状,提高病人生活质量的目的。其中,药物治疗是疼痛治疗最基本、最常用的方法。一旦明确诊断的剧烈疼痛患者应及时应用镇痛药。常用的镇痛药可分为:
(1)阿片类镇痛药药:一类主要作用于中枢神经系统,能选择性地消除或缓解痛觉的药物,同时又能减轻不愉快的情绪反应,但并不影响其它感觉。常用的镇痛药包括阿片生物碱类(吗啡、可待因)与人工合成品(哌替啶、阿法罗定、美沙酮等)。因此对已确诊的剧烈疼痛,及时应用镇痛药既可解除病人的痛苦,有利于疾病的恢复,又可防止休克的发生,在急救中具有重要意义。但因该类镇痛药大都有强成瘾性,临床上仅适用于急救、术后疼痛治疗及晚期癌症病人镇痛。
(2)解热镇痛药:一类具有退热和减轻外周慢性钝痛的药物。能抑制下丘脑前部神经元中的前列腺素(PGs)的合成和释放,除解热和镇痛作用外,还具有抗炎、抗风湿作用。解热镇痛类药物也可选择性作用于体温调节中枢,降低其异常兴奋性,通过神经调节使皮肤血管扩张,排汗增加,呼吸加快,增加散热,同时稳定白细胞内的溶酶体膜,阻碍白细胞内致热原的释放,使体温恢复到正常水平。一般来说,此类药物对头痛、牙痛、神经痛、关节痛、肌肉痛及月经痛等钝痛效果好,但对内脏平滑肌绞痛无效。
(3)非甾体类抗炎药(NSAIDs):非甾体类抗炎药是与激素相对而言的,这一类药物其化学结构中缺乏激素所具有的甾环,故而得名。它具有解热、镇痛和抗炎作用,是治疗风湿性疾病的一线药物。此类药物种类很多,目前最常用的有乙酰水杨酸(即阿司匹林)、对乙酰氨基酚(扑热息痛)、布洛芬等。尽管这—类药都是通过减少体内前列腺素的合成起作用,但各种药物之间还存在一些细微的差别。一般用于治疗轻到中度的非癌性疼痛,如骨骼肌功能紊乱、关节炎、痛经和头痛等。
(4)其他用于缓解神经性疼痛的非镇痛药:例如,抗癫痫药可用于治疗神经病理性疼痛,如三叉神经痛、幻肢痛等,常用药物有苯妥英钠和卡马西平;抗抑郁药可用于治疗由紧张及焦虑等精神、心理因素导致的疼痛,以及治疗慢性疼痛病人的抑郁症状,常用药有氟西汀、赛乐特、左洛复、多虑平等;催眠镇静药在慢性疼痛治疗中多用作辅助用药,以苯二氮草类最常用,如地西泮和硝西泮等,但该类药物反复应用后,可引起药物依赖和耐药性,故不应滥用。
上述药物虽能一定程度的缓解疼痛症状,然而其具有广泛的成瘾性或药物依赖、严重胃肠道不良反应(溃疡、胃炎,甚至穿孔出血等)、伤肾、诱发心血管疾病(COX-2特异性抑制剂心类镇痛剂可引起肌梗塞、心絞痛、缺血性中風等)、过敏反应或耐药性等毒副作用。因此,研发新型高效无毒的镇痛药成为现代药物研究的热点之一。目前对镇痛药物的探索研究中,中药、天然药已越来越凸显其药效良好、无成瘾性、不良反应少及资源丰富等优势,引起人们的重视。
中医学治疗痛证已有几千年的历史,在《黄帝内经》中就已对痛证的病因、病机、病位、证候、预后等方面进行了系统的论述。中医理论认为“痛则不通,通则不痛”,据此为主治疗各种疼痛的中药及中药复方在中医临床中应用广泛。按其功用特点分成祛风散瘀止痛药、活血通络止痛药等,麻沸散就是典型的代表。中药镇痛作用明确、应用灵活,且毒副作用极小,在人类医学史上发挥着不可替代的作用,近来在各国医药界的引起广泛关注。
而从天然产物或其衍生物中开发新型的镇痛药物的努力,也取得了较大的进展。南加州大学神经学家George Miljanich博士所领导的研究小组在海底的一种肉食性蜗牛中发现一种称为ω-芋螺毒素(ω-conotoxin或omega conopeptide)的神经毒素,它可以作用于神经细胞的钙通道,使疼痛的信号不能传送到大脑,保持其整个神经系统运作的正常性。人工合成的ω-芋螺毒素Ziconotide的镇痛作用比吗啡强1000倍,且不具成瘾性或药物依赖性。但因其给药途径局限于髓腔给药,因此使用非常不方便。2012年11月在英国伦敦科学博物馆一个名为“减轻痛苦:未来救助”的展览会的启动仪式上,Venomtech公司负责人史蒂夫-特瑞姆演示了如何从狼蛛体内抽取毒液,他表示该公司供应从有毒动物体内提取的毒液给世界各国科学家以研制理想的止痛药。
我国有丰富的天然药用动物、植物和矿物资源,虽然中药方剂中不乏以虫类入药者,然而在对天然药物的研究中,仍是以植物药的研究较多,对动物药的研究长期以来并未得到重视。上述欧美科学家的经验表明,动物将是开发新型镇痛药物的宝贵药用资源。而昆虫占整个动物数量的90%,是世界上最大的生物类群,据估计其种类可能达1000万种,个体数量超过1018。由于药用昆虫资源丰富、生物活性较强,因此药用昆虫作为我国中医药的一部分,是一笔宝贵的财富。
喙尾琵琶甲(Blaps rynchopetera Fairmaire)俗称臭壳子、小黑虫、臭屁虫、高脚虫、高脚臭虫、打屁虫,臭虫等,成虫能分泌具有药用价值的防御液(即臭屁)。喙尾琵琶甲是云南彝族长期广泛使用的昆虫药物(彝族药名“”,音译为“寒斋”),用于热证发烧、饮食积滞、小儿疳积、夜惊、乳癖、乳痰、疮痒肿毒、湿疹、皮肤瘙痒等。据调查,彝族民间医生在治疗肿瘤、心血管等疑难病症的处方中,80%以上都含有该昆虫药。2011年8月云南曲靖地区肺癌患者生吞服用臭壳虫的新闻也被广泛报导。该昆虫除了药用外,云南大部分地区还作为食用佳肴,可在农贸市场和药材市场购买到。因此,喙尾琵琶甲是一种极具开发和利用价值的民族民间药用昆虫。
国内外文献表明:目前对喙尾琵琶甲的研究主要集中在对其形态、生态分布、化学成以及抗肿瘤作用方面的探索,而对该药的有关药理、毒理、临床应用、药材标准等方面的研究报道都非常少。除本专利发明人前期对其粗提物的抗肿瘤、抗菌作用进行了初步研究,尚未见其它关于喙尾琵琶甲提取物镇痛作用的报道。
我们在前期的工作中对喙尾琵琶甲的体内外抗肿瘤及抑菌作用进行了初步的研究,在筛选抗肿瘤、抑菌的活性部位过程中,意外发现喙尾琵琶甲提取物具有强效的镇痛作用。若能在不易产生成瘾性、依赖性、耐药性的传统民间昆虫药物喙尾琵琶甲中找到高效的镇痛活性部位,将对治疗疼痛提供全新的物质基础。根据前期研究结果,为了能从喙尾琵琶甲中获得高效镇痛的活性物质,我们设计了喙尾琵琶甲提取物的富集工艺并制备了该提取物,采用热板法和扭体法评价其镇痛效果。以期能得到有效的活性物质,从而将其进一步开发成为镇痛药物,将其应用于疼痛治疗。据此完成本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种适合于工业化生产的喙尾琵琶甲提取物,具体而言,该提取物由下列方法制备得到:
用70%-98%醇溶剂浸泡提取经粉碎的喙尾琵琶甲3次,每次浸泡20-30小时,每次提取0.5-2小时;合并提取液,减压浓缩得浸膏。其中,所用醇溶剂中的醇是指甲醇、乙醇中的一种或两种,优选乙醇;减压浓缩时的温度不超过100℃。
本发明中的喙尾琵琶甲是指鞘翅目拟步甲科琵琶甲属昆虫喙尾琵琶甲Blaps rynchopetera Fairmaire的任一部位或全虫,优选全虫。
本发明的另一目的是提供了喙尾琵琶甲提取物在制备治疗疼痛的药物中的应用。由喙尾琵琶甲提取物可以与药学上常用的辅料或载体结合,制备得到具有消除或缓解疼痛功效的药物组合物。该类药物组合物可以采用注射剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、气雾剂、透皮贴剂、栓剂、滴丸剂、栓剂、外用搽剂、软膏剂等剂型。
本发明有效地富集了喙尾琵琶甲提取物,并采用药学研究中镇痛药物筛选的经典实验,热板法和扭体法评价喙尾琵琶甲提取物的镇痛作用。试验结果显示:喙尾琵琶甲提取物对中枢性疼痛和外周性疼痛都具有较强的镇痛作用。这些结果说明喙尾琵琶甲提取物在制备镇痛药物的应用上有着相当的优势,并且以往未见相关的报道,从而构成本发明。
本发明有益之处在于:首次发现彝族民间昆虫药物喙尾琵琶甲的醇提物具有防治疼痛方面的成药潜力,为开发非阿片类、非甾体抗炎药之创新型非成瘾性镇痛药物提供了新的物质基础,具有潜在巨大的社会效益和经济效益。本发明再一特点为:喙尾琵琶甲提取物的制备工艺操作简便、成本低、污染小、安全可靠,利于节能减排条件下的大规模生产。产业化前景十分明确。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的实质,下面通过实施例进一步说明本发明。实施例给出了喙尾琵琶甲提取物的制备、热板法和扭体法评价其镇痛作用的试验结果,说明其在制备镇痛药物中的用途。
在药学研究中筛选镇痛药的常用致痛方法概括有物理法(热、电、机械)和化学法。动物的疼痛反应常表现出嘶叫、舔足、翘尾、蹦跳及皮肤、肌肉抽搐。化学法,即将某些化学物质,如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等,涂布于动物的的某些敏感部位或腹腔注射。热板法为物理致痛,借助热的刺激使动物产生疼痛,这种刺激通过传入神经传给中枢,产生疼痛的感觉,使用吗啡可以抑制痛觉向中枢的传递,而达到镇痛的目的。而扭体法为化学致痛,借助致痛物质的化学刺激而产生疼痛,同进还会出现炎症反应,非甾抗炎药对这类疼痛有镇痛作用。
必须说明,本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1:喙尾琵琶甲提取物的制备
喙尾琵琶甲(臭壳虫)活体,购自大理新桥农贸市场。经大理学院农业与生物科学学院杨自忠教授鉴定为喙尾琵琶甲Blaps rynchopetera Fairmaire。将喙尾琵琶甲用95%乙醇杀灭,自然凉干,得4.1公斤,粉碎后用95%乙醇浸泡提取3次,每次加乙醇溶液10升、浸泡24小时、提取1小时。合并提取液,室温下减压浓缩得喙尾琵琶甲提取物浸膏1.26公斤,放置-4℃下保存。
实施例2:以热板法测试喙尾琵琶甲提取物的镇痛作用
实验原理:小鼠足底无毛,皮肤裸露,所以对刺激敏感。将雌性小鼠置于一定温度的热板上,热刺激小鼠足部产生痛反应,即舔足反应。以小鼠出现舔足的时间作为痛反应指标,评价测试药物的镇痛效果。
1. 实验材料:
1.1 药物与试剂:将根据实施例1制备得到的喙尾琵琶甲提取物浸膏用生理盐水配制成高、低浓度,分别为0.2克/毫升和0.4克/毫升;阿司匹林肠溶片,0.3克/片,湖南新汇制药有限公司,批号:080903,以生理盐水配制成0.04克/毫升浓度供实验用。
1.2 动物:雌性昆明种小鼠50只,体重20±2克,由大理学院实验动物中心提供,合格证号:SCXK。
1.3 仪器:RB-200智能热板仪,成都泰盟科技有限公司出品;TP电子天平,梅特勒-托利多仪器上海有限公司。
2. 方法与结果:
2.1 实验前,在55±0.5℃的热板上测定健康的雌性昆明种小鼠之基础痛阈值,选痛阈值范围在5~30秒的小鼠供实验用。
2.2 合格雌性小鼠依体重随机分为4组,每组11只:阳性对照组按0.3毫升/20克·体重(gBW)灌胃阿司匹林;空白对照组灌服等体积生理盐水;高剂量组按0.3毫升/20克·体重(gBW)灌胃0.4克/毫升的喙尾琵琶甲提取物;低剂量组按0.3毫升/20克·体重(gBW)灌胃0.2克/毫升的喙尾琵琶甲提取物;每日给药1次,连续给药5天。于最后一次给药后30、60、90分钟测定小鼠的痛阈值,痛阈值超过60秒者按60秒计。
2.3 结果如表1所示,喙尾琵琶甲提取物高剂量组小鼠在给药后各时间点的痛阈值均明显大于空白对照组,其镇痛作用与阳性对照阿司匹林近似,给药后90分钟测试的痛阈值甚至高于阳性对照;低剂量组在给药后60和90分钟的痛阈值高于空白对照,但无统计学上的显著性差异。
表1 喙尾琵琶甲流浸膏对小鼠热痛阈值的影响
注:与空白对照组比较,*P < 0.05,**P < 0.01
3. 实验结论:
小鼠的爪趾对热刺激非常敏感,其表现为跳跃、缩足和舔后足。热板法适合于评价中枢镇痛药物的效果。实验结果显示:以较高剂量(6克/公斤·体重)的喙尾琵琶甲提取物灌胃给药后,可显著延长热刺激致小鼠舔后足的潜伏期,说明喙尾琵琶甲提取物能明显提高热板小鼠的痛阈值。在给药后的30分钟、60分钟测试小鼠的痛阈值结果表明:高剂量的喙尾琵琶甲提取物的药效与阳性对照相似,其与空白对照相比,延长的痛阈值均具统计学意义;而在末次给药后90分钟阳性对照阿司匹林的作用已不显著,但高剂量喙尾琵琶甲提取物仍能显著增加小鼠的痛阈值;低剂量的喙尾琵琶甲提取物则在给药后90分钟显示一定的镇痛效果,其痛阈值与空白对照相比虽不具有统计学意义,但与阳性对照近似。实验表明,高剂量的喙尾琵琶甲提取物能有效提高热板小鼠的痛阈值,即喙尾琵琶甲提取物有中枢镇痛的功效,有可能发展成为新的具有中枢镇痛作用的药物。
实施例3:以扭体法测试喙尾琵琶甲提取物对醋酸致小鼠疼痛的影响
实验原理:应用化学刺激物注入小鼠腹腔内刺激腹膜,引起深部的大面积而较久的疼痛刺激,致使小鼠产生“扭体反应”(腹部内凹、收缩成“S”形,躯干与后腿伸张、臀部高起及蠕行等)。以小鼠出现扭体的次数为痛反应指标,镇痛药物可以抑制动物的“扭体反应”,因此可从受试动物的扭体次数判断药物是否具有镇痛作用。
1. 实验材料:
1.1 药物与试剂:将根据实施例1制备得到的喙尾琵琶甲提取物浸膏用生理盐水配制成高、低浓度,分别为0.2克/毫升和0.4克/毫升;阿司匹林肠溶片,0.3克/片,湖南新汇制药有限公司,批号:080903,以生理盐水配制成0.04克/毫升浓度供实验用;醋酸:分析纯,广东汕头新宁化工厂,批号:950517,使用前配置成浓度为0.6%。
1.2 动物:昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重20±2克,由大理学院实验动物中心提供,合格证号:SCXK。
1.3 仪器:TP电子天平,梅特勒-托利多仪器上海有限公司。
2. 方法与结果:
2.1 合格小鼠依体重随机分为4组,每组10只,雌雄各半:阳性对照组灌胃阿司匹林;空白对照组灌服生理盐水;高剂量组灌胃0.4克(浸膏重量)/毫升的喙尾琵琶甲提取物;低剂量组灌胃0.2克(浸膏重量)/毫升的喙尾琵琶甲提取物;灌胃体积为每公斤·体重150毫升,即0.3毫升/20克·体重(gBW),每日给药1次,连续给药5天。于末次给药后30分钟,每只小鼠腹腔注射0.2毫升的0.6%醋酸,观察并记录各鼠在腹腔注射醋酸后的15分钟内扭体次数,计算抑制率。抑制率=(空白对照组平均扭体次数-实验组平均扭体次数)/空白对照组平均扭体次数×100%。
2.2 结果如表2所示,喙尾琵琶甲提取物低剂量组与高剂量组对醋酸所致小鼠扭体反应的抑制率分别为42%和49%,抑制作用明显。
表2 喙尾琵琶甲流浸膏对冰醋酸所致小鼠扭体反应的影响
注:与空白对照组比较,**P < 0.01,***P < 0.005
3. 实验结论:
小鼠扭体实验是通过注射冰醋酸刺激腹膜,小鼠因疼痛而表现出扭体反应。扭体实验适用于外周镇痛的评价研究。扭体实验结果证明喙尾琵琶甲提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的抑制作用明显,与阳性对照药物阿司匹林的功效相近。实验结果说明喙尾琵琶甲提取物具有较强的外周性疼痛的镇痛功效,有可能发展成为新的镇痛药物。
热板法和扭体法是药学研究中筛选镇痛药物的常用方法,该二实验敏感、简便、重复性好。上述实施例结果证实,喙尾琵琶甲提取物具有较好的镇痛作用,尤其是对醋酸所致外周性疼痛效果更佳,在较低剂量就表现出明显的镇痛作用。可以期望进一步开发成为来源于天然活性物质的毒副作用小的新型镇痛药物。
在上述说明书阐述本发明时,同时提供了实施例的目的是举例说明本发明的实际操作过程和本发明的意义。在进入本发明权利要求和其等同物范围内时,本发明的实际应用包括所有一般变化、配合,或改进。
Claims (5)
1.一种喙尾琵琶甲提取物,其特征为所述提取物由下列方法制备得到:用70%-98%醇溶剂浸泡提取经粉碎的喙尾琵琶甲3次,每次浸泡20-30小时、提取0.5-2小时;合并提取液,减压浓缩得浸膏;其中喙尾琵琶甲是指鞘翅目拟步甲科琵琶甲属昆虫喙尾琵琶甲Blaps rynchopeteraFairmaire的任一部位或全虫。
2.根据权利要求1的喙尾琵琶甲提取物,其特征为:所用醇溶剂中的醇是指甲醇、乙醇中的一种或两种;减压浓缩时的温度不超过100℃。
3.根据权利要求1-2之一的喙尾琵琶甲提取物用于制备消除或缓解疼痛的镇痛药物的用途。
4.一种药物组合物,其为治疗有效量的根据权利要求1-2之一的喙尾琵琶甲有效部位提取物和可药用载体。
5.根据权利要求4的药物组合物,其药物剂型是片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、注射剂、滴丸剂、气雾剂、透皮贴剂、栓剂、外用搽剂或软膏剂。
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