CN103249426A

CN103249426A - 用于治疗创伤的方法和包括富组蛋白5环状类似物的组合物

Info

Publication number: CN103249426A
Application number: CN2011800571657A
Authority: CN
Inventors: 吉莱斯·安德烈·拉乔伊; 格雷格·约翰·亚当斯·维尔克
Original assignee: University of Western Ontario
Current assignee: University of Western Ontario
Priority date: 2010-11-10
Filing date: 2011-11-10
Publication date: 2013-08-14
Also published as: CA2817373A1; US20140065119A1; WO2012061937A1; EP2637682A4; EP2637682A1

Abstract

本发明提供了治疗创伤的组合物和方法。组合物包括富组蛋白（5）环状类似物。

Description

用于治疗创伤的方法和包括富组蛋白5环状类似物的组合物

发明领域

本发明主要涉及创伤治疗，更确切地，涉及使用富组蛋白环状类似物来治疗创伤。

发明背景

创伤的愈合需要复杂的生物学与分子事件良好的协调整合，包括细胞迁移，细胞增殖与细胞外基质（ECM）沉积。对炎症介质，生长因子和细胞因子，以及对机械应力的的细胞应答必须是适当而精确的。这些基础过程与那些引导性的胚胎发生，组织与器官的再生，甚至是肿瘤形成，都是相似的。然而，在成年人的创伤和这些其他系统之间还是有确切的区别存在。在容易愈合以及并无潜在的病理生理缺陷（严重创伤）的皮肤创面的情况下，主要的进化动力已经达到使用最少的能量快速修复的能力。因此，这些创伤通过疤痕愈合而非再生。在预先存在病理生理异常（慢性创伤，例如糖尿病溃疡）的创伤中，进化适应很可能还没有产生，造成了愈合受到影响的结果。

成纤维细胞/角质形成细胞共培养是创伤愈合的一个实例。在成纤维细胞/角质形成细胞共培养（分别为56%和38%）研究的处理组和对照组中，与已报道过的皮肤成纤维细胞培养相比，12周的愈合率较高，即使用成纤维细胞/角质形成细胞的处理出现了边缘效应。关于皮肤成纤维细胞培养，某研究曾报道过当最高剂量与生理盐水湿润的纱布相比，每周应用皮肤成纤维细胞培养促进了足底非缺血性溃疡在12周内的愈合，然而另一研究发现处理组与安慰剂组之间并无区别。除了创伤愈合效果指征，与对照组的18%相比，处理组中的愈合率仅有30%。因此，从投入的成本来说，这个方法缺少显著的效果。

皮肤移植也可以在创伤治疗中应用。在相关方面，网状自体皮片移植与传统的皮片移植的比较似乎指示在两种方法之间并没有很大区别。

在本领域中生长因子创伤治疗也很普遍，其包括基本成纤维细胞生长因子（bFGF）以及表皮生长因子（EGF）治疗。EGF已显示出在实验性创伤中促进了表皮生长。两个研究报道了当与安慰剂组相比较时，显著更高的溃疡（主要为足部）愈合速率；然而，另一较不鲁棒的，在腿部溃疡的病人中的研究报道了相反的结果。生长因子治疗因此显示出较大的无效性和昂贵性。

鉴于以上，开发治疗创伤的有效方法是很有价值的。

发明简述

富组蛋白5环状类似物现已令人惊讶地发现具有愈合创伤的属性。

因此，本发明一方面提供了治疗哺乳动物中的创伤的方法，包括对创伤给予治疗有效量的富组蛋白5环状类似物及其功能相同的衍生物。

本发明的另一方面提供了用于创伤治疗的组合物，包括与药物可接受的载体结合的富组蛋白5环状类似物及其功能相同的衍生物。

本发明的又一方面提供了制品，包括包装和包含富组蛋白5环状类似物及其功能相同的衍生物的组合物。所述包装上贴有标签以指示所述组合物适于治疗创伤。

本发明的另一方面提供富组蛋白5环状类似物或一种与其功能相同的衍生物，用于制造用于治疗创伤的药物。

通过以下详细描述，权利要求和附图，本发明的上述与其他方面，特征和优点将会更加清楚。

附图简述

图1显示了富组蛋白5及其环状类似物的氨基酸序列；

图2A为在测量严重程度的6个不同参数（创面面积，肉芽组织，炎症，矿化作用，痂形成，以及创面深度）下，通过0（无表现），1（轻微），2（中度），以及3（严重）的计分系统，描述使用不同的环状富组蛋白治疗的愈合过程的表格。

图2B图示了使用环状富组蛋白疗法治疗创伤使其愈合的结果。

图3图示了在人类原代细胞培养中，与酮康唑的毒性相比，环状富组蛋白类似物缺乏毒性；以及

图4图示了比较环状富组蛋白类似物与多链丝霉素的创伤愈合活性。

具体描述

本发明提供了治疗哺乳动物中的创伤的方法。此方法包括对创伤给予治疗有效量的环状富组蛋白5类似物或其功能相同的衍生物。

富组蛋白5是具有以下氨基酸序列：¹DSHAKRHHGYKRFHEKHHSHRGY²⁴(SEQ ID No:1)的抗菌肽。环状富组蛋白5类似物是富组蛋白5的环化形式，例如在富组蛋白5内部相距约5到14个氨基酸残基的残基之间成内部键，导致富组蛋白5的环化。在富组蛋白5内部的氨基酸残基可以被一个或多个适于导致其环化的残基替换(例如，用可环化的氨基酸残基如赖氨酸，谷氨酸或者半胱氨酸残基替换)来提供可通过这些残基容易地环化的富组蛋白5类似物。因此，适合的富组蛋白5类似物显示出与富组蛋白5的高度序列同源性，例如，至少约90-95%的序列同源性。这种类似物的一个实例是DSHAKRHHCYKRFHEKHHSHRCY(SEQ ID No:2)。应当认识到，其他合适的环状类似物可能在富组蛋白5序列内部的不同位点包括可环化残基。图1中示出了其他合适位点。功能相同的衍生物也包括在内，其中包括具有合适的替换来包含可环化的氨基酸残基的富组蛋白5的剪切后的版本，以及在其任意一端包含附加的末端氨基酸的衍生物。术语“功能相同的”指保持了环化富组蛋白5的治疗创伤的活性的衍生物。术语“衍生物”也包括在活性位点上(例如游离羧基或者氨基基团或者其他侧链基团)的修饰。可进行这些修饰以赋予富组蛋白类似物或衍生物需要的性质，例如增加的稳定性，或提高的细胞摄取。在一实施方案中，环状富组蛋白类似物包括序列RHHGYKRFHEKHHSHRGY(SEQ ID No.25)，其中一个或两个氨基酸残基被选自谷氨酸、赖氨酸、半胱氨酸和含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许环化。

富组蛋白5环状类似物的制备在美国专利第6,555,650号被描述，其内容都以引用的方式并入本文中，并通常包含了肽合成的标准方法，及之后提供环状类似物的环化反应。富组蛋白5或其变体经由修饰来并入可环化的氨基酸残基，例如，适于形成环化的富组蛋白类似物的残基，如赖氨酸，谷氨酸与/或半胱氨酸，这些残基合适地分布，例如相距约5至14个氨基酸残基来形成环化的长约7至16个氨基酸残基的环。然后环状类似物可被制备。环化反应可包括赖氨酸残基的游离氨基基团与谷氨酸残基的游离羧基基团的反应，来形成内酰胺（酰胺）链，导致环的形成。然而，天然存在于富组蛋白5的16号位的谷氨酸残基，应优选地保持完整并在环化中不被使用，因为其在终产物的活性中起作用。据此，优选引入谷氨酸作为替换氨基酸基团，用于与赖氨酸反应的目的，以通过酰胺基团形成环状类似物。参与环化反应的赖氨酸也可作为替换基团被引入，或者可选地，天然存在于富组蛋白内部的赖氨酸也可以使用。

形成环化的富组蛋白类似物的环化作用可以通过富组蛋白内部半胱氨酸残基的反应来实现，或天存在于富组蛋白内部或通过替换引入。富组蛋白肽链中的半胱氨酸残基易反应形成二硫键，赋予必要的环状结构。尽管键在化学上是可逆的，它们足够稳定以达到本发明中的化合物的标准。作为半胱氨酸的备选物，其他含巯基的氨基酸，例如同型半胱氨酸或者青霉胺，也可以作为替换氨基酸使用。根据本发明，具有两个二硫键或者一个二硫键和一个内酰胺键的二环类似物也可被制备并使用，以及头尾相连的环化的类似物。环化可通过其他化学的手段来实现，例如通过硫醚键。

包含半胱氨酸替换物以及通过二硫基团环化的肽可以通过游离线性肽在具有半胱氨酸选择性保护的碳酸氢铵溶液（例如0.1M）中的空气氧化制备。内酰胺环化的肽可以通过以下来制备：在温和的条件下，在肽段仍然连接在树脂上并且其他侧链仍然被保护的同时，通过Pd(0)催化剂选择性去除Aloc/Allyl Lys和Glu侧链保护基团。这样使用(苯并三唑氧基)-三(二甲胺基)磷-六氟磷酸盐（pyBOP0与HOBt为偶联剂，或者用其他常见偶联剂）在侧链之间可以形成酰胺键。

环状富组蛋白5类似物及其衍生物有用于治疗哺乳动物中的创伤。本文使用的术语“创伤”指皮肤的任何损伤，包括开放性与封闭性创伤二者，例如切口，裂伤，擦伤，刺伤，穿透性创伤，钝器外力损伤引起的创伤，烧伤，以及粘膜表面创伤例如口腔，眼睛和阴道表面，以及包括皮肤溃疡，例如压力性，动脉，静脉和糖尿病溃疡在内的慢性伤口。创伤有可能或可能不会由微生物感染引起，或者有可能或可能不会特征为微生物的存在。

本文使用的与创伤相关的术语“治疗”指使创伤改善或者愈合。创伤愈合可在以下参数的基础上检测，例如创面面积，肉芽组织，炎症，矿化作用，痂形成，以及创面深度，因此通过一个或多个这些参数中的进展程度，包括创伤闭合程度，而显而易见。因此，这些参数中的一个或多个的进展的至少约10%，或创伤闭合的至少约10%，指示创伤愈合。也可以确定这些参数的视觉观察到的累积分数（其中0为健康，1为轻微，2为中等，3为严重）从而确定创伤的愈合。因此，创伤中这些参数的累积分数的降低指示创伤愈合，例如累计分数降低约10%，优选20%和更优选的30%或更高，指示创伤愈合。

本文使用的术语“哺乳动物”包括人类与非人类哺乳动物两者。

对哺乳动物给予治疗有效的剂量的环状富组蛋白5类似物或衍生物来治疗创伤。本文使用的术语“治疗有效的”剂量指治疗给定创伤有效而不导致不可接受的有害副作用的剂量。术语“给予”指向接受者提供环状富组蛋白剂量的任意合适的方式，所述方式依赖于如下所述的所用的给药形式。例如，如下文所详述的，所述药剂可以通过口服，注射，经粘膜和局部方式给予。

因此，本方法的治疗有效剂量为每kg体重0.01mg至约100mg，例如，约0.05mg/千克至约50mg/千克。然而，如本领域技术人员可理解的，所述富组蛋白5环化类似物或衍生物的有效剂量根据待治疗患者的症状，年龄，体重，待治疗创伤的严重程度和形成原因，使用的富组蛋白类似物，以及给药方式而变化。本发明的富组蛋白5类似物或衍生物可通过单次剂量或者分次剂量给药。

在创伤的治疗中，可单独或者以与药物可接受的佐剂或载体结合的组合物的形式给予所述环状富组蛋白5类似物或衍生物。表述“药物可接受的”指在药学领域使用是可接受的，即没有不可接受的毒性或不适合对哺乳动物进行给药的性质。药物可接受的佐剂实例包括但不限于，稀释剂，赋形剂等。可参考“Remington's:The Science andPractice of Pharmacy(雷明顿：药剂学科学与实践)",21st Ed.,LippincottWilliams&Wilkins,2005,作为一般药物制剂的指南。佐剂选择依赖于拟采用的给予所述组合物的方式。在本发明一实施方案中，将所述化合物配置为通过输注方式或者通过皮下或静脉注射给药，并且因此以无菌和无热原的并任选地被缓冲或等渗的水溶液使用。因此，所述化合物可在蒸馏水中或者更优选地，在生理盐水中，磷酸盐缓冲生理盐水或5%葡萄糖溶液中被给药。制备用于通过片剂，胶囊，锭剂，水或非水液体中的溶液或悬浮液，水包油或者油包水乳液，酏剂，或糖浆来口服给药的组合物，使用的佐剂包括糖类，例如乳糖，葡萄糖与蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉与马铃薯淀粉；纤维素与其衍生物，包括羟甲基纤维素钠，乙基纤维素和醋酸纤维素；西黄芪胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；硬脂酸；硬脂酸镁；硫酸钙；植物油如花生油，棉籽油，芝麻油，橄榄油和玉米油；多元醇，如丙二醇，甘油，山梨醇，甘露糖醇和聚乙二醇；琼脂；藻酸；水；等渗生理盐水和磷酸盐缓冲溶液。也可存在湿润剂，润滑剂如月桂基硫酸钠，稳定剂，制锭剂，崩解剂，抗氧化剂，防腐剂，着色剂与调味剂。在另一实施方案中，所述环状类似物可被配制为用于局部施用的霜剂，洗剂或软膏。对于这种局部施用，所述环状类似物与合适的基质如甘油三酯基质结合。这些霜剂，洗剂和软膏还可包含表面活性剂和其他化妆品用添加剂例如柔肤水等以及香水。也可使用合适的推进剂佐剂制备用于例如鼻腔给药的气雾制剂。本发明组合物也可作为丸剂，药糖剂，或贴剂给药。还包括粘膜给药的组合物，包括口服，鼻内，直肠或阴道给药以治疗这些区域的创伤。这些组合物通常包括一种或多种合适的非刺激性赋形剂或载体，包括例如可可脂，聚乙二醇，栓剂蜡，水杨酸盐或其他合适的载体。不管所述组合物是如何被给药的，也可将例如有助于延长所述组合物保质期的其他佐剂加入到所述组合物中。

在特定实施方案中，与可吸收的水凝胶材料，例如冻干胶原预混合的环状富组蛋白5类似物或衍生物可在创伤处被局部施用。富组蛋白类似物也可被附加于聚合物或者其他基质，例如适用于直接施用在创面上的胶布或者聚合物网状物。通过生物工程改造的表达能愈合创伤的富组蛋白5类似物或衍生物的皮肤成纤维细胞/角质形成细胞也可以应用于创伤。合适的基质或聚合物网状物，例如人造或非人造的皮片，可任选地用选择的富组蛋白5类似物或衍生物进行注入来施用在创伤处以允许富组蛋白5类似物或衍生物缓慢释放来实现在一段时期内对创伤的持续治疗。

在另一方面，所述的富组蛋白5环状类似物或衍生物可与一种或多种其他治疗剂结合，给予需要创伤治疗的哺乳动物，所述其他治疗剂包括例如，创伤愈合因子例如生长因子，例如表皮生长因子，bFCF,PDGF；血小板，皮肤成纤维细胞与角质形成细胞。在此方面，环状富组蛋白5类似物或衍生物可被单独地在独立的剂型中或在组合的剂型中一起，被给予接受创伤治疗的哺乳动物中。

所述的愈合创伤的富组蛋白5类似物或衍生物可进一步在组合疗法中使用，例如，其中激光疗法在创伤位点应用，与多次的环状富组蛋白肽应用一起促进创伤愈合。

本发明的又一方面提供了制品，包括包装和包含富组蛋白5环状类似物或其功能相同的衍生物的组合物。所述包装上贴有标签以指示所述组合物适于治疗创伤。

本领域的技术人员将认识到或者可通过使用不超过常规的实验确定本文所述的具体实施方案的许多等价方式。尽管已经讨论了本发明的具体实施方案，然而上述说明是为了阐释而非限制。本领域技术人员可在阅读本说明书的基础上清楚地理解本发明的许多变化方案。本发明的全部范围应依照本权利要求及其全部等价范围，以及本说明书与这些变化方案而确定。后面的权利要求意欲包括这些等价方式。

以下具体实施例是为了描述本发明的实施方案，而不应被认为是限制。

实施例1-DB2121治疗创伤的活性

材料与方法：DB2121为在机构内使用肽合成器与建立的方法合成的富组蛋白5的环状衍生物。DB2121被确认为环状肽（如图1所示），质量为2558.23g/mol，具有N-RHHCYKRKFHEKHHCHRGY-C的氨基酸序列。化合物使用HPLC纯化以达到至少95%的纯度并冻干。然后将20毫克的DB2121重悬浮在10mM的Tris-Cl，pH7.2，在4°C空气氧化过夜，然后作为原液在后续实验中使用。确切的质量通过直接注入通过MassLynx4.0软件操作的Micromass ESI-Qtof Quattro微质谱仪来确定。酮康唑购自Sigma Chemical Co.。BALB/c小鼠由CharlesRiver提供，在大学动物护理设施（Universities'Animal Care Facility)饲养。首先至少使小鼠适应环境48小时，以实验之前确认其健康。戊巴比妥，Euthanyl，丁丙诺啡和氯已定购自Sigma Chemical Co.。所有对动物实施的步骤均通过西安大略大学的动物饲养与使用委员会（Animal Care and Use Committee at the University of Western Ontario)的许可。

BALB/c小鼠在手术的当天称重并用异氟醚气体麻醉(通过放置在一个密闭容器中，以1升/分钟给予氧气和4%异氟醚)。麻醉完毕将小鼠转移至机构内的鼻面罩系统并为手术保持1升/分钟的氧气和4%异氟醚。通过剃除背部和胸部表面的毛制备小鼠。剃除区域使用氯已定肥皂和乙醇清洁。腹膜内注射一次浓度为0.05mg/kg的叔丁啡来控制疼痛。然后用6mm的圆形活检穿孔器进行手术，所述手术由在背部和胸部区域两处皮肤缺损组成。位于尾部的皮肤缺陷注入了25微升无菌磷酸盐缓冲液（PBS）。位于颅部的创伤注入了25微升不同浓度的受试物（在无菌PBS中的l0mg/kg，1mg/kg，或0.1mg/kg的DB2121或无菌PBS中的10mg/kg酮康唑）。创面保持暴露，小鼠允许休息恢复15分钟。然后，小鼠转移回单独的笼内并且保持充足的食物和水，保持7天。

在第7天，将Balb/c小鼠处死，提取血液，供后续分析。然后使用手术刀切除皮肤伤口，并立即放在室温福尔马林中固定。经过48小时的固定期，使用既定的程序，用不同浓度的PBS/乙醇洗涤组织样品，放置在组织学检查室，并最终在石蜡中过夜包埋。将包埋的皮肤组织切片，厚度为5μm，并放置在显微镜玻片上。所有的玻片最后使用苏木精/伊红染色，并在室温下储存。

使用视觉上的评分系统来衡量创伤愈合过程的进展，它具有6种不同的参数，即损伤大小，肉芽组织，炎症，矿化作用，痂形成，损伤深度。将每个参数的得分在单独的部分记录为两份，根据等级为0（健康），1（轻微），2（中度），3（重度）。正如在图2A中显示的，随后将每个处理的每个参数的分数相加，这个最后的总数被称为累积分数，低的累积分数意味着组织被认为基本上愈合，而高的分数意味着创伤仍然处于不同严重程度的愈合过程中。计算每次处理的累积分数的所观察到的平均值和标准平均值，并绘制在条形图上（图2B）。采用单因素方差分析（每个处理组与对照组）使用Tukey方法的确定结果的显著性。至少p<0.05的置信区间被认为是显著的。

图2A/B显示的结果表明，在每个被测浓度，DB2121显著地促进了伤口愈合过程（**P<0.01；***P<0.001），在DB2121浓度为1mg/kg时累积得分低至9.2+/-2.56，（生理盐水对照组的累积得分为24.9+/-1.28）。组织学的直接观察清楚地显示了由对皮肤缺损引入DB2121而改善的伤口愈合过程。

7天后，对照组的创伤显示出炎症，仍然包含焦痂（痂）组织，具有不完全的表皮，最终出现不均匀分布深色的肉芽组织；创伤的所有标志位于创伤愈合过程中的早期阶段。然而，DB2121对皮肤缺陷的治疗导致了改善的愈合，通过覆盖整个创伤宽度的完全形成的表皮，不明显的焦痂组织，减轻的红肿，以及缺少炎症细胞和深色肉芽组织说明。

进行类似的实验来比较DB2121与对创伤愈合有贡献的已有产物多链丝霉素的创伤愈合活性。如图4所示，DB2121的创伤愈合活性与多链丝霉素相当。

实施例2-DB2121的毒性

还在人类细胞中进行了DB2121的毒性研究。依照Min etal.2004.Nat Biotechnol22：717-23中所述的方法，使用原代人类新生儿包皮上皮细胞检测DB2121的毒性，所述文献的内容以引用的方式并入本文中。简言之，当所述细胞处于对数生长期时，将(A)50μMDB2121、B)50μM富组蛋白H5、(C)50μM酮康唑或(D)DMSO加入所述培养基中。在加入化合物后18和36小时，用相差显微镜在20倍的放大倍数下对所述包皮上皮细胞成像。图像分析后，立即通过SDS-PAGE凝胶提取、分离蛋白，进行蛋白质印迹并检测磷酸化和非磷酸化的ERK1、2以监测所述包皮角化细胞的细胞铺展/迁移和/或增殖。所述实验重复三次。

前述处理之后，除用酮康唑处理以外，人类原代细胞显示形态学正常。酮康唑对哺乳动物细胞的毒性是已知的。

然后研究这些表型是否在分子水平上有所反映。将所述原代细胞裂解并监测称为磷酸化ERK1、2的增殖标志物。与对照相比，在用酮康唑处理的细胞中可观察到ERK1，2活化的明显抑制。相反，与对照相比，在用DB2121处理的细胞中活化的ERK1，2未被抑制。

两种研究都表明DB2121在50μM的工作浓度下对人类原代细胞是无毒的。

为测定DB2121的无毒性浓度范围，将多种浓度的DB2121和作为对照的50μM的酮康唑或DMSO分别加入原代人类包皮上皮细胞培养物中。在加入后0、36和72小时，从培养皿中取出所述上皮细胞并测定存活细胞数。所述试验重复三次。在第72小时时，用相差显微镜在20倍放大倍数下对暴露于各种化合物的包皮上皮细胞成像。为进行细胞计数，用台盼蓝拒染法将所述上皮细胞染色以监测细胞存活率。

图3中表明这些结果显示与酮康唑相比，DB2121在原代培养细胞中具有极低的毒性和良好的毒性特征。

此外，当通过腹膜内途径注射时，小鼠能够耐受15mg/kg浓度的DB2121。当对成年大鼠进行静脉内注射时，最高达且包括1.5mg/kg的浓度是无害的。

实施例3-DB2121的稳定性

质谱测定显示DB2121环状类似物可在人类唾液中可体外稳定至少72小时。将所述环状类似物在1μM浓度和37°C温度下在人类唾液中体外孵育。在从0到72小时的多个时间点，取1.0μl的等分试样直接注射到Micromass Quattro Micro质谱仪中。收集总计3分钟的数据。然后用Mass Lynx4.0Analysis软件处理所述数据。

以活性形式存在的环状类似物的预期平均质量为2557.93。显示环状富组蛋白类似物在人类唾液中可存在高达至少72小时的孵育。对应于环状富组蛋白类似物的在约1质量单位的可接受误差范围内的峰值为在0小时2556.95、在24小时2557.65和在72小时2557.10。

Claims

1.治疗哺乳动物的创伤的方法，包括对所述哺乳动物给予治疗有效量的富组蛋白5环状类似物或其功能上相同的衍生物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述环状类似物包括序列RHHGYKRFHEKHHSHRGY（SEQ ID No.25），其中一个或两个氨基酸残基被选自半胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸和含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许所述富组蛋白环化。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述环状类似物具有选自以下的氨基酸序列：DSHAKRHHCYKRFHEKHHSHRCY,

RHHCYKRKFHEKHHSHRCY,RHHCYKRKFHEKHHSHRGC,

RHHCYKRKFHEKHHSHCGY,RHHCYKRKFHEKHHSCRGY,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY,RHHCYKRKFHEKHCSHRGY,

RHHCYKRKFHEKCHSHRGY,RHHGCKRKFHEKHHSHCGY,

RHHGYKRKCHEKHHCHRGY,RHHGYKRCFHEKHHCHRGY,

RHHGYKCKFHEKHHCHRGY,RHHGYCRKFHEKHHCHRGY,

RHHGCKRKFFIEKHHCHRGY,RHHGYKCKFHEKHHSCRGY,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY,RHHCYKRKFHEKHHCHRG,

RHHCYKRKFHEKHHCHR,RHHCYKRKFHEKHHCH,

RHHCYKRKFHEKHHC,(D)RHHCYKRKFHEKHHCHRG(D)Y,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY-NH2和

RHHCWKRKFHEKHHCHRGY。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述环状类似物中的一个或两个半胱氨酸残基被选自谷氨酸、赖氨酸和其他含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许环化。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述环状类似物是用富组蛋白5制备的，其中所述富组蛋白氨基酸的至少一个被选自谷氨酸、赖氨酸、半胱氨酸和其他含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许环化。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述创伤为选自以下的皮肤损伤：切口，裂伤，擦伤，刺伤，穿透性创伤，钝器外力损伤引起的创伤，烧伤，粘膜创伤，压力性溃疡，动脉溃疡，静脉溃疡和糖尿病溃疡。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述类似物以每kg体重约0.01mg至约100mg的剂量给予。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述类似物与选自以下的其他治疗剂一起给予：表皮生长因子，bFCF，PDGF，血小板，皮肤成纤维细胞和角质形成细胞。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述类似物与基质混合或附加于基质给予，所述基质选自：水凝胶，聚合物，皮肤成纤维细胞/角质形成细胞以及人造或非人造的皮片。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述类似物与激光疗法组合对创伤给予。

11.适用于创伤治疗的组合物，包括富组蛋白5环状类似物或其功能上相同的衍生物和至少一种药物可接受的载体。

12.如权利要求11所定义的组合物，其中所述环状类似物包括序列RHHGYKRFHEKHHSHRGY(SEQ ID No.25)，其中一个或两个氨基酸残基被选自半胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸和含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许所述富组蛋白环化。

13.如权利要求11所述的组合物，其中所述环状类似物具有选自以下的氨基酸序列：DSHAKRHHCYKRFHEKHHSHRCY,

RHHCYKRKFHEKHHSHRCY,RHHCYKRKFHEKHHSHRGC,

RHHCYKRKFHEKHHSHCGY,RHHCYKRKFHEKHHSCRGY,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY,RHHCYKRKFHEKHCSHRGY,

RHHCYKRKFHEKCHSHRGY,RHHGCKRKFHEKHHSHCGY,

RHHGYKRKCHEKHHCHRGY,RHHGYKRCFHEKHHCHRGY,

RHHGYKCKFHEKHHCHRGY,RHHGYCRKFHEKHHCHRGY,

RHHGCKRKFFIEKHHCHRGY,RHHGYKCKFHEKHHSCRGY,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY,RHHCYKRKFHEKHHCHRG,

RHHCYKRKFHEKHHCHR,RHHCYKRKFHEKHHCH,

RHHCYKRKFHEKHHC,(D)RHHCYKRKFHEKHHCHRG(D)Y,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY-NH2和

RHHCWKRKFHEKHHCHRGY。

14.如权利要求13所述的组合物，其中所述环状类似物中的一个或两个半胱氨酸残基被选自谷氨酸、赖氨酸和其他含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许环化。

15.如权利要求11所述的组合物，其中所述环状类似物是用富组蛋白5制备的，其中所述富组蛋白氨基酸的至少一个被选自谷氨酸、赖氨酸、半胱氨酸和其他含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许环化。

16.如权利要求11所述的组合物，其与选自以下的其他治疗剂结合：表皮生长因子，bFCF，PDGF，血小板，皮肤成纤维细胞和角质形成细胞。

17.如权利要求11所述的组合物，其中所述类似物与基质混合或附加于基质，所述基质选自水凝胶，聚合物，皮肤成纤维细胞/角质形成细胞以及人造或非人造的皮片。

18.制品，包括包装和包含富组蛋白5环状类似物的组合物，其中所述包装贴有标签以指示所述组合物适于治疗哺乳动物的创伤。

19.如权利要求18所定义的制品，其中所述环状类似物包括序列RHHGYKRFHEKHHSHRGY(SEQ ID No.25)，其中一个或两个氨基酸残基被选自半胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸和含巯基氨基酸的氨基酸替换以允许所述富组蛋白环化。

20.如权利要求19所述的制品，其中所述环状类似物具有选自以下的氨基酸序列：DSHAKRHHCYKRFHEKHHSHRCY,

RHHCYKRKFHEKHHSHRCY,RHHCYKRKFHEKHHSHRGC,

RHHCYKRKFHEKHHSHCGY,RHHCYKRKFHEKHHSCRGY,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY,RHHCYKRKFHEKHCSHRGY,

RHHCYKRKFHEKCHSHRGY,RHHGCKRKFHEKHHSHCGY,

RHHGYKRKCHEKHHCHRGY,RHHGYKRCFHEKHHCHRGY,

RHHGYKCKFHEKHHCHRGY,RHHGYCRKFHEKHHCHRGY,

RHHGCKRKFFIEKHHCHRGY,RHHGYKCKFHEKHHSCRGY,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY,RHHCYKRKFHEKHHCHRG,

RHHCYKRKFHEKHHCHR,RHHCYKRKFHEKHHCH,

RHHCYKRKFHEKHHC,(D)RHHCYKRKFHEKHHCHRG(D)Y,

RHHCYKRKFHEKHHCHRGY-NH2和

RHHCWKRKFHEKHHCHRGY。