CN103249319A - 即饮型软饮料中的植酸酶 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及酸性即饮型饮料，其具有大于0.95的水活度、低于6的pH值并且富含活性植酸酶。

Description

即饮型软饮料中的植酸酶
本发明涉及富含活性植酸酶(phytase)的即饮型无植酸盐无酒精的饮料。
此外，本发明涉及即饮型饮料用于给人体输送活性植酸酶以及纠正人体矿物质缺乏的用途。
矿物营养(所谓微量营养)缺乏仍然在发展中国家非常普遍，而且特别是在青少年、孕妇和在发达国家的素食主义者中也受到关注，因此是一个重要的公共卫生问题。
缺铁(或“铁质缺乏症”)是营养缺乏的最常见的已知形式。缺铁的直接后果是缺铁性贫血。主要影响婴幼儿、儿童、少女和妇女(特别是孕妇或哺乳期妇女)。在儿童中，特别影响从6个月到2至5岁的儿童。在生命的最初6个月，婴儿通过母乳获取铁。婴儿的铁状况取决于怀孕前母亲的铁状况。断奶后，供应给婴儿的铁完全依赖于从食物中的摄取。在素食主义者中，特别是贫穷国家里(的素食主义者)中，主要摄取的热量来自于富含植酸的产品，其限制了矿物(包括铁)的生物利用度。在婴儿中，缺铁会导致大脑和运动发育延迟以及改变情感发育，这不能通过后期补铁治愈。缺铁婴儿有更少的自身安全感，从而更少探索，以及不太稳定的情绪。
因此，在婴儿早期缺铁会减少儿童以后一生中的发育选项。在成人中，缺铁的明显影响主要是缺乏能量，从而降低了机体和认知能力，降低劳动生产率以及增加产妇死亡率。由于铁是大多数动植物必不可少的，很大范围的食物可以提供铁。然而，这些食物被身体吸收和处理的方式不同；例如，从肉类(血红素铁源)中的铁比颗粒状铁(非血红素铁源)更容易被分解和吸收，并且一种类型食物中的矿物质和化学物质可能抑制来自同时吃下的另一种类型食物的铁的吸收。
缺锌(或“低锌血症”)是一种可用于代谢需要的锌不足的状况。事实上，三分之一的世界人口有缺锌的风险，范围从4％到73％，这取决于国家。在发展中世界里，缺锌是第五大引发疾病的危险因素。给人提供微量营养(包括锌)是在来自著名经济学家的国际小组的“哥本哈根共识”中确定的主要全球性问题的四种速赢方案之一。保守估计，25％的世界人口有缺锌的风险。主要消费以锌的生物利用度低的植物为基础饮食的人群往往缺锌。需要增加锌的生理状态包括婴儿和儿童的生长期以及孕期妇女。缺锌与皮肤和毛发问题以及不理想的免疫功能、以及延迟的性成熟(尤其在男孩中)有关。
缺钙(低钙血症)是在血液中存在低的血清钙水平，通常定为低于2.1mmol/L或9mg/dl，或离子钙水平低于1.1mmol/L(4.5mg/dL)。它是一种电解质紊乱。在血液中，所有钙中约一半与蛋白质(例如血清白蛋白)结合，但是人体调节的钙是未结合的，或离子化的。如果一个人的血液蛋白水平不正常，则血浆中的钙可能不准确。在这种情况下，离子钙水平被认为是临床上更准确的。
缺镁是指低于规定水平的饮食镁的缺乏，这可导致许多症状和状况。通常可以通过改变饮食或口服补充剂来纠正。然而，在更严重的情况下，静脉补充是必要的。缺镁的症状包括：过度兴奋、肌肉无力和疲倦。严重缺镁可导致因心脏衰竭而死亡。在儿童和成年的生长阶段，骨骼健康和强度需要钙和磷，来愈合骨折并在整个生命中(包括更年期)保持健康和强壮的骨骼。
植酸(或以盐形式时的植酸盐)在许多植物组织(尤其是麸皮和种子)中是磷和矿物质的主要储存形式。植酸盐被发现于坚果、种子(包括豆类和豆荚，例如豆、黄豆、花生、豌豆、鹰嘴豆、小扁豆和其他)以及谷物(例如小麦、玉蜀黍/玉米、(糙)米、高粱、黑小麦、黑麦和其他)的外壳和胚种中。它是重要矿物质(如钙、镁、铁和锌)的强大螯合剂，并且因此可能造成在那些其矿物质摄取依赖于这些食物的饮食的人的矿物缺乏。从这个角度看，植酸盐是一种抗营养。
植酸酶是将植酸(或植酸盐)分裂成低级肌苷磷酸酯和植源肌醇(myo-inositol)以及正磷酸盐的酶，并从而增加被包藏的矿物质的生物利用度。类似于植酸，植酸酶被发现于谷物的外壳和胚种，并通过食物加工(如浸泡、面团加工、发酵等)活化。然而，各种类型谷物不是总是具有与内源性植酸盐含量相关的量的内源性植酸酶活性。在使用酸面闭的全黑麦膳食面包的生产中，所有的植酸盐络合物被分裂，但用酵母制造全麦餐食面包的发酵过程中仅约50％的植酸盐络合物被分裂。除食品加工技术本身外，面粉的物理参数(诸如颗粒大小)以及pH值也影响植酸盐的酶促降解：磨细谷粉、低pH以及几个小时的浸泡时间促进矿物质的自由化。
本领域技术人员已知，为了降低其抗营养作用，在加工基于蔬菜的营养饮料时可以使用添加的植酸酶(WO2009/098182)，来降低植酸盐的量，从而改善矿物质盐的生物利用度。然而，对于某些食物来说，不幸的是这是不可用的，因为食物加工的条件与酶发挥其活性的条件不相容，或者这样的修改后的食物加工条件将大幅增加所述加工的食物的生产成本。
或者，植酸酶可以以药片形式与膳食一起输送给人体。然而，这不是优选的形式，因为目前的趋势是避免每天摄入的药片数量的倍增。
WO2002/054881公开了包含植酸酶的适合人类消费的饮料。上述公开的饮料为牛奶。牛奶通常包括超过3％的蛋白质和本领域中技术人员已知的用来稳定酶活性并因此稳定植酸酶活性的其他因子。事实上，蛋白质是熟知的酶活性稳定剂，这可以解释为什么在牛奶中观察到具有一定稳定性的植酸酶。然而，由于液态食品中的植酸酶对温度、光和氧的固有不稳定性，包含植酸酶的饮料需要保持冷藏或冷冻。因此，直到现在该应用被限制于具有复合基质(包括蛋白质)的饮料和保持冷藏或冷冻的饮料。
WO2004/071218公开了可以是液体的食品制剂。然而，由于植酸酶在液体中不稳定性，这限于富含蛋白质的饮料，如牛奶和豆奶。
即饮型饮料代表给人们输送健康益处的最好的食物类别。由于植酸酶储存稳定性与含植酸酶的食品/饲料的水活度呈负相关的事实，植酸酶补充的即饮型饮料是业界期待已久的。
本发明的目的是找到补充有植酸酶的高水活度的即饮型饮料，其能够保留酶活性而在人的胃中到达其活性的目标位置前不用冷藏或冷冻，从而输送期望的生物可利用的铁和锌矿物质，并解决上面提到的问题。此外，软饮料中的这种活性植酸酶解决了含植酸盐食品的预处理的成本问题，这样的预处理在发展中国家当地制备富含植酸盐的餐食时也不总是可能的。
本申请的发明人现惊奇地发现，具有大于0.95的水活度以及低于6的pH值的酸性即饮型软饮料提供稳定植酸酶的活性的最佳基质。在具有限制的或甚至没有任何蛋白质的本发明的即饮型饮料中，植酸酶活性对温度、光保持稳定，并且更耐降解，这第一次允许在商品化期间或商品化后未冷藏的即饮型饮料中使用活性植酸酶。
本领域中技术人员没有预见的是，在包含有限量的脂肪和/或蛋白质的这样的高水活度酸性液体中加入植酸酶，在摄取富含植酸和/或植酸盐的膳食的同时或之前不久将其喝下时，将引起植酸酶稳定性和随后的人体中矿物生物可利用性方面的改善。
因此，在第一实施方式中，本发明涉及即饮型无植酸盐无酒精软饮料，其具有大于0.95的水活度(Aw)、低于6的pH值、低于3wt.-％的蛋白质含量并且富含10至50000FTU/升的植酸酶。
水活度或Aw是水含量的量度。它被定义为液体的蒸气压除以同温下纯水的蒸气压；因此，纯蒸馏水的水活度等于1。
术语“即饮型”饮料(常称为RTD)为用于描述以即可消费的制备好的形式出售的经包装的饮料。该术语包括软饮料、调味水、果汁、混合饮料(schorle)以及汽酒。根据饮料的类型，它们通常具有1到5年的保质期。
在一个优选的实施方式中，所述即饮型饮料为软饮料。术语“软饮料”(也称为苏打、汽水、苏打汽水、可乐或碳酸饮料)为通常不含酒精(但可含有少量(通常少于0.5体积％))的饮料。软饮料经常是碳酸化的并常在冷藏或室温时消费。一些最常见的软饮料包括可乐、调味水、苏打水、冰镇茶、甜茶、发泡柠檬水(或其他柠檬软饮)、浓缩果汁、果汁饮料、根啤、橘子苏打水、葡萄苏打水、奶油苏打和姜汁啤酒。
术语“软”与“硬”(即体积上具有高酒精含量的饮料)相对使用。通常也暗指饮料不包含牛奶或其他乳制品。热巧克力、热茶、咖啡、饮用水、果汁、混合饮料或汽酒和奶昔不在该分类中。
本文中使用的术语“植酸酶”表示将植酸特异性地分裂为肌醇(myo-inositol)和正磷酸盐的磷酸酶。根据正磷酸盐从其分裂离开植酸的碳原子，存在3-植酸酶和6-植酸酶的区别。催化的反应如下：
3-植酸酶(酶EC3.1.3.8)：
肌醇(myo-inositol)六磷酸脂+H2O＝1D-肌醇1，2，4，5，6-五磷酸脂+磷酸盐
6-植酸酶(酶EC3.1.3.26)：
肌醇六磷酸脂+H2O＝1D-肌醇1，2，3，4，5-五磷酸脂+磷酸盐
根据本发明，特别优选食品级3-植酸酶、食品级6-植酸酶或其混合物。本发明的植酸酶可来自植物和/或微生物源。植酸酶的优选植物源为麦芽。来自真菌源的优选的植酸酶为从黑曲霉(Aspergillus niger)或担子菌隔孢伏革菌(Peniophora lycii)分离的。来自黑曲霉的真菌植酸酶已经商业化用于动物饲料中。已经从大肠杆菌(E.coli)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)以及从耐热性微生物中分离出微生物植酸酶。已经从许多微生物中克隆编码酶的基因，并且能够在工业生产规模上容易地生产和纯化相应的酶。此外，植酸酶能够被基因工程，以使它们更耐热、光和/或化学降解。如EP 0897985B1所描述，优选的植酸酶为NatuphosTM5000L、NatuphosTM5000G、来源于担子菌隔孢伏革菌的植酸酶或基因工程合成的植酸酶。
以FTU为单位测定植酸酶活性：1FTU(也称为FYT)是在pH5.5和37℃下每分钟释放出1μmole磷酸盐的植酸酶的量。
术语“富含植酸酶”指的是以每升至少10FTU的量将外源性植酸酶加入到软饮料中。
在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料具有2.5和5.5之间的、优选3和5.5之间、最优选在3.5和5之间的pH。
使用任何食品级的有机酸、优选使用可源自各种商业供应商(例如Citrique Beige、Tienen)的食品级柠檬酸来酸化本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料。因此，在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料的特征在于其包含0.5至4g/l的柠檬酸。
在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料富含每升10至20000FTU、优选地至少每升20、最优选至少每升50FTU且优选少于每升5000FTU、最优选少于每升2000FTU的植酸酶。
在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料具有低于1wt.-％、优选在0和0.5wt.-％之间的总脂肪含量。
在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料具有低于3wt.-％、优选低于2.5wt.-％的总蛋白质含量。
在又一个实施方式中，本发明所用植酸酶为微生物来源的并且优选地来自真菌曲霉属(Aspergillus)、担子菌隔孢伏革菌(Peniophora lycii)，或如EP0897985B1中所描述的由合成基因工程一致基因制造。植酸酶优选以液体水溶性形式(例如：甘油、山梨糖醇等)、或以粉末/颗粒的水溶性形式(例如：用麦芽糖糊精配制)并且可在本发明的即饮型软饮料的生产过程中的任何时间加入。
在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料为碳酸化的。碳酸化指的是在水溶液中溶解二氧化碳。该过程通常涉及高二氧化碳压强。降低该压强后，从溶液中作为气泡释放出二氧化碳。在碳酸饮料中观察到这种效应。由于水溶液的碳酸化需要高的压强，所述溶液的容器的开启伴随着爆裂声。碳酸化用来减少苏打中游离氧的可用性，并且能够少量降低液体的pH值，从而可以防止细菌的生长。或者，可以对即饮型软饮料进行无菌填充、根据标准的饮料灭菌条件进行巴氏灭菌，或者通过本领域技术人员已知的其它手段来消毒。实现微生物稳定性的其他方式为无菌灌装或热灌装。无菌灌装是指用已经消毒的饮料填充罐或其他容器，因此该过程必须在无菌条件下进行。饮料沿狭窄管道传输时的连续消毒(随后进行无菌填充)允许更快速的加热，这样比通过装罐后加热的消毒对饮料质量的影响更小。最优选的是，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料为碳酸化的。
在另一个实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料还富含营养物质、其它酶、调味剂或其混合物。
在本文中的术语“营养物质”表示人类膳食的生理必需组分，诸如维生素，例如维生素A、β-胡萝卜素、B族维生素(B1，B2，B3，B5，B6，和/或B12)、叶酸、烟酸、维生素E、维生素C、生物素、泛酸盐、维生素K、维生素D以及它们的衍生物和混合物，以及其他矿物质和微量元素，例如铁、硒、锌、钙、镁和/或锰。术语营养物质也表示必需的脂肪酸，例如：ω-3脂肪酸(诸如二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA))、多不饱和的ω-6脂肪酸(诸如花生四烯酸)、肌酸、辅酶Q10、白藜芦醇、咖啡因、左旋肉碱和人参提取物。
营养物质通常以粉末形式加入，甚至油性维生素(如维生素A或维生素E)优选以粉末产品形式(例如可以包含其他成分(如基质组分(如水胶体)、抗氧化物、增塑剂和/或乳化剂)的被吸附物、喷雾干燥粉末或小颗粒)使用。最优选为这些营养物质的水分散性粉末状产品形式。
本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料可被包装在合适的罐子或瓶子中。本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料的特征在于，在所述软饮料在25℃下储存6个月后植酸酶活性为初始活性的至少40％、优选50％、更优选60％、最优选70％。
本发明的组合物的功效可以评估如下：
可以使用本领域中已完善的方法(动物饲料等；植酸酶活性的测定ISO30024：2009)来评估即饮型饮料中植酸酶活性的稳定性。
或者，可以通过矿物的生物利用度研究来评估间接功效：使用标记的Fe以及采用稳定的同位素测量，体内评估人的铁吸收，从而允许评估人受试者内的铁吸收(如B.Troesch et al.，Am J Clin Nutr，2009；89：539-44中所述)。这可通过血浆响应曲线，在曲线中可比较有植酸酶和无植酸酶配方的AUC(曲线下面积)。
在另一实施方式中，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料用于给人体输送活性植酸酶，更具体地用于纠正人体中矿物质缺乏。更优选地，本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料与含植酸和/或植酸盐的膳食相结合使用。即饮型软饮料最好与餐食一起、在餐食前不久或在餐食后不久来消费。
因此，基于本发明的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料有助于给儿童提供最好的生命的初期扶植，有助于提高儿童的能量，支持皮肤、毛发和指甲健康，支持强大的免疫功能，有助于提高免疫系统，支持骨骼健康，支持健康的儿童发育，有助于保持儿童生长和茁壮成长，支持健康的认知发育，支持改善的认知和记忆，增加肌肉的新陈代谢以激发能量调动，改善骨骼肌肉质量(通过在受损时刺激合成代谢途径、抑制分解代谢途径并加速肌肉再生；通过将用于能量产生的营养物质用途从碳水化合物或蛋白质燃烧转变为脂肪燃烧；促进脂肪燃烧；作为脂肪燃烧的调节剂，通过脂肪酸氧化来增加能量消耗，增加脂肪代谢，促进脂肪氧化，减少体内脂肪并增加肌肉质量；帮助实现良好的体形(美体塑身)，减少体内脂肪并增加瘦肌肉质量；以及增加产热；增加人体新陈代谢来消耗更多的能量)。
在另一个实施方式中，提供了纠正人体矿物缺乏的方法，其包含如下步骤：a)施用具有大于0.95的水活度、低于6的pH值、低于3wt.-％的蛋白质含量并富含10至50000FTU/升的植酸酶的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，b)观察矿物盐水平趋于正常。
在本发明的又一方面为进行商务业务的方法，所述商务业务包含向消费者上市销售富含10至50000FTU/升的植酸酶的即饮型无植酸盐无酒精软饮料，所述方法包含告知消费者当与含植酸和/或植酸盐的餐食组合饮用时，富含10至50000FTU/升的植酸酶的即饮型无植酸盐无酒精软饮料纠正人体矿物质缺乏，从而有助于给儿童提供最好的生命的初期扶植，有助于提高儿童的能量，支持皮肤、毛发和指甲健康，支持强大的免疫功能，有助于提高免疫系统，支持骨骼健康，支持健康的儿童发育，有助于保持儿童生长和茁壮成长，支持健康的认知发育，支持改善的认知和记忆，增加肌肉的新陈代谢以激发能量调动，改善骨骼肌肉质量(通过在受损时刺激合成代谢途径、抑制分解代谢途径并加速肌肉再生；通过将用于能量产生的营养物质用途从碳水化合物或蛋白质燃烧转变为脂肪燃烧；促进脂肪燃烧；作为脂肪燃烧的调节剂，通过脂肪酸氧化来增加能量消耗，增加脂肪代谢，促进脂肪氧化，减少体内脂肪并增加肌肉质量；帮助实现良好的体形(美体塑身)，减少体内脂肪并增加瘦肌肉质量；以及增加产热；增加人体新陈代谢来消耗更多的能量)。
所述用途也可与确定的药物治疗组合。所述“告知”可通过如下来实现：在包装上印刷该信息，或邻近所述组合物显示所述信息，或通过不在物理上接近产品的其他单独的广告媒体(即电视、收音机、互联网、广告牌或其他已知的广告方法)。
通过如下实施例来进一步说明本发明。
实施例
实施例1：调味水的组合物
实施例2：软饮料的组合物
本发明的组合物包含如下组分：
水为来自Eden Springs(瑞士)的饮用水，其具有如下组成：
Figure BDA00002856692600093
实施例3：苹果混合饮料(apple sehorle)的组合物
实施例4：10％橙汁饮料的组合物
Figure BDA00002856692600102
实施例5：含4％果汁的即饮型饮料的组合物
Figure BDA00002856692600103
实施例6：即饮型能量饮料的组合物
Figure BDA00002856692600104
Figure BDA00002856692600111
实施例7：即饮型运动饮料(樱桃味运动饮料)的组合物
Figure BDA00002856692600112
实施例8：增加水活度的基质中植酸酶的稳定性
在具有增加的水含量和初始补充有400FTU/g植酸酶(植酸酶5000L)的不同食物产品中测定35℃下储存6周和12周后的残余植酸酶活性。表1示出了在35℃下储存6周和12周后水活度(Aw)和植酸酶的残余活性(稳定性)的逆相关性。Aw越高，植酸酶活性的稳定性越小。
表1：在增加水活度的食品基质中植酸酶活性
实施例9：在不同温度和pH下在酸性软饮料中植酸酶的稳定性
植酸酶(植酸酶5000L)采用两种浓度：在缓冲溶液(pH5.5，作为参照)和在具有不同pH值：2.5和3.5的软饮料中2000FTU/1和8000FTU/1。软饮料在室温下和40℃下储存于玻璃瓶中。在储存期间的不同时间点测量植酸酶活性。
材料和方法：
植酸酶：植酸酶5000L(液体形式)
缓冲溶液(pH5.5)：具有0.01％吐温20的250mM醋酸钠
软饮料：在本实验中使用如实施例2中所述的组合物的软饮料(植酸酶含量除外，调节至2000或8000FTU/1)。
瓶装糖浆的制备：将山梨酸钾加入到11容量瓶中并用软化水溶解。逐一加入糖浆、柠檬酸和杏味料。每次加入后，用磁力搅拌器轻轻混合溶液。
饮料的制备：用饮用水(稍微小于1升)稀释瓶装糖浆并调节pH。使用HCl溶液调节pH至2.5并使用NaOH溶液使pH＝3.5。pH调节后，将饮用水加至11。缓冲液和饮料以两种浓度富含植酸酶，A0＝2000FTU/I和A0＝8000FTU/I并分装于玻璃瓶(0.21)中。然后盖上瓶盖。
酶活性测量：将0.4ml的0.25M的醋酸钠和0.01％吐温-20(pH5.5)中的稀释过的酶样品加入到Eppendorf管中，并在37℃下进行预孵肓。加入0.8ml预孵育的底物溶液(在0.25M醋酸钠pH5.5中7.5mM来自Sigma的植酸钠)，以开始反应。在37℃下30min后，通过加入0.8ml钼酸盐/钒酸盐停止试剂来停止反应。在415nm下测量吸光度。一个植酸酶单位(U)为在所选反应条件下每分钟从植酸盐中释放1μmol无机磷酸盐的酶的量。所有样品均重复测定两次。
结果：
表2示出了当2种不同浓度植酸酶的软饮料在室温下储存时，在不同时间点和不同pH值下残余植酸酶活性的百分比。
Figure BDA00002856692600131
表2：在不同时间点(7、14、21、42天)不同pH(3.5和2.5)下当软饮料在室温下储存时，以残余活性的％表达的植酸酶活性的保留。示出了2种浓度的植酸酶(2000和8000FTU/1)的数据。
在储存于室温下的缓冲液中，植酸酶活性在42天内保持恒定。在软饮料中，储存中植酸酶活性降低。在具有较高pH的软饮料中，保留比具有较低pH的软饮料中更高。植酸酶的初始浓度(A0)未对结果示出明显影响。A0＝8000FTU/1所得到的结果与A0＝2000FTU/1所得到的结果非常相似。因此，稳定性很可能与软饮料中的所述蛋白质含量无关。
表3示出了当2种不同浓度的植酸酶软饮料在40℃下储存时，在不同时间点和不同pH值下，残余植酸酶活性的百分比。
Figure BDA00002856692600141
表3：在40℃储存的未巴氏灭菌的缓冲液和软饮料中植酸酶的保留。
结论
结果非常令人惊讶，因为在饮料中植酸酶的活性的保留比具有非常高水活度(Aw～1)的系统所期望的要高得多。室温下储存42天后，在pH2.5的未巴氏灭菌的软饮料中，保持率约为75％，并且在pH3.5的未巴氏灭菌的软饮料中约为85％。
实施例10：在不同pH下PET-瓶中酸性软饮料中植酸酶的稳定性
植酸酶(植酸酶5000L)采用在缓冲溶液(pH5.5，作为参照)和在具有不同pH值：2.5和3.5的软饮料中2000FTU/l的浓度。软饮料在室温(25℃)下储存于PET-瓶中。在储存期间的不同时间点测量植酸酶活性。
材料和方法：
植酸酶：植酸酶5000L(液体形式)
缓冲溶液(pH5.5)：具有0.01％吐温20的250mM醋酸钠。
软饮料：
成份 软饮料pH2.5[g] 软饮料pH3.5[g]
糖浆64°Brix 156.2 156.2
山梨酸钾 0.2 0.2
柠檬酸溶液50％w/w 5.0 5.0
杏味料，78848-56Givaudan 0.2 0.2
植酸酶euphovida5000L 0.4 0.4
HCL1N 4.5 -
NaOH1N - 8.1
苏打水至 1000.0 1000.0
瓶装糖浆的制备：将山梨酸钾加入到11容量瓶中并用软化水溶解。逐一加入糖浆、柠檬酸和杏味料。每次加入后，用磁力搅拌器轻轻混合溶液。将用于调节pH2.5的HCL1N或调节pH3.5的NaOH1N加入到瓶装糖浆中。
饮料的制备：对于饮料，制备瓶装糖浆(见上述)。用相应量的糖浆充满单个瓶中。用苏打水稀释糖浆至最终强度。分别添加植酸酶溶液于每个瓶中，用瓶盖将瓶封闭并小心搅拌以使植酸酶均匀分布于饮料中。水中CO2-含量约为7g/l。
酶活性测量：将0.4ml的0.25M的醋酸钠和0.01％吐温-20(pH5.5)中的稀释过的酶样品加入到Eppendorf管中，并在37℃下进行预孵育。加入0.8ml预孵育的底物溶液(在0.25M醋酸钠pH5.5中7.5mM来自Sigma的植酸钠)，以开始反应。在37℃下30min后，通过加入0.8ml铜酸盐/钒酸盐停止试剂来停止反应。在415nm下测量吸光度。一个植酸酶单位(U)为在所选反应条件下每分钟从植酸盐中释放1μmol无机磷酸盐的酶的量。所有样品均重复测定两次。
结果：
表4示出了当在室温(25℃)下储存软饮料时，在不同时间(以周计)以及不同pH值下残余植酸酶活性的百分比。
表4：
储存时间(周) 0 1 2 3 6 12 26 43
缓冲液pH5.5 100 95 96 95 96 92 - 92
软饮料pH3.5 100 - - 101 98 97 92 92
软饮料pH2.5 100 - - 78 67 54 - 29
对于pH3.5和缓冲液，在碳酸软饮料中植酸酶稳定性非常好。

Claims (17)

1.即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其具有大于0.95的水活度、低于6的pH值、低于3wt.-％的蛋白质含量并且富含10至50000FTU/升的植酸酶。
2.如权利要求1所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于所述pH值在2.5和5.5之间。
3.如权利要求1或2中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于所述pH值在3和5.5之间。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于其包含0.5至4g/l的柠檬酸。
5.如权利要求1-4中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于其富含50至20000FTU每升的植酸酶。
6.如权利要求1-5中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于脂肪含量低于1wt.-％。
7.如权利要求1-6中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于所述植酸酶来源于微生物，并优选来自Aspergillus。
8.如权利要求1-7中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于其为无菌填充、巴氏灭菌的或碳酸化的。
9.如权利要求1-8中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于其还富含营养物质，其它酶、调味剂或其混合物。
10.如权利要求1-9中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，其特征在于，在所述软饮料在25℃下储存6个月后，所述植酸酶活性至少为初始活性的50％。
11.如权利要求1-10中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料用于给人体输送活性植酸酶的用途。
12.如权利要求1-10中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料用于给人体输送至少150FTU植酸酶的用途。
13.如权利要求1-12中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料用于纠正人体矿物质缺乏的用途。
14.如权利要求1-13中任意一项所述的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料与含植酸和/或植酸盐的餐食相结合的用途。
15.纠正人体矿物质缺乏的方法，其包含如下步骤：
a)施用即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，所述软饮料具有大于0.95的水活度、低于6的pH值、低于3wt.％的蛋白质含量并且富含10至50000FTU/升的植酸酶。
b)观察矿物盐水平接近正常。
16.进行商务业务的方法，所述业务包含向消费者市场销售富含10至50000FTU/升植酸酶的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料，所述方法包括告知消费者当与含植酸和/或植酸盐的餐食组合饮用时，富含10至50000FTU/升植酸酶的即饮型无植酸盐无酒精的软饮料纠正人体矿物质缺乏。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述告知通过如下来实现：在包装上印刷该信息，或邻近所述组合物显示该信息，或通过不在物理上接近产品的其他单独的广告媒体。
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