CN103239711B - 曲普瑞林注射液和制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种曲普瑞林注射液和制法。具体地说，本发明液体药物组合物曲普瑞林或其药学可接受的盐、乙酸钠、和水。本发明方法包括以下步骤：步骤1：将曲普瑞林或其药学可接受的盐和乙酸钠溶解于适量注射用水中；步骤2：测定步骤1所得药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的盐酸溶液调节pH值至4.0～7.0之间；步骤3：测定步骤2所得药液中的活性成分的浓度，加适量注射用水使活性成分的浓度达到所述液体药物组合物中规定的浓度；再次测定药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的盐酸溶液调节pH值至4.0～7.0之间；步骤4：将步骤3所得药液经过0.22μm微孔滤膜除菌过滤，灌装到无菌玻璃瓶中，即得液体药物组合物。本发明组合物具有良好的药学性能。

Description

曲普瑞林注射液和制法

技术领域

本发明涉及曲普瑞林的制剂，尤其是涉及曲普瑞林注射液。

背景技术：

曲普瑞林，已以其醋酸盐或者巴莫酸盐的形式应用于临床，临床适应症包括前列腺癌、性早熟、辅助生殖技术(ART)例如体外受精术(IVF)、子宫内膜异位症和子宫肌瘤等，已上市产品例如有达菲林。曲普瑞林英文名为：Triptorelin，别名有：垂普托雷林、色氨瑞林、Decapeptyl等，其CAS登记号为57773-63-4，分子式，C64H82N18O13，分子量1311.45。曲普瑞林的肽序为：Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂。

曲普瑞林系合成的促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物。其结构的改良是将天然分子结构中的第六个左旋氨基酸(甘氨酸)，以右旋色氨酸取代以使其促效作用更为显著。曲普瑞林作用与GnRH相同，但其血浆半衰期延长且对GnRH受体的亲和力更强，因此曲普瑞林成为GnRH受体的强力激动剂。曲普瑞林注射后，最初会刺激垂体分泌促性腺激素(Gn)，即黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)。当垂体经过长期的刺激后会进入不应期，促性腺激素的释放会减少，因而使性类固醇(睾丸酮或雌激素)降低至去势水平。上述作用是可逆转的。

1974年日本武天化工的Fujino Masahiko等人首先发明促黄体急速释放激素的十肽酰胺类似物的合成工艺。并在日本，德国，美国等国家申请专利，专利号分别为：JP19740027442、DE2446005、US4008209(液相法)。

目前市售曲普瑞林制剂有水针剂(通常药物浓度为1ml:0.1mg；例如国药准字H20044922，醋酸曲普瑞林注射液，长春金赛药业)、冻干粉针剂(通常药物浓度为0.1mg；例如注册证号H20040237，辉凌制药有限公司)，然而这些制剂通常需要在2-8℃避光条件下低温贮藏，可见该产品的稳定性问题是需要特别关注的。

因此，提供一种方法以制备具有良好药学性能例如稳定性能的曲普瑞林制剂例如水溶液注射剂，仍然是本领域技术人员极其期待的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方法以制备具有良好药学性能例如稳定性能的曲普瑞林制剂例如水溶液注射剂，期待该方法可以得到高性能例如较高稳定性的曲普瑞林制剂。本发明人令人惊奇地发现，使用特定配方制成的曲普瑞林具有良好的品质。本发明因此而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种液体药物组合物，其中包括：曲普瑞林或其药学可接受的盐、乙酸钠、和水。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其每1ml中包含曲普瑞林或其药学可接受的盐的量以曲普瑞林(C64H82N18O13)计为0.01～1mg，例如0.05～0.5mg，例如约0.05mg、约0.1mg、约0.25mg、约0.5mg。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其每1ml中包含乙酸钠的量为1～10mg，例如2～8mg，例如3～7mg。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其中所述曲普瑞林的药学可接受的盐选自：醋酸盐或者巴莫酸(亦称双羟萘酸)盐。在一个实施方案中，所述曲普瑞林的药学可接受的盐是醋酸曲普瑞林。在一个实施方案中，所述曲普瑞林的药学可接受的盐是巴莫酸曲普瑞林。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，该溶液的pH值在4.0～7.0之间，优选该溶液的pH值在4.5～6.5之间，优选该溶液的pH值在5.0～6.0之间。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其中还包含药学可接受的酸碱调节剂。在一个实施方案中，所述酸碱调节剂选自盐酸、氢氧化钠、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它们的水溶液。该酸碱调节剂的用量以足以使项目1所述配方的药液的pH值达到规定值即可，而通常不必作特别的限制。通常药液的酸碱调节操作是本领域技术人员具有的一般技能，并且通常是根据药液的已有pH值和目标pH值，再用适量酸碱调节剂例如1N盐酸溶液或1N氢氧化钠或者此二者组合来调节。

在本发明液体药物组合物中，其中包含的主要物质是水，其作为该组合物的载体或溶媒。作为载体或溶媒的水的量是不必作特别限定的，本领域技术人员在配制液体药物组合物时通常是向药液中加入适量的水以使整个溶液体积达到规定的量；例如，在配制时加入适量的水，使最终溶液达到每1ml中包含曲普瑞林(C64H82N18O13)的量为0.1mg的浓度，即水的量通常是以“定容量、”“平衡量”等方式加入。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其每1ml中包含：

曲普瑞林或其药学可接受的盐，其量为以曲普瑞林(C64H82N18O13)计为0.01～1mg，例如0.05～0.5mg，例如约0.05mg、约0.1mg、约0.25mg、约0.5mg；

乙酸钠，其量为1～10mg，例如2～8mg，例如3～7mg；

任选的酸碱调节剂，其量为使该溶液的pH值调节在4.0～7.0之间，优选使该溶液的pH值调节在4.5～6.5之间，优选使该溶液的pH值调节在5.0～6.0之间；和水。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其中所述的水是注射用水。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其为注射用制剂。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其为无菌产品和/或无热源的注射液。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其为过滤除菌的无菌产品的注射液。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其是单位剂量包装的制剂。例如，其是玻璃瓶包装的单位剂量制剂，每瓶装量可以是0.1～10ml，例如每瓶标示装量为0.5ml、1ml、2ml、5ml。

根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其中还包含选自下列的辅料：甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麦芽糖醇、氯化钠及其组合。根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其每1ml中包含上述辅料的量为2～20mg，例如5～10mg。

进一步地，本发明第二方面提供了制备液体药物组合物例如本发明第一方面任一项的液体药物组合物的方法，其包括以下步骤：

步骤1：将曲普瑞林或其药学可接受的盐和乙酸钠溶解于适量注射用水中；

步骤2：测定步骤1所得药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的盐酸溶液调节pH值至4.0～7.0之间，例如调节至4.5～6.5，例如调节至5.0～6.0；

步骤3：测定步骤2所得药液中的活性成分的浓度，加适量注射用水使活性成分的浓度达到所述液体药物组合物中规定的浓度；再次测定药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的盐酸溶液调节pH值至4.0～7.0之间，例如调节至4.5～6.5，例如调节至5.0～6.0；

步骤4：将步骤3所得药液经过0.22μm微孔滤膜除菌过滤，灌装到无菌玻璃瓶中，即得液体药物组合物。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物每1ml中包含曲普瑞林或其药学可接受的盐的量以曲普瑞林(C64H82N18O13)计为0.01～1mg，例如0.05～0.5mg，例如约0.05mg、约0.1mg、约0.25mg、约0.5mg。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物每1ml中包含乙酸钠的量为1～10mg，例如2～8mg，例如3～7mg。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述曲普瑞林的药学可接受的盐选自：醋酸盐或者巴莫酸(亦称双羟萘酸)盐。在一个实施方案中，所述曲普瑞林的药学可接受的盐是醋酸曲普瑞林。在一个实施方案中，所述曲普瑞林的药学可接受的盐是巴莫酸曲普瑞林。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物的pH值在4.0～7.0之间，优选该溶液的pH值在4.5～6.5之间，优选该溶液的pH值在5.0～6.0之间。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物中还包含药学可接受的酸碱调节剂。在一个实施方案中，所述酸碱调节剂选自盐酸、氢氧化钠、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它们的水溶液。该酸碱调节剂的用量以足以使项目1所述配方的药液的pH值达到规定值即可，而通常不必作特别的限制。通常药液的酸碱调节操作是本领域技术人员具有的一般技能，并且通常是根据药液的已有pH值和目标pH值，再用适量酸碱调节剂例如1N盐酸溶液或1N氢氧化钠或者此二者组合来调节。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物每1ml中包含：

曲普瑞林或其药学可接受的盐，其量为以曲普瑞林(C64H82N18O13)计为0.01～1mg，例如0.05～0.5mg，例如约0.05mg、约0.1mg、约0.25mg、约0.5mg；

乙酸钠，其量为1～10mg，例如2～8mg，例如3～7mg；

任选的酸碱调节剂，其量为使该溶液的pH值调节在4.0～7.0之间，优选使该溶液的pH值调节在4.5～6.5之间，优选使该溶液的pH值调节在5.0～6.0之间；和水。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物为注射用制剂。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物为无菌产品和/或无热源的注射液。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物为过滤除菌的无菌产品的注射液。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物是单位剂量包装的制剂。例如，其是玻璃瓶包装的单位剂量制剂，每瓶装量可以是0.1～10ml，例如每瓶标示装量为0.5ml、1ml、2ml、5ml。

根据本发明第二方面任一项的方法，其中所述液体药物组合物中还包含选自下列的辅料：甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麦芽糖醇、氯化钠及其组合。根据本发明第一方面任一项的液体药物组合物，其每1ml中包含上述辅料的量为2～20mg，例如5～10mg。

本发明引述的文献资料，其全部内容通过引用并入本文。在本发明的任一方面，其任一实施方案的任意一个或多个技术特征可以组合到该方面的任一其它实施方案中，也可以组合到另一方面的任一实施方案中，只要这种组合不会出现矛盾。

本发明使用的各种术语具有本领域技术人员常规理解的一般含义，在与该一般含义不一致时，以本发明为准。

本发明总体上提供的是一种液体组合物，其中的主要载体是水，而溶质包括活性成分以及乙酸钠等。因此，为方便起见，在本发明中，在表示浓度百分数的情况下使用到“%”时，如未另外说明，是指重量/体积百分数。

本发明使用的pH调节剂包括但不限于氢氧化钠溶液、盐酸溶液，例如1M氢氧化钠溶液、1M盐酸溶液。在本发明中，提及本发明组合物或者用于对照的组合物的pH值时，该pH值是组合物的最终pH值，而不是其中间物料的pH值。

在本发明中，曲普瑞林或其药学可接受的盐作为本发明药物组合物的活性成分，其可以通过市售购得，例如可得自成都天台山制药有限公司的醋酸曲普瑞林(药品批准文号H20052269)，亦可参考文献方法制得，例如参考中国专利申请号2013100137122中记载的方法获得醋酸曲普瑞林，还可参考文献该专利文献中记载的方法获得曲普瑞林，还可参考文献该专利文献中记载的方法通过与巴莫酸形成盐而获得巴莫酸曲普瑞林；它们通常应当符合药用原料药的要求。

在本发明中，乙酸钠，亦可称为醋酸钠，其在本领域通常认为具有缓冲作用，特别是具有使药液的pH值稳定的作用，也就是其可以具有缓冲剂的功能。然而本发明出人意料地发现，使用乙酸钠具有使活性成分化学稳定性改善的效果，而当使用其它具有缓冲功能的药用辅料例如磷酸盐、枸橼酸盐等时，虽然它们可以使药液的稳定性保持稳定，但是它们并不能使活性成分保持稳定，这种现象是现有技术尚无法解释的。

本发明的组合物是一种可以直接静脉注射的药液，其符合注射液的一般质量要求。

在一个实施方案中，本发明曲普瑞林经氨基酸光学纯检测，除了Try以外，其它7个氨基酸的D-型对映体比例相对于其相应氨基酸酸而言均小于0.2%。在一个实施方案中，本发明曲普瑞林经氨基酸光学纯检测，除了Try以外，其它7个氨基酸的D-型对映体比例相对于其相应氨基酸酸而言均小于0.15%。在一个实施方案中，本发明曲普瑞林经氨基酸光学纯检测，其中D-Arg相对于全部精氨酸而言均小于0.2%，优选小于0.15。在本发明的一个实施方案中，本发明提供了一种曲普瑞林，其中乙腈含量低于0.03%。本发明组合物在制备过程中加入了乙酸钠；在该组合物例如制剂成品中，乙酸钠的量可以通过本领域已知的方法测定，例如可通过离子色谱法(中国药典2010年版二部附录VJ)试验，用合适的阴离子交换柱，以含1mmol/L碳酸氢钠和3.2mmol/L碳酸钠的混合液为淋洗液，流速为每分钟1ml，以电导检测器进行测定其中乙酸钠的含量。

曲普瑞林(Triptorelin)是一合成的十肽，是天然GnRH(促性腺激素释放激素)的类似物。动物研究和人体研究表明，初始刺激后，长期使用曲普瑞林可抑制促性腺激素的分泌，从而抑制睾丸和卵巢的功能。动物研究和人体研究表明，初始刺激后，长期使用曲普瑞林可抑制促性腺激素的分泌，从而抑制睾丸和卵巢的功能。对动物进行的进一步研究提示另一作用机制：通过降低外周GnRH受体的敏感性产生直接性腺抑制作用。曲普瑞林在临床上有广泛用途，例如，前列腺癌：注射曲普瑞林，早期血LH和FSH水平升高，进而血睾酮水平升高；继续用药2～3周，血LH和FSH水平降低，进而血睾酮降至去势水平；同时，治疗初期酸性磷酸酶一过性增高；治疗可使症状有所改善。性早熟：在两性，曲普瑞林均可抑制垂体促性腺激素的分泌亢进，表现为雌二醇或睾酮的分泌的抑制、LH峰值降低以及身高年龄/骨龄比例的提高；最初的性腺刺激有可能引起阴道的少量出血，需要使用醋酸甲羟孕酮或环丙孕酮醋酸酯治疗。子宫内膜异位症：曲普瑞林持续用药可抑制雌二醇的分泌，从而使异位的子宫内膜组织处于休息状态。不孕症：曲普瑞林可抑制促性腺激素(FSH和LH)的分泌；这一治疗确保抑制LH峰值，从而提高卵泡生成的质量,增加卵泡数量。子宫肌瘤：研究表明某些子宫肌瘤的体积明显缩小，在治疗第3个月时最明显。大多数患者在治疗第1个月后出现闭经，需纠正因月经过多或子宫出血造成的贫血。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中，当使用到pH调节剂对物料进行调节时，如无另外说明，是用1M氢氧化钠溶液或者1M盐酸溶液进行调节，其用量是使物料特别是溶液的pH值调节至规定值(例如在标明值的±0.1范围内)或范围，例如在当前物料溶液的pH值为6.5而目标pH值为5.5时，先用1M盐酸溶液调节至5.0±0.1，如果调节过量，可用1M氢氧化钠溶液回调，这些操作是本领域技术人员具备的一般技能。下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备药物组合物的方法。在下面配制药液时，以每1ml药液及其中的组分和量罗列配方，但是具体投料时，每批次投量量为1000ml。此外，在下文罗列配方时，可能以曲普瑞林或者曲普瑞林药学可接受的盐投料，但在表述它们的量时，均折算成曲普瑞林(C64H82N18O13)的量计算。

制备例1：制备曲普瑞林及其药学可接受的盐

步骤1：Fmoc-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

10g的Rink Amid MBHA树脂(0.84mmol/g)，9.51g的Fmoc-Gly-OH；

氨基酸(在本步骤中为Fmoc-Gly-OH)：肽偶联剂HBTU：酰胺键形成促进剂(HOAT和HOBT以摩尔比1：2混合使用)：有机碱DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。溶剂用量根据经验和具体操作掌握，例如10g树脂中清洗、脱帽反应、偶联反应中溶剂用量为50～150ml，特别是在清洗时每次尽量用尽量少的溶剂，后面的步骤亦可参考本步骤1的溶剂用量进行。

(2)操作：准确称取10g Rink Amid MBHA树脂(0.84mmol/g)于反应器中，然后加入二氯甲烷100ml，振荡并浸泡60分钟，用二氯甲烷、甲醇、二甲基甲酰胺分别交替清洗两次，抽滤以除去溶剂。加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺溶液(100ml)室温下振荡进行脱帽反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂(1～3mg)利用茚三酮反应检测，显蓝色；若不显蓝色，则需重新进行此步。

称取9.51g的Fmoc-Gly-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应1小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测(即茚三酮检测法)，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

本步骤1所得Fmoc-Gly-树脂，经检测，偶联率达0.89。该Fmoc-Gly-树脂用于后续的反应步骤。

步骤2：Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

在本实施例的本步骤2以及后续的各步骤中，上一步骤所得树脂全部投料到下一步骤；并且使用的肽偶联剂为HBTU，酰胺键形成促进剂为HOBT：有机碱为DIEA。

本步骤中，氨基酸(Fmoc-Pro-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测(在本发明中亦称为KT检测)，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取10.8g的Fmoc-Pro-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应2小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤3：Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-Arg(Pbf)-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取20.76g的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、乳酸(相当于Fmoc-Arg(Pbf)-OH摩尔量的0.2倍)、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应2小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。本操作步骤获得的Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂继续用于后续的步骤。本实施例1最终所得精制曲普瑞林经氨基酸光学纯检测，精制曲普瑞林经氨基酸光学纯检测，除了Try以外，其它7个氨基酸的D-型对映体比例相对于其相应氨基酸酸而言均小于0.15%，特别是结果显示D-Arg相对于全部精氨酸的量而言的含量为0.07%。

步骤4：Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-Leu-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取11.31g的Fmoc-Leu-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应2.5小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤5：Fmoc-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-D-Trp(Boc)-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取16.85g的Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应3小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤6：Fmoc-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-Tyr(tBu)-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取17.4g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应3小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤7：Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-Ser(tBu)-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取12.27g的Fmoc-Ser(tBu)-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应4小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤8：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂 的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-Trp(Boc)-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取16.85g的Fmoc-Trp(Boc)-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应5小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤9：Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro- Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(Fmoc-His(Trt)-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取19.83g的Fmoc-His(Trt)-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应5小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间。

步骤10：H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pr o-Gly-树脂的制备

(1)原辅料配比

本步骤中，氨基酸(H-Pyr-OH)：HBTU：HOBT：DIEA=1：1：1：4(摩尔比)。

(2)操作：加入20%六氢吡啶/二甲基甲酰胺室温下振荡反应60分钟，去掉氮端Fmoc保护基。抽滤除去溶剂后，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，并抽滤除去溶剂。取少量树脂利用茚三酮反应检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取4.14g的H-Pyr-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，搅拌混匀后，倒入反应器中，室温振荡反应6小时。抽滤除去反应液，再分别用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗树脂两次，抽滤除去溶剂。KT检测，显黄色。若不是黄色，则需延长反应时间，接肽反应结束后，放入真空干燥器内干燥过夜，称重，得保护的十肽树脂。

步骤11：、肽链的裂解

将上一步骤所得树脂转移到500ml圆底烧瓶中，加入100ml预冷切割液(95%三氟乙酸/2%TIS/2%EDT/1%水)，室温搅拌反应3小时。抽滤以将树脂与滤液分离，用20ml三氟乙酸洗涤树脂2次，然后将滤液与洗涤液合并。然后加入冰冻乙醚1000ml，离心将沉淀与乙醚分离，将沉淀用5%醋酸溶解冷冻干燥后得醋酸曲普瑞林粗品。

步骤12：精制纯化

将上一步骤所得冻干的醋酸曲普瑞林粗品溶于5%醋酸，用离子交换色谱系统(Shodex IEC SP-420N，北京谱朋公司)，经5%HAc洗脱分离后，收集醋酸曲普瑞林主峰流分。然后将主峰流分通过反向色谱柱用等度洗脱。

反向色谱洗脱条件如下：色谱仪：岛津-高效液相色谱仪；色谱柱：Lichrospher RP-18色谱柱；流动相：20%CH₃CN/H₂O；流速：10ml/min；紫外检测波长：280nm。

将收集所得主峰流动相浓缩后，用冷冻干燥机冻干，冷冻干燥后得醋酸曲普瑞林精制品。以上12个步骤经计算总收率达27.6%(以步骤1中10g树脂投料量计)。

本实施例获得的醋酸曲普瑞林精制品，其经现行上市醋酸曲普瑞林原料药的药品标准测定，完全符合该标准的规定。例如其按无水、无醋酸物计，含C64H82N18O13为99.92%；按无水、无醋酸物计，比旋度为-69.2°；测定甘氨酸、组氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、丝氨酸八种氨基酸组成，以各氨基酸总摩尔数的八分之一作为1，计算各氨基酸的相对比值，甘氨酸、组氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸均在0.90～1.10之间，丝氨酸为1.02。

制备例2：制备曲普瑞林及其药学可接受的盐

参考上文制备例1的方法，不同的是在步骤11和步骤12中将其中使用的各种醋酸溶液替换为等浓度的巴莫酸溶液，得到巴莫酸曲普瑞林精制品，经测定其完全符合该原料药的标准规定。例如其按无水、无醋酸物计，含C64H82N18O13为99.87%；按无水、无醋酸物计，比旋度为-69.5°；测定甘氨酸、组氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、丝氨酸八种氨基酸组成，以各氨基酸总摩尔数的八分之一作为1，计算各氨基酸的相对比值，甘氨酸、组氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸均在0.93～1.07之间，丝氨酸为1.01。

制备例3：制备曲普瑞林及其药学可接受的盐

参照CN101357936A(中国专利申请号200710044419.7，崔颀，等)说明书实施例1记载的方法制备得到醋酸曲普瑞林精制品，纯度99.35%。

【测定法1】：组合物或原料药中活性成分的含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.0)-乙腈(73:27)为流动相，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm；取Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-OH对照品与醋酸曲普瑞林对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中分别含0.1mg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按曲普瑞林峰计算不低于3000；Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-OH峰和醋酸曲普瑞林峰的分离度应符合要求；

测定法：精密取供试品适量，加水溶解并稀释至每1ml中含0.1mg的溶液(本发明液体组合物可以不加水溶解/稀释处理)，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取醋酸曲普瑞林对照品适量，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得供试品中曲普瑞林的含量。

【测定法2】：组合物或原料药中活性成分的有关物质测定

取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液(本发明液体组合物可以不加水溶解/稀释处理)，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为对照溶液；照以上【测定法1】含量测定中的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成份峰高约为满量程的10%～20%，再精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2.5倍，计算有关物质的量。通常而言，对于醋酸曲普瑞林原料药，规定其供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单一杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(即小于0.5%)，各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(即小于2.0%)。本发明液体药物组合物亦可作类似的规定。

化学稳定性考察方法：

本方法可以用于考察本发明各种产品模拟长期贮藏条件下的稳定性特别是化学稳定性。具体方法为：将制得的液体药物组合物在30℃下放置6个月，测定试样中曲普瑞林的含量[30℃6月，可称为高温平均含量，mg/ml，测定10瓶的平均值]相对于该试样在5℃下处理相应时间时曲普瑞林的含量[5℃6月，可称为低温平均含量，mg/ml，测定10瓶的平均值]的百分数，可简称为残余含量(%)，计算式如下：

其中，高温平均含量(mg/ml)和低温平均含量(mg/ml)是样品经【测定法1】测定得到的曲普瑞林的含量(mg/ml，10瓶的均值)。

此外，还照【测定法2】测定试样中的有关物质，即测定它们的最大单一杂质含量、总杂质含量。对于每一试样，分别计算最大单一杂质含量增加百分数(%，可简称为“最大单杂增量”)、以及总杂质含量增加百分数(%，可简称为“总杂增量”)，二者计算式如下：

在计算最大单杂增量时，以高温显示的最大单杂为准计，尽管该最大单杂在低温样品中显示并不是最大杂质。

实施例1：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.1mg
乙酸钠	5mg
		注射用水	适量，加至1ml。

制法：

步骤1：将活性成分和乙酸钠溶解于适量(约0.9ml)注射用水中；

步骤2：测定步骤1所得药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5(本实施例中实际上用到乙酸调节pH)；

步骤3：测定步骤2所得药液中的活性成分的浓度，加适量注射用水至全量；再次测定药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5；

步骤4：将步骤3所得药液经过0.22μm微孔滤膜除菌过滤，灌装到无菌玻璃瓶中，即得液体药物组合物，在本发明中实施例1的样品可简称为Ex1；其它实施例的样品亦可类似表示。

补充实施例1：参考以上实施例1的方法，不同的是将其中的乙酸钠的量进行调整，分别为0mg、0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、3mg、4mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、15mg、20mg，得到的组合物编号分别为Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex110、Ex111、Ex112、Ex113、Ex114，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5。

补充实施例2：参考以上实施例1的方法，不同的是将药液用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值为3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5，得到的组合物编号分别为Ex121、Ex122、Ex123、Ex124、Ex125、Ex126、Ex127、Ex128、Ex129。

补充实施例3：参考以上实施例1的方法，不同的是将其中的乙酸钠替换为枸橼酸3mg、枸橼酸5mg、枸橼酸7mg(三者必要时用1N的氢氧化钠或1N的枸橼酸溶液调节pH值)，或者替换为枸橼酸钠3mg、枸橼酸钠5mg、枸橼酸钠7mg(三者必要时用1N的氢氧化钠或1N的枸橼酸溶液调节pH值)，或者替换为乙酸铵3mg、乙酸铵5mg、乙酸铵7mg(三者必要时用1N的氢氧化铵或1N的乙酸溶液调节pH值)，或者替换为磷酸氢二钠3mg、磷酸氢二钠5mg、磷酸氢二钠7mg(三者必要时用1N的氢氧化钠或1N的磷酸溶液调节pH值)，或者替换为酒石酸3mg、酒石酸5mg、酒石酸7mg(三者必要时用1N的氢氧化钠或1N的酒石酸溶液调节pH值)，得到的组合物编号分别为Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139、Ex140、Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145。

补充实施例4：参考以上实施例1的方法，不同的是将原料改用制备例2的巴莫酸曲普瑞林，并且将其中的乙酸钠的量进行调整，分别为0mg、1mg、2mg、3mg、4mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg，得到的组合物编号分别为Ex150、Ex151、Ex152、Ex153、Ex154、Ex155、Ex156、Ex157、Ex158、Ex159，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5。

补充实施例5：参考以上实施例1的方法，不同的是将原料改用制备例2的巴莫酸曲普瑞林，并且将药液用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，得到的组合物编号分别为Ex161、Ex162、Ex163、Ex164、Ex165、Ex166、Ex167。

补充实施例6：参考以上实施例1的方法，不同的是将原料改用制备例2的巴莫酸曲普瑞林，并且将其中的乙酸钠替换为枸橼酸(必要时用1N的氢氧化钠或1N的枸橼酸溶液调节pH值)、枸橼酸钠(必要时用1N的氢氧化钠或1N的枸橼酸溶液调节pH值)、乙酸铵(必要时用1N的氢氧化铵或1N的乙酸溶液调节pH值)、磷酸氢二钠(三者必要时用1N的氢氧化钠或1N的磷酸溶液调节pH值)、酒石酸(必要时用1N的氢氧化钠或1N的酒石酸溶液调节pH值)，得到的组合物编号分别为Ex171、Ex172、Ex173、Ex174、Ex175。

稳定性考察

方法：照本文化学稳定性考察方法测定以上实施例1以及其补充实施例1-6制备的试样在30℃下放置6个月后的化学稳定性，特别是测定它们的残余含量(%)、最大单杂增量(%)和总杂增量(%)，并与5℃6月处置试样进行比较。另外还测定各样品在上述高温和低温处置6月后溶液的pH值。

结果：

Ex1的残余含量为98.3%，最大单杂增量为53%，总杂增量为62%。

Ex106、Ex107、Ex108、Ex109、Ex123、Ex124、Ex125、Ex126、Ex127、Ex153、Ex154、Ex155、Ex156、Ex162、Ex163、Ex164、Ex165、Ex166各试样的残余含量均在97～101%范围内，最大单杂增量均在46～65%范围内，总杂增量均在55～75%范围内。例如Ex106的残余含量为97.8%，最大单杂增量为55%，总杂增量为67%。此外，各试样的低温时的最大单一杂质含量均小于0.2%，总杂质含量均均小于0.5%；高温时的最大单一杂质含量均小于0.3%，总杂质含量均均小于0.9%；显示这些样品在经高温处理前以及在经高温处理后均符合该产品一般的质量标准要求。

Ex101、Ex102、Ex103、Ex104、Ex105、Ex110、Ex111、Ex112、Ex113、Ex114，Ex121、Ex122、Ex128、Ex129，Ex131、Ex132、Ex133、Ex134、Ex135、Ex136、Ex137、Ex138、Ex139、Ex140、Ex141、Ex142、Ex143、Ex144、Ex145，Ex150、Ex151、Ex152、Ex157、Ex158、Ex159，Ex161、Ex167，Ex171、Ex172、Ex173、Ex174、Ex175各试样的残余含量均在82～89%范围内，最大单杂增量均在195～315%范围内，总杂增量均在250～375%范围内。例如Ex106的残余含量为85.5%，最大单杂增量为255%，总杂增量为295%。此外，各试样的低温时的最大单一杂质含量均小于0.2%，总杂质含量均均小于0.5%；但高温时的最大单一杂质含量均小于0.5%，总杂质含量均均小于2.0%。显示这些样品在经高温处理前均符合该产品一般的质量标准要求，但是在经高温处理后均不符合该产品一般的质量标准要求。

另外，测试各试样溶液低温处置6月后的pH值，结果显示除了Ex101和Ex150两个试样的pH值有明显变化外(高温样品与低温处理的相应样品相比较，均增加了0.5～0.7个pH值单位)，其它样品的的pH值无明显变化外(高温样品与低温处理的相应样品相比较，变化均在0.15个pH值单位以内)。可见不论是用乙酸钠还是其它具有缓冲能力的辅料均可以有效地使药液的pH值稳定。

实施例2：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.lmg
乙酸钠	5mg
		麦芽糖醇	8mg
注射用水	适量，加至lml。

制法：

步骤1：将活性成分、麦芽糖醇和乙酸钠溶解于适量(约0.9ml)注射用水中；

步骤2：测定步骤1所得药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5(本实施例中实际上用到乙酸调节pH)；

步骤3：测定步骤2所得药液中的活性成分的浓度，加适量注射用水至全量；再次测定药液的pH值，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5；

步骤4：将步骤3所得药液经过0.22μm微孔滤膜除菌过滤，灌装到无菌玻璃瓶中，即得液体药物组合物，在本发明中实施例1的样品可简称为Ex2。

补充实施例7：参考以上实施例2的方法，不同的是将其中的麦芽糖醇的量进行调整，分别为0mg、1mg、3mg、5mg、7mg、10mg、12mg、15mg、20mg，得到的组合物编号分别为Ex201、Ex202、Ex203、Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209，必要时用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5。

补充实施例8：参考以上实施例2的方法，不同的是将其中乙酸钠的量改为3mg，并且将麦芽糖醇的量分别调整为5mg、7mg、10mg，得到的组合物编号分别为Ex211、Ex212、Ex213；参考以上实施例2的方法，不同的是将其中乙酸钠的量改为7mg，并且将麦芽糖醇的量分别调整为5mg、7mg、10mg，得到的组合物编号分别为Ex214、Ex215、Ex216。

补充实施例9：参考以上实施例2的方法，不同的是将其中的麦芽糖醇替换为甘露醇6mg、甘露醇9mg、山梨醇6mg、山梨醇9mg、乳糖6mg、乳糖9mg、甘氨酸6mg、甘氨酸9mg、右旋糖苷6mg、右旋糖苷9mg，得到的组合物编号分别为Ex220、Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227、Ex228、Ex229。

补充实施例10：参考以上实施例2的方法，不同的是调节最终药液pH值至5.0，并且将麦芽糖醇的量分别调整为5mg、7mg、10mg，得到的组合物编号分别为Ex231、Ex232、Ex233；参考以上实施例2的方法，不同的是调节最终药液pH值至6.0，并且将麦芽糖醇的量分别调整为5mg、7mg、10mg，得到的组合物编号分别为Ex234、Ex235、Ex236。

稳定性考察

方法：照本文化学稳定性考察方法测定以上实施例2以及其补充实施例7-10制备的试样在30℃下放置6个月后的化学稳定性，特别是测定它们的残余含量(%)、最大单杂增量(%)和总杂增量(%)，并与5℃6月处置试样进行比较。另外还测定各样品在上述高温和低温处置6月后溶液的pH值。

结果：

Ex2的残余含量为98.5%，最大单杂增量为21%，总杂增量为30%。

Ex204、Ex205、Ex206、Ex207、Ex208、Ex209、Ex211、Ex212、Ex213、Ex214、Ex215、Ex216、Ex231、Ex232、Ex233、Ex234、Ex235、Ex236各试样的残余含量均在97～101%范围内，最大单杂增量均在17～25%范围内，总杂增量均在23～35%范围内。例如Ex204的残余含量为99.1%，最大单杂增量为20%，总杂增量为29%。此外，各试样的低温时的最大单一杂质含量均小于0.2%，总杂质含量均均小于0.5%；高温时的最大单一杂质含量均小于0.3%，总杂质含量均均小于0.9%；显示这些样品在经高温处理前以及在经高温处理后均符合该产品一般的质量标准要求。但是令人遗憾的是Ex207、Ex208、Ex209在经高温处理后出现有不溶性微粒，这对于注射制剂而言是不可接受的。

Ex201、Ex202、Ex203、Ex220、Ex221、Ex222、Ex223、Ex224、Ex225、Ex226、Ex227、Ex228、Ex229各试样的残余含量均在97～101%范围内，最大单杂增量均在45～65%范围内，总杂增量均在50～75%范围内。例如Ex201的残余含量为97.8%，最大单杂增量为59%，总杂增量为65%。此外，各试样的低温时的最大单一杂质含量均小于0.2%，总杂质含量均均小于0.5%；高温时的最大单一杂质含量均小于0.3%，总杂质含量均均小于0.9%；显示这些样品在经高温处理前以及在经高温处理后均符合该产品一般的质量标准要求。

另外，Ex204、Ex205、Ex206三者与未添加麦芽糖醇的Ex1相比较，它们的残余含量无明显差异，但是最大单杂增量均比Ex1降低了25个百分点，总杂增量均比Ex1降低了30个百分点，显示添加适量麦芽糖醇是有益的，尽管不添加同样可以获得满足药品标准规定的要求。

实施例3：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.O1mg
乙酸钠	3mg
		pH调节剂	调pH至5.0
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例4：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.5mg
乙酸钠	7mg
		pH调节剂	调pH至6.0
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例5：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.2mg
乙酸钠	4mg
		pH调节剂	调pH至5.5
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例6：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.3mg
乙酸钠	6mg
		pH调节剂	调pH至5.5
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例7：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.O1mg
乙酸钠	3mg
		麦芽糖醇	7.5mg
pH调节剂	调pH至5.0

注射用水

适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例8：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.5mg
乙酸钠	7mg
		麦芽糖醇	5mg
pH调节剂	调pH至6.0
		注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例9：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.2mg
乙酸钠	4mg
		麦芽糖醇	10mg
pH调节剂	调pH至5.5
		注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例10：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例1的醋酸盐)	0.3mg
乙酸钠	6mg
		麦芽糖醇	7mg
pH调节剂	调pH至5.5
		注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例11：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例2的巴莫酸盐)	0.Olmg
乙酸钠	3mg
		pH调节剂	调pH至5.0
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例12：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例2的巴莫酸盐)	0.5mg
乙酸钠	7mg
		pH调节剂	调pH至6.0
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例13：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例3的醋酸盐)	0.Olmg
乙酸钠	3mg
		pH调节剂	调pH至5.0
注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

实施例14：制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物

配方

组分	用量
		曲普瑞林(制备例3的醋酸盐)	0.5mg
乙酸钠	7mg

pH调节剂	调pH至6.0
		注射用水	适量，加至lml。

参考实施例1或实施例2的方法制备包含曲普瑞林或其盐的液体药物组合物。

长期留样试验：

取本发明组合物试样Ex1、Ex2以及实施例3-14所得各试样，在10±2℃条件下放置3年，参考上文化学稳定性考察方法，不同的是其中的“低温”结果以0月的结果代替。结果显示，本发明上述组合物试样在0月和36月时，药液pH值均在该试样制备时理论pH值的±0.2个单位之内，最大的单一杂质均小于0.30%(标准规定应小于0.5%)，总杂质均小于0.70%(标准规定应小于2.0%)，表明这些试样在长期放置3年后仍然具有良好的稳定性。例如Ex1放置3年后残余含量(%，与0月相比)为98.2%，最大的单一杂质为0.24%，总杂质为0.55%。

Claims (1)

1.一种包含曲普瑞林醋酸盐的液体药物组合物，其配方为：

组分 用量 曲普瑞林的醋酸盐 0.1 mg 乙酸钠 5 mg 麦芽糖醇 8 mg 注射用水 适量

所述液体药物组合物的制备方法为：

步骤1：将曲普瑞林的醋酸盐、麦芽糖醇和乙酸钠溶解于适量的注射用水中；

步骤2：测定步骤1所得药液的pH值，用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH 值至5.5；

步骤3：测定步骤2所得药液中的活性成分的浓度，加适量注射用水至1ml；再次测定药液的pH值，用1N的氢氧化钠或1N的醋酸溶液调节pH值至5.5；

步骤4：将步骤3所得药液经过0.22μm 微孔滤膜除菌过滤，灌装到无菌玻璃瓶中，即得液体药物组合物。