CN103222990A

CN103222990A - 干酪乳杆菌和银杏叶提取物在制备防治高脂血症药物中的应用

Info

Publication number: CN103222990A
Application number: CN2013101482666A
Authority: CN
Inventors: 曾东; 倪学勤; 温啸; 辛金鸽; 曾燕; 贺大方; 张丹; 丁艳东; 李利杰
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2013-04-25
Filing date: 2013-04-25
Publication date: 2013-07-31

Abstract

本发明公开了干酪乳杆菌和银杏叶提取物在制备防治高脂血症药物中的应用，干酪乳杆菌与银杏叶提取物协同作用明显降低了肥胖小鼠体质量、TC、TG和MDA；TC和TG降解率分别提高24.48％和20.93％，小鼠体重较高脂组降低了13.22％，MDA的含量降低了5.98％。小鼠血清中HDL-C有明显的升高，提升率高达167.85％。小鼠体内GSH-PX提高了13.14％，CAT、SOD等酶的活力分别下降49.02％、3.13％。干酪乳杆菌与银杏叶提取物协同作用，具有降血脂、促进胆固醇代谢、控制体重的作用，可用于预防和治疗高脂血症。

Description

干酪乳杆菌和银杏叶提取物在制备防治高脂血症药物中的应用

技术领域

本发明涉及的是干酪乳杆菌干酪亚种和银杏叶提取物在制备预防和治疗高脂血症中药物的应用。

背景技术

进入21世纪人们生活水平有了显著提高，与此同时一些与生活方式相关性疾病开始成为威胁人类健康的首要原因。在我国心脑血管疾病的死亡率已经上升到第二位。高血脂症即血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的增高，是引起心脑血管疾病的一个主要原因。大量的流行病学调查和研究均表明，高血脂症是当今社会常见的一种疾病，近年来，它的发病率在逐渐的上升，已被称为“人类健康的三大杀手之一”，对人的健康所造成的伤害非常大。高血脂除可以导致动脉粥样硬化、诱发冠心病、脑中风、心肌梗塞等疾病外，还会诱发高血压、高血糖、脂肪肝、胰腺炎、眼底出血等严重的疾病，对人体的危害十分严重，极大地影响到患者的生活质量。

因此，研究开发能够降低高血脂的保健药品对预防疾病保护人民身体健康有重要的意义。然而，在高血脂症新型保健食品开发及新药研究中，常见的降脂药物虽对血脂调节较强，但副作用也较明显，在治疗疾病的同时也留下不少后遗症，研制既安全有效又绿色环保无毒副作用的降脂药物成为当前医学研究中一个重要课题。

乳酸菌作为微生态制剂，具有减少血清中的胆固醇含量,降低心血管疾病发病率的功效。此外还刺激机体免疫功能，改善宿主机体的各种生理功能，达到防病治病，促进生长的目的，被认为是一种具有多重降血脂作用的微生物。此外，乳酸菌还有抑制NPC1L1蛋白、影响自主交感神经活动、促进脂肪组织的生热作用和改善肝脏NKT细胞衰竭等新的机制。人体临床试验分析也表明，口服乳酸菌可以对总胆固醇水平和LDL胆固醇水平产生有益作用。研究显示，初级胆汁酸作为胆固醇的一个重要产物，可被乳酸菌所产生的胆盐水解酶分解成游离胆汁酸和氨基酸，难溶的游离胆汁酸盐随着粪便排出，减少对胆汁酸的重吸收，增加胆固醇向胆盐的转化，从而降低胆固醇水平。

研究发现，银杏叶是一种具有多种药理功能的中药，含有黄酮类、酚类、萜类以及氨基酸类等多种化学成分。从银杏叶中提取的有效活性成分主要有2类活性物质，分别是银杏萜内酯类化合物和黄酮类化合物，是一种天然的自由基清除剂，具有抗氧化、抗菌消炎以及改善缺血心肌功能等生理功效，其药用价值十分突出。EGb（银杏叶提取物）可明显提升高密度脂蛋白含量，抑制PAF，降低血液黏度以及血浆胆固醇与血纤蛋白原的合成，改善血浆磷脂和胆固醇的比例。试验报道，银杏黄酮能促进脂肪细胞的脂解作用。另有报道，给SD大鼠饲喂高脂饲料10d后，加喂EGb，18d后与对照组相比，SD大鼠血清中胆固醇含量极显著降低，甘油三酯也显著降低，说明EGb具有明显降低血脂的作用。

随着对药物危害的认识，中草药以其无毒害副作用受到青昧。大量研究表明，中药对益生菌的增殖有促进作用，将有益菌与中药联合应用，不仅具有无毒、无害和无污染的特点，而且还可通过相互的促进作用加强疗效。目前，已有大量研究表明，乳酸菌及银杏叶提取物均有降低小鼠血脂的作用。但是尚未见两者的比较及联合作用的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种干酪乳杆菌和银杏叶提取物在制备防治高脂血症药物中的应用。

本发明的技术方案如下：

干酪乳杆菌和银杏叶提取物在制备防治高脂血症药物中的应用，干酪乳杆菌与银杏叶提取物协同，具有调血脂降血脂、促进胆固醇代谢、控制体重的作用，用于预防和治疗高脂血症。

将体重为20±1g的小鼠随机分成5组，分别为：空白对照组、高脂对照组、干酪乳杆菌组、银杏叶组和混合组，除空白对照组外，其他4组给予高脂饲料，每周称1次体重，建立肥胖模型，试验期为30天。测定各组小鼠体重及血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶（CAT）等的活性。结果干酪乳杆菌与银杏叶提取物协同作用明显降低了肥胖小鼠体质量、TC、TG和MDA；TC和TG降解率分别达到24.48％和20.93％，小鼠体重较高脂组降低了13.22％，MDA的含量降低了5.98％。小鼠血清中HDL-C有明显的升高，提升率高达167.85％。小鼠体内GSH-PX活力提高了13.14％，CAT、SOD等酶活力分别降低了49.02％、3.13％。干酪乳杆菌与银杏叶提取物协同作用，具有降血脂、促进胆固醇代谢、控制体重的作用，可用于预防和治疗高脂血症。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

1材料与方法

1.1材料

银杏叶有效成分提取物（购于四川同泰植物化工有限公司），干酪乳杆菌K1菌株（干酪乳杆菌干酪亚种购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：中国北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所），编号为：CGMCC1.2435），实验小白鼠60只（四川农业大学龙鼠家园雌性小鼠60只，体重19～21g），MRS培养基（蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母膏粉4g，葡萄糖20g，吐温-801ml，磷酸氢二钾2g，乙酸钠5g，柠檬酸三铵0.2g，磷酸镁0,2g，硫酸锰0.05g），灌胃针。

1.2仪器设备

全自动生化分析仪GS200（深圳市锦瑞电子有限公司），AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

1.3方法

1.3.1灌胃乳酸菌菌液的制备

将干酪乳杆菌K1菌株涂布于MRS固体培养基上，37℃静置培养24h。挑取单一菌落接种MRS液体培养基，37℃培养32～36h后备用。

在无菌操作的条件下，取1mL培养后的菌液加入装有99mL无菌生理盐水的锥形瓶中，用漩涡振荡器振荡10min，使试样混合均匀，即成10^-2稀释液，然后无菌10倍稀释，分别从10^-5、10^-6、10^-7三个稀释度试管中取0.1mL稀释液，涂布接种于MRS琼脂平板中，每个稀释度3块平皿。37℃厌氧培养至长出菌落后进行平板计数。在灌胃前，样品均以PBS溶液制成l0⁸cfu／mL悬液，临用时新鲜配制。

1.3.2银杏叶提取物溶液的配置

银杏叶提取物(EGb,含24%黄酮苷,6%银杏内酯)加温配成37℃水溶液，以100mg/kg体重的黄酮量灌胃小鼠，配成浓度为41.7mɡ/mL的银杏溶液（含银杏叶提取物0.417g/kg体重)。

1.3.3高脂饲料的制备

高脂饲料配方：胆固醇2％、胆酸钠0．5％、丙硫氧嘧啶0．2％、蔗糖5％、猪油10％、基础饲料82．3％。

1.3.4动物饲喂及血清样品的制备

将健康的小鼠60只在干燥、清洁、通风良好的环境中饲养，温度控制在24±1℃，预饲一周基础饲料后，将小鼠随机分成5组，试验分组及处理见表1。

表1动物分组及处理

按上述要求，各组小鼠分笼饲养，自由进食饮水。饲喂30d后各组分别随机选择10只小鼠称量体重并记录数据。禁食10h后，用乙醚麻醉后从眼眶采血。在室温下静止放置30min，3500r/min离心10min，分离血清备用。

1.3.5测定指标

采用全自动生化分析仪GS200测定血清中的总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、葡萄糖（GLU）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总蛋白（TP）。

1.3.6统计分析

采用SPSS17.0软件进行显著性分析，差异显著是采用Duncan氏方法对各组间平均数进行多重比较，数据结果以平均数±标准偏差

表示。

2结果与分析

2.1对小鼠体重及血脂含量的影响

由表2可以看出，高脂组、银杏叶组和干酪乳杆菌组的体重与空白对照组都存在显著性差异(P＜0.05)，而空白对照组的体重与混合组基本相近。这说明混合组有明显降低高脂小鼠体重的功能。高脂模型组血清中的TG、TC含量以及体重的差值与空白对照组相比差异极显著性(P＜0.01)，证明肥胖模型建模成功。银杏叶组、干酪乳杆菌组和混合组TG水平与高脂模型组之间存在极显著性差异(P＜0.01)，其中混合组的TG值与空白对照组小鼠最为相近，说明混合组降TG效果最好。与高脂模型组相比，银杏叶组、干酪乳杆菌组和混合组的TC水平均较低，但只有混合组与高脂模型组之间存在极显著差异(P＜0.01)，说明混合组降低TC效果最佳。银杏叶组和混合组的HDL-C均高于高脂组并存在极显著性差异(P＜0.01)，其中混合组的HDL-C水平最高，且极显著地高于空白对照组，说明混合组对降低动脉粥样硬化效果最好。高脂组的体重明显高于其他组，空白对照组和混合组与高脂模型之间存在极显著性差异(P＜0.01)，银杏叶组与高脂组之间存在显著性差异(P＜0.05)。混合组的LDL-C含量也低于高脂组。

表2各组小鼠体重及血脂指标

同列数据与高脂组相比：*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；与空白对照组相比：a表示P＜0.05，A表示P＜0.01

2.2对小鼠血清生化指标的影响

由表3可以看出，虽然各组TP和ALB的数值无明显差别，但混合组TP值的含量低于其他组，ALB的含量高于干酪乳杆菌和银杏叶组，但低于高脂组和空白对照组。干酪乳杆菌组的GLU含量显著低于高脂组，ALT的含量也低于其他各组。

表3各组小鼠血清生化指标

2.3对小鼠血清抗氧化活性的影响

由表4可见，混合组的CAT活力与高脂模型组以及空白对照组之间均呈极显著性差异(P＜0.01)，说明干酪乳杆菌银杏叶提取物混合可以有效降低CAT的活性。相对于高脂模型组，只有混合组的GSH-PX活性显著提高(P＜0.05)，说明干酪乳杆菌银杏叶提取物混合可以有效提高小鼠血清中GSH-PX酶的活性。混合组可以有效降低小鼠血清中MDA的含量，SOD活力较高脂对照组小鼠也有一定程度的降低，并且更接近正常小鼠的SOD水平。

表4小鼠血清中CAT、GSH-P、SOD酶活性和MDA含量

本发明从干酪乳杆菌K1菌株与银杏叶提取物协同作用代谢的角度研究其减肥降脂，预防动脉粥样硬化发生的功能及可能的机理，结果表明其不但可以降低高血脂小鼠血清TC、TG以及体重的水平，还可以提高HDL-C的含量以及血清GSH-PX活性，降低MDA含量和CAT的活性。GSH-PX构成机体主要抗氧化酶系统，可以减少活性氧自由基的产生，防止脂质过氧化物对机体组织造成损害。机体内源酶GSH-PX活性的提高可以减少LPO对低密度脂蛋白LDL-C的氧化修饰，而氧化性低密度脂蛋白Ox-LDL-C是AS形成和发展的重要原因。

综上所述，干酪乳杆菌K1菌株与银杏叶的提取物协同作用，可以降低血清TC、TG的含量，促进HDL-C的生成，减少小鼠体重的质量，通过调节脂肪代谢，进而预防动脉粥样硬化发生。有益菌与中草药联合制剂作用不仅能防病治病，还具有无毒、无害和无污染的特点，而且还通过相互的促进作用加强了疗效，所以其有望成为一种新型的调血脂，预防动脉粥样硬化的保健食品。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims

1.干酪乳杆菌和银杏叶提取物在制备防治高脂血症药物中的应用，其特征在于，干酪乳杆菌与银杏叶提取物协同，具有降血脂、促进胆固醇代谢、控制体重的作用，用于预防和治疗高脂血症。